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拟南芥miR395d基因的克隆和过表达载体构建及其在油菜中的转化
被引量：
6
1
作者
张芸
李会
+3 位作者
车丽玲
黄思齐
邱承祥
杨志敏
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第2期25-29,共5页
MicroRNAs(miRNAs)是一类内源性长度约为21～24个核苷酸,在基因表达、生长发育、细胞周期及环境胁迫等方面起着重要作用的单链非编码小分子RNA。研究表明:植物miRNAs通过转录后以切割的方式对其靶基因的表达起着负调控作用。miR395的靶...
MicroRNAs(miRNAs)是一类内源性长度约为21～24个核苷酸,在基因表达、生长发育、细胞周期及环境胁迫等方面起着重要作用的单链非编码小分子RNA。研究表明:植物miRNAs通过转录后以切割的方式对其靶基因的表达起着负调控作用。miR395的靶基因分别为ATP硫酸化酶和硫转运体SULTR2;1,两者在硫同化及转运中起着重要的作用。为了进一步探究miR395的功能,本研究利用PCR法从拟南芥中克隆了miR395d前体基因,并与pCAMBIA1304载体连接,构建了miR395d前体基因的过量表达载体,通过根癌农杆菌介导法将其转化到甘蓝型油菜特选4号中,目前已获得了转基因植株。
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关键词
mir395d
前体
ATP硫酸化酶
硫转运体SULTR2
1
过表达载体
转基因
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职称材料
水稻miR395d基因过表达载体的构建及功能初步分析
被引量：
1
2
作者
王文文
孙红正
+4 位作者
李俊周
彭廷
杜彦修
张静
赵全志
《分子植物育种》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第9期2876-2881,共6页
为研究miR395调控水稻硫吸收和同化的分子机制,我们通过生物信息学的分析方法,设计了水稻mi R395d基因的前体序列,将其连接到pHB载体上,从而构建了miR395d的过表达载体,随后通过农杆菌介导法转化水稻品种日本晴,获得10组转基因株系。采...
为研究miR395调控水稻硫吸收和同化的分子机制,我们通过生物信息学的分析方法,设计了水稻mi R395d基因的前体序列,将其连接到pHB载体上,从而构建了miR395d的过表达载体,随后通过农杆菌介导法转化水稻品种日本晴,获得10组转基因株系。采用潮霉素抗性筛选鉴定阳性转基因植株,在潮霉素溶液中能正常生长的为阳性植株,反之则为假阳性植株,并利用qRT-PCR的方法验证miR395d的表达量。结果表明,阳性转基因株系OE-2、OE-3和OE-4中miR395d基因表达量显著升高,说明miR395d的过表达载体构建成功。初步分析miR395d过表达植株的功能发现,在缺硫的水平下,与日本晴相比,miR395d过表达水稻植株叶片出现萎黄、植物生物量显著降低、根长显著变短等表型,其生长发育受到抑制。由于硫是植物生长所需营养元素之一,对植物生长发育及作物产量和品质均存在重要影响。miR395d过表达水稻株系的构建,为后续进一步研究miR395在水稻硫吸收和同化路径中的作用提供了材料。
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关键词
水稻(Oryza
sativa)
mir395d
基因表达
载体构建
原文传递
题名
拟南芥miR395d基因的克隆和过表达载体构建及其在油菜中的转化
被引量：
6
1
作者
张芸
李会
车丽玲
黄思齐
邱承祥
杨志敏
机构
南京农业大学生命科学学院
出处
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第2期25-29,共5页
基金
国家自然科学基金项目(30671249)
江苏省自然科学基金项目(BK2006137)
文摘
MicroRNAs(miRNAs)是一类内源性长度约为21～24个核苷酸,在基因表达、生长发育、细胞周期及环境胁迫等方面起着重要作用的单链非编码小分子RNA。研究表明:植物miRNAs通过转录后以切割的方式对其靶基因的表达起着负调控作用。miR395的靶基因分别为ATP硫酸化酶和硫转运体SULTR2;1,两者在硫同化及转运中起着重要的作用。为了进一步探究miR395的功能,本研究利用PCR法从拟南芥中克隆了miR395d前体基因,并与pCAMBIA1304载体连接,构建了miR395d前体基因的过量表达载体,通过根癌农杆菌介导法将其转化到甘蓝型油菜特选4号中,目前已获得了转基因植株。
关键词
mir395d
前体
ATP硫酸化酶
硫转运体SULTR2
1
过表达载体
转基因
Keywords
pre-
mir395d
ATP sulphurylase（APS）
sulphate transporter 2
1（SULTR2
1）
over-expression vector
transgenic
分类号
S565.4 [农业科学—作物学]
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职称材料
题名
水稻miR395d基因过表达载体的构建及功能初步分析
被引量：
1
2
作者
王文文
孙红正
李俊周
彭廷
杜彦修
张静
赵全志
机构
河南农业大学农学院河南粮食作物协同创新中心河南省水稻生物学重点实验室
出处
《分子植物育种》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第9期2876-2881,共6页
基金
河南省基础与前沿技术研究项目(162300410159)
国家留学基金委-河南省地方合作项目(201408410185)共同资助
文摘
为研究miR395调控水稻硫吸收和同化的分子机制,我们通过生物信息学的分析方法,设计了水稻mi R395d基因的前体序列,将其连接到pHB载体上,从而构建了miR395d的过表达载体,随后通过农杆菌介导法转化水稻品种日本晴,获得10组转基因株系。采用潮霉素抗性筛选鉴定阳性转基因植株,在潮霉素溶液中能正常生长的为阳性植株,反之则为假阳性植株,并利用qRT-PCR的方法验证miR395d的表达量。结果表明,阳性转基因株系OE-2、OE-3和OE-4中miR395d基因表达量显著升高,说明miR395d的过表达载体构建成功。初步分析miR395d过表达植株的功能发现,在缺硫的水平下,与日本晴相比,miR395d过表达水稻植株叶片出现萎黄、植物生物量显著降低、根长显著变短等表型,其生长发育受到抑制。由于硫是植物生长所需营养元素之一,对植物生长发育及作物产量和品质均存在重要影响。miR395d过表达水稻株系的构建,为后续进一步研究miR395在水稻硫吸收和同化路径中的作用提供了材料。
关键词
水稻(Oryza
sativa)
mir395d
基因表达
载体构建
Keywords
Rice(Oryza sativa)
mir395d
Gene expression
Vector construction
分类号
S511 [农业科学—作物学]
Q943.2 [生物学—植物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
拟南芥miR395d基因的克隆和过表达载体构建及其在油菜中的转化
张芸
李会
车丽玲
黄思齐
邱承祥
杨志敏
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
6
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
水稻miR395d基因过表达载体的构建及功能初步分析
王文文
孙红正
李俊周
彭廷
杜彦修
张静
赵全志
《分子植物育种》
CAS
CSCD
北大核心
2019
1
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