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Combination of Loop-Mediated Isothermal Amplification Assay and Nested PCR for Detection of Borrelia burgdorferi sensu lato in Human Serum Samples 被引量:1
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作者 ZHANG Liu Li HOU Xue Xia +3 位作者 GENG Zhen LOU Yong Liang WAN Kang Lin HAO Qin 《Biomedical and Environmental Sciences》 SCIE CAS CSCD 2015年第4期312-315,共4页
A set of universal loop-mediated isothermal amplification (LAMP) primers targeting the flo gene was designed to detect Borrelia burgdorferi sensu lato (B. burgdorferi s.I.) in human samples. The sensitivity of LAM... A set of universal loop-mediated isothermal amplification (LAMP) primers targeting the flo gene was designed to detect Borrelia burgdorferi sensu lato (B. burgdorferi s.I.) in human samples. The sensitivity of LAMP was 20 copies/reaction, and the assay did not detect false positives among 11 other related bacteria. A positive LAMP result was obtained for 9 of the 24 confirmed cases and for 12 of 94 suspected cases. The positive rate of LAMP was the same as that of nested PCR. The LAMP is a useful diagnostic method that can be developed for rapid detection of B. burgdorferi s.I. in human sera. Combination of the LAMP and nested PCR was more sensitive for detecting B. burgdorferi s.I. in human serum samples. 展开更多
关键词 pcr LAMP Combination of loop-mediated Isothermal Amplification Assay and Nested pcr for Detection of Borrelia burgdorferi sensu lato in Human Serum Samples
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猪丁型冠状病毒荧光定量RT-PCR与S1蛋白间接ELISA检测方法的建立及应用 被引量:11
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作者 王经纬 雷喜梅 +7 位作者 覃盼 赵鹏伟 王斌 王逸雯 李懿婷 金颢蕊 李龙 黄耀伟 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期1265-1275,共11页
最近,新发现的猪丁型冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCo V)可导致仔猪腹泻,亟待建立有效准确的核酸及血清学检测方法并调查猪场的PDCo V感染情况。本研究采用针对病毒M基因的探针荧光定量RT-PCR检测方法,对2014-2015年间收集的河... 最近,新发现的猪丁型冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCo V)可导致仔猪腹泻,亟待建立有效准确的核酸及血清学检测方法并调查猪场的PDCo V感染情况。本研究采用针对病毒M基因的探针荧光定量RT-PCR检测方法,对2014-2015年间收集的河南、湖南、浙江、江西、安徽、河北、黑龙江、江苏、山东和上海等10个省市收集的共254份腹泻仔猪小肠匀浆或粪便样本进行检测,共检出11份PDCo V阳性样本,总阳性率为4.33%。采用在昆虫细胞表达纯化的PDCo V囊膜S1蛋白为包被抗原,建立间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,检测2015-2016年间收集的来自江苏、湖南、浙江等7个省份的609份具有腹泻症状的猪血清样品,抗PDCo V S1抗体检出率为44.17%(269/609)。上述建立的两种方法分别针对病毒的RNA或抗体对PDCo V进行特异性检测,可以应用于PDCo V流行情况的监控。 展开更多
关键词 猪丁型冠状病毒 实时荧光定量RT-pcr 间接ELISA S1基因
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PCR和IFA测定猪圆环病毒2型半数细胞培养感染量的比较 被引量:6
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作者 王林山 尹燕博 +5 位作者 邹勇 何锡忠 韩芳婷 倪建平 赵本进 李春华 《上海农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第1期34-38,共5页
采用聚合酶链式反应(PCR)和间接免疫荧光法(IFA)测定PCV2 SN07-1 2株的半数细胞培养感染量(TCID_(50)),初步比较两种方法测定病毒滴度的差异。参照Reed-Muench法计算TCID_(50),并采用荧光定量PCR(Real-time PCR)法对试验结果进行验证。... 采用聚合酶链式反应(PCR)和间接免疫荧光法(IFA)测定PCV2 SN07-1 2株的半数细胞培养感染量(TCID_(50)),初步比较两种方法测定病毒滴度的差异。参照Reed-Muench法计算TCID_(50),并采用荧光定量PCR(Real-time PCR)法对试验结果进行验证。对于同一病毒样品,IFA法测出的TCID_(50)为10^(6.5)/mL,PCR法测出的TCID_(50)为10^(5.0)/mL,结果表明:IFA法比PCR法更敏感,更适宜用于测定PCV2的效价。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 间接免疫荧光 聚合酶链式反应 半数细胞培养感染量
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定量PCR和间接免疫荧光法联合检测生殖器疱疹病毒感染 被引量:6
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作者 叶兴东 颜景兰 +3 位作者 张莉 朱慧兰 佟菊贞 林霭 《中国皮肤性病学杂志》 CAS 北大核心 2001年第1期14-15,25,共3页
目的 研究间接免疫荧光法 (IIF)检测生殖器HSV感染的敏感性和特异性。方法 以定量PCR为对照 ,用HSV型共同性糖蛋白单克隆抗体为夹心的IIF法 ,检测了 94例临床诊断为生殖器疱疹的患者皮疹中的HSV。结果 IIF法检测HSV的敏感性为 74.12 ... 目的 研究间接免疫荧光法 (IIF)检测生殖器HSV感染的敏感性和特异性。方法 以定量PCR为对照 ,用HSV型共同性糖蛋白单克隆抗体为夹心的IIF法 ,检测了 94例临床诊断为生殖器疱疹的患者皮疹中的HSV。结果 IIF法检测HSV的敏感性为 74.12 % ,特异性为 5 5 .60 % ;总阳性率 ( 71.3 0 % )明显低于定量PCR法的阳性率 ( 90 .40 % ) (P <0 .0 5 ) ;但两种方法检测GH患者皮水疱内的HSV阳性率无明显差异 ( 86.2 0 %vers .97.0 0 % ) ,而检测糜烂性皮疹内的HSV时 ,PCR法的阳性率高于IIF法 (P <0 .0 5 )。结论 IIF法具有简单、快捷的优点 ,适用于检测早期可疑GH患者皮疹内HSV ,有临床实用价值。 展开更多
关键词 生殖器疱疹病毒感染 定量聚合酶链反应 间接免疫荧光法
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环介导间接PCR鉴别高、低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒方法的建立 被引量:7
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作者 郑鸣 李华玮 +2 位作者 边传周 王永芬 王老七 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期364-370,共7页
建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)环介导间接PCR检测方法,用于该病毒的感染检测和高致病性毒株与低致病性毒株的鉴别诊断。根据GenBank数据库中PRRSV中国流行株ORF7和ORF1a基因... 建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)环介导间接PCR检测方法,用于该病毒的感染检测和高致病性毒株与低致病性毒株的鉴别诊断。根据GenBank数据库中PRRSV中国流行株ORF7和ORF1a基因序列的保守性,设计2对特异性探针,分别标记于大豆Lectin基因两端,作为报告基因,经过一步链置换反应后,采用反向PCR扩增报告基因,建立PRRSV环介导间接PCR检测方法,该方法扩增HP-PRRSV可得大小为193bp和355bp的特异片段,扩增LP-PRRSV可得大小为193bp和442bp的特异片段。试验结果表明,该方法能成功鉴别HP/LP-PRRSV,可检测出5.6TCID50/mL LP-PRRSV和18TCID50/mL HP-PRRSV的病毒RNA,HP/LP-PRRSV混合感染不影响检测灵敏度,与CSFV、PPV、PRV、PCV2、ETEC和Haemophilus parasui等常见猪源性病原的检测无明显交叉反应;对20份临床样本进行比较检测,环介导间接PCR检测出14份PRRSV阳性样本,其中4份LP-PRRSV、9份HP-PRRSV和1份LP/HP-PRRSV,与常规PCR检测结果一致。环介导间接PCR是一种简便快速、灵敏、特异的病原学诊断工具,适合PRRSV感染的快速检测和HP/LP-PRRSV鉴别诊断,尤其适合HP/LP-PRRSV混合感染的鉴别。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 环介导间接pcr 报告基因
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同时检测水禽3种常见病原菌的环介导间接PCR方法的建立 被引量:6
6
作者 程龙飞 傅光华 +7 位作者 林群群 刘荣昌 陈翠腾 傅秋玲 万春和 施少华 陈红梅 黄瑜 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期96-99,共4页
为建立同时检测大肠杆菌、禽源多杀性巴氏杆菌和鸭疫里默氏菌等水禽常见病原菌的环介导间接PCR方法,根据大肠杆菌的gapA基因、禽源多杀性巴氏杆菌的KMTl基因、鸭疫里默氏菌的OmpA基因序列,分别设计引物、标记于猪线粒体基因片段的两... 为建立同时检测大肠杆菌、禽源多杀性巴氏杆菌和鸭疫里默氏菌等水禽常见病原菌的环介导间接PCR方法,根据大肠杆菌的gapA基因、禽源多杀性巴氏杆菌的KMTl基因、鸭疫里默氏菌的OmpA基因序列,分别设计引物、标记于猪线粒体基因片段的两端,制备不同细菌的捕获探针;将捕获探针与待检测菌的基因组杂交、补平缺口、环化。采用1对引物反向扩增捕获探针,建立检测水禽3种常见病原菌的环介导间接PCR方法,扩增片段大小分别为328,422和504bp。沙门菌、金黄色葡萄球菌、小鹅瘟病毒的检测结果为阴性。该方法能检测出100Pg的细菌基因组DNA,与常规PCR的符合性为]00%。该方法可用于水禽3种常见病原菌的同时检测,是一种特异性好、灵敏度高的快速病原学诊断方法。 展开更多
关键词 大肠杆菌 多杀性巴氏杆菌 鸭疫里默氏菌 环介导间接pcr
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H9N2亚型禽流感病毒和新城疫病毒混合感染环介导间接PCR鉴别方法的建立与评估 被引量:7
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作者 郑鸣 郭宏伟 +5 位作者 李华玮 赵绪永 王老七 魏露露 郑保亮 王永芬 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1085-1090,共6页
根据GenBank中禽流感病毒(AIV)的HA基因和新城疫病毒(NDV)的F基因序列保守性,分别设计2条序列相邻的特异性探针,标记于不同大小的拟南芥TOC1基因片段两端,作为报告基因,建立了AIV和NDV双重环介导间接PCR鉴别方法,AIV和NDV扩增片段大小... 根据GenBank中禽流感病毒(AIV)的HA基因和新城疫病毒(NDV)的F基因序列保守性,分别设计2条序列相邻的特异性探针,标记于不同大小的拟南芥TOC1基因片段两端,作为报告基因,建立了AIV和NDV双重环介导间接PCR鉴别方法,AIV和NDV扩增片段大小分别为200,270 bp。结果表明,所建立的方法对AIV和NDV核酸样品可扩增出特异性目的片段,而传染性法氏囊病病毒(IBDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、鸡痘病毒(FPV)和鸡马立克病病毒(MDV)的核酸样品未见明显扩增;对AIV和NDV核酸样品检测的最低极限质量浓度分别为25.0,12.5μg/L;该方法特异性好、灵敏度高,2种病原同时检测不影响检测特异性和灵敏性。97份临床样本检测结果表明,环介导间接PCR对AIV和NDV的检出率分别为15.5%和27.8%,分别高于常规PCR的12.4%和23.7%,接近于SybrGreen实时PCR的15.5%和28.9%;Kappa一致性检验显示,环介导间接PCR、SybrGreen实时PCR 2种方法对AIV和NDV检测的结果高度符合,Kappa值分别为κ=0.92和κ=0.87。本试验成功建立了AIV/NDV双重环介导间接PCR检测方法,适用于临床上2种病原的快速鉴别诊断。 展开更多
关键词 禽流感病毒 新城疫病毒 双探针 环介导间接pcr
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利用PCR和间接免疫荧光染色技术检测风信子黄腐病菌 被引量:4
8
作者 胥婧 沈秀萍 +2 位作者 邵秀玲 胡白石 许志刚 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期58-61,共4页
根据风信子黄腐病菌(Xanthom onas hyacinthi,XHA)的fimA基因,合成了1对特异性引物JAAN/JARA,目的片段为226 bp,用来检测样本中有无目标细菌。用XHA全菌体免疫家兔,获得抗血清,建立了检测风信子黄腐病菌的间接免疫荧光染色检测技术。用... 根据风信子黄腐病菌(Xanthom onas hyacinthi,XHA)的fimA基因,合成了1对特异性引物JAAN/JARA,目的片段为226 bp,用来检测样本中有无目标细菌。用XHA全菌体免疫家兔,获得抗血清,建立了检测风信子黄腐病菌的间接免疫荧光染色检测技术。用上述两种方法对风信子黄腐病菌和人工接种发病样品进行检测。结果表明,这两种方法可以准确、灵敏地检测风信子黄腐病菌及带菌样品,方法简单、快速、实用,可以在口岸检疫中推广使用,以减少风信子黄腐病菌进入中国的风险。 展开更多
关键词 风信子黄腐病菌 pcr检测 间接免疫荧光染色技术
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多重PCR在多杀性巴氏杆菌荚膜定群中的应用 被引量:6
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作者 张媛 魏财文 +2 位作者 李建 李伟杰 蒋玉文 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1286-1291,共6页
为了修订行业标准《猪巴氏杆菌病诊断技术》(NY/T 564-2002),改进多杀性巴氏杆菌荚膜定群方法,制备了多杀性巴氏杆菌分群抗血清,并建立了多重PCR,对53株菌同时用血凝方法及多重PCR进行定群。经正向间接血凝试验测定,制备的各型血清仅与... 为了修订行业标准《猪巴氏杆菌病诊断技术》(NY/T 564-2002),改进多杀性巴氏杆菌荚膜定群方法,制备了多杀性巴氏杆菌分群抗血清,并建立了多重PCR,对53株菌同时用血凝方法及多重PCR进行定群。经正向间接血凝试验测定,制备的各型血清仅与对应型抗原发生凝集反应,表明血清具有较高的特异性,可作为多杀性巴氏杆菌的荚膜定群抗血清。53株多杀性巴氏杆菌均扩增出了相应的预期片段,PCR结果与Carter氏间接血细胞凝集试验结果相一致。结果表明,可将多重PCR增添至行业标准中,用其代替原有血清学方法进行多杀性巴氏杆菌荚膜定群。 展开更多
关键词 需氧菌 多杀性巴氏杆菌 荚膜定群 抗血清 多重pcr Carter氏间接血细胞凝集试验
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猪瘟病毒PCR-ELISA检测方法的初步应用 被引量:2
10
作者 王利平 金前跃 +3 位作者 刘兴友 王选年 谭东鹤 李鹏 《家畜生态学报》 北大核心 2023年第7期64-71,共8页
猪瘟(classicalswinefever,CSF)是危害猪健康的重要传染病之一,具有急性、热性和高度接触性等特性,给世界养猪业造成了巨大的经济损失。PCR-ELISA检测方法是在PCR和ELISA基础上创新的一种新技术,其灵敏性和准确性都高于单纯的PCR检测和E... 猪瘟(classicalswinefever,CSF)是危害猪健康的重要传染病之一,具有急性、热性和高度接触性等特性,给世界养猪业造成了巨大的经济损失。PCR-ELISA检测方法是在PCR和ELISA基础上创新的一种新技术,其灵敏性和准确性都高于单纯的PCR检测和ELISA检测。根据GenBank中猪瘟石门株序列,设计特异性引物,分别在5'端标记生物素和地高辛,经过PCR扩增后,加入到包被有链霉亲和素的ELISA反应板上,然后通过DIG-HRP抗体进行显色反应,建立PCR-ELISA检测方法。结果表明:PCR-ELISA最低检测到1.81×10^(4)拷贝/μL,普通PCR最低检测到1.81×10^(6)拷贝/μL,因此PCR-ELISA灵敏性比普通PCR高约100倍;对27份未知样品进行检测,普通PCR检测出阳性样品15份,阳性率为55.5%,PCR-ELISA检出20份阳性样品,阴性7份,阳性率为74%,阳性检出率增加18.5%;用建立的Real-TimePCR进行验证,检测结果与PCR-ELISA一致,两者的符合度为100%;然后用PK15细胞对普通PCR未检测出的阳性样品进行病毒分离培养,通过间接免疫荧光(IFA)及普通PCR检测,结果显示该5份样品均为阳性。说明本研究所建立的PCR-ELISA方法具有灵敏、特异、准确、快速、安全等优势,可应用于CSFV的快速诊断,为CSFV的流行病学监测提供有力保障。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 pcr-ELISA 荧光定量pcr 间接免疫荧光
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环介导间接PCR检测方法的建立 被引量:3
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作者 王永芬 郑鸣 边传周 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期130-134,共5页
建立环介导间接PCR检测体系,为分子诊断提供一种新的检测工具。以质粒pUC18的核苷酸序列为模板,设计两条特异性探针,采用常规PCR技术将特异性探针标记于大豆Lectin基因的左右两端充当报告基因,此标记的报告基因与待检的pUC18质粒经杂交... 建立环介导间接PCR检测体系,为分子诊断提供一种新的检测工具。以质粒pUC18的核苷酸序列为模板,设计两条特异性探针,采用常规PCR技术将特异性探针标记于大豆Lectin基因的左右两端充当报告基因,此标记的报告基因与待检的pUC18质粒经杂交和缺口补平后形成一环状DNA分子,然后采用反向PCR技术扩增报告基因,建立针对pUC18质粒的环介导间接PCR检测方法。结果表明,该检测方法的检测底限为0.32 pg/μL,与常规PCR相当,并且与其他质粒和动物DNA检测无交叉反应,是一种简单、快速、灵敏、特异的PCR检测方法。 展开更多
关键词 探针 报告基因 环介导间接pcr 建立 分子诊断
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烟草芜菁花叶病毒的ELISA和RT-PCR快速检测技术研究 被引量:2
12
作者 周利飞 刘映红 +1 位作者 孙现超 申艳芝 《西南农业学报》 CSCD 2007年第4期758-761,共4页
采用间接ELISA和RT-PCR,建立了烟草芜菁花叶病毒(Turnipmosaic virus,TuMV)快速检测的技术体系。间接ELISA测定结果表明,TuMV多抗按1∶3000浓度稀释后,具有较高的检测灵敏度,其检测极限浓度为1∶3215;通过改进RNA提取技术,从少量的烟草... 采用间接ELISA和RT-PCR,建立了烟草芜菁花叶病毒(Turnipmosaic virus,TuMV)快速检测的技术体系。间接ELISA测定结果表明,TuMV多抗按1∶3000浓度稀释后,具有较高的检测灵敏度,其检测极限浓度为1∶3215;通过改进RNA提取技术,从少量的烟草病叶中提取出高质量总RNA,进行cDNA合成及PCR扩增,得到一条长度约986 bp的特异PCR扩增产物,与理论设计的大小一致,可有效地对田间烟株进行快速检测。 展开更多
关键词 芜菁花叶病毒 间接ELISA RT-pcr 快速检测
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基于单链置换的环介导间接PCR鉴别PEDV、TGEV方法的建立及应用 被引量:2
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作者 郑鸣 李华玮 +3 位作者 刘莹莹 王永芬 边传周 郭宏伟 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第24期4790-4798,共9页
【目的】猪病毒性腹泻主要是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)所引起的一种急性肠道传染病,临床上以呕吐、腹泻、脱水、高发病率和死亡率为主要特征。PEDV与TGEV同属α冠状病毒,可以感染各年龄段猪只,尤其对仔猪的... 【目的】猪病毒性腹泻主要是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)所引起的一种急性肠道传染病,临床上以呕吐、腹泻、脱水、高发病率和死亡率为主要特征。PEDV与TGEV同属α冠状病毒,可以感染各年龄段猪只,尤其对仔猪的危害最为严重,可导致大量仔猪死亡,给养殖业造成严重经济损失。由于PEDV和TGEV感染在临床症状、病理变化和流行病学上极为相似,临床上很难区分,因此,建立一种高效、特异的临床鉴别诊断方法对于预防病毒性腹泻的爆发流行具有重要意义。本试验旨在建立猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)环介导间接PCR检测方法,用于猪病毒性腹泻的病原学鉴别诊断。【方法】根据Gen Bank数据库中PEDV和TGEV基因组序列信息,在对两种病毒基因序列同源性比较的基础上,分别选取PEDV和TGEV核蛋白(N)基因序列的一段高度保守区,设计两条序列相邻的特异性探针,标记于不同大小的TOC1基因片段两端,作为特异性标记的报告基因。此报告基因与待测靶标基因经杂交、环化后,采用1对引物反向PCR扩增报告基因,建立PEDV/TGEV鉴别诊断方法,扩增片段大小分别为404、252bp。【结果】该方法特异性好,可单独或同时检测PEDV和TGEV,与猪圆环病毒2型(PCV2)、猪A型轮状病毒(RAV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病毒(PRV)和猪细小病毒(PPV)等常见猪源性病毒无交叉扩增;检测灵敏度高,对PEDV和TGEV的最低极限浓度分别为1.6和8 pg·μL-1的核酸样品,两种病原的同时检测不影响检测灵敏度;采用环介导间接PCR、常规RT-PCR和Sybr Green实时PCR对157份临床样本进行比较检测,3种方法的PEDV检出率分别为33.76%、21.66%和36.31%,TGEV检出率分别为26.75%、13.38%和28.03%;kappa检验结果,环介导间接PCR、Sybr Green实时PCR两种方法对PEDV和TGEV检测结果的符合度均为96.18%(κ≥0.90)【结论】环介导间接PCR可以用于鉴别诊断PEDV/TGEV,是一种快速、准确、灵敏、特异的病原学诊断工具。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) 猪传染性胃肠炎病毒(TGEV) 环介导间接pcr 探针 报告基因
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间接免疫荧光法与RT-PCR法检测鼠肺汉坦病毒带毒率 被引量:2
14
作者 杨洋 张振 +1 位作者 张旭 白梅 《中华卫生杀虫药械》 CAS 2020年第1期36-38,共3页
目的对间接免疫荧光法(IFA)和逆转录聚合酶连反应(RT-PCR)两种检测鼠肺汉坦病毒(HV)的实验方法进行比较,为进一步完善出血热病毒实验室检测方案提供依据。方法采用IFA和RT-PCR对2018年收集的200份鼠肺进行HV检测、分型,统计鼠种和数量... 目的对间接免疫荧光法(IFA)和逆转录聚合酶连反应(RT-PCR)两种检测鼠肺汉坦病毒(HV)的实验方法进行比较,为进一步完善出血热病毒实验室检测方案提供依据。方法采用IFA和RT-PCR对2018年收集的200份鼠肺进行HV检测、分型,统计鼠种和数量。结果锦州市鼠带汉坦病毒率2014年最高为5.42%(11/203),2010年最低为0.95%(1/105)。人间肾综合征出血热发病率2014年最高为6.77/10万,2010年最低为2.27/10万。鼠带毒指数与人间出血热发病率正相关(r=0.75,P<0.05);IFA检测鼠肺HA抗原阳性率为2.00%(4/200);RT-PCR检测鼠肺HA核酸阳性率为4.00%(8/200),两种方法检测结果有统计学差异(χ~2=13.01,P<0.01);锦州地区主要流行株为汉城(SEO)型HV。结论 RT-PCR检测鼠肺HV核酸的敏感性高于IFA检测鼠肺HV抗原的敏感性,可以推广应用RT-PCR检测鼠肺带毒率的实验室检测技术。 展开更多
关键词 肾综合征出血热 汉坦病毒 间接免疫荧光法 逆转录聚合酶连反应
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同时检测鸭疫里默氏菌和大肠杆菌的环介导间接PCR方法的建立 被引量:1
15
作者 程龙飞 傅光华 +7 位作者 林群群 刘荣昌 陈翠腾 傅秋玲 万春和 施少华 陈红梅 黄瑜 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期637-640,共4页
为建立同时检测鸭疫里默氏菌和大肠杆菌的环介导间接PCR方法,本研究根据鸭疫里默氏菌外膜蛋白A基因和大肠杆菌的gapA基因的保守序列设计两对特异性探针,分别标记于猪线粒体基因片段的两端形成两种不同的捕获探针,将捕获探针与待检测菌... 为建立同时检测鸭疫里默氏菌和大肠杆菌的环介导间接PCR方法,本研究根据鸭疫里默氏菌外膜蛋白A基因和大肠杆菌的gapA基因的保守序列设计两对特异性探针,分别标记于猪线粒体基因片段的两端形成两种不同的捕获探针,将捕获探针与待检测菌的基因组杂交、补平缺口、环化后,采用1对引物反向扩增捕获探针,建立检测鸭疫里默氏菌和大肠杆菌的环介导间接PCR方法,扩增片段分别为540 bp和328 bp,本研究建立的方法对金黄色葡萄球菌、禽多杀性巴氏杆菌、沙门氏菌的检测结果为阴性;能够检测出10 pg的鸭疫里默氏菌和大肠杆菌的基因组DNA,与常规PCR的符合率为100%。本研究建立的环介导间接PCR方法是一种特异性好、灵敏度高的快速病原学诊断方法,为同时检测鸭疫里默氏菌和大肠杆菌提供了一种可行的方法。 展开更多
关键词 鸭疫里默氏菌 大肠杆菌 环介导间接pcr
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喉鳞癌中HPV的免疫组化、原位杂交、PCR和间接原位PCR检测 被引量:2
16
作者 李晓 吴能定 +1 位作者 徐如君 项晶晶 《诊断病理学杂志》 CSCD 1999年第4期230-232,I012,共4页
目的探讨HPV与喉癌发生的关系。方法采用免疫组化、原位杂交、PCR和间接原位PCR技术检测50例喉鳞状细胞癌中的HPV感染情况。结果免疫组化衣壳抗原阳性6例(12%),原位杂交阳性13例(26%),PCR阳性10例(20%),原位PCR阳性17例(3... 目的探讨HPV与喉癌发生的关系。方法采用免疫组化、原位杂交、PCR和间接原位PCR技术检测50例喉鳞状细胞癌中的HPV感染情况。结果免疫组化衣壳抗原阳性6例(12%),原位杂交阳性13例(26%),PCR阳性10例(20%),原位PCR阳性17例(34%),综合上述方法阳性率为42%(阳性对例)。结论HPV感染与喉癌有着明显的关系,间接原位PCR在检测HPV感染时具有较高的敏感性,特异性强,结果可靠,可定性定位,是一项具有发展前途且更易为病理工作者所接受的PCR技术。 展开更多
关键词 喉肿瘤 喉鳞癌 HPV 原位杂交 pcr
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建立环介导间接PCR同时检测3种主要猪源性病毒 被引量:4
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作者 郑鸣 边传周 王老七 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第21期4499-4507,共9页
【目的】建立同时检测猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的环介导间接PCR方法,实现3种病毒快速检测。【方法】根据GenBank数据库中猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRR... 【目的】建立同时检测猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的环介导间接PCR方法,实现3种病毒快速检测。【方法】根据GenBank数据库中猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的核苷酸序列设计3对特异性探针,利用PCR技术分别标记于大豆Lectin基因片段的两端形成3种不同的报告基因,此标记的报告基因与3种待测靶标基因经杂交、缺口补平、环化后,采用1对引物反向PCR扩增报告基因,建立了PCV2、CSFV和PRRSV的环介导间接PCR检测方法,扩增片段大小分别为564 bp、434 bp和338 bp,该方法即可用于单病毒检测又可用于多病毒检测。【结果】灵敏度和特异性试验结果表明,无论是单病毒检测还是多病毒检测,该法都具有高度特异性,与其它病原检测无明显交叉反应;对PCV2、CSFV和PRRSV 3种病毒同时检测的底限分别为0.8、25和6.2 pg.μL-1,和单个病毒的检测灵敏度相同。利用环介导间接PCR和常规PCR对20份临床样本进行比较检测,结果表明,无论单病毒检测还是多病毒检测,其结果均与常规PCR检测结果完全一致。【结论】环介导间接PCR检测技术可用于PCV2、CSFV和PRRSV 3种病毒的同时检测,是一种简便快速、灵敏、特异的病原学诊断工具。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 猪瘟病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒 环介导间接pcr
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应用间接原位PCR诊断弓形虫淋巴结炎 被引量:7
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作者 卢慎 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2008年第1期70-72,I0002,共4页
目的:探讨间接原位PCR技术在弓形虫淋巴结炎病理诊断中的应用。方法:设计弓形虫B1基因1对引物进行原位扩增,选择弓形虫B1基因来源的地高辛标记探针进行扩增后原位杂交,应用间接原位PCR技术,检测三所医院共86例病理诊断为慢性非特异性淋... 目的:探讨间接原位PCR技术在弓形虫淋巴结炎病理诊断中的应用。方法:设计弓形虫B1基因1对引物进行原位扩增,选择弓形虫B1基因来源的地高辛标记探针进行扩增后原位杂交,应用间接原位PCR技术,检测三所医院共86例病理诊断为慢性非特异性淋巴结炎石蜡包埋切片组织中的弓形虫。结果:86例中47例弓形虫阳性,占54.65%。三所医院弓形虫阳性率经统计学处理无显著性差异(P>0.05)。结论:在病理诊断为慢性非特异性淋巴结炎病例中,存在被误诊的弓形虫淋巴结炎病例。 展开更多
关键词 弓形虫 淋巴结炎 间接原位pcr
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间接法原位PCR检测喉鳞癌组织HPV感染 被引量:1
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作者 李晓 吴能定 +2 位作者 徐如君 沈宝珠 黎向红 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第1期45-48,共4页
目的建立稳定的原位PCR方法 ,并探讨HPV感染与喉鳞癌发生的关系。方法采用免疫组化、原位杂交、PCR和间接原位PCR技术 ,检测了50例喉鳞癌中的HPV感染情况。结果免疫组化衣壳抗原阳性者6例(12 % ) ,原位杂交阳性者13例 (26 % ) ,PCR阳性... 目的建立稳定的原位PCR方法 ,并探讨HPV感染与喉鳞癌发生的关系。方法采用免疫组化、原位杂交、PCR和间接原位PCR技术 ,检测了50例喉鳞癌中的HPV感染情况。结果免疫组化衣壳抗原阳性者6例(12 % ) ,原位杂交阳性者13例 (26 % ) ,PCR阳性者10例 (20 % ) ,原位PCR阳性者17例 (34 % ) ,综合上述方法的检出率为42 % (21例 )。结论HPV感染与喉癌有着明显的关系 ,间接原位PCR在检测HPV感染中具有较高的敏感性、特异性和可靠性 ,可以定性、定位。 展开更多
关键词 乳头瘤病毒 喉鳞癌 免疫组化染色 喉肿瘤 pcr
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应用免疫组化、原位杂交及间接原位PCR诊断弓形虫淋巴结炎 被引量:1
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作者 卢慎 《中国实验诊断学》 2008年第10期1305-1307,共3页
目的研究弓形虫淋巴结炎的病理诊断。方法应用免疫组化、原位杂交及间接原位PCR技术,检测71例病理诊断为慢性非特异性淋巴结炎(淋巴结反应性增生)组织切片中的弓形虫。结果在71例中应用免疫组化、原位杂交及间接原位PCR技术检测,弓形虫... 目的研究弓形虫淋巴结炎的病理诊断。方法应用免疫组化、原位杂交及间接原位PCR技术,检测71例病理诊断为慢性非特异性淋巴结炎(淋巴结反应性增生)组织切片中的弓形虫。结果在71例中应用免疫组化、原位杂交及间接原位PCR技术检测,弓形虫阳性病例分别为17例(23.94%)、35例(49.30%)、41例(57.75%),经统计学处理有显著差异(P<0.005)。结论病理诊断为慢性非特异性淋巴结炎(淋巴结反应性增生)病例中,部份为漏诊的弓形虫淋巴结炎病例。免疫组化、原位杂交及间接原位PCR均能显示淋巴结组织切片中的弓形虫,但弓形虫检测结果阳性率依次为间接原位PCR、原位杂交及免疫组化。 展开更多
关键词 弓形虫 淋巴结 免疫组化 原位杂交 间接原位pcr
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