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AcMNPV突变株的蛋白表达时相研究
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作者 丁清泉 方勤 +3 位作者 RenéeLapointe 戴顺英 赵小东 Eric B.Carstens 《中国病毒学》 CSCD 2003年第1期35-38,共4页
将苜蓿银纹夜蛾多核衣壳核型多角体病毒(Autograph Colifornica nuclear polyhedrosis virus,AcMNPV)的野生型株HR3和温度敏感突变株ts317、ts538、ts8感染草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)Sf21细胞,并在允许温度(25℃)或非允许温度(3... 将苜蓿银纹夜蛾多核衣壳核型多角体病毒(Autograph Colifornica nuclear polyhedrosis virus,AcMNPV)的野生型株HR3和温度敏感突变株ts317、ts538、ts8感染草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)Sf21细胞,并在允许温度(25℃)或非允许温度(33℃)下培养,分别采用过氧化物酶标记的抗P47蛋白、抗P143蛋白、抗多体蛋白和抗病毒结构蛋白的单克隆抗体检测病毒增殖过程各蛋白出现的时间。结果表明:1)P47蛋白是一种晚期(12hpi)表达蛋白,各突变株在允许温度(25℃)能够表达,但在非允许温度(33℃)不能表达。2)P143蛋白是一种早期(8hpi)表达蛋白,在允许温度和非允许温度时都能表达,ts8的表达量较少。3)在非允许温度条件下,蛋白质的合成速度高于允许温度。4)野生型和突变株ts317的病毒结构蛋白(P80、GP64、VP39、P24和PTP)在允许温度增殖下都能检测到,ts538和ts8表达量相对少些。5)除了GP64和P24外,ts538和ts8感染的细胞在非允许温度下不能表达病毒的结构蛋白。6)野生型毒株HR3在允许温度和非允许温度下的蛋白表达无明显差异。 展开更多
关键词 苜蓿银纹夜蛾多衣壳核型多角体病毒 mnpv 蛋白表达 温度敏感突变株
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杆状病毒splt MNPV S1136基因的克隆,表达及其产物功能
2
《现代临床医学生物工程学杂志》 2002年第2期123-123,共1页
关键词 杆状病毒 splt mnpv S1136基因 克隆 表达
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斜纹夜蛾核型多角体病毒日本株(C3)p10基因的克隆及序列分析
3
作者 朱江 沈颂东 +4 位作者 王文兵 朱玉芳 曹广力 胡兆丽 盛晔 《苏州大学学报(自然科学版)》 CAS 2004年第3期72-77,共6页
从斜纹夜蛾核多角体病毒(Spodopteralituramulticapsidnucleopolyhedrovirus,SpltMNPV)日本株(C3)基因组中克隆了p10基因.核苷酸序列分析表明,该克隆片断涵盖了318bp的读码框及5′端启动子区191bp和3′端终止区62bp的序列.在起始密码子... 从斜纹夜蛾核多角体病毒(Spodopteralituramulticapsidnucleopolyhedrovirus,SpltMNPV)日本株(C3)基因组中克隆了p10基因.核苷酸序列分析表明,该克隆片断涵盖了318bp的读码框及5′端启动子区191bp和3′端终止区62bp的序列.在起始密码子ATG上游-63~-59bp处有一杆状病毒晚期和晚晚期启动子基序TAAG.联配分析表明,SpltMNPV日本株(C3)的核苷酸序列和氨基酸序列与其它9种核多角体病毒的同源性有较大差异.以p10基因为基础绘制的杆状病毒分子进化树将家蚕核多角体病毒(Bombyxmorinucle opolyhedrovirus,BmNPV)与苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographacalifornicamulticapcidnucleopolyhe drovirus,AcMNPV)归到同一分枝,这与以gp37基因和egt基因为基础绘制的杆状病毒分子进化树结果一致. 展开更多
关键词 10基因 日本株 mnpv 克隆 杆状病毒 启动子区 晚期 核型多角体病毒 斜纹夜蛾 苜蓿
暂未订购
新基因Splt137在大肠杆菌中的表达及抗体制备 被引量:4
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作者 尹崇 李朝飞 +2 位作者 王立华 张萍 庞义 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期75-77,共3页
用PCR的方法扩增得到斜纹夜蛾核多角体病毒 (SpltMNPV)ORF137全长基因 (Splt137)。将其克隆到原核表达载体pQE30上 ,并转化大肠杆菌M15 ,在IPTG诱导下表达了与预期相对分子质量相符的一个 2 7× 10 7的蛋白质 ,经过聚丙烯酰氨凝胶... 用PCR的方法扩增得到斜纹夜蛾核多角体病毒 (SpltMNPV)ORF137全长基因 (Splt137)。将其克隆到原核表达载体pQE30上 ,并转化大肠杆菌M15 ,在IPTG诱导下表达了与预期相对分子质量相符的一个 2 7× 10 7的蛋白质 ,经过聚丙烯酰氨凝胶电泳纯化 ,免疫家兔制备了抗Splt137抗体。Western免疫印迹分析表明 ,该抗体适合用作Splt137蛋白的进一步分析。 展开更多
关键词 大肠杆菌 斜纹夜蛾核多角体病毒 Splt137基因 原核表达 抗体 基因表达 杆状病毒
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杆状病毒gp64基因可能是细胞凋亡诱导因子 被引量:3
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作者 代小江 庞义 +1 位作者 农广 施先宗 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期7-12,共6页
发现野生型苜宿丫纹夜蛾多粒包埋核多角体病毒(Autographacalifornicamulticap-sidnuclearpolyhedrosisvirus,AcMNPV)诱导斜纹夜蛾(Spodopteralitu... 发现野生型苜宿丫纹夜蛾多粒包埋核多角体病毒(Autographacalifornicamulticap-sidnuclearpolyhedrosisvirus,AcMNPV)诱导斜纹夜蛾(Spodopteralitura)细胞Sl-zsu-1发生典型的细胞凋亡.该细胞凋亡发生于病毒感染后10~12h,在病毒感染后的24h左右的高峰期细胞凋亡率为95%~100%.AcMNPVDNA和包埋型病毒粒子不能诱导细胞凋亡,只有芽生型病毒粒子才能诱导细胞凋亡.AcMNPVgp64基因编码的GP64膜融合蛋白不仅是位于芽生型病毒粒子囊膜上已知唯一的病毒结构蛋白,还是病毒感染时最早接触细胞的病毒因子.首次提出AcMNPVgp64基因编码的GP64膜融合蛋白可能是一种细胞凋亡诱导因子,并设计了构建AcMNPVGP64膜融合蛋白异源包装病毒的实验方案以便加以证实. 展开更多
关键词 杆状病毒 gp64基因 细胞凋亡 诱导因子 昆虫
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杆状病毒增效蛋白研究进展 被引量:12
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作者 马永平 欧洋 +2 位作者 孟小林 徐进平 叶林柏 《中国病毒学》 CSCD 1999年第3期185-189,共5页
关键词 杆状病毒 增效蛋白 舞毒蛾 核型多角体病毒
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中国棉铃虫核型多角体病毒VHA_(273)原毒株及其克隆株的比较研究 被引量:2
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作者 贾放 徐佳 +4 位作者 聂英超 肖杨 周蕊 李小青 余泽华 《中国病毒学》 CSCD 2003年第3期241-245,共5页
本文从形态结构、生物活性、核酸限制性内切酶图谱、结构多肽等方面对中国棉铃虫核型多角体病毒(HaNPV)VHA273多粒包埋型原毒株及其单粒包埋型克隆株H9进行了比较研究.它们对中国棉铃虫三龄初幼虫的LC5o值分别为2.987×104PIBs/mL和... 本文从形态结构、生物活性、核酸限制性内切酶图谱、结构多肽等方面对中国棉铃虫核型多角体病毒(HaNPV)VHA273多粒包埋型原毒株及其单粒包埋型克隆株H9进行了比较研究.它们对中国棉铃虫三龄初幼虫的LC5o值分别为2.987×104PIBs/mL和1.647×104PIBs/mL当感染剂量为2×107PIBs/mL时,其LT5o值分别是4.866d和4.797d.两个毒株的生物活性差别不大.经SDS-PAGE分析,两毒株结构多肽图谱带型相差较大.两毒株基因组经EcoR Ⅰ,BamH Ⅰ,Hind Ⅲ和Xba Ⅰ消化后,得到的内切酶图谱表现为两毒株间有差别.这些差异的发现将有助于从分子水平揭示多粒包埋病毒和单粒包埋病毒形成原因. 展开更多
关键词 棉铃虫核型多角体病毒 VHA273原毒株 克隆株 生物活性 结构多肽 生物防治
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甜菜夜蛾核多角体病毒VP39蛋白在苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒中的功能研究 被引量:1
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作者 李赛男 吕怡娜 +3 位作者 姜焕焕 黄麟淇 区炳明 刘文华 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期1440-1449,共10页
【目的】构建表达甜菜夜蛾核多角体病毒(Spodoptera exigua multiple nucleopolyhedrovirus,SeMNPV)VP39蛋白的vp39假型苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica MNPV,AcMNPV),明确SeMNPV VP39是否能取代AcMNPV VP39在AcMNPV... 【目的】构建表达甜菜夜蛾核多角体病毒(Spodoptera exigua multiple nucleopolyhedrovirus,SeMNPV)VP39蛋白的vp39假型苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica MNPV,AcMNPV),明确SeMNPV VP39是否能取代AcMNPV VP39在AcMNPV中行使功能,为深入探究杆状病毒的核衣壳装配机理打下理论基础。【方法】利用Bac-to-Bac杆状病毒表达载体系统在AcMNPV vp39缺失型重组bacmid(bAcvp39KO)的基础上构建携带SeMNPV vp39基因、绿色荧光蛋白基因(Enhanced green fluorescence protein,egfp)和多角体蛋白基因(Polyhedrin,polh)的重组病毒(vAcSevp39:FLAG)。利用Western blotting检测分析SeMNPV vp39在vAcSevp39:FLAG转染的草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)IPLB-Sf21-AE clonal isolate 9(Sf9)细胞中的表达情况,通过荧光显微镜观察vAcSevp39:FLAG在Sf9中的感染和扩散情况,采用病毒滴度测定并绘制病毒生长曲线检测vAcSevp39:FLAG的感染性芽生型病毒粒子产量,并以电子显微镜观察vAcSevp39:FLAG转染的Sf9细胞中的形态发生情况。【结果】Western blotting检测结果表明,SeMNPV VP39能在vAcSevp39:FLAG转染的Sf9细胞中获得表达;荧光显微镜观察和病毒生长曲线测定结果表明,在vAcSevp39:FLAG转染的Sf9细胞中无感染性的芽生型病毒粒子产生,与AcMNPV vp39缺失型重组病毒(vAcvp39KO)的现象一致;电子显微镜观察发现,与vAcvp39KO不同的是,在vAcSevp39:FLAG转染的细胞中虽然未产生核衣壳,但在感染细胞的核中存在大量空的透明长管状衣壳结构,表明SeMNPV VP39能挽救vAcvp39KO的衣壳结构装配,但在AcMNPV中不具备装配核衣壳的能力。【结论】SeMNPV VP39在AcMNPV中虽能形成衣壳结构,但不能有效装配核衣壳,导致无芽生型病毒粒子和包埋型病毒粒子产生。 展开更多
关键词 苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒 vp39 甜菜夜蛾核多角体病毒 芽生型病毒粒子 核衣壳装配
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中国棉铃虫核多角体病毒(Heliothis armigera NPV)VHA273毒株DNA的酶切分析与比较研究 被引量:1
9
作者 吴柏春 《华中师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期74-77,共4页
VHA273毒株原为MNPV型,经纯系中国棉铃虫扩增而得出约10%的SNPV.高度纯化两型多用体,温和碱解后,酚法抽提SNPVDNA和MNPVDNA.限制性内切酶BglⅡ,BamHI,EcoRI和HindⅢ分别平行酶切两种DNA,依次均得出11,8,14和13条电泳带.比较分... VHA273毒株原为MNPV型,经纯系中国棉铃虫扩增而得出约10%的SNPV.高度纯化两型多用体,温和碱解后,酚法抽提SNPVDNA和MNPVDNA.限制性内切酶BglⅡ,BamHI,EcoRI和HindⅢ分别平行酶切两种DNA,依次均得出11,8,14和13条电泳带.比较分析DNA的酶切电泳图谱发现,经同一种限制性内切酶酶切,SNPVDNA与MNPVDNA不仅电泳片段数相同,电泳带位也-一对应.讨论提出:该SNPVDNA与MNPVDNA在分子、亚分子水平上是一致的. 展开更多
关键词 酶切图谱 VHA273毒株 DNA 棉铃虫 核多角体病毒
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一种用昆虫病毒研发高效安全的新型生物农药正在全面推广--中国科学院广谱高效昆虫杆状病毒杀虫剂的研制和应用 被引量:4
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作者 张忠信 《科技促进发展》 2016年第1期46-50,共5页
传统观点认为,一种昆虫病毒只能防控一种害虫,广谱甘蓝夜蛾核型多角体病毒(Mb MNPV)杀虫剂的开发改变了这一传统观念。该体病毒杀虫剂可防治32种以上鳞翅目害虫,尤其对我国重要抗性农业害虫小菜蛾、地老虎、甜菜夜蛾、棉铃虫、烟青虫、... 传统观点认为,一种昆虫病毒只能防控一种害虫,广谱甘蓝夜蛾核型多角体病毒(Mb MNPV)杀虫剂的开发改变了这一传统观念。该体病毒杀虫剂可防治32种以上鳞翅目害虫,尤其对我国重要抗性农业害虫小菜蛾、地老虎、甜菜夜蛾、棉铃虫、烟青虫、甘蓝夜蛾、粘虫等有很好的防控效果。中国科学院武汉病毒研究所研制出一种广谱昆虫杆状病毒生物杀虫剂,并已建成全球最大的千吨级昆虫病毒杀虫剂生产线,年产制剂超过600吨。在全国21个省(市、区)大面积推广应用,控制抗性小菜蛾、棉铃虫、甜菜夜蛾等重要农业害虫,年应用面积超过600万亩,已成为目前国内外年产量和年应用面积最大的昆虫病毒生物杀虫剂。 展开更多
关键词 广谱 杆状病毒 生物农药 生产 应用
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斜纹夜蛾核型多角体病毒p74基因的定位和克隆
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作者 杨洁龙 綮新 +1 位作者 吴文言 闫庆生 《中山大学学报论丛》 1998年第4期6-10,共5页
用苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)p74基因的部分片段标记探针,通过SouthernBloting将斜纹夜蛾核型多角体病毒(SlMNPV)的p74基因定位于XhoⅠ49kb、EcoRⅠ44kb、BamH... 用苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)p74基因的部分片段标记探针,通过SouthernBloting将斜纹夜蛾核型多角体病毒(SlMNPV)的p74基因定位于XhoⅠ49kb、EcoRⅠ44kb、BamHⅠ30kb片段上.通过酶切图谱分析和部分序列测定,将其p74基因精确定位.用计算机软件DNASIS和PROSIS对这部分DNA序列进行分析发现其与AcMNPVp74基因的同源性为69%,其可能编码多肽的氨基酸顺序与AcMNPVp74相应部分的同源性为66%. 展开更多
关键词 斜纹夜蛾核型多角体病毒(Slmnpv) p74基因 克隆和序列测定
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中国棉铃虫核多角体病毒VHA273毒株病毒粒子结构蛋白及超微结构的研究 被引量:2
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作者 吴柏春 《华中师范大学学报(自然科学版)》 CSCD 1994年第3期383-388,共6页
HaNPVVHA273毒株的sNPV与mNPV病毒粒子大小为280~275×60~150nm,核衣壳大小为310~400nm×60nm.SDS-PAGE分析显示,该病毒粒子含有23种结构蛋白,分子量为1.0~... HaNPVVHA273毒株的sNPV与mNPV病毒粒子大小为280~275×60~150nm,核衣壳大小为310~400nm×60nm.SDS-PAGE分析显示,该病毒粒子含有23种结构蛋白,分子量为1.0~9.2×104道尔顿.虽然浓度梯度超离心显现病毒粒子有5条沉降带,但各沉降带的电泳图谱非常一致.说明VHA73的sNPV与mNPV的结构蛋白在分子及亚分子水平上是一致的. 展开更多
关键词 VHA273 病毒粒子 球状病毒 HANPV
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A suspended cell line from Trichoplusia ni (Lepidoptera): Characterization and expression of recombinant proteins 被引量:9
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作者 Min-Juan Meng Tian-Long Li +1 位作者 Chang-You Li Guo-Xun Li 《Insect Science》 SCIE CAS CSCD 2008年第5期423-428,共6页
A suspended cell line from Trichoplusia ni embryos was established, and its susceptibility to Autographa californica multiple nuclear polyhedrosis virus (AcMNPV) infection was investigated. This cell line had charac... A suspended cell line from Trichoplusia ni embryos was established, and its susceptibility to Autographa californica multiple nuclear polyhedrosis virus (AcMNPV) infection was investigated. This cell line had characteristics distinct from the BTI-Tn5B 1- 4 cell line (Tn5B 1-4) from T. ni in growth, and showed approximately the same responses to AcMNPV infection, production of occlusion bodies, and levels of recombinant protein expression. No clumps were observed at maximum cell density at late-log phase in shake-flask or T-flask cultures, and thus the cells represent a useful new contribution for baculovirus research. The cells consist of two major morphological types: approximately 70% spindle-shaped cells and 30% round cells. The cell line was highly susceptible to virus infection and produced around 107 AcMNPV occlusion bodies per cell, on average. Production of β-galactosidase and secreted alkaline phosphatase was high with 3.97 ± 0.13 × 10^4 IU/mL and 3.48 ± 0.40IU/mL, respectively. This cell line may be applicable for studies of scale-up production of viruses or baculovirus-insect cell expression. We also believe the new line can be a source for cell clones with higher production of virus and recombinant proteins compared to the parent or other existing cell lines such as Tn5B 1-4. 展开更多
关键词 Autographa californica mnpv RAPD-PCR recombinant protein expression suspended cell line
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