目的探讨颅内动脉瘤患者血清缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cysteine aspartate protein hydrolase-3,Caspase-3)、微小RNA-143(microRNA-143,miR-143)水平与动脉瘤破裂的关...目的探讨颅内动脉瘤患者血清缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cysteine aspartate protein hydrolase-3,Caspase-3)、微小RNA-143(microRNA-143,miR-143)水平与动脉瘤破裂的关系。方法143例颅内动脉瘤患者作为病例组,根据颅内动脉瘤破裂与否分为未破裂组(n=95)和破裂组(n=48),另选取同期健康体检人群138例作为对照组,收集各组受检者的一般资料(年龄、性别及体质量指标);抽取病例组患者入院日、对照组体检者体检日空腹肘静脉血离心,采用酶联免疫吸附试验和实时荧光定量PCR检测各组受检者血清HIF-1α、Caspase-3及miR-143水平;随访病例组患者术后3个月,采用CT血管造影检查患者的动脉瘤影像特征(动脉瘤标准化表面最大压力、瘤体宽径、形状不规则占比、载瘤动脉宽度、低剪切力面积比值、动脉瘤标准化表面平均压力、瘤体长径、瘤径宽度、瘤体最长径、平均壁面剪切力及动脉瘤位置)并判断颅内动脉瘤破裂与否,采用多因素logistic分析病例组患者颅内动脉瘤破裂的影响因素,采用Spearman相关分析和ROC曲线分析病例组患者血清HIF-1α、Caspase-3、miR-143水平与颅内动脉瘤破裂的相关性及预警价值。结果病例组患者血清Caspase-3、HIF-1α高于对照组,miR-143水平低于对照组(P<0.05);破裂组颅内动脉瘤患者血清miR-143水平和瘤体宽径低于未破裂组,血清HIF-1α、Caspase-3及低剪切力面积比值、瘤体最长径、形状不规则占比、瘤体长径、平均壁面剪切力水平高于未破裂组(P<0.05);logistic分析结果显示,血清Caspase-3、miR-143、HIF-1α及低剪切力面积比值、瘤体宽径、瘤体长径、平均壁面剪切力、瘤体最长径、形状不规则是颅内动脉瘤破裂的影响因素(P<0.05);Spearman相关分析结果显示,血清miR-143与患者颅内动脉瘤破裂呈负相关(P<0.05),血清Caspase-3、HIF-1α与患者颅内动脉瘤破裂呈正相关(P<0.05);血清miR-143、Caspase-3及HIF-1α预测颅内动脉瘤破裂的曲线下面积(AUC)分别为0.716、0.689及0.702,3者联合预测颅内动脉瘤破裂的AUC为0.802大于单独指标预测。结论血清高HIF-1α、Caspase-3水平及低miR-143水平是颅内动脉瘤破裂的影响因素,且3者联合预测价值更高。展开更多
目的O-GlcNAc糖基化(O-linked beta-N-acetylglucosamine,O-GlcNAc)和Yes相关蛋白1(yes-associated protein 1,YAP1)是否会发生糖基化、在结直肠癌中的表达情况及发挥作用的机制都尚未得到充分阐明。本研究旨在借助癌症基因组图谱(the c...目的O-GlcNAc糖基化(O-linked beta-N-acetylglucosamine,O-GlcNAc)和Yes相关蛋白1(yes-associated protein 1,YAP1)是否会发生糖基化、在结直肠癌中的表达情况及发挥作用的机制都尚未得到充分阐明。本研究旨在借助癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据库、组织标本和细胞系探究O-GlcNAc糖基化和YAP1糖基化在结直肠中所发挥的作用。方法采用免疫组化法检测O-GlcNAc和OGT蛋白(O-linked-N-acetylglucosamine transferase,OGT)在结直肠组织和癌旁组织中的表达情况;运用qPCR检测结直肠组织和癌旁组织中OGT mRNA表达水平;借助在线分析TCGA数据库,了解OGT的表达情况及其对预后产生的影响;通过Western Blot检测OSMI-1对O-GlcNAc糖基化的抑制作用;采用CCK-8和Transwell检测,在抑制O-GlcNAc糖基化后,观察肠癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的变化;借助数据库分析YAP1的表达情况及其O-GlcNAc糖基化位点,并经质谱分析确定YAP1是否发生O-GlcNAc糖基化修饰;运用Co-IP和免疫荧光实验验证YAP1和OGT之间的结合关系;采用qPCR和免疫荧光明确抑制O-GlcNAc糖基化后YAP1表达位置的改变以及下游效应基因表达的改变情况。结果研究发现,OGT蛋白和mRNA在结直肠组织中的表达水平明显升高,但对患者的预后并无明显影响;OSMI-1能够抑制肠癌细胞的O-GlcNAc糖基化,并且抑制细胞增殖、侵袭与迁移能力;YAP1可与OGT结合并发生O-GlcNAc糖基化,当抑制O-GlcNAc糖基化后,YAP1入核数量减少,转录活性降低。结论在结直肠癌中,O-GlcNAc糖基化水平呈现升高趋势,OGT和YAP1结合,使YAP1发生O-GlcNAc糖基化修饰,促进其转录活性。展开更多
目的:研究甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)耐药前后人大肠癌(结直肠癌)HT-29细胞中透明质酸蛋白聚糖连结蛋白1(hyaluronan and proteoglycan link protein 1,HAPLN1)表达的变化及其对MTX耐药性的影响,并探究可能的分子机制。方法:采用浓度...目的:研究甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)耐药前后人大肠癌(结直肠癌)HT-29细胞中透明质酸蛋白聚糖连结蛋白1(hyaluronan and proteoglycan link protein 1,HAPLN1)表达的变化及其对MTX耐药性的影响,并探究可能的分子机制。方法:采用浓度梯度递增法构建耐药细胞株HT-29/MTX;RT-PCR检测HAPLN1和多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance-associated protein 2,MRP2)的mRNA表达水平;采用脂质体介导法将人HAPLN1和MRP2基因的干扰质粒转染HT-29/MTX细胞并筛选出稳定表达的细胞系;采用CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;采用Western blot检测HAPLN1、MRP2、IκB激酶(IκB kinase,IKK)α/β、p-IKKα/β(Ser176/Ser177)、p65和p-p65(Ser536)的蛋白水平。结果:HT-29/MTX细胞中HAPLN1和MRP2的mRNA和蛋白表达水平都显著高于其亲代HT-29细胞(P<0.05),耐药倍数高达463.756。抑制HAPLN1和MRP2基因表达使MTX对HT-29/MTX细胞的IC_(50)从15.304μmol/L分别降至6.119μmol/L和7.801μmol/L,逆转倍数分别为2.501和1.962,并增强MTX诱导的细胞凋亡(P<0.05)。敲减HAPLN1基因表达和使用IKK抑制剂IKK16均可下调IKKα/β和p65蛋白磷酸化水平以及MRP2蛋白表达水平(P<0.05),但IKK16未对HAPLN1蛋白表达产生影响(P>0.05)。结论:敲减HAPLN1基因表达可在体外增强人大肠癌耐药细胞株HT-29/MTX对MTX的敏感性,这可能与其抑制IKK/p65信号通路活化,继而下调MRP2基因表达有关。展开更多
文摘目的探讨颅内动脉瘤患者血清缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cysteine aspartate protein hydrolase-3,Caspase-3)、微小RNA-143(microRNA-143,miR-143)水平与动脉瘤破裂的关系。方法143例颅内动脉瘤患者作为病例组,根据颅内动脉瘤破裂与否分为未破裂组(n=95)和破裂组(n=48),另选取同期健康体检人群138例作为对照组,收集各组受检者的一般资料(年龄、性别及体质量指标);抽取病例组患者入院日、对照组体检者体检日空腹肘静脉血离心,采用酶联免疫吸附试验和实时荧光定量PCR检测各组受检者血清HIF-1α、Caspase-3及miR-143水平;随访病例组患者术后3个月,采用CT血管造影检查患者的动脉瘤影像特征(动脉瘤标准化表面最大压力、瘤体宽径、形状不规则占比、载瘤动脉宽度、低剪切力面积比值、动脉瘤标准化表面平均压力、瘤体长径、瘤径宽度、瘤体最长径、平均壁面剪切力及动脉瘤位置)并判断颅内动脉瘤破裂与否,采用多因素logistic分析病例组患者颅内动脉瘤破裂的影响因素,采用Spearman相关分析和ROC曲线分析病例组患者血清HIF-1α、Caspase-3、miR-143水平与颅内动脉瘤破裂的相关性及预警价值。结果病例组患者血清Caspase-3、HIF-1α高于对照组,miR-143水平低于对照组(P<0.05);破裂组颅内动脉瘤患者血清miR-143水平和瘤体宽径低于未破裂组,血清HIF-1α、Caspase-3及低剪切力面积比值、瘤体最长径、形状不规则占比、瘤体长径、平均壁面剪切力水平高于未破裂组(P<0.05);logistic分析结果显示,血清Caspase-3、miR-143、HIF-1α及低剪切力面积比值、瘤体宽径、瘤体长径、平均壁面剪切力、瘤体最长径、形状不规则是颅内动脉瘤破裂的影响因素(P<0.05);Spearman相关分析结果显示,血清miR-143与患者颅内动脉瘤破裂呈负相关(P<0.05),血清Caspase-3、HIF-1α与患者颅内动脉瘤破裂呈正相关(P<0.05);血清miR-143、Caspase-3及HIF-1α预测颅内动脉瘤破裂的曲线下面积(AUC)分别为0.716、0.689及0.702,3者联合预测颅内动脉瘤破裂的AUC为0.802大于单独指标预测。结论血清高HIF-1α、Caspase-3水平及低miR-143水平是颅内动脉瘤破裂的影响因素,且3者联合预测价值更高。
文摘目的O-GlcNAc糖基化(O-linked beta-N-acetylglucosamine,O-GlcNAc)和Yes相关蛋白1(yes-associated protein 1,YAP1)是否会发生糖基化、在结直肠癌中的表达情况及发挥作用的机制都尚未得到充分阐明。本研究旨在借助癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据库、组织标本和细胞系探究O-GlcNAc糖基化和YAP1糖基化在结直肠中所发挥的作用。方法采用免疫组化法检测O-GlcNAc和OGT蛋白(O-linked-N-acetylglucosamine transferase,OGT)在结直肠组织和癌旁组织中的表达情况;运用qPCR检测结直肠组织和癌旁组织中OGT mRNA表达水平;借助在线分析TCGA数据库,了解OGT的表达情况及其对预后产生的影响;通过Western Blot检测OSMI-1对O-GlcNAc糖基化的抑制作用;采用CCK-8和Transwell检测,在抑制O-GlcNAc糖基化后,观察肠癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的变化;借助数据库分析YAP1的表达情况及其O-GlcNAc糖基化位点,并经质谱分析确定YAP1是否发生O-GlcNAc糖基化修饰;运用Co-IP和免疫荧光实验验证YAP1和OGT之间的结合关系;采用qPCR和免疫荧光明确抑制O-GlcNAc糖基化后YAP1表达位置的改变以及下游效应基因表达的改变情况。结果研究发现,OGT蛋白和mRNA在结直肠组织中的表达水平明显升高,但对患者的预后并无明显影响;OSMI-1能够抑制肠癌细胞的O-GlcNAc糖基化,并且抑制细胞增殖、侵袭与迁移能力;YAP1可与OGT结合并发生O-GlcNAc糖基化,当抑制O-GlcNAc糖基化后,YAP1入核数量减少,转录活性降低。结论在结直肠癌中,O-GlcNAc糖基化水平呈现升高趋势,OGT和YAP1结合,使YAP1发生O-GlcNAc糖基化修饰,促进其转录活性。
文摘目的:研究甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)耐药前后人大肠癌(结直肠癌)HT-29细胞中透明质酸蛋白聚糖连结蛋白1(hyaluronan and proteoglycan link protein 1,HAPLN1)表达的变化及其对MTX耐药性的影响,并探究可能的分子机制。方法:采用浓度梯度递增法构建耐药细胞株HT-29/MTX;RT-PCR检测HAPLN1和多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance-associated protein 2,MRP2)的mRNA表达水平;采用脂质体介导法将人HAPLN1和MRP2基因的干扰质粒转染HT-29/MTX细胞并筛选出稳定表达的细胞系;采用CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;采用Western blot检测HAPLN1、MRP2、IκB激酶(IκB kinase,IKK)α/β、p-IKKα/β(Ser176/Ser177)、p65和p-p65(Ser536)的蛋白水平。结果:HT-29/MTX细胞中HAPLN1和MRP2的mRNA和蛋白表达水平都显著高于其亲代HT-29细胞(P<0.05),耐药倍数高达463.756。抑制HAPLN1和MRP2基因表达使MTX对HT-29/MTX细胞的IC_(50)从15.304μmol/L分别降至6.119μmol/L和7.801μmol/L,逆转倍数分别为2.501和1.962,并增强MTX诱导的细胞凋亡(P<0.05)。敲减HAPLN1基因表达和使用IKK抑制剂IKK16均可下调IKKα/β和p65蛋白磷酸化水平以及MRP2蛋白表达水平(P<0.05),但IKK16未对HAPLN1蛋白表达产生影响(P>0.05)。结论:敲减HAPLN1基因表达可在体外增强人大肠癌耐药细胞株HT-29/MTX对MTX的敏感性,这可能与其抑制IKK/p65信号通路活化,继而下调MRP2基因表达有关。
