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淫羊藿苷诱导mESCs分化为心肌样细胞的研究 被引量:1
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作者 相荣科 穆祥 +4 位作者 赵菊 吴波 刘笑然 张涛 高建明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期811-815,共5页
本研究探讨了淫羊藿苷(Icariin,ICA)对小鼠胚胎干细胞(Mouse embryonic stemcells,mESCs)定向分化为心肌样细胞的效果。试验以mESCs分化培养液为空白对照组,分别添加淫羊藿苷10-6mol.L-1(ICA1)、10-7mol.L-1(ICA2)、10-8mol.L-1(ICA3)3... 本研究探讨了淫羊藿苷(Icariin,ICA)对小鼠胚胎干细胞(Mouse embryonic stemcells,mESCs)定向分化为心肌样细胞的效果。试验以mESCs分化培养液为空白对照组,分别添加淫羊藿苷10-6mol.L-1(ICA1)、10-7mol.L-1(ICA2)、10-8mol.L-1(ICA3)3个剂量为试验组,对诱导后培养4周的mESCs采用免疫细胞化学法鉴定诱导后细胞中肌动蛋白T(cTnT)的表达,并计算心肌样细胞分化率;采用RT-PCR鉴定诱导后mESCs中心肌特异性基因MLC-2v、α-MHC、β-MHC、Nkx2.5、GATA-4的表达。结果在诱导后细胞中有心肌特异性蛋白cTnT表达;ICA2组分化率显著高于对照组和其他剂量组;且诱导后细胞有心肌特异性基因MLC-2v、α-MHC、β-MHC、Nkx2.5、GATA-4表达。结果表明,ICA可在体外诱导mESCs定向分化为心肌样细胞,10-7mol.L-1ICA为最佳诱导浓度。 展开更多
关键词 淫羊藿苷 体外诱导 mescs 心肌样细胞
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MESC SPE 74/008壳牌企标与ASTM A312标准对比分析及启示 被引量:1
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作者 丁金贤 高虹 +3 位作者 姜云山 翟丽丽 沈卫强 章建新 《现代冶金》 CAS 2017年第3期65-66,共2页
通过对壳牌石油公司的企业标准与美国标准的对比分析认为,壳牌石油标准在保留美国标准原则上,对其特殊条款的要求及操作细节进行细化和明确,使该标准适用于石油、化工行业的选材要求;对改进和完善不锈钢钢管标准具有启迪作用。
关键词 不锈钢管 mesc SPE 74/008 ASTM A312 壳牌石油标准
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SHELL MESC SPE 77/312和ISO 15848-2标准对比
3
作者 焦娟 《化肥设计》 CAS 2021年第2期24-26,共3页
介绍了SHELL MESC SPE 77/312和ISO 15848-2两个标准的不同版本对试验压力、允许泄漏量、保压时间和检测方法4个方面的要求,并进行了相应的整理和差异总结,从而能为指导相关设计、工艺及检验人员工作提供帮助。
关键词 SHELL mesc SPE 77/312 ISO 15848-2 试验压力 允许泄漏量 保压时间 检测方法
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mESC衍生内皮祖细胞定向分化为血管内皮细胞促伤口愈合 被引量:7
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作者 陈凤娇 左朝艳 +5 位作者 吕佳荟 杨影 彭倩 杨柳 陆莹 丁洁 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期320-332,共13页
缺血性功能障碍是重要的全球健康问题。血管内皮细胞(vascular endothelial cell,VEC)在血管生成和创面修复中发挥关键作用,血管重建不足可导致慢性不愈合伤口。因此,了解有效的血管内皮细胞生成策略有助于受损组织中的血管再生。胚胎... 缺血性功能障碍是重要的全球健康问题。血管内皮细胞(vascular endothelial cell,VEC)在血管生成和创面修复中发挥关键作用,血管重建不足可导致慢性不愈合伤口。因此,了解有效的血管内皮细胞生成策略有助于受损组织中的血管再生。胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)在组织的内皮化研究中应用广泛。内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC)是血管内皮细胞发育中不可或缺的部分。本研究目的在于找到一种小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cell,mESC)衍生为内皮祖细胞的快速、易筛选且高重复性的方法,并从内皮祖细胞定向分化中获得存活率高和功能性好的血管内皮细胞。结果表明,胚胎干细胞通过10 ng/mL VEGF和5 ng/mL bFGF定向诱导分化为增殖能力强的“铺路石”样祖细胞。同时,差异贴壁法有助于EPC的筛选。而EPC可诱导3 d的祖细胞高表达CD 133和CD 34(相对表达量分别为0.88±0.04和2.12±0.02);采用acctuse酶消化祖细胞,并在50 ng/mL VEGF和25 ng/mL bFGF的条件下诱导7 d分化为血管内皮样细胞,该细胞不仅高表达内皮细胞标志基因CD31、CD144、LAMA5、Tek、KDR和vWF,高表达标志蛋白CD31、CD144、LAMA5(相对表达量分别为1.07±0.03、0.60±0.02和0.70±0.02),而且具有良好的迁移、成管和Weibel Palade(W-P)小体形成能力。随后,将PBS、EPC和VEC分别应用于大小相同的创面治疗,EPC和VEC均能加快组织愈合程度(相对愈合率分别为78.93±75.35%、95.57±83.73%和100.00±0.00%),VEC明显增强了伤口的血管生成能力和炎症反应。该研究初步证实,mESC衍生的EPC定向诱导7 d后可分化为血管内皮细胞。此内皮细胞具有较好的组织修复功能,干细胞促进血管生成的生理途径有望成为组织重塑的新靶点。 展开更多
关键词 小鼠胚胎干细胞 内皮祖细胞 血管内皮细胞 血管生成 伤口愈合
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肝肾藏象视域下情志刺激影响MeSCs稳态变化诱发白发症的机制探析
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作者 牟翔宇 高冬梅 +5 位作者 郭英慧 王杰琼 高明周 王常瞵 张守亮 乔明琦 《世界科学技术-中医药现代化》 CSCD 北大核心 2023年第4期1488-1493,共6页
白发症指人类个体因头发毛干中色素减退或缺失使得头发变白或变灰的生理与病理现象,黑素细胞干细胞(MeSCs)向头发中毛母质提供分泌色素的黑素细胞以促进毛干着色,且其生理活动易受情志刺激影响,故MeSCs功能稳态的维持与头发色素盈亏密... 白发症指人类个体因头发毛干中色素减退或缺失使得头发变白或变灰的生理与病理现象,黑素细胞干细胞(MeSCs)向头发中毛母质提供分泌色素的黑素细胞以促进毛干着色,且其生理活动易受情志刺激影响,故MeSCs功能稳态的维持与头发色素盈亏密切相关。藏象理论是中医学体现整体医学思维的重要组成部分,《内经》有云:肝藏血,发为血之余,肾藏精,其华在发,该二脏既与头发的生理病理表现密切相关,其生理功能又易受情志刺激影响,故从中医肝肾藏象理论的视角探讨情志刺激影响MeSCs稳态变化从而诱发白发症的相关机制,可为中西医结合治疗白发症提供新思路。 展开更多
关键词 肝藏象 肾藏象 情志刺激 白发症 黑素细胞干细胞
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TRPC3 is required for the survival, pluripotency and neural differentiation of mouse embryonic stem cells(mESCs) 被引量:6
6
作者 Helen Baixia Hao Sarah E. Webb +3 位作者 Jianbo Yue Marc Moreau Catherine Leclerc Andrew L. Miller 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS CSCD 2018年第3期253-265,共13页
Transient receptor potential canonical subfamily member 3(TRPC3) is known to be important for neural development and the formation of neuronal networks. Here, we investigated the role of TRPC3 in undifferentiated mous... Transient receptor potential canonical subfamily member 3(TRPC3) is known to be important for neural development and the formation of neuronal networks. Here, we investigated the role of TRPC3 in undifferentiated mouse embryonic stem cells(mESCs) and during the differentiation of mESCs into neurons. CRISPR/Cas9-mediated knockout(KO) of TRPC3 induced apoptosis and the disruption of mitochondrial membrane potential both in undifferentiated mESCs and in those undergoing neural differentiation. In addition, TRPC3 KO impaired the pluripotency of mESCs. TRPC3 KO also dramatically repressed the neural differentiation of mESCs by inhibiting the expression of markers for neural progenitors, neurons, astrocytes and oligodendrocytes.Taken together, our new data demonstrate an important function of TRPC3 with regards to the survival, pluripotency and neural differentiation of mESCs. 展开更多
关键词 transient receptor potential canonical subfamily member 3 (TRPC3) mouse embryonic stem cells mescs) neurondifferentiation CRISPR/Cas9 PLURIPOTENCY APOPTOSIS mitochondrial membrane potential
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AKT三种亚型基因敲除对小鼠胚胎干细胞自我更新和分化的影响
7
作者 杨淇 汤帅 +5 位作者 张林林 唐午阳 豆澳祥 张宇航 李丕顺 郑晓峰 《中国生物化学与分子生物学报》 北大核心 2025年第3期426-436,共11页
AKT,又称为蛋白质激酶B(protein kinase B, PKB),在细胞增殖和代谢过程中发挥关键作用。AKT有3种亚型:AKT1、AKT2和AKT3,这3种亚型对小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells, mESCs)多能性和分化的影响尚不明确。本研究旨在探讨AKT... AKT,又称为蛋白质激酶B(protein kinase B, PKB),在细胞增殖和代谢过程中发挥关键作用。AKT有3种亚型:AKT1、AKT2和AKT3,这3种亚型对小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells, mESCs)多能性和分化的影响尚不明确。本研究旨在探讨AKT亚型缺失对小鼠胚胎干细胞自我更新和分化的影响。本文利用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立AKT的3种亚型基因敲除的细胞系,通过蛋白质印迹(Western blot)、流式细胞术、qRT-PCR、CCK-8、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, AP)染色和RNA-seq对其表型和分子变化进行分析。Akt的3种亚型基因敲除的细胞系构建成功,Akt1和Akt2的缺失会抑制小鼠胚胎干细胞的增殖,Akt任意一种亚型的缺失不会影响多能性基因在mRNA水平和蛋白质水平的表达,但在拟胚体形成过程中,Akt的3种亚型的缺失均会影响3个胚层基因的mRNA水平表达。转录物组分析结果表明,与野生型mESCs相比,Akt1、Akt2和Akt3缺失后分别有995、547和429个差异表达基因(|log2FC|≧1,P<0.05),这3种亚型调控的差异表达基因存在部分重叠。综上,Akt的3种亚型的独立缺失不影响小鼠胚胎干细胞干性的维持,但是他们对于分化至关重要。Akt的3种亚型可以共同调控基因的表达,同时也保留了各自的调控特异性。本研究为理解Akt的3种亚型在干细胞生物学中的独特和重叠作用提供了基础,突显了它们在维持干细胞功能和分化中的重要性。 展开更多
关键词 小鼠胚胎干细胞 AKT亚型 多能性 CRISPR/Cas9 RNA测序
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双同源盒诱导小鼠胚胎干细胞向胚外内胚层分化的机制研究
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作者 洪磊 郭传亮 +4 位作者 蔡勤 李婉睿 曾溢滔 薛燕 曾凡一 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期1359-1369,共11页
目的·探索双同源盒(double homeobox,DUX)蛋白对小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cell,mESC)向胚外内胚层(extraembryonic endoderm,XEN)分化潜能的影响及可能的作用机制。方法·使用慢病毒体系在mESC中构建过表达DUX细胞... 目的·探索双同源盒(double homeobox,DUX)蛋白对小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cell,mESC)向胚外内胚层(extraembryonic endoderm,XEN)分化潜能的影响及可能的作用机制。方法·使用慢病毒体系在mESC中构建过表达DUX细胞系,利用流式细胞术检测DUX过表达前后2细胞样细胞(2-cell-like cell,2CLC)的比例,并使用实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测2细胞期特异性基因,如内源性Dux、锌指和SCAN结构域的蛋白质4c(zinc finger and SCAN domain containing 4c,Zscan4c)、锌指蛋白352(zinc finger protein 352,Zfp352)和鼠内源性反转录病毒-聚合酶(murine endogenous retrovirus-L polymerase,MERVL-pol)的表达。RT-qPCR检测过表达DUX的mESC多能性因子[nanog homeobox(Nanog)、kruppel-like transcription factor 4(Klf4)、性别决定区Y框蛋白2(sex determining region Y-box 2,Sox2)、八聚体结合转录因子4(octamer-binding transcription factor 4,Oct4)]和自然分化状态下各胚层标志性基因[内胚层(endodermal):GATA结合蛋白4(GATA binding protein 4,Gata4)、Gata6、Sox17;外胚层(ectodermal):微Ⅲ型β微管蛋白3(tubulin beta 3 classⅢ,Tubb3)、巢蛋白(Nestin);中胚层(mesodermal):心脏和神经嵴衍生物表达转录本1(heart and neural crest derivatives expressed 1,Hand1)、肌源性分化蛋白1(myogenic differentiation 1,Myod1)、激酶插入结构域受体(kinase insert domain protein receptor,Flk1)]的表达。挖掘公共转录组测序(RNA sequencing,RNA-seq)数据,通过分析胚外内胚层标志基因的表达水平,明确DUX对mESC向胚外内胚层分化的影响;通过对差异基因的功能及通路进行基因本体论(Gene Ontology,GO)富集分析、京都基因和基因组数据库(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析和基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA),找出DUX作用的信号通路;深入分析已有的染色质免疫共沉淀技术结合二代测序(chromatin immunoprecipitation sequencing,ChIP-seq)数据,探究DUX的潜在靶基因。结果·2CLC比例升高和2细胞期标志基因表达上调,证明已成功构建过表达DUX细胞系。分子生物学实验显示过表达DUX后可有效维持mESC的多能性,与公共RNA-seq数据分析结果一致;差异基因分析发现,内胚层基因出现特异性上调;诱导mESC自然分化后,RT-qPCR检测实验表明XEN标志基因(Gata4、Gata6、Sox17)的mRNA表达出现显著上调(P<0.001),而中胚层、外胚层基因没有特异性变化。GSEA结果提示DUX可能激活了视黄醇代谢信号通路,ChIP-seq数据解析进一步揭示在DUX结合的peaks中存在已知的视黄酸受体motif,可激活下游与XEN发育相关的靶基因。结论·DUX与视黄酸信号通路密切关联,预示其激活了视黄酸信号通路,促进mESC倾向XEN分化。 展开更多
关键词 小鼠胚胎干细胞 胚外内胚层细胞 双同源盒 视黄酸信号通路
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TNF-α和VEGF协同作用小鼠胚胎干细胞衍生的血管内皮祖细胞促伤口愈合 被引量:4
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作者 杨影 陈东升 +6 位作者 赵艾艾 何才蓉 陈凤娇 何运雪 郑梅 陆莹 丁洁 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期240-250,共11页
皮肤伤口愈合是世界范围内的重大临床难题之一,血管生成和炎症反应是影响伤口愈合和组织再生的关键环节。内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC)在血管内皮修复和招募炎症细胞促伤口愈合过程中发挥重要作用。然而,体内直接输送EP... 皮肤伤口愈合是世界范围内的重大临床难题之一,血管生成和炎症反应是影响伤口愈合和组织再生的关键环节。内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC)在血管内皮修复和招募炎症细胞促伤口愈合过程中发挥重要作用。然而,体内直接输送EPC低效且会损害细胞存活力和功能进而影响治愈效率。因此,改善EPC的生物学功能以促进伤口愈合很有必要。本研究将小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESC)在10 ng/mL VEGF和5 ng/mL bFGF的作用下诱导获得CD133+CD34+EPC。以mESC衍生的EPC为研究对象,将外源性肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)作用于mESC-EPC,结果表明,10 ng/mL TNF-α和10 ng/mL VEGF协同处理组相比于单因子处理显著促进EPC的黏附、细胞迁移和管腔形成能力(P<0.01)。进一步通过建立小鼠局部皮肤全层创伤模型,在创周处注射10 ng/mL TNF-α和10 ng/mL VEGF协同EPC治疗明显加速伤口愈合(P<0.05),再生皮肤真皮层增厚(P<0.001),促进血管生成素ANG1和ANG2介导CD31+内皮细胞构成的毛细血管网络成熟。随着伤口愈合程度的加深,促炎因子TNF-α在蛋白质水平的表达下调(术后13 d,PBS组、EPC组、VE组、TE组和VTE组的TNF-α相对表达量分别为0.73±0.01、0.60±0.02、0.42±0.02、0.36±0.01和0.34±0.03),创造有利于伤口愈合的炎症微环境。综上所述,10 ng/mL TNF-α和10 ng/mL VEGF的协同作用强化EPC的生物学功能,并通过促进新血管生成和早期炎症反应加速小鼠皮肤伤口闭合和组织重塑,为细胞干预伤口愈合治疗提出新的思路。 展开更多
关键词 小鼠胚胎干细胞 血管生成因子 内皮祖细胞 伤口愈合 肿瘤坏死因子-Α
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小鼠上胚层多能干细胞研究进展 被引量:1
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作者 陈杨林 刘悦石 +1 位作者 李喜和 包斯琴 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2017年第7期931-938,共8页
小鼠上胚层干细胞(mouse epiblast stem cell,mEpiSC)是一种来自于5.5天~7.5天小鼠胚胎上胚层(epiblast)组织的多能性干细胞。EpiSC自我更新能力和多能性的维持主要依赖激活素(Activin/Nodal)和成纤维细胞生长因子(fibroblast growth fa... 小鼠上胚层干细胞(mouse epiblast stem cell,mEpiSC)是一种来自于5.5天~7.5天小鼠胚胎上胚层(epiblast)组织的多能性干细胞。EpiSC自我更新能力和多能性的维持主要依赖激活素(Activin/Nodal)和成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor,FGF)信号,Activin和FGF信号对细胞多能网络进行调控,EpiSC培养体系和分离方法目前仍处于不断优化的过程。相比于处于"幼稚(na?ve)"状态的小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cell,mESC),mEpiSC被认为处于"待发(primed)"状态。虽然mEpiSC被注射入囊胚后,细胞嵌合效率较低,但是当其被移植入着床后胚胎时,却比mESC更容易与受体胚胎发生嵌合。因此,来源于小鼠着床后胚胎的EpiSC与来自于着床前胚胎的ESC相比,在多能性维持、发育潜能和诱导方法等方面存在本质区别。该文对小鼠EpiSC和ESC进行比较,并综述目前小鼠EpiSC的研究进展。 展开更多
关键词 EpiSC mesc 多能性 发育潜能
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DEHP、MEHP对小鼠胚胎干细胞细胞毒性的研究 被引量:7
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作者 李玉秋 段志文 +2 位作者 裴秀丛 张玉敏 马明月 《实用药物与临床》 CAS 2016年第8期925-928,共4页
目的分析不同浓度的邻苯二甲酸二乙基己酯[di(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP]及其活性代谢产物邻苯二甲酸单乙基己基酯[mono(2-ethylhexyl)phthalate,MEHP)对小鼠胚胎干细胞细胞毒性、增殖的影响。方法用含有不同浓度DEHP(1 000、100、10... 目的分析不同浓度的邻苯二甲酸二乙基己酯[di(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP]及其活性代谢产物邻苯二甲酸单乙基己基酯[mono(2-ethylhexyl)phthalate,MEHP)对小鼠胚胎干细胞细胞毒性、增殖的影响。方法用含有不同浓度DEHP(1 000、100、10、1、0.1、0.01μmol/L)、MEHP(1 000、100、10、1、0.1、0.01μmol/L)的培养液,对胚胎干细胞进行培养,用CCK-8法检测细胞活性。结果染毒96 h后,高剂量(1 000μmol/L)DEHP、MEHP均对胚胎干细胞的增殖有抑制作用(P<0.05),且染毒剂量与细胞抑制率之间存在明显的正相关性,相关系数分别为0.51、0.62(P<0.05)。结论在一定浓度范围内,DEHP及MEHP均对小鼠ESC具有细胞毒性,且有浓度依赖性。 展开更多
关键词 DEHP MEHP 小鼠胚胎干细胞 细胞毒性
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种子包衣对微胚乳玉米种子萌发的影响 被引量:8
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作者 谢阳姣 戴罗杰 +2 位作者 吕凤莲 吴子恺 冯和平 《玉米科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期89-92,共4页
研究了微胚乳玉米种衣剂及国外先进的适乐时种衣剂对微胚乳玉米种子萌发的影响。结果表明,微胚乳玉米种衣剂对微胚乳玉米种子的室内发芽和田间出苗都具有极显著促进作用,适乐时种衣剂对微胚乳玉米种子发芽和出苗有一定的抑制作用。
关键词 微胚乳玉米 微胚乳玉米种衣剂 种子萌发
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乳腺上皮细胞体外培养的研究进展 被引量:6
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作者 郝明超 刘犇 +4 位作者 樊江峰 王明亮 陈鹏 高旭东 余四九 《中国奶牛》 2011年第14期39-43,共5页
乳腺上皮细胞体外培养的成功对研究乳腺的生长发育、泌乳机制、乳腺肿瘤和癌变的发生及乳腺生物反应器的应用等方面的研究都有重要的意义。具体来说,体外培养建立的乳腺上皮细胞系可为克隆和转基因动物生产提供良好的核供体;分泌功能的... 乳腺上皮细胞体外培养的成功对研究乳腺的生长发育、泌乳机制、乳腺肿瘤和癌变的发生及乳腺生物反应器的应用等方面的研究都有重要的意义。具体来说,体外培养建立的乳腺上皮细胞系可为克隆和转基因动物生产提供良好的核供体;分泌功能的乳腺上皮细胞系的建立为乳腺发育学、乳腺病理学、泌乳生物学研究提供细胞模型。本文综述了国内外在此领域的研究进展,对乳腺上皮细胞的体外培养技术进行了总结为相关领域的研究提供参考。 展开更多
关键词 乳腺上皮细胞 细胞培养 细胞系 乳腺上皮干细胞
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六苯氧基环三磷腈的合成及其在PP中的应用研究 被引量:5
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作者 许肖丽 叶文 +4 位作者 郝冬梅 陈涛 林倬仕 尹亮 陈崇伟 《塑料助剂》 2013年第6期19-22,30,共5页
以六氯环三膦腈和苯酚钠为原料制备了六苯氧基环三磷腈(PCPZ),产物收率高于97%,纯度达99%以上,利用高效液相色谱(HPLC)、傅立叶红外光谱(FT-IR)、31P核磁共振(31P NMR)和1H核磁共振(1H NMR)表征产物并确定其分子结构。将合成的PCPZ和焦... 以六氯环三膦腈和苯酚钠为原料制备了六苯氧基环三磷腈(PCPZ),产物收率高于97%,纯度达99%以上,利用高效液相色谱(HPLC)、傅立叶红外光谱(FT-IR)、31P核磁共振(31P NMR)和1H核磁共振(1H NMR)表征产物并确定其分子结构。将合成的PCPZ和焦磷酸蜜胺盐(MPP)、三聚氰胺(MA)、助剂(AA)复配成膨胀型阻燃剂(IFR),并添加到聚丙烯(PP)中制备成阻燃聚丙烯(PP)。利用MINI TAB软件的混料设计功能研究了复配IFR对阻燃PP体系的阻燃性能和力学性能的影响。结果表明,阻燃效果较好的IFR配方:PCPZ48.6%、MPP25.0%、MA12.5%和AA13.9%,IFF添加量为30%时,IFR-PP的LOI为33%,通过UL 94 V-0级测试,拉伸强度为25.98 MPa,断裂伸长率为230%,缺口冲击强度为4.72 kJ/m2。 展开更多
关键词 六苯氧基环三磷腈 苯酚钠 膨胀型阻燃剂 聚丙烯 合成 应用
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基于Petri网的UML顺序图分析 被引量:1
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作者 胡建军 《计算机工程与科学》 CSCD 北大核心 2009年第3期115-117,共3页
本文针对顺序图形式分析上存在的困难,引进消息事件序约束的概念,利用Petri网理论定义了顺序图的分析模型,并给出了UML顺序图冲突和语义一致性的检查方法,最后通过一个实例说明了方法的使用。实例表明,该方法是可行和高效的。
关键词 顺序图 消息事件序约束 激活期 容量函数
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具有新霉素抗性的小鼠胚胎成纤维细胞的分离及饲养层制备
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作者 刘青青 《科教导刊(电子版)》 2019年第27期294-295,共2页
目的:建立一种操作简便,并能高效获得高质量的具有新霉素抗性(neo)的C57BL/6J小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast cells,MEF细胞)的分离培养方法;所得细胞经过丝裂霉素C处理后能作为饲养层细胞支持小鼠胚胎干细胞(mouse emb... 目的:建立一种操作简便,并能高效获得高质量的具有新霉素抗性(neo)的C57BL/6J小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast cells,MEF细胞)的分离培养方法;所得细胞经过丝裂霉素C处理后能作为饲养层细胞支持小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESC)的生长和neo抗性筛选。方法:取12.5-14.5d的胎鼠躯干部剪碎成糊状,利用Collagenase type IV和Trypsin的消化作用获得原代MEF细胞。使用丝裂霉素C处理MEF细胞获得饲养层细胞。结果:制备得到的MEF细胞形态饱满、增殖速度快、细胞数量充足。使用丝裂霉素C处理细胞后,细胞正常存活但失去增殖能力,能支持mESC的生长和neo抗性筛选。结论:成功制备具有neo抗性的MEF细胞和饲养层细胞。 展开更多
关键词 新霉素 MEF细胞 mesc 丝裂霉素C 饲养层
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MicroRNA-26b抑制胚胎干细胞的多能性 被引量:2
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作者 曹靓 金瑞 +6 位作者 孟祥云 王浩浩 李天立 刘小燕 王康林 吴繁荣 臧洪梅 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2020年第7期997-1001,共5页
目的明确miRNA-26b(miR-26b)对小鼠胚胎干细胞(mESCs)多能性的调控作用。方法实时荧光定量PCR检测miR-26簇前体在mESCs和小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)中的表达。实时荧光定量PCR检测胚状体(EB)形成过程中成熟miR-26b的表达。CCK-8方法检测mi... 目的明确miRNA-26b(miR-26b)对小鼠胚胎干细胞(mESCs)多能性的调控作用。方法实时荧光定量PCR检测miR-26簇前体在mESCs和小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)中的表达。实时荧光定量PCR检测胚状体(EB)形成过程中成熟miR-26b的表达。CCK-8方法检测miR-26b对mESCs增殖能力的影响。流式细胞术测定miR-26b对mESCs细胞周期与凋亡的影响。使用碱性磷酸酶染色试剂盒检测miR-26b对mESCs中碱性磷酸酶活性的影响。实时荧光定量PCR检测miR-26b对mESCs中多能性转录因子(Oct4、Sox2和Nanog)mRNA表达的影响。使用蛋白质印迹法检测miR-26b对mESCs中3个关键转录因子的蛋白表达影响。用体外模型观察转染pcDNA-pre-miR-26b对mESCs形态的影响。结果 mESCs中,miR-26b的前体在miR-26簇群表达最高。MEF中所有miR-26前体均上调,其中pre-miR-26b上调幅度最大(上调约10倍)。成熟的miR-26b在EB形成过程中从第2天到第6天明显上调,并且成熟miR-26b在MEF中的表达水平明显高于其在mESCs中的表达水平。miR-26b的过表达抑制mESCs增殖,并显示miR-26b过表达诱导mESCs于细胞周期的G1期阻滞,miR-26b不影响mESCs的凋亡。ALP染色结果表明miR-26b导致mESCs中ALP活性降低。过表达miR-26b导致mESCs中多能性标志物(Oct4、Sox2和Nanog)的表达水平降低。体外模型研究miR-26b对mESCs分化的影响,在miR-26b诱导的第4天观察到了分化的细胞。结论此研究证实miR-26b对mESCs多能性的调控作用。 展开更多
关键词 miR-26b 胚胎干细胞 多能性 分化
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全反式维甲酸联合Ⅳ型胶原促进胚胎干细胞向平滑肌细胞分化 被引量:2
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作者 邵晓平 彭程飞 +4 位作者 田孝祥 闫承慧 韩雅玲 张红明 刘大男 《中国动脉硬化杂志》 CAS 北大核心 2016年第2期119-123,共5页
目的探讨全反式维甲酸(atRA)联合Ⅳ型胶原(collagenⅣ)能否更好的促进小鼠胚胎干细胞(m ESC)向平滑肌细胞分化。方法体外培养m ESC,通过碱性磷酸酶染色、SSEA1染色和在体成瘤实验检测m ESC全能性。制作胚胎小体(EB)并悬浮3天后分别分为... 目的探讨全反式维甲酸(atRA)联合Ⅳ型胶原(collagenⅣ)能否更好的促进小鼠胚胎干细胞(m ESC)向平滑肌细胞分化。方法体外培养m ESC,通过碱性磷酸酶染色、SSEA1染色和在体成瘤实验检测m ESC全能性。制作胚胎小体(EB)并悬浮3天后分别分为:无诱导(对照组)、atRA诱导组、Ⅳ型胶原诱导组、atRA联合Ⅳ型胶原诱导组,使其贴壁分化。通过平滑肌细胞抗体(SM-αactin)的Western blot检测及SM-αactin与平滑肌肌球蛋白重链(SM-MHC)免疫荧光双染结果观察比较不同组别的细胞分化为平滑肌细胞的情况并进行比较。结果经m ESC全能性鉴定,提示小鼠胚胎干细胞的培养成功。发现在第7天及第14天atRA联合Ⅳ型胶原诱导组细胞SM-αactin蛋白表达量均明显高于其他3组,同时观察第14天的SM-αactin与SM-MHC双荧光染色,发现atRA联合Ⅳ型胶原诱导组的SM-αactin与SM-MHC表达量也是最高,表明细胞的分化成熟度是最好的,atRA诱导组和Ⅳ型胶原诱导组次之,对照组最差。结论全反式维甲酸联合Ⅳ型胶原能够更好的促进胚胎干细胞向平滑肌细胞分化。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 全反式维甲酸 Ⅳ型胶原 SM-αactin SM-MHC
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小鼠胚胎干细胞转染条件的优化 被引量:2
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作者 陈天姬 杜娟 卢光琇 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2010年第12期20-24,共5页
【目的】对小鼠胚胎干细胞(mESCs)转染条件进行优化。【方法】分别将0.5×105,1×105,2×105,4×105个细胞接种24孔板(各细胞量均接种2孔),培养48h在其细胞融合度分别为30%,50%,70%,90%左右时,分别设置相同的(0.8μgDN... 【目的】对小鼠胚胎干细胞(mESCs)转染条件进行优化。【方法】分别将0.5×105,1×105,2×105,4×105个细胞接种24孔板(各细胞量均接种2孔),培养48h在其细胞融合度分别为30%,50%,70%,90%左右时,分别设置相同的(0.8μgDNA/2μL脂质体)和不同的DNA/脂质体用量(DNA量(μg)/Lipo量(μL)分别为0.4/1,0.8/2,1.6/4,3.2/8),采用脂质体(LipofectamineTM2000)转染法,将pEGFP-N1报告基因载体转染到mESCs中,48h后通过荧光观察和流式分析检测各组EGFP荧光强度,比较转染效率。【结果】在质粒及脂质体用量相同(0.8μgDNA/2.0μL脂质体)的条件下,随着细胞融合度的增加,EGFP荧光强度逐渐减弱,在细胞融合度为30%,50%,70%,90%左右时转染,各组EGFP阳性细胞率分别为56.4%,51.8%,40.8%和23.3%。提高转染质粒及脂质体量可在一定程度上提高转染效率,但脂质体的细胞毒性也随之增加,不利于细胞生长。【结论】低融合度(30%~50%)条件下,使用0.8μgDNA/2.0μL脂质体对mESCs进行转染,可获得较高的转染效率(>50%),同时可维持良好的细胞状态。 展开更多
关键词 小鼠胚胎干细胞 细胞融合度 脂质体法 PEGFP-N1 转染效率
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基于CRISPR/Cas9n技术建立携带mT-F2A-EGFP报告系统的小鼠胚胎干细胞系
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作者 王靖怡 王琼 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期417-427,共11页
目的·通过CRISPR/Cas9n(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9 nickase)介导的同源定向修复(homologous-directed repair,HDR)技术在小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cell... 目的·通过CRISPR/Cas9n(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9 nickase)介导的同源定向修复(homologous-directed repair,HDR)技术在小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cell,mESC)的中内胚层关键调控分子T-box转录因子Brachyury(即T基因)末端依次敲入手足口病毒2A(foot-and-mouth disease virus 2A,F2A)和增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)以建立T荧光报告细胞系(mTF2A-EGFP)。方法·首先,针对T基因构建特异性单链导向RNA(single guide RNA,sgRNA)质粒和包含F2A-EGFP的供体质粒。利用电穿孔将这2种质粒递送到mESC E14Tg2a(E14)内,通过HDR在T基因末端插入F2A-EGFP。然后,通过药物筛选和基因测序验证所获得的单克隆细胞,并将其诱导形成类胚体(embryonic body,EB)进行分化。通过荧光显微镜和流式细胞技术分别监测mT-F2A-EGFP细胞克隆在分化前后的荧光信号变化,并进行实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,RT-qPCR)来检测多能性标志基因、中内胚层以及外胚层标志基因的转录水平变化。同时,检测克隆细胞的周期、生长曲线,并利用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)染色检测候选克隆干细胞特性。最后,挑选克隆细胞系T1进行了EB分化。利用流式细胞技术分选出分化细胞群中EGFP荧光表达细胞(EGFP+)和无荧光表达的细胞(EGFP-),并检测各谱系基因的表达情况。结果·EGFP被正确插入到E14细胞的T基因,其荧光强度能正确反映T基因表达水平且未产生明显的不良反应。当T1报告克隆分化时,通过流式细胞技术分选出的包含mT-F2A-EGFP的荧光细胞主要高表达中内胚层标志基因。结论·成功构建携带mT-F2A-EGFP的mESC,可实现对T基因调控程度的快速监测,并实时追踪分化过程中表达T基因标记EGFP的中内胚层细胞。 展开更多
关键词 小鼠胚胎干细胞 CRISPR/Cas9n 中内胚层分化 增强绿色荧光蛋白 报告基因 BRACHYURY 手足口病毒2A
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