肺癌外泌体miR-494-3p靶向ZEB1抑制非小细胞肺癌A549细胞EMT进程的机制

1

作者 侯丽丽 宋秋红 +1 位作者 刘硕人 赵睿暄 《西部医学》 2026年第1期6-12,19,共8页

目的探讨外周血间充质干细胞(MSCs)来源的外泌体(MSCs-Exos)对非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞上皮-间质转化(EMT)进程的影响和机制。方法从NSCLC患者的外周血中提取MSCs,分离、纯化,并通过油红O染色评估其脂质分化能力。采用超速离心法分... 目的探讨外周血间充质干细胞(MSCs)来源的外泌体(MSCs-Exos)对非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞上皮-间质转化(EMT)进程的影响和机制。方法从NSCLC患者的外周血中提取MSCs,分离、纯化,并通过油红O染色评估其脂质分化能力。采用超速离心法分离出MSCs-Exos,并用TEM检测其形态。采用NTA分析外泌体的大小和分布。Western blot检测外泌体特征蛋白CD9、TSG101和Calnexin的表达。此外,采用RT-qPCR检测MSCs-Exos中miR-494-3p的表达水平。培养NSCLC细胞A549,并进行Transwell细胞侵袭实验,以评估MSCs-Exos对A549细胞迁移和侵袭特性的影响;采用RT-qPCR定量检测ZEB1 mRNA的表达水平。荧光素酶实验检测miR-494-3p与ZEB1结合情况。免疫细胞荧光染色观察细胞内E-cadherin和Vimentin表达,Western Blot检测ZEB1、E-cadherin、Vimentin、MMP2和MMP9蛋白的表达水平。结果miR-494-3p表达在MSCs-Exos中明显降低。MSCs-Exos中miR-494-3p抑制A549细胞增殖、迁移和EMT进程。miR-494-3p可直接靶向ZEB1。过表达ZEB1减弱miR-494-3p对A549细胞EMT进程的抑制作用。结论NSCLC患者外周血MSCs-Exos中miR-494-3p通过靶向ZEB1抑制A549细胞EMT进程。 展开更多

关键词 非小细胞肺癌 间充质干细胞 外泌体 mir-494-3p ZEB1 上皮-间质转化

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miR-494-3p通过SMAD9影响唾液腺腺样囊性癌细胞学功能的研究

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作者 任海宁 孟颖 +2 位作者 张澔泽 王晨星 叶金海 《口腔生物医学》 2025年第5期261-267,共7页

目的:探究miR-494-3p对人唾液腺腺样囊性癌(SACC)细胞的增殖、迁移和侵袭的影响。方法:通过miR-494-3p-mimics转染设置对照组和过表达组,并通过实时荧光定量PCR验证转染效率;CCK-8、划痕和Transwell实验检测miR-494-3p对SACC细胞的增殖... 目的:探究miR-494-3p对人唾液腺腺样囊性癌(SACC)细胞的增殖、迁移和侵袭的影响。方法:通过miR-494-3p-mimics转染设置对照组和过表达组,并通过实时荧光定量PCR验证转染效率;CCK-8、划痕和Transwell实验检测miR-494-3p对SACC细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响;双荧光素酶报告基因检测293T细胞系miR-494-3p与SMAD9蛋白之间的相互作用,通过转染si-NC设为对照组、转染si-SMAD9设为敲除组、转染si-SMAD9+miR-494-3p inhibitor设为挽救组,CCK-8、划痕和Transwell实验检测miR-494-3p通过SMAD9对SACC细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果:与对照组相比,miR-494-3p过表达组SACC细胞增殖、迁移和侵袭能力显著增强(P<0.05),miR-494-3p与SMAD9蛋白存在靶向关系,与对照组比较,敲除组、挽救组SACC细胞的增殖、迁移和侵袭均增强(P<0.05),与敲除组比较,挽救组SACC细胞的增殖、迁移和侵袭减弱(P<0.05)。结论:miR-494-3p可以通过抑制SMAD9促进SACC细胞的增殖、迁移和侵袭。 展开更多

关键词 唾液腺腺样囊性癌 mir-494-3p SMAD9 增殖 迁移 侵袭

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脂肪因子对3T3-L1脂肪细胞miR-494-3p表达的调控影响

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作者 刘頔 徐广峰 +3 位作者 林小飞 郑君 欧明明 王玉美 《中国当代医药》 2025年第31期8-12,共5页

目的分析脂肪因子抵抗素、瘦素和白细胞介素-6对3T3-L1脂肪前体细胞miR-494-3p表达的调控作用。方法将3T3-L1前体脂肪细胞诱导分化为成熟脂肪细胞,于实验前1天更换为无血清无糖的培养基饥饿刺激过夜,然后分别以浓度为60 ng/ml抵抗素、30... 目的分析脂肪因子抵抗素、瘦素和白细胞介素-6对3T3-L1脂肪前体细胞miR-494-3p表达的调控作用。方法将3T3-L1前体脂肪细胞诱导分化为成熟脂肪细胞,于实验前1天更换为无血清无糖的培养基饥饿刺激过夜,然后分别以浓度为60 ng/ml抵抗素、30 ng/ml瘦素和30 ng/ml白细胞介素-6干预成熟脂肪细胞0、4、8、24、48 h,在每个时间点收集干预后的脂肪细胞,应用实时荧光定量PCR技术测定成熟脂肪细胞内miR-494-3p、U6和miR-103的表达量,并计算miR-494-3p/U6和miR-494-3p/miR-103比值。结果抵抗素干预成熟脂肪细胞48 h后,miR-494-3p/U6和miR-494-3p/miR-103表达低于0 h,差异有统计学意义(P<0.05)。瘦素干预3T3-L1成熟脂肪细胞4、8、24、48 h后,miR-494-3p/U6表达高于0 h,差异有统计学意义(P<0.05);干预24、48 h后,miR-494-3p/U6和miR-494-3p/miR-103表达高于0 h,差异有统计学意义(P<0.05)。白细胞介素-6干预24 h后,miR-494-3p/U6表达低于0 h,差异有统计学意义(P<0.05);干预24、48 h后,miR-494-3p/miR-103表达低于0 h,差异有统计学意义(P<0.05)。结论脂肪因子可能通过调控miR-494-3p的表达水平进而影响成熟脂肪细胞的胰岛素敏感性,为肥胖所致的胰岛素抵抗的防治带来新的发现和潜在的干预靶点。 展开更多

关键词 mir-494-3p 胰岛素抵抗 抵抗素 瘦素 白细胞介素-6

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miR-494-3p通过下调胰岛素受体底物-1促糖尿病大鼠心肌细胞胰岛素抵抗 被引量：12

4

作者 吴洁 秦兴华 +5 位作者 侯作旭 付子豪 李国华 杨红燕 张星 高峰 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期271-278,共8页

越来越多的证据表明microRNA广泛参与调控心血管功能。我们预实验结果显示糖尿病大鼠心肌miR-494-3p增加,且有研究表明miR-494-3p与肥胖等代谢异常有关。因此,本研究旨在探讨miR-494-3p在糖尿病心肌胰岛素敏感性改变中的作用及其机制。... 越来越多的证据表明microRNA广泛参与调控心血管功能。我们预实验结果显示糖尿病大鼠心肌miR-494-3p增加,且有研究表明miR-494-3p与肥胖等代谢异常有关。因此,本研究旨在探讨miR-494-3p在糖尿病心肌胰岛素敏感性改变中的作用及其机制。利用高脂饲料联合链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型,提取心肌组织RNA进行qPCR检测,结果显示糖尿病大鼠的心肌miR-494-3p表达水平与正常大鼠相比明显上调(P <0.05)。体外高糖高脂诱导H9c2细胞胰岛素抵抗模型,qPCR结果显示细胞中miR-494-3p水平明显升高(P <0.01),并随高脂程度加重而增加;抑制miR-494-3p表达可以增加胰岛素刺激下细胞对葡萄糖的摄取(P <0.01),并提高胰岛素刺激后Akt磷酸化水平(P <0.05);单纯过表达H9c2细胞中的miR-494-3p可以抑制胰岛素刺激的葡萄糖摄取,并降低Akt磷酸化水平(P <0.01)。生物信息学联合蛋白免疫印迹实验证实胰岛素受体底物-1 (insulin receptor substrate 1, IRS1)是miR-494-3p负性调节胰岛素信号转导的靶分子之一。上述结果提示,miR-494-3p通过下调IRS1促进糖尿病大鼠心肌细胞胰岛素抵抗的形成。 展开更多

关键词 mir-494-3p 2型糖尿病 心肌细胞 胰岛素受体底物-1 胰岛素抵抗

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LINC00355调控miR-494-3p/CCND2对前列腺癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响 被引量：7

5

作者 张建育 李毅宁 +1 位作者 郭一泓 穆鑫 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期564-570,共7页

目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA LINC00355)对前列腺癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响及其作用机制。方法:qRT-PCR检测前列腺癌组织及癌旁组织中LINC00355、miR-494-3p、细胞周期蛋白HD2(CCND2)mRNA的表达水平;体外培养前列腺癌细胞DU145,... 目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA LINC00355)对前列腺癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响及其作用机制。方法:qRT-PCR检测前列腺癌组织及癌旁组织中LINC00355、miR-494-3p、细胞周期蛋白HD2(CCND2)mRNA的表达水平;体外培养前列腺癌细胞DU145,分别将si-NC、si-LINC00355、si-LINC00355与anti-miR-NC、si-LINC00355与anti-miR-494-3p、si-LINC00355与miR-NC、si-LINC00355与miR-494-3p mimics共转染至DU145细胞。MTT检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告实验验证LINC00355与miR-494-3p的靶向调控作用以及miR-494-3p与CCND2的靶向调控作用;Western blot检测CCND2、P21、上皮钙黏附素(E-cadherin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白表达量。结果:与癌旁组织相比,前列腺癌组织中LINC00355与CCND2 mRNA的表达水平显著升高(P<0.05),miR-494-3p的表达水平显著降低(P<0.05);与si-NC组、si-LINC00355+miR-NC组相比,si-LINC00355组、si-LINC00355+miR-494-3p组细胞增殖抑制率显著升高(P<0.05),迁移细胞数与侵袭细胞数显著减少(P<0.05),P21、E-cadherin蛋白水平显著升高(P<0.05),MMP-2蛋白水平显著降低(P<0.05);与si-NC组相比,si-LINC00355组细胞中miR-494-3p的表达水平显著升高(P<0.05),CCND2 mRNA及蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);与si-LINC00355+anti-miR-NC组相比,si-LINC00355+anti-miR-494-3p组细胞增殖抑制率显著降低(P<0.05),迁移细胞数与侵袭细胞数显著增多(P<0.05),P21、E-cadherin蛋白水平显著降低(P<0.05),MMP-2蛋白水平显著升高(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实LINC00355能够靶向结合miR-494-3p, miR-494-3p能够靶向CCND2。结论:LINC00355通过与CCND2竞争结合miR-494-3p,降低miR-494-3p对CCND2表达的抑制作用,从而促进前列腺癌细胞增殖、侵袭、迁移。 展开更多

关键词 LncRNA LINC00355 mir-494-3p CCND2 前列腺癌 增殖 侵袭 迁移

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miR-494通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进胰岛β细胞增殖、抑制其凋亡增加胰岛素分泌 被引量：2

6

作者 宋姗姗 杨洋 +1 位作者 何静 唐俊峰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1003-1009,共7页

目的 探究微小RNA-494 (miR-494)与胰岛β细胞功能和妊娠糖尿病之间的关系。方法 选择20例妊娠糖尿病患者和健康体检者,反转录PCR测定其外周血miR-494的含量;培养INS-1胰岛细胞瘤细胞,分别采用含低糖(3.3 mmol/L)和高糖(16.7 mmol/L)处... 目的 探究微小RNA-494 (miR-494)与胰岛β细胞功能和妊娠糖尿病之间的关系。方法 选择20例妊娠糖尿病患者和健康体检者,反转录PCR测定其外周血miR-494的含量;培养INS-1胰岛细胞瘤细胞,分别采用含低糖(3.3 mmol/L)和高糖(16.7 mmol/L)处理后,采用ELISA测定胰岛素含量来评价胰岛细胞基础和高糖刺激的胰岛素分泌能力;采用miR-494模拟物对照、miR-494模拟物、miR-494抑制物对照、miR-494抑制物分别处理INS-1细胞24、48、72 h,收集细胞。采用噻唑蓝(MTT)法检测INS-1细胞的活性,流式细胞术检测细胞凋亡;反转录PCR检测INS-1细胞Wnt3a、β联蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和c-Myc的mRNA表达;Western blot法检测细胞Wnt3a、β-catenin、cyclin D1、c-Myc蛋白表达。结果 与正常对照组相比,妊娠糖尿病患者空腹胰岛素、空腹血糖、1 h血糖和2 h血糖显著升高;外周血miR-494含量降低。过表达miR-494的INS-1细胞上清液胰岛素浓度增加,当给予高糖后,过表达miR-494进一步促进胰岛素分泌。过表达miR-494明显促进INS-1细胞活性,抑制INS-1细胞凋亡;miR-494能够显著性促进Wnt3a、β-catenin、cyclin D1、c-Myc的mRNA和蛋白表达,miR-494抑制物处理则结果相反。结论 miR-494通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进胰岛β细胞增殖、抑制其凋亡增加胰岛素分泌。 展开更多

关键词 妊娠糖尿病 WNT β联蛋白(β-catenin) 微小RNA-494(mir-494) 胰岛Β细胞

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miR-494 对骨肉瘤细胞增殖和侵袭的作用 被引量：3

7

作者 张雷 段广超 吴智辉 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第21期1974-1977,共4页

[目的]探究miR-494对骨肉瘤细胞增殖和侵袭的调控作用及机制。[方法]对骨肉瘤MG-63细胞采用瞬时转染法上调/下调miR-494水平,采用RT-PCR法检测mRNA表达水平,CCK-8法检测细胞的增殖能力,Transwell法检测细胞的侵袭能力,划痕实验检测细胞... [目的]探究miR-494对骨肉瘤细胞增殖和侵袭的调控作用及机制。[方法]对骨肉瘤MG-63细胞采用瞬时转染法上调/下调miR-494水平,采用RT-PCR法检测mRNA表达水平,CCK-8法检测细胞的增殖能力,Transwell法检测细胞的侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot检测目标蛋白表达水平。[结果]瞬时转染后随时间推移,两组miR-494的表达均显著增加(P<0.05),转染后12、18以及24 h时,转染组的miR-494表达情况均高于对照组(P<0.05)。随时间推移,两组细胞增殖均显著增加(P<0.05),24、48以及72 h时,转染组细胞增殖水平均显著低于对照组(P<0.05)。转染组在视野下的平均细胞数、细胞跨膜数量以及细胞迁移率均显著低于对照组(P<0.05)。转染组CDK6的mRNA以及蛋白表达均显著低于对照组(P<0.05)。[结论]miR-494的高表达能够抑制骨肉瘤细胞的增殖,并且能够导致CDK6的mRNA以及蛋白质表达水平降低。 展开更多

关键词 骨肉瘤 mir-494 CDK6 细胞增殖

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miR-494在胃癌组织中的表达及其对人胃癌SGC-7901细胞增殖和迁移的影响 被引量：4

8

作者 李炜 王娟毅 +2 位作者 姚忠强 贺启华 吴光辉 《现代消化及介入诊疗》 2019年第9期952-956,共5页

目的探究miR-494在胃癌组织中的表达及其对人胃癌SGC-7901细胞增殖和迁移的影响机制。方法收集34例胃癌病人肿瘤标本和癌旁组织,使用RT-PCR检测miR-494表达情况;将胃癌SGC-7901细胞分为:空白对照组、空白质粒导入组和目的基因组。空白... 目的探究miR-494在胃癌组织中的表达及其对人胃癌SGC-7901细胞增殖和迁移的影响机制。方法收集34例胃癌病人肿瘤标本和癌旁组织,使用RT-PCR检测miR-494表达情况;将胃癌SGC-7901细胞分为:空白对照组、空白质粒导入组和目的基因组。空白质粒导入组使用空白质粒转染胃癌SGC-7901细胞,目的基因组使用miR-494转染胃癌SGC-7901细胞;分别检测各组miR-494的表达水平;使用CCK-8检测各组胃癌SGC-7901细胞的增殖情况;使用Transwell检测各组胃癌SGC-7901细胞侵袭性及迁移性;使用蛋白质印记检测各组增殖、侵袭和迁移相关蛋白表达水平。结果相比癌旁正常组织,胃癌组织中miR-494表达水平显著降低(P<0.05);空白对照组与空白质粒导入组各项指标均无显著差异(P>0.05);相比空白质粒导入组,目的基因组miR-494表达水平、单位面积细胞侵袭数目和Ki67、VEGF、E-cadherin蛋白表达水平显著降低(P<0.05),细胞抑制率和Vimentin、N-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论miR-494的表达可以有效降低胃癌SGC-7901细胞相关增殖蛋白的表达,抑制其增殖,并通过调节上皮间质转化抑制胃癌SGC-7901细胞的侵袭及迁移能力。 展开更多

关键词 胃癌SGC-7901 mir-494 细胞增殖 细胞迁移

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MiR-494通过核转录因子-κB通路对脓毒症大鼠肾损伤的作用机制 被引量：2

9

作者 卢鹏 张雷 +2 位作者 樊晶晶 李菁 朱一堂 《解剖学杂志》 CAS 2021年第4期286-290,共5页

目的:探讨miR-494通过核转录因子-κB(NF-κB)通路对脓毒症大鼠肾损伤的作用机制。方法:大鼠分为假手术组、脓毒症大鼠模型组(模型组)、转染miR-494 inhibitor脓毒症大鼠模型组(miR-494 inhibitor组)。Masson三色法检测大鼠肾组织病变程... 目的:探讨miR-494通过核转录因子-κB(NF-κB)通路对脓毒症大鼠肾损伤的作用机制。方法:大鼠分为假手术组、脓毒症大鼠模型组(模型组)、转染miR-494 inhibitor脓毒症大鼠模型组(miR-494 inhibitor组)。Masson三色法检测大鼠肾组织病变程度,ELISA法检测炎症因子水平,免疫印迹检测NF-κB的蛋白表达,TUNEL检测肾小管细胞凋亡,全自动生化分析仪检测大鼠血清及尿液中血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)及24 h尿蛋白定量(UTP)等生物化学指标。结果:与假手术组相比,模型组及miR-494 inhibitor组大鼠肾组织中miR-494表达量均升高,但miR-494 inhibitor组大鼠miR-494表达低于模型组;模型组和miR-494 inhibitor组大鼠血清中Scr、BUN和UTP的表达水平均显著升高。与模型组相比,miR-494 inhibitor组大鼠血清Scr、BUN、UTP水平显著降低。假手术组肾组织结构完整,miR-494 inhibitor组肾小球间质增多,肾间质增宽,炎症细胞浸润严重。与miR-494 inhibitor组相比,模型组肾小球硬度增加,肾小管周围组织炎症细胞浸润更加严重。假手术组大鼠白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-1β的表达水平最低,模型组大鼠IL-6、TNF-α和IL-1β的表达最高;与模型组比较,miR-494 inhibitor组大鼠IL-6、TNF-α和IL-1β的水平明显降低,肾小管上皮细胞的凋亡率比模型组低,但高于假手术组。miR-494 inhibitor组中大鼠NF-κB p65蛋白表达比模型组低,但高于假手术组。结论:miR-494低表达可抑制脓毒症大鼠NF-κB p65的表达,降低炎症因子水平,从而改善肾损伤程度。 展开更多

关键词 mir-494 脓毒症 核转录因子-ΚB 肾 损伤

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外周血miR-494及Let-7e在诊断急性缺血性脑卒中患者中的临床价值 被引量：2

10

作者 包元飞 王新 王玲玲 《临床与病理杂志》 2016年第12期2028-2032,共5页

目的:通过检测急性缺血性脑卒中患者与正常对照组外周血中miR-494及Let-7e的表达水平,探讨其与急性缺血性脑卒中的关系。方法:收集67例急性缺血性脑卒中患者及50例非卒中正常健康人群,采用实时荧光定量PCR法(Quantitative Real-time PCR... 目的:通过检测急性缺血性脑卒中患者与正常对照组外周血中miR-494及Let-7e的表达水平,探讨其与急性缺血性脑卒中的关系。方法:收集67例急性缺血性脑卒中患者及50例非卒中正常健康人群,采用实时荧光定量PCR法(Quantitative Real-time PCR,QRT-PCR)检测血浆中miR-494及Let-7e表达水平,比较两组外周血中表达水平的差异。并对miR-494及Let-7e行ROC曲线分析,分析其对急性缺血性脑卒中的诊断价值。进一步将急性缺血性脑卒中患者分为预后不佳组(MRS 3-6)和预后良好组(MRS0-2),分析其在两组之间的差异。结果:急性缺血性脑卒中患者外周血中的miR-494(1.71±1.14)及Let-7e(1.43±0.93)的表达水平较正常对照组外周血明显升高(P<0.05)。miR-494及Let-7e ROC曲线下面积分别为0.777、0.756。预后不良组的miR-494(2.04±0.11 vs.1.46±0.05)及Let-7e(1.68±0.61 vs.1.24±0.27)表达水平均较预后良好组显著升高,两组之间有统计学差异(P<0.05)。结论:miR-494及Let-7e可能与急性缺血性脑卒中相关,对急性缺血性脑卒中患者的临床诊断和预后判断具有潜在的应用价值。 展开更多

关键词 缺血性脑卒中 mir-494 LET 7e 实时荧光定量PCR法 MRS评分

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miR-494通过抑制SIRT1表达调节人宫颈癌Hela细胞系增殖和迁移 被引量：3

11

作者 陈建亮 《实用预防医学》 CAS 2015年第11期1390-1392,1386,共4页

目的观察宫颈癌组织中miR-494的表达情况及其对宫颈癌细胞系Hela增殖和迁移的影响,并对其相关机制进行初步的分析。方法 RT-PCR方法检测miR-494在宫颈癌组织和宫颈癌细胞系中的表达情况。克隆形成实验检测miR-494对宫颈癌细胞系Hela增... 目的观察宫颈癌组织中miR-494的表达情况及其对宫颈癌细胞系Hela增殖和迁移的影响,并对其相关机制进行初步的分析。方法 RT-PCR方法检测miR-494在宫颈癌组织和宫颈癌细胞系中的表达情况。克隆形成实验检测miR-494对宫颈癌细胞系Hela增殖能力的影响;划痕实验检测miR-494对宫颈癌细胞系Hela迁移能力的影响。Target Scans软件预测miR-494可能的靶基因,并采用荧光素酶报告基因实验验证预测的靶基因。Western blot方法检测miR-494对预测靶基因表达的影响。结果 miR-494在宫颈癌组织和宫颈癌细胞系中的表达较正常组织相比显著降低(P<0.01)。转染miR-494可显著抑制Hela细胞的增殖和迁移能力(P<0.01),而转染anti-miR-494可增加Hela细胞的增殖和迁移能力(P<0.01)。Targetsscan软件预测miR-494可能的靶基因为去乙酰化酶1(sirtuin 1,SIRT1),且得到荧光素报告实验结果证实。Western blot结果显示转染miR-494可显著抑制Hela细胞中SIRT1的表达(P<0.01),而转染anti-miR-494可增加Hela细胞中SIRT1的表达(P<0.01)。结论 miR-494可通过调节SIRT1的表达而发挥宫颈癌抑制作用。 展开更多

关键词 mir-494 去乙酰化酶1 宫颈癌 增殖 迁移

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骨肉瘤组织中miR-494、miR-130b下游靶基因的探究 被引量：1

12

作者 曹博 史永涛 《海南医学院学报》 CAS 2018年第24期2103-2106,2111,共5页

目的:研究骨肉瘤组织中miR-494、miR-130b的表达量并探究下游靶基因。方法:收集在延安大学附属医院手术切除的骨肉瘤组织,另取同期关节置换术后的正常骨组织作为对照;抽提miRNA后测定miR-494、miR-130b的表达量,抽提RNA后测定增殖基因... 目的:研究骨肉瘤组织中miR-494、miR-130b的表达量并探究下游靶基因。方法:收集在延安大学附属医院手术切除的骨肉瘤组织,另取同期关节置换术后的正常骨组织作为对照;抽提miRNA后测定miR-494、miR-130b的表达量,抽提RNA后测定增殖基因、侵袭基因的mRNA表达量,抽提蛋白后测定血管新生分子的蛋白含量。结果:骨肉瘤组织中miR-494、Runx3、ELL2、p16、RECK、TIMP1的表达量以及TSSC3的蛋白含量显著低于正常骨组织,miR-130b、β-catenin、CyclinD1、Sox9、ADAMTS18、CatD、STMN1的表达量以及CEACAM6、VEGF、Ang-2的蛋白含量显著高于正常骨组织;骨肉瘤组织中miR-494与Runx3、ELL2、p16、RECK、TIMP1、TSSC3呈正相关,与β-catenin、CyclinD1、Sox9、ADAMTS18、CatD、STMN1、CEACAM6、VEGF、Ang-2呈负相关,miR-130b与Runx3、ELL2、p16、RECK、TIMP1、TSSC3呈负相关,与β-catenin、CyclinD1、Sox9、ADAMTS18、CatD、STMN1、CEACAM6、VEGF、Ang-2呈正相关。结论:骨肉瘤组织中miR-494的低表达以及miR-130b的高表达能够调控增殖、侵袭基因的表达及血管新生分子的生成。 展开更多

关键词 骨肉瘤 mir-494 mir-130b 增殖 侵袭 血管新生

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miR-494对肺癌细胞株A549及SPCA1生长及侵袭的抑制作用 被引量：5

13

作者 麦春平 陈衍 +2 位作者 姚开泰 刘真 方唯意 《广东药学院学报》 CAS 2013年第2期185-189,共5页

目的探讨miR-494对肺癌细胞增殖、侵袭的影响及分子机制。方法利用化学合成的miR-494mimics转染A549及SPCA1肺癌细胞株,通过MTT、Transwell小室迁移实验、Boyden小室侵袭实验等观察过表达miR-494后细胞迁移、侵袭能力及生长的变化;利用W... 目的探讨miR-494对肺癌细胞增殖、侵袭的影响及分子机制。方法利用化学合成的miR-494mimics转染A549及SPCA1肺癌细胞株,通过MTT、Transwell小室迁移实验、Boyden小室侵袭实验等观察过表达miR-494后细胞迁移、侵袭能力及生长的变化;利用Western blot检测细胞周期、上皮间叶转变(EMT)标志物相关蛋白。结果 MTT法显示,与对照组比较,过表达miR-494组细胞生长速度减慢,差异有统计学意义(P<0.001)。Transwell及Boyden实验显示过表达组细胞穿过聚碳酸酯膜的数量少于对照组,差异有统计学意义(P<0.001)。Western blot结果显示,与对照组比较,过表达miR-494的A549和SPCA1细胞中,CCND1、N-CA、VIMENTIN表达下调。结论miR-494可能通过下调CCND1、VIMENTIN、N-CA对肺癌细胞株A549及SPCA1的增殖、迁移及侵袭起到抑制作用。 展开更多

关键词 mir-494 肺癌 生长 侵袭

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CLPTM1L与miR-494靶向关系的双荧光素酶报告实验验证 被引量：4

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作者 张仁 张圣洁 +2 位作者 张学研 李彤 臧文巧 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2015年第3期430-433,共4页

目的:确定miR-494与CLPTM1L的靶向关系。方法:采用生物信息学方法预测miR-494与CLPTM1L基因的结合位点。采用PCR技术扩增CLPTM1L基因3'UTR片段,并克隆至pmir GLO载体,构建野生型及突变型重组双荧光素酶报告质粒。将培养的293T细胞分... 目的:确定miR-494与CLPTM1L的靶向关系。方法:采用生物信息学方法预测miR-494与CLPTM1L基因的结合位点。采用PCR技术扩增CLPTM1L基因3'UTR片段,并克隆至pmir GLO载体,构建野生型及突变型重组双荧光素酶报告质粒。将培养的293T细胞分为4组,分别共转染miR-494或阴性对照和pmir GLO-CLPTM1L-W 3'UTR或pmir GLOCLPTM1L-M 3'UTR,检测4组细胞中荧光素酶活性。结果:酶切和测序证实成功构建了野生型及突变型重组双荧光素酶报告质粒pmir GLO-CLPTM1L-W 3'UTR和pmir GLO-CLPTM1L-M 3'UTR;与共转染miR-494 mimics和突变型CLPTM1L3'UTR质粒的293T细胞中荧光素酶活性(1.056 4±0.163 4)、共转染阴性对照序列和突变质粒的293T细胞中荧光素酶活性(0.961 3±0.177 9)或野生型质粒的293T细胞中荧光素酶活性(0.983 4±0.001 2)相比,共转染miR-494 mimics和野生型CLPTM1L 3'UTR质粒的293T细胞中荧光素酶活性(0.651 6±0.136 4)明显降低(F=4.476,P=0.040),其他3组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CLPTM1L与miR-494存在靶向关系。 展开更多

关键词 mir-494 CLPTM1L 双荧光素酶报告系统

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miR-494慢病毒表达载体的构建 被引量：3

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作者 林燕明 张庆 +3 位作者 唐志 沈湘 吴爱兵 吴斌 《现代肿瘤医学》 CAS 2013年第5期930-933,共4页

目的:构建miR-494基因的慢病毒表达载体。方法:以人基因组DNA为模板,PCR扩增hsa-miR-494基因,用XhoⅠ、BamHⅠ双酶切携带EGFP的慢病毒载体pGIPZ,酶切产物电泳后回收约11kb的载体片段。使用DNA连接试剂盒中的Solution I将其与miR-494连接... 目的:构建miR-494基因的慢病毒表达载体。方法:以人基因组DNA为模板,PCR扩增hsa-miR-494基因,用XhoⅠ、BamHⅠ双酶切携带EGFP的慢病毒载体pGIPZ,酶切产物电泳后回收约11kb的载体片段。使用DNA连接试剂盒中的Solution I将其与miR-494连接,连接产物转化,次日挑选单菌落,PCR筛选正向阳性克隆,随后将选定的含有阳性克隆的单菌落摇菌,提取质粒并行酶切鉴定及对插入的miR-494测序,所构建载体命名为pGIPZ-miR-494-eGFP,获pGIPZ-miR-494-eGFP后按Invitrogen公司推荐的标准程序进行慢病毒包装和确认慢病毒是否成功生产。将慢病毒颗粒以最适滴度感染人体肺腺癌细胞株A549,通过Aldefluor流式分选出带有目的基因和空载病毒的细胞,用Real-Time PCR检测感染效率。结果:目的基因与慢病毒载体连接成功。共转染293T细胞包装病毒与浓缩后滴度达1.02×108TU/ml,并转染到肺腺癌细胞株A549上,Aldefluor流式分选出的细胞后通过Real-Time PCR检测结果显示miR-494慢病毒表达载体感染的A549细胞miR-494表达高于对照组达10倍以上。结论:成功构建携带人miR-494基因的慢病毒表达载体pGIPZ-miR-494-eGFP,为相关后续研究打下了良好基础。 展开更多

关键词 mir-494 EGFP 慢病毒载体 A549

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miR-494在疾病发生和发展中的作用及分子机制 被引量：1

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作者 莫夏 陈宁 +2 位作者 李金秀 郭艳菊 范晶晶 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期495-504,共10页

microRNA-494(miR-494)是位于染色体14q32.31位点上的一个非编码小分子RNA,主要通过结合靶mRNA的3’非翻译区(3’untranslated regions,3’UTR)来加速RNA降解或抑制蛋白质翻译,从而调控转录后基因的表达。miR-494作为调控基因表达的重... microRNA-494(miR-494)是位于染色体14q32.31位点上的一个非编码小分子RNA,主要通过结合靶mRNA的3’非翻译区(3’untranslated regions,3’UTR)来加速RNA降解或抑制蛋白质翻译,从而调控转录后基因的表达。miR-494作为调控基因表达的重要因子,参与多种疾病的发生、发展和预后。PTEN/PI3K/AKT、核因子κ-B(nuclear factorκ-B,NF-κB)、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)/SMAD、Wnt/β-catenin是调控人体生理与病理生理学过程的重要通路,参与miR-494介导的多种疾病发生和发展。此外,miR-494在循环系统中的存在以及较高的稳定性使其有可能成为疾病诊断、治疗和预测预后的生物靶标。本文综述了近期miR-494在调控疾病中的作用及分子机制的研究进展,并概述miR-494在临床中的诊疗价值,以期为日后针对miR-494的研究及临床应用提供理论参考。 展开更多

关键词 mir-494 PTEN/PI3K/AKT 核因子κ-B MAPK 转化生长因子-β/SMAD WNT/Β-CATENIN

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蓝刺头多糖B通过miR-494-3p/FOXO1/PGC1α信号通路改善胰岛素抵抗HepG2细胞糖脂代谢紊乱 被引量：2

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作者 李冉 夏雅娟 +2 位作者 高珍珍 宋越 杨英 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期99-104,共6页

目的:探讨蓝刺头多糖B对棕榈酸诱导的HepG2胰岛素抵抗的抑制作用及可能机制。方法:MTT法检测蓝刺头多糖B对HepG2细胞增殖的影响;建立棕榈酸诱导HepG2胰岛素抵抗细胞模型;检测蓝刺头多糖对细胞葡萄糖的消耗量、糖原、游离脂肪酸、三酰甘... 目的:探讨蓝刺头多糖B对棕榈酸诱导的HepG2胰岛素抵抗的抑制作用及可能机制。方法:MTT法检测蓝刺头多糖B对HepG2细胞增殖的影响;建立棕榈酸诱导HepG2胰岛素抵抗细胞模型;检测蓝刺头多糖对细胞葡萄糖的消耗量、糖原、游离脂肪酸、三酰甘油的含量;油红O染色观察细胞脂肪变性的程度;实时荧光定量PCR检测miR-494-3p、Foxo1、Pgc1a、Pck2、G6pase mRNA表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组葡萄糖消耗量和糖原合成量显著降低(P<0.01),游离脂肪酸和三酰甘油的含量显著升高(P<0.01),Foxo1、Pgc1α、Pck2、G6pase mRNA的表达显著上调(P<0.05);与模型对照组相比,蓝刺头多糖B 0.5、1.5、3 mg/mL组均能明显增加葡萄糖消耗量和糖原合成量(P<0.05或P<0.01),同时能明显降低细胞内游离脂肪酸和三酰甘油含量(P<0.05或P<0.01),蓝刺头多糖B 1.5、3 mg/mL能够显著改善细胞的脂肪变性(P<0.01),蓝刺头多糖B 3 mg/mL能够明显上调miR-494-3p的表达、明显下调Foxo1、Pgc1a、Pck2、G6pase mRNA表达(P<0.05)。结论:蓝刺头多糖B对棕榈酸诱导的HepG2细胞的胰岛素抵抗有抑制作用,其机制可能与调控miR-494-3p/Foxo1/Pgc1a信号通路有关。 展开更多

关键词 蓝刺头多糖B 胰岛素抵抗 糖脂代谢 mir-494-3p 叉头转录因子-1/过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子-1α信号通路

原文传递

miR-494-3p靶向调控RCAN1对高糖诱导的足细胞损伤的影响 被引量：1

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作者 郭晓莉 杜燕 +1 位作者 李莎莎 袁二磊 《中国医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第8期711-717,共7页

目的 探讨miR-494-3p对高糖(HG)诱导的小鼠肾足细胞(MPC5)损伤的影响及其对钙调磷酸酶调节蛋白1 (RCAN1)的调控作用。方法 HG诱导MPC5细胞建立细胞损伤模型,随机分为NC组、HG组、HG+anti-miR-NC组、HG+anti-miR-494-3p组、HG+pcDNA组、H... 目的 探讨miR-494-3p对高糖(HG)诱导的小鼠肾足细胞(MPC5)损伤的影响及其对钙调磷酸酶调节蛋白1 (RCAN1)的调控作用。方法 HG诱导MPC5细胞建立细胞损伤模型,随机分为NC组、HG组、HG+anti-miR-NC组、HG+anti-miR-494-3p组、HG+pcDNA组、HG+RCAN1组、HG+anti-miR-494-3p+si-NC组、HG+anti-miR-494-3p+si-RCAN1组。采用实时PCR (qRT-PCR)检测miR-494-3p、RCAN1 mRNA表达量;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA法检测白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)水平;双荧光素酶报告实验检测miR-494-3p mimic对Wt-RCAN1荧光素酶活性的影响;Western blotting检测RCAN1蛋白表达量。结果与NC组比较,HG组miR-494-3p表达量升高,凋亡率、IL-1β、TNF-α水平升高,RCAN1 mRNA及蛋白水平降低(P <0.05);与HG+anti-miR-NC组比较,HG+anti-miR-494-3p组凋亡率、IL-1β、TNF-α水平降低(P <0.05);miR-494-3p mimic可降低Wt-RCAN1荧光素酶活性(P <0.05);与HG+pcDNA组比较,HG+RCAN1组凋亡率、IL-1β、TNF-α水平降低(P <0.05);与HG+anti-mi R-NC+si-NC组比较,HG+anti-miR-494-3p+si-RCAN1组凋亡率、IL-1β、TNF-α水平升高(P <0.05)。结论 沉默miR-494-3p可通过促进RCAN1表达抑制MPC5细胞凋亡、炎症反应,从而减轻HG诱导的MPC5细胞损伤。 展开更多

关键词 mir-494-3p 钙调磷酸酶调节蛋白1 足细胞 炎症 细胞凋亡

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子宫内膜异位症血清miR-494-5p/miR-1304-3p水平及不孕 被引量：4

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作者 赵喜艳 崔美英 +1 位作者 范丽丝 冯惠芳 《中国计划生育学杂志》 2019年第4期487-489,493,共4页

目的:探讨子宫内膜异位症患者血清miR-494-5p和miR-1304-3p水平及与不孕的关系。方法:选取2016年5月—2017年8月就诊于本院的子宫内膜异位症患者52例为观察组,选取同期正常体检健康女性52例为对照组,采用实时荧光定量法检测血清miR-494... 目的:探讨子宫内膜异位症患者血清miR-494-5p和miR-1304-3p水平及与不孕的关系。方法:选取2016年5月—2017年8月就诊于本院的子宫内膜异位症患者52例为观察组,选取同期正常体检健康女性52例为对照组,采用实时荧光定量法检测血清miR-494-5p和miR-1304-3p水平,视觉模拟评分法(VAS)评估观察组痛经程度。结果:血清miR-494-5p和miR-1304-3p观察组表达量高于对照组(P<0.05);观察组中,子宫内膜异位症Ⅳ期患者水平高于Ⅰ～Ⅲ期患者,重度疼痛患者水平高于中度、轻度及无疼痛患者,不孕症患者高于非不孕症患者(均P<0.05)。结论:子宫内膜异位症患者血清miR-494-5p和miR-1304-3p表达量随病情进展而逐渐增加,且伴有不孕症患者表达量相对较高,该指标对子宫内膜异位症患者病情进展评估可能有重要意义,值得进一步研究。 展开更多

关键词 子宫内膜异位症 血清mir-494-5p/mir-1304-3p 不孕

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miR-494在乳腺癌中的表达及其临床意义 被引量：4

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作者 靳雪芹 刘水逸 +3 位作者 李晓怡 陈卫群 镇鸿雁 卢忠心 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2017年第11期828-831,共4页

目的探讨miR-494在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中的表达及其与乳腺癌临床分期、转移和预后的关系。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测5种乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MDA-MB-453、HCC-1937、MDA-MB-468、MCF-7和乳腺上皮细胞系HBL-... 目的探讨miR-494在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中的表达及其与乳腺癌临床分期、转移和预后的关系。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测5种乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MDA-MB-453、HCC-1937、MDA-MB-468、MCF-7和乳腺上皮细胞系HBL-100中miR-494的表达水平;收集54对乳腺癌组织和癌旁组织,用qRT-PCR法检测其miR-494的表达水平,并分析其与乳腺癌临床分期、转移和预后的关系。结果 qRT-PCR检测结果显示,与正常乳腺上皮细胞HBL-100相比,MDA-MB-231、MDA-MB-453、HCC-1937、MDA-MB-468、MCF-7乳腺癌细胞系中miR-494的表达水平均明显降低(t分别为212.9、37.73、27.53、10.61、19.46,P均<0.05)。此外,miR-494在乳腺癌组织中的表达水平亦明显低于癌旁组织(t=5.80,P<0.01),且与临床分期(χ2=17.41,P<0.05)、组织病理分级(χ2=5.33,P<0.05)、C-erb B-2表达情况(χ2=9.83,P<0.05)、Ki-67阳性细胞百分比(χ2=6.13,P<0.05)有关。结论 miR-494在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中低表达,且与乳腺癌临床分期、转移和预后关系密切,可成为乳腺癌辅助诊断和预后判断的分子标志。 展开更多

关键词 微小RNA-494 乳腺癌 预后判断

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