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拟南芥miR395d基因的克隆和过表达载体构建及其在油菜中的转化 被引量:6
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作者 张芸 李会 +3 位作者 车丽玲 黄思齐 邱承祥 杨志敏 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期25-29,共5页
MicroRNAs(miRNAs)是一类内源性长度约为21~24个核苷酸,在基因表达、生长发育、细胞周期及环境胁迫等方面起着重要作用的单链非编码小分子RNA。研究表明:植物miRNAs通过转录后以切割的方式对其靶基因的表达起着负调控作用。miR395的靶... MicroRNAs(miRNAs)是一类内源性长度约为21~24个核苷酸,在基因表达、生长发育、细胞周期及环境胁迫等方面起着重要作用的单链非编码小分子RNA。研究表明:植物miRNAs通过转录后以切割的方式对其靶基因的表达起着负调控作用。miR395的靶基因分别为ATP硫酸化酶和硫转运体SULTR2;1,两者在硫同化及转运中起着重要的作用。为了进一步探究miR395的功能,本研究利用PCR法从拟南芥中克隆了miR395d前体基因,并与pCAMBIA1304载体连接,构建了miR395d前体基因的过量表达载体,通过根癌农杆菌介导法将其转化到甘蓝型油菜特选4号中,目前已获得了转基因植株。 展开更多
关键词 mir395d前体 ATP硫酸化酶 硫转运体SULTR2 1 过表达载体 转基因
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水稻miR395d基因过表达载体的构建及功能初步分析 被引量:1
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作者 王文文 孙红正 +4 位作者 李俊周 彭廷 杜彦修 张静 赵全志 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期2876-2881,共6页
为研究miR395调控水稻硫吸收和同化的分子机制,我们通过生物信息学的分析方法,设计了水稻mi R395d基因的前体序列,将其连接到pHB载体上,从而构建了miR395d的过表达载体,随后通过农杆菌介导法转化水稻品种日本晴,获得10组转基因株系。采... 为研究miR395调控水稻硫吸收和同化的分子机制,我们通过生物信息学的分析方法,设计了水稻mi R395d基因的前体序列,将其连接到pHB载体上,从而构建了miR395d的过表达载体,随后通过农杆菌介导法转化水稻品种日本晴,获得10组转基因株系。采用潮霉素抗性筛选鉴定阳性转基因植株,在潮霉素溶液中能正常生长的为阳性植株,反之则为假阳性植株,并利用qRT-PCR的方法验证miR395d的表达量。结果表明,阳性转基因株系OE-2、OE-3和OE-4中miR395d基因表达量显著升高,说明miR395d的过表达载体构建成功。初步分析miR395d过表达植株的功能发现,在缺硫的水平下,与日本晴相比,miR395d过表达水稻植株叶片出现萎黄、植物生物量显著降低、根长显著变短等表型,其生长发育受到抑制。由于硫是植物生长所需营养元素之一,对植物生长发育及作物产量和品质均存在重要影响。miR395d过表达水稻株系的构建,为后续进一步研究miR395在水稻硫吸收和同化路径中的作用提供了材料。 展开更多
关键词 水稻(Oryza sativa) mir395d 基因表达 载体构建
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小麦miR395a前体克隆、遗传转化及组织表达模式分析
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作者 丁超杰 关园园 李成伟 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2020年第4期52-56,共5页
miRNA是一类在调控植物发育和生物及非生物逆境胁迫响应过程中发挥重要功能的非编码小RNA,为了探究miR395a在小麦抗病中的功能和作用机制,比较了不同物种中的miR395a成熟序列,分析发现miR395a在不同物种中具有较高的保守性,其中小麦与... miRNA是一类在调控植物发育和生物及非生物逆境胁迫响应过程中发挥重要功能的非编码小RNA,为了探究miR395a在小麦抗病中的功能和作用机制,比较了不同物种中的miR395a成熟序列,分析发现miR395a在不同物种中具有较高的保守性,其中小麦与拟南芥、番茄以及大豆中的miR395a成熟序列具有高度一致性。并从小麦叶片中克隆了miR395a的前体序列,并将其连接到植物表达载体pCambia1301上,构建了miR395a前体的过量表达载体,之后通过农杆菌介导的遗传转化法,转化至小麦栽培品种(百农207)中,获得56株转基因植株,并通过PCR鉴定出11株阳性转基因植株。用RT-qPCR技术对不同组织中miR395a的表达量进行分析,结果显示,miR395a为组成型表达,但在不同组织中的表达量有差异,其中在三叶期和抽穗期叶片中的表达量较高,叶鞘中次之,旗叶中表达量最低。综上,获得了过量表达miR395a前体的小麦转基因植株,为进一步研究miR395a在小麦抗病中的功能及作用机制提供了材料来源。 展开更多
关键词 小麦 mir395a前体 过量表达载体构建 遗传转化 组织表达模式分析
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红芸豆miR395家族成员的鉴定及其与结瘤相关的表达分析
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作者 王东梅 孙丽丽 +2 位作者 郑江涛 王利祥 郭数进 《山西农业科学》 2023年第10期1170-1177,共8页
microRNA395是高等植物保守的miRNA家族,主要通过靶向低亲和力硫酸盐转运蛋白(AST)和ATP磺酰化酶(APS)来响应植物的硫饥饿反应,硫饥饿会显著影响固氮植物的结瘤共生固氮过程。为解析miR395在豆科植物结瘤共生固氮中的作用,对红芸豆miR39... microRNA395是高等植物保守的miRNA家族,主要通过靶向低亲和力硫酸盐转运蛋白(AST)和ATP磺酰化酶(APS)来响应植物的硫饥饿反应,硫饥饿会显著影响固氮植物的结瘤共生固氮过程。为解析miR395在豆科植物结瘤共生固氮中的作用,对红芸豆miR395家族成员进行生物信息学预测,并对pvu-miR395在红芸豆不同组织和根瘤菌侵染不同时间段进行差异表达分析。结果显示,在全基因组水平上鉴定出8个pvu-miR395的家族成员,位于第2、3号染色体上。pvu-miR395家族成员成熟序列和星标序列高度保守,它们的前体序列均可生成稳定的二级结构。进一步对芸豆与大豆、苜蓿、拟南芥、水稻miR395家族成员进行系统进化分析,可将miR395家族成员分为GroupⅠ~Ⅳ4个亚家族。顺式作用元件分析发现,该家族成员可能参与植物激素、胁迫、生长和发育等过程;qRT-PCR差异表达分析发现,pvu-miR395家族成员均在根瘤中表达量最高,具有组织特异性,且pvu-miR395的表达量随根瘤菌处理时间延长呈现先升高后降低的趋势,显著抑制根瘤菌的侵染。靶基因预测表明,硫酸盐转运蛋白和硫酸腺苷酰基转移酶可能是pvu-miR395的靶基因。 展开更多
关键词 红芸豆 mir395 生物信息学分析 靶基因 结瘤 表达分析
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Molecular evolution of the rice miR395 gene family 被引量:7
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作者 Sreelatha GUDDETI De Chun ZHANG +6 位作者 Ai Li LI Chuck H. LESEBERG Hui KANG Xiao Guang LI Wen Xue ZHAI Mitrick A. JOHNS Long MAO 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 2005年第8期631-638,共8页
MicroRNAs (miRNAs) are 20-22 nucleotide non-coding RNAs that play important roles in plant and animal development. They are usually processed from larger precursors that can form stem-loop structures. Among 20 miRNA f... MicroRNAs (miRNAs) are 20-22 nucleotide non-coding RNAs that play important roles in plant and animal development. They are usually processed from larger precursors that can form stem-loop structures. Among 20 miRNA families that are conserved between Arabidopsis and rice, the rice miR395 gene family was unique because it was organized into compact clusters that could be transcribed as one single transcript. We show here that in fact this family had four clusters of total 24 genes. Three of these clusters were segmental duplications. They contained miR395 genes of both 120 bp and 66 bp long. However, only the latter was repeatedly duplicated. The fourth cluster contained miR395 genes of two different sizes that could be the consequences of intergenic recombination of genes from the first three clusters. On each cluster, both 1-duplication and 2-duplication histories were observed based on the sequence similarity between miR395 genes, some of which were nearly identical suggesting a recent origin. This was supported by a miR395 locus survey among several species of the genus Oryza, where two clusters were only found in species with an AA genome, the genome of the cultivated rice. A comparative study of the genomic organization of Medicago truncatula miR395 gene family showed significant expansion of intergenic spaces indicating that the originally clustered genes were drifting away from each other. The diverse genomic organizations of a conserved microRNA gene family in different plant genomes indicated that this important negative gene regulation system has undergone dramatic tune-ups in plant genomes. 展开更多
关键词 gene duplication genome evolution Oryza sativa microRNA.
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miR395a-MdWRKY26调控苹果植物耐盐的分子机制
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作者 刘荣欣 刘嘉伟 +2 位作者 张嘉琪 侯宗甫 王志英 《北京农学院学报》 2024年第2期25-31,共7页
【目的】为了揭示miR 395 a-MdWRKY 26表达模式在盐处理下调控苹果耐盐性的分子机制,并且为苹果耐盐新品种的选育提供基础。【方法】以‘嘎啦’野生型苹果苗和通过稳定遗传转化方法得到的miR 395 a-OE、miR 395 a-RNAi、MdWRKY 26-OE、M... 【目的】为了揭示miR 395 a-MdWRKY 26表达模式在盐处理下调控苹果耐盐性的分子机制,并且为苹果耐盐新品种的选育提供基础。【方法】以‘嘎啦’野生型苹果苗和通过稳定遗传转化方法得到的miR 395 a-OE、miR 395 a-RNAi、MdWRKY 26-OE、MdWRKY 26-RNAi转基因苹果苗为试验材料,对其进行200 mM的NaCl处理,观察表型并且用RT-qPCR检测盐处理下的表达量,用紫外分光光度计法测量丙二醛含量。【结果】结果表明,200 mM的NaCl处理后,与对照相比,miR 395 a-OE和MdWRKY 26-RNAi转基因植株受到的伤害程度较高,对盐更敏感;而MdWRKY 26-OE和miR 395 a-RNAi转基因植株受到的损害程度较轻,表明植株MdWRKY 26-OE和miR 395 a-RNAi转基因植株具有耐盐性。【结论】通过耐盐性分析,得到miR 395 a基因负调控苹果耐盐性,而MdWRKY 26基因发挥正调控作用。揭示了miR 395 a-MdWRKY 26调控苹果耐盐性的分子机理,可以减弱植物在盐处理下受到的伤害。 展开更多
关键词 苹果 盐处理 miR 395a MdWRKY26
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Control of sulfate concentration by miR395-targeted APS genes in Arabidopsis thaliana 被引量:9
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作者 Qin Ai Gang Liang +1 位作者 Huimin Zhang Diqiu Yu 《植物分类与资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期114-123,共10页
Sulfur nutrition is crucial for plant growth and development,as well as crop yield and quality.Inorganic sulfate in the soil is the major sulfur source for plants.After uptake,sulfate is activated by ATP sulfurylase,a... Sulfur nutrition is crucial for plant growth and development,as well as crop yield and quality.Inorganic sulfate in the soil is the major sulfur source for plants.After uptake,sulfate is activated by ATP sulfurylase,and then gets assimilated into sulfur-containing metabolites.However,the mechanism of regulation of sulfate levels by ATP sulfurylase is unclear.Here,we investigated the control of sulfate levels by miR395-mediated regulation of APS1/3/4.Sulfate was over-accumulated in the shoots of miR395 over-expression plants in which the expression of the APS1,APS3,and APS4 genes was suppressed.Accordingly,reduced expression of miR395 caused a decline of sulfate concentration.In agreement with these results,over-expression of the APS1,APS3,and APS4 genes led to the reduction of sulfate levels.Differential expression of these three APS genes in response to sulfate starvation implied that they have different functions.Further investigation revealed that the regulation of sulfate levels mediated by miR395 depends on the repression of its APS targets.Unlike the APS1,APS3,and APS4 genes,which encode plastid-localized ATP sulfurylases,the APS2 gene encodes a cytosolic version of ATP sulfurylase.Genetic analysis indicated that APS2 has no significant effect on sulfate levels.Our data suggest that miR395-targeted APS genes are key regulators of sulfate concentration in leaves. 展开更多
关键词 SULFUR mir395 APS1 APS2 APS3 APS4 ATP sulfurylase
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miR395-regulated sulfate metabolism exploits pathogen sensitivity to sulfate to boost immunity in rice 被引量:10
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作者 Zeyu Yang Shugang Hui +10 位作者 Yan Lv Miaojing Zhang Dan Chen Jingjing Tian Haitao Zhang Hongbo Liu Jianbo Cao Wenya Xie Changyin Wu Shiping Wang Meng Yuan 《Molecular Plant》 SCIE CAS CSCD 2022年第4期671-688,共18页
MicroRNAs (miRNAs) play important roles in plant physiological activities. However, their roles and molecular mechanisms in boosting plant immunity, especially through the modulation of macronutrient metabolism in res... MicroRNAs (miRNAs) play important roles in plant physiological activities. However, their roles and molecular mechanisms in boosting plant immunity, especially through the modulation of macronutrient metabolism in response to pathogens, are largely unknown. Here, we report that an evolutionarily conserved miRNA, miR395, promotes resistance to Xanthomonas oryzae pv. oryzae (Xoo) and X. oryzae pv. oryzicola (Xoc), two destructive bacterial pathogens, by regulating sulfate accumulation and distribution in rice. Specifically, miR395 targets and suppresses the expression of the ATP sulfurylase gene OsAPS1, which functions in sulfate assimilation, and two sulfate transporter genes, OsSULTR2;1 and OsSULTR2;2, which function in sulfate translocation, to promote sulfate accumulation, resulting in broad-spectrum resistance to bacterial pathogens in miR395-overexpressing plants. Genetic analysis revealed that miR395-triggered resistance is involved in both pathogen-associated molecular pattern-triggered immunity and R gene-mediated resistance. Moreover, we found that accumulated sulfate but not S-metabolites inhibits proliferation of pathogenic bacteria, revealing a sulfate-mediated antibacterial defense mechanism that differs from sulfur-induced resistance. Furthermore, compared with other bacteria, Xoo and Xoc, which lack the sulfate transporter CysZ, are sensitive to high levels of extracellular sulfate. Accordingly, miR395-regulated sulfate accumulation impaired the virulence of Xoo and Xoc by decreasing extracellular polysaccharide production and biofilm formation. Taken together, these results suggest that rice miR395 modulates sulfate metabolism to exploit pathogen sensitivity to sulfate and thereby promotes broad-spectrum resistance. 展开更多
关键词 mir395 sulfate metabolism disease resistance CysZ RICE
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玉米mi R395基因家族生物信息学分析及靶基因预测
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作者 王丽 路运才 《中国农学通报》 2022年第14期30-37,共8页
MicroRNA(miRNA)具有调控基因表达的作用,为了揭示玉米miR395基因家族进化规律、表达模式及功能,开展了基因定位、多序列比对、顺式作用元件分析、二级结构分析、靶基因预测及表达模式分析。结果共鉴定到16个成员,且均集中分布在第2号、... MicroRNA(miRNA)具有调控基因表达的作用,为了揭示玉米miR395基因家族进化规律、表达模式及功能,开展了基因定位、多序列比对、顺式作用元件分析、二级结构分析、靶基因预测及表达模式分析。结果共鉴定到16个成员,且均集中分布在第2号、第10号染色体上;19个碱基完全相同,表明在进化过程中具有高度保守性;具有18个ABRE类顺式作用元件,推测其通过参与调节ABA信号传导,提高玉米抗逆性;多数靶向基因参与硫酸盐同化,初步推测玉米miR395基因家族参与玉米硫代谢;转录组分析发现zma-miR395基因家族中一些成员为下调表达模式。研究结果为后续玉米相关基因的功能解析奠定了基础。 展开更多
关键词 玉米 mir395基因家族 生物信息学分析 靶基因 表达模式
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