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MiR30b与小鼠Bach2相互作用的研究
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作者 段志青 李岩 +1 位作者 卫定禄 张志伟 《航天医学与医学工程》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期84-87,共4页
目的研究B细胞末端分化过程中miR30b新的作用靶点。方法经生物信息学分析,利用特异性引物以及定点突变引物从小鼠c DNA中分别扩增大小为530、361和189bp三个目的片段,胶回收并对361和189bp进行拼接,获得野生型、突变型小鼠Bach2 mRNA特... 目的研究B细胞末端分化过程中miR30b新的作用靶点。方法经生物信息学分析,利用特异性引物以及定点突变引物从小鼠c DNA中分别扩增大小为530、361和189bp三个目的片段,胶回收并对361和189bp进行拼接,获得野生型、突变型小鼠Bach2 mRNA特异性片段,分别与pmir GLO载体连接,构建野生型、突变型重组荧光素酶报告基因质粒pmir GLO-m Bach2、pmir GLO-m Bach2 mt;与miR30b共转染至HEK293 T细胞,分析其荧光素酶活性。结果重组荧光素酶报告基因质粒经双酶切及测序证实构建正确;共转染后,与pmir GLO+miR30b组相比,pmir GLO-m Bach2+miR30b组的荧光素酶活性明显降低(P<0.05),而pmir GLO-m Bach2 mt+miR30b组的荧光素酶活性则无明显改变(P>0.05)。结论小鼠Bach2 mRNA是miR30b的靶点。 展开更多
关键词 mir30b 小鼠Bach2 靶基因 B细胞末端分化
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miR⁃30b在低氧环境中调控兔骨髓间充质干细胞成软骨分化 被引量:3
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作者 汪仡骁 吴恒鹏 +3 位作者 万雪 陈方 石超 瓦庆德 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第24期3113-3118,共6页
目的针对软骨缺损难以自行修复的临床难题,探讨miR⁃30b调控兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)成软骨分化中的作用及潜在机制,为软骨修复提供新思路。方法密度梯度离心法分离BMSCs;流式细胞术和双向诱导分化实验鉴定细胞;CCK⁃8和Western blot检... 目的针对软骨缺损难以自行修复的临床难题,探讨miR⁃30b调控兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)成软骨分化中的作用及潜在机制,为软骨修复提供新思路。方法密度梯度离心法分离BMSCs;流式细胞术和双向诱导分化实验鉴定细胞;CCK⁃8和Western blot检测细胞在不同CoCl_(2)浓度下增殖能力和HIF⁃1α表达变化情况;构建稳定表达miR⁃30b的细胞株,Western blot检测其靶基因SOX9和Wnt/β⁃catnein信号通路的表达;在低氧环境中成软骨诱导分化,21 d后Western blot和免疫组化染色检测CollagenⅡ与SOX9的表达。结果流式检测和双向分化实验结果显示细胞高表达CD29和CD34,低表达CD44和CD45,同时具有良好的分化能力。CCK⁃8结果表明CoCl2溶液诱导的低氧环境可促进BMSCs增殖(P<0.05),且低氧可促进细胞表达HIF⁃1α。稳定表达miR⁃30b的细胞在低氧环境中成软骨诱导21 d后,免疫组化和Western blot结果显示CollagenⅡ与SOX9的表达较对照组、空载组及低氧组均明显下调(P<0.01)。结论miR⁃30b能降低BMSCs在低氧环境中成软骨分化,为表观遗传学调控干细胞修复软骨缺损提供参考。 展开更多
关键词 软骨缺损 miR⁃30b 骨髓间充质干细胞 成软骨分化 低氧
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miR⁃30b⁃5p通过下调MKRN3表达抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭 被引量:3
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作者 周乾华 毕华俊 +2 位作者 孟凡东 施益明 芮超 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2023年第13期1627-1633,共7页
目的探讨miR⁃30b⁃5p在食管癌细胞中的表达及对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响机制。方法收集2016年1月至2020年12月就诊于安徽省第二人民医院手术治疗的70例食管癌患者的肿瘤和癌旁组织,检测miR⁃30b⁃5p的表达水平。qRT⁃PCR检测食管... 目的探讨miR⁃30b⁃5p在食管癌细胞中的表达及对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响机制。方法收集2016年1月至2020年12月就诊于安徽省第二人民医院手术治疗的70例食管癌患者的肿瘤和癌旁组织,检测miR⁃30b⁃5p的表达水平。qRT⁃PCR检测食管癌细胞株中miR⁃30b⁃5p的表达水平。将miR⁃30b⁃5p mimics转染至TE⁃13和ECA109细胞中,检测转染后各组细胞中miR⁃30b⁃5p及MKRN3表达水平。根据细胞增殖实验,Transwell及裸鼠成瘤实验检测食管癌细胞增殖、迁移及侵袭能力。双荧光素酶实验验证miR⁃30b⁃5p的靶基因。蛋白印迹实验探索miR⁃30b⁃5p对食管癌影响的分子机制。结果miR⁃30b⁃5p在食管癌细胞和食管癌组织中相较于正常上皮细胞和癌旁组织表达显著下降(P<0.05)。细胞增殖实验显示,miR⁃30b⁃5p mimics组增殖率显著低于NC组(P<0.05);Transwell实验结果显示,miR⁃30b⁃5p mimics组迁移率及侵袭率显著低于NC组(P<0.05);双荧光素酶实验显示MKRN3是miR⁃30b⁃5p的直接靶基因。Western blot检测JAK/STAT信号通路蛋白发现,miR⁃30b⁃5p mimics组蛋白低于NC组(P<0.05)。结论miR⁃30b⁃5p在食管癌中呈现低表达,miR⁃30b⁃5p通过下调MKRN3表达抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。 展开更多
关键词 miR⁃30b⁃5p makorin环指蛋白3 食管癌 JAK/STAT信号通路 细胞增殖 细胞迁移 细胞侵袭
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