禽白血病病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用 被引量：1

1

作者 苏晓月 吕转平 +2 位作者 沈亚安 赵明明 唐思静 《家畜生态学报》 北大核心 2025年第1期64-69,共6页

为了建立一种禽白血病病毒(ALV)抗体检测方法,利用原核表达禽白血病病毒的p27蛋白建立一种检测ALV抗体的间接ELISA方法。结果显示,p27蛋白以包涵体形式表达,Western blot检测显示p27蛋白具有良好的反应活性,以p27蛋白为包被抗原建立的间... 为了建立一种禽白血病病毒(ALV)抗体检测方法,利用原核表达禽白血病病毒的p27蛋白建立一种检测ALV抗体的间接ELISA方法。结果显示,p27蛋白以包涵体形式表达,Western blot检测显示p27蛋白具有良好的反应活性,以p27蛋白为包被抗原建立的间接ELISA方法检测NDV、IBDV、IBV、AIV-H9、ILTV阳性血清均为阴性,最低抗体检出效价为1︰12800,与进口试剂盒的符合率为94.87%,检测临床血清样品的阳性率为14.02%。结果说明该研究建立的间接ELISA方法特异性强、敏感性高、符合性好,可为ALV的检测和净化等提供一种简单快速的方法。 展开更多

关键词 禽白血病病毒 间接elisa方法 抗体检测 净化

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新城疫病毒HN蛋白的截短表达及间接ELISA方法建立

2

作者 魏玲 王思怡 +4 位作者 熊荣园 梁洪 王怀禹 李彩虹 杨国淋 《家畜生态学报》 北大核心 2025年第3期91-95,共5页

为了建立一种快速的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)抗体检测方法,试验采用原核表达技术表达HN蛋白,以HN蛋白为检测抗原建立酶联免疫吸附测定(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法。结果表明,获得了以包涵体形式表... 为了建立一种快速的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)抗体检测方法,试验采用原核表达技术表达HN蛋白,以HN蛋白为检测抗原建立酶联免疫吸附测定(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法。结果表明,获得了以包涵体形式表达的重组蛋白,间接ELISA方法检测6种其它鸡病阳性血清均为阴性,其最低抗体检出效价为1∶10240,其与血凝抑制试验(Hemagglutination inhibition,HI)方法的阳性和阴性符合率分别为98.08%和92.31%,检测临床样品阳性率为91.48%。说明建立的间接ELISA方法可用于NDV免疫抗体检测和疫苗免疫效果评价。 展开更多

关键词 新城疫病毒 HN蛋白 截短表达 间接elisa 抗体检测

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基于IgY的ELISA法检测淋病奈瑟氏菌的效果及抗体敏感度影响分析

3

作者 肖昕 张曼珂 +3 位作者 夏乐欢 罗艳 李勤 李红姣 《中国卫生标准管理》 2025年第8期172-176,共5页

目的 探讨高效价、高纯度、生物活性好的抗淋病奈瑟氏菌的特异性鸡卵黄免疫球蛋白(immunoglobulin of yolk,IgY)应用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测淋病奈瑟氏菌的效果。方法 采用超声破碎、研磨破碎、... 目的 探讨高效价、高纯度、生物活性好的抗淋病奈瑟氏菌的特异性鸡卵黄免疫球蛋白(immunoglobulin of yolk,IgY)应用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测淋病奈瑟氏菌的效果。方法 采用超声破碎、研磨破碎、共振裂解等方法裂解淋病奈瑟氏菌,筛选出最佳裂解抗原,然后将经甲醛灭活的全菌抗原或裂解抗原与佐剂充分乳化免疫产蛋母鸡;采用酶联免疫吸附试验检测水稀释后的IgY抗体效价变化;通过硫酸铵盐析,超滤法纯化抗体,并用十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝电泳法和二喹啉甲酸法测定抗体纯度和浓度,ELISA法评价IgY检测效果。结果 超声破碎法裂解的淋病奈瑟氏菌抗原浓度最高且蛋白条带最为完整;0.5 mL的1×10^(9) CFU/mL灭活菌初次免疫4周后再次免疫的方案产生的抗体效价最高,可达1∶25 600。硫酸铵沉淀超滤纯化后的抗体纯度可达94%,浓度为27.02 mg/mL;建立的间接ELISA法制检测淋病奈瑟氏菌具有较高的特异性和敏感度。结论 基于IgY的ELISA法检测淋病奈瑟氏菌效果显著,可以提高制备抗体的敏感度。 展开更多

关键词 淋病奈瑟氏菌 鸡卵黄抗体 免疫球蛋白 间接elisa法 效能 价值

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猪瘟病毒间接ELISA抗体检测方法的建立

4

作者 颜士琦 李复坤 +5 位作者 齐冬梅 赖月辉 黄福强 冯钰鑫 周晓敏 樊全宝 《广东畜牧兽医科技》 2025年第5期66-72,120,共8页

猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的猪的一种高度传染性和致死性的病毒性疾病,疫苗接种是预防CSF的有效手段,抗体水平是评价免疫猪群免疫效果的重要指标。该研究通过原核表达系统成... 猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的猪的一种高度传染性和致死性的病毒性疾病,疫苗接种是预防CSF的有效手段,抗体水平是评价免疫猪群免疫效果的重要指标。该研究通过原核表达系统成功表达了CSFV重组蛋白E2Y,将纯化的E2Y蛋白作为包被抗原,优化条件并建立了CSFV间接ELISA抗体检测方法。试验结果表明,蛋白包被浓度为0.25μg/mL,与常见猪病毒的阳性血清无交叉反应,具有良好的特异性、灵敏性、可重复性,与商品化试剂盒一致性为91.67%。该研究成功建立了CSFV间接ELISA抗体检测方法,为进一步优化和研制CSFV抗体检测试剂盒提供了技术参考。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 抗体检测 间接elisa方法

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非洲猪瘟病毒P54蛋白原核表达及间接ELISA检测方法建立 被引量：1

5

作者 王程 夏应菊 +1 位作者 王海东 刘业兵 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期4440-4449,共10页

【目的】建立一种具有良好特异性和敏感性的非洲猪瘟病毒(African swine fever,ASFV)抗体间接ELISA检测方法。【方法】根据ASFV P54蛋白基因序列进行大肠杆菌密码子优化,将优化后的P54序列克隆到pET-28a(+)质粒中,构建重组质粒pET28a-P... 【目的】建立一种具有良好特异性和敏感性的非洲猪瘟病毒(African swine fever,ASFV)抗体间接ELISA检测方法。【方法】根据ASFV P54蛋白基因序列进行大肠杆菌密码子优化,将优化后的P54序列克隆到pET-28a(+)质粒中,构建重组质粒pET28a-P54,利用大肠杆菌表达系统表达目的蛋白并用His镍柱进行纯化,经SDS-PAGE和Western blotting鉴定后,以纯化的P54蛋白作为检测抗原进行包被,建立一种间接ELISA方法,对包被条件、封闭液、封闭时间和血清孵育等反应条件进行优化后,对其临界值、特异性、灵敏性和重复性进行验证。【结果】SDS-PAGE结果显示,P54蛋白分子质量为42 ku,纯度在95%以上;Western blotting结果显示,P54蛋白与ASFV阳性血清能产生特异性反应。优化后的ELISA反应条件为:0.3125μg/mL抗原37℃包被1 h,5%脱脂奶粉37℃封闭1 h,1∶800稀释的血清37℃孵育2 h,1∶15000稀释的酶标二抗37℃孵育1 h。该ELISA检测方法仅与ASFV阳性血清产生特异性反应,与猪瘟病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、牛病毒性腹泻病毒、猪伪狂犬病病毒和乙型脑炎病毒的阳性血清均无明显交叉反应;该方法灵敏性较高,ASFV阳性血清稀释度为1∶3200时仍有明显反应。批间重复和批内重复变异系数均<10%;与商品化试剂盒相比,其阳性符合率为95.45%,阴性符合率为96.05%,总符合率为95.83%。【结论】本研究建立了一种以ASFV P54蛋白为检测抗原的ASFV间接ELISA方法,该方法具有良好的特异性和敏感性,能运用于ASFV的血清学检测,为非洲猪瘟的快速诊断提供更多选择。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒(ASFV) 间接elisa方法 P54蛋白 原核表达

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基于重组核衣壳蛋白的猪德尔塔冠状病毒间接ELISA检测方法的建立 被引量：3

6

作者 胡帅琪 丛潇 +5 位作者 练月晓 伍妙梨 朱于军 丛锋 顾有方 闻爱友 《安徽科技学院学报》 2024年第3期25-33,共9页

目的:建立一种关于猪德尔塔冠状病毒(Porcine Deltacoronavirus, PDCoV)抗体的检测方法。方法:对猪德尔塔冠状病毒的核衣壳蛋白(N)进行原核表达,通过Western Blot、SDS-PAGE等方法,对重组蛋白进行鉴定;在获得正确表达的重组蛋白后,以此... 目的:建立一种关于猪德尔塔冠状病毒(Porcine Deltacoronavirus, PDCoV)抗体的检测方法。方法:对猪德尔塔冠状病毒的核衣壳蛋白(N)进行原核表达,通过Western Blot、SDS-PAGE等方法,对重组蛋白进行鉴定;在获得正确表达的重组蛋白后,以此为抗原,对ELISA反应条件进行优化,并对其特异性、敏感性、重复性进行测试,最终建立ELISA检测方法,并对临床样品进行检测。结果:优化后的抗原包被浓度为2μg/孔,37℃孵育1 h;1%BSA 37℃封闭1 h;一抗稀释最佳浓度为1∶1 600,孵育时间为1 h;酶标二抗最佳孵育时间为60 min。重组蛋白能与猪德尔塔冠状病毒血清发生特异性反应,所建立的检测方法具有优良的敏感性、特异性、重复性。结论:本研究建立了一种针对猪德尔塔冠状病毒的间接ELISA检测方法,为猪德尔塔冠状病毒的抗体水平检测及疾病的防控提供了一种有效的方法。 展开更多

关键词 猪德尔塔冠状病毒 重组核衣壳蛋白 间接elisa 诊断方法

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狐源兔脑炎微孢子虫极管蛋白2(PTP2)的原核表达及间接ELISA方法的建立

7

作者 高妍 贺飞 +1 位作者 王好 刘丽凡 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第12期108-114,共7页

为了建立一种特异性好、敏感性高、重复性好的可检测蓝狐兔脑炎微孢子虫病的间接ELISA方法,试验首先从疑似感染兔脑炎微孢子虫(Encephalitozoon.cuniculi)的蓝狐脑组织DNA中扩增PTP2基因,并将其与原核表达载体pET-32a(+)连接,构建重组质... 为了建立一种特异性好、敏感性高、重复性好的可检测蓝狐兔脑炎微孢子虫病的间接ELISA方法,试验首先从疑似感染兔脑炎微孢子虫(Encephalitozoon.cuniculi)的蓝狐脑组织DNA中扩增PTP2基因,并将其与原核表达载体pET-32a(+)连接,构建重组质粒pET32a-PTP2,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达,将菌体超声后对表达的重组蛋白进行可溶性分析,并纯化目的蛋白;然后以重组蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件和临界值的确定建立蓝狐兔脑炎微孢子虫的间接ELISA方法,并进行特异性、敏感性和重复性试验;最后采用建立的间接ELISA方法对28份经常规PCR方法验证已经感染兔脑炎微孢子虫病的蓝狐血清样品进行检测,并计算符合率。结果表明:表达的重组蛋白的分子质量为45.8 ku,且表达产物以可溶性蛋白和包涵体两种形式存在,经纯化杂带明显减少,纯化后的重组蛋白质量浓度为1.55 mg/mL。间接ELISA方法的最佳包被抗原质量浓度为8μg/ml,最佳一抗稀释度为1∶100,最佳封闭液为5%脱脂乳,最佳封闭条件为37℃、1 h,最佳一抗孵育时间为120 min,最佳二抗稀释度为1∶5 000,最佳二抗孵育时间为60 min,最佳显色时间为20 min。阴、阳性血清OD_(450)临界值分别为0.268和0.302。建立的间接ELISA方法检测蓝狐犬瘟热病毒、蓝狐伪狂犬病毒、蓝狐细小病毒阳性血清均为阴性,可检测到稀释度为1∶3 200的蓝狐兔脑炎微孢子虫阳性血清,批内重复与批间重复变异系数均小于10%。用建立的间接ELISA方法检测28份蓝狐血清样品的阳性样品数为23份,与常规PCR方法的符合率为82.14%。说明试验成功建立了一种可检测蓝狐兔脑炎微孢子虫病的间接ELISA方法,该方法特异性好、敏感性高、重复性好,适合在基层推广。 展开更多

关键词 兔脑炎微孢子虫病 微孢子虫极管蛋白2(PTP2) 原核表达 间接elisa 检测方法的建立

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抗水禽呼肠孤病毒σC蛋白抗体间接ELISA方法的建立及鹅群血清学调查 被引量：1

8

作者 陈稼龙 何莉 +3 位作者 郑炜鸿 朱婉君 张济培 陈济铛 《广东畜牧兽医科技》 2024年第6期8-15,共8页

为提供水禽呼肠孤病毒病早期诊断的精准快速检测方法,该试验通过BL21(DE3)原核表达系统稳定表达水禽呼肠孤病毒σC蛋白,并将纯化的重组σC蛋白包被ELISA酶标板,经进一步反应条件优化。结果显示,该试验建立的ELISA检测方法最优反应条件是... 为提供水禽呼肠孤病毒病早期诊断的精准快速检测方法,该试验通过BL21(DE3)原核表达系统稳定表达水禽呼肠孤病毒σC蛋白,并将纯化的重组σC蛋白包被ELISA酶标板,经进一步反应条件优化。结果显示,该试验建立的ELISA检测方法最优反应条件是:抗原包被含量为1μg/孔,待检血清最佳稀释度为1∶50,孵育时间为45 min,酶标二抗最佳稀释度为1∶500,孵育时间为30 min,最佳底物显色时间为20 min,OD_(450)值≥0.3判定为阳性。该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,对水禽呼肠孤病毒基因Ⅰ型和基因Ⅱ型血清具有一定的交叉反应。对105份临床健康鹅群血清样品进行检测,阳性率高达77.33%。该研究提供了一种敏感高效的快速检测水禽呼肠孤病毒中和抗体的方法,为鹅群临床血清大规模检测提供方法,为研发商品化的ELISA检测试剂盒提供基础。 展开更多

关键词 水禽呼肠孤病毒 σC蛋白 间接elisa方法 血清学调查

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基于山羊痘病毒P32蛋白ELISA检测方法的建立 被引量：8

9

作者 吴锦艳 田宏 +3 位作者 陈妍 尚佑军 宋江伟 刘湘涛 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1906-1911,共6页

P32蛋白是羊痘病毒株中特异性很强的免疫原性结构蛋白,本研究利用原核表达系统对山羊痘病毒P32基因进行表达,并应用该蛋白建立了检测山羊痘病毒血清抗体检测方法。将P32基因克隆至pGEX-6P-1表达载体,经抗性筛选,测序鉴定获得重组阳性克... P32蛋白是羊痘病毒株中特异性很强的免疫原性结构蛋白,本研究利用原核表达系统对山羊痘病毒P32基因进行表达,并应用该蛋白建立了检测山羊痘病毒血清抗体检测方法。将P32基因克隆至pGEX-6P-1表达载体,经抗性筛选,测序鉴定获得重组阳性克隆,成功构建了羊痘病毒重组pGEX-P32表达载体。经IPTG诱导表达,可稳定、高效地表达P32融合蛋白。融合蛋白纯化后SDS-PAGE结果表明,以终浓度为1mmol/L的IPTG进行诱导,8h后表达量最高,表达蛋白为融合蛋白,相对分子质量约56 000,表达产量约占菌体总蛋白的28%。Western-blotting检测表明,表达的融合蛋白能与羊痘阳性血清发生特异性反应,说明表达获得的产物具有良好的反应原性。用表达的融合蛋白建立了检测羊痘血清抗体的ELISA方法,经方阵滴定,确定抗原最佳包被质量浓度为每孔0.4mg/L,最佳血清稀释度为1∶20。符合率试验表明ELISA方法和琼脂扩散试验的阳性符合率为83.44%,并且所建立的方法具有很好的特异性、重复性和敏感性,这为应用该融合蛋白制备山羊痘病毒免疫血清学诊断试剂和疫苗研究奠定了基础。 展开更多

关键词 山羊痘病毒 P32基因 表达 间接elisa方法

原文传递

坦布苏病毒NS1蛋白的表达及ELISA检测方法的建立 被引量：7

10

作者 提金凤 李志杰 +3 位作者 李秀丽 张敏敏 张媛媛 刁有祥 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期970-977,共8页

为了建立坦布苏病毒(TMUV)感染鸭群的抗体检测方法,以TMUV NS1的原核表达蛋白质作为包被抗原,建立了间接ELISA方法,并对该方法进行了检测条件的优化。将TMUV NS1全基因序列克隆至pET-28a(+),利用BL21(DE3)表达NS1蛋白,纯化后其质量浓度... 为了建立坦布苏病毒(TMUV)感染鸭群的抗体检测方法,以TMUV NS1的原核表达蛋白质作为包被抗原,建立了间接ELISA方法,并对该方法进行了检测条件的优化。将TMUV NS1全基因序列克隆至pET-28a(+),利用BL21(DE3)表达NS1蛋白,纯化后其质量浓度为4.16μg·μL^(-1)。通过方阵试验,确定了NS1蛋白的最佳包被质量浓度是100ng·孔-1,检测血清的最佳稀释倍数为40倍。随后对检测条件进行了优化,优化后的结果:抗原的最佳包被条件是4℃作用过夜;酶标二抗的最佳工作条件是稀释5 000倍,37℃作用1h;阴阳血清的临界值为0.278。一系列试验验证了该检测方法具有很强的特异性、敏感性、重复性。对采集自山东各地的80份血清样品进行检测,其检测结果显示,该方法与经典的鸡胚中和试验检测结果的符合率为93.5%以上,且比传统的中和试验更敏感。对TMUV感染鸭群的血清进行检测,描述了TMUV感染后鸭群抗体水平的消长规律,为该病的防治提供重要的理论依据。以NS1蛋白为包被抗原的间接ELISA方法的建立为临床上TMUV的感染提供了一种新的抗体检测方法,尤其是在TMUV早期感染的检测方面有着更为广泛的应用前景。 展开更多

关键词 鸭坦布苏病毒 NS1蛋白 间接elisa 检测方法

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鱼肠道弧菌间接ELISA快速检测法的建立 被引量：7

11

作者 吴晓春 邓灯 +2 位作者 程顺峰 刘慧 姜令绪 《水产科学》 CAS 北大核心 2013年第5期284-288,共5页

为准确、快速诊断鱼肠道弧菌感染所致的海水鱼类全身性败血症,以鱼肠道弧菌为抗原,制备抗鱼肠道弧菌多克隆抗体,建立了鱼肠道弧菌间接酶联免疫吸附检测方法。该方法最佳反应条件为:抗原包被密度为107 cfu/mL,免疫血清稀释度为1∶211。... 为准确、快速诊断鱼肠道弧菌感染所致的海水鱼类全身性败血症,以鱼肠道弧菌为抗原,制备抗鱼肠道弧菌多克隆抗体,建立了鱼肠道弧菌间接酶联免疫吸附检测方法。该方法最佳反应条件为:抗原包被密度为107 cfu/mL,免疫血清稀释度为1∶211。病原菌检测灵敏度为每孔105 cfu/mL。抗血清与迟缓爱德华氏菌、杀鲑气单胞菌、恶臭假单胞菌、鱼肠道弧菌、副溶血弧菌、鳗弧菌、溶藻胶弧菌、秦皇岛弧菌8种水产致病菌的交叉反应结果呈阴性。用该法检测人工感染后的牙鲆和健康牙鲆,在发病鱼的肝脏、肾脏、脾脏、腹水等处检测出病原菌而健康鱼则为阴性。该技术能够准确、快速检测出鱼肠道弧菌。 展开更多

关键词 鱼肠道弧菌 间接elisa技术 检测方法

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间接竞争ELISA检测大豆11S球蛋白和7S伴球蛋白 被引量：9

12

作者 彭楠 刘建峰 +1 位作者 梁运祥 葛向阳 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期661-664,共4页

采用酸沉淀、亲和层析(ConA-Sepharose 4B)等手段,成功地分离纯化了大豆11S球蛋白和7S伴球蛋白,SDS-PAGE检测表明2种蛋白纯度分别达到95%和90%。将纯化的11S球蛋白和7S伴球蛋白分别免疫大白兔获得抗血清,并建立起间接竞争ELISA检测大豆... 采用酸沉淀、亲和层析(ConA-Sepharose 4B)等手段,成功地分离纯化了大豆11S球蛋白和7S伴球蛋白,SDS-PAGE检测表明2种蛋白纯度分别达到95%和90%。将纯化的11S球蛋白和7S伴球蛋白分别免疫大白兔获得抗血清,并建立起间接竞争ELISA检测大豆豆粕及其深加工产品中11S和7S抗原蛋白含量的方法。 展开更多

关键词 11S球蛋白 7S伴球蛋白 亲和层析 间接竞争elisa法

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胸腺素α1间接ELISA测定方法的建立及其在转基因蓝藻中的应用 被引量：2

13

作者 朱笃 陈天圣 +3 位作者 李元广 叶勤 章军 周克夫 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第12期1-4,共4页

利用胸腺素α1(Tα1)_小牛血清白蛋白融合蛋白免疫新西兰兔获得的抗体 ,建立了Tα1间接酶联免疫吸附测定法 (ELISA) ,以定量检测转Tα1基因聚球藻7942外源基因表达产物胸腺素α1 ,实验结果表明该方法灵敏度高、专一性强、重复性好 ,可... 利用胸腺素α1(Tα1)_小牛血清白蛋白融合蛋白免疫新西兰兔获得的抗体 ,建立了Tα1间接酶联免疫吸附测定法 (ELISA) ,以定量检测转Tα1基因聚球藻7942外源基因表达产物胸腺素α1 ,实验结果表明该方法灵敏度高、专一性强、重复性好 ,可用于转基因微藻Tα1表达量的定量检测 ,同时表明Tα1基因能在聚球藻7942中稳定表达。 展开更多

关键词 胸腺素Α1 间接elisa 测定方法 转基因蓝藻 应用 酶联免疫测定法 聚球藻7942

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重组小反刍兽疫病毒H蛋白的真核表达与间接ELISA检测方法的建立 被引量：3

14

作者 曹丽萍 卢旺银 +6 位作者 李晓霞 王瑞红 王睿男 史琳 王亚丽 宋晓晖 孙雨 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期1080-1086,共7页

本研究利用昆虫杆状病毒表达系统成功表达了小反刍兽疫病毒(PPRV)重组H蛋白,并以该H蛋白为包被抗原建立了检测PPRV抗体的间接ELISA方法。通过检测已知背景的绵羊血清,评价了间接ELISA的特异性、敏感性和重复性。结果显示,该ELISA对其他... 本研究利用昆虫杆状病毒表达系统成功表达了小反刍兽疫病毒(PPRV)重组H蛋白,并以该H蛋白为包被抗原建立了检测PPRV抗体的间接ELISA方法。通过检测已知背景的绵羊血清,评价了间接ELISA的特异性、敏感性和重复性。结果显示,该ELISA对其他相关的羊类病原无交叉反应,组内与组间变异系数均低于10%。利用建立的I-ELISA法和血清中和试验分别对550份绵羊临床样本进行检测,结果显示,Ⅰ-ELISA法检测的阳性率为76.55%,血清中和试验检测的阳性率为76.73%,敏感性符合率为98.58%;Ⅰ-ELISA法检测的阴性率为23.45%,血清中和试验检测的阴性率为23.27%,特异性符合率为96.09%,两种方法的总符合率为98%。上述结果表明,本研究建立的检测小反刍兽疫病毒血清中和抗体的间接ELISA方法与血清中和试验比较,具有良好的特异性、敏感性和重复性,可开发为临床适应的检测试剂盒。 展开更多

关键词 小反刍兽疫病毒 H蛋白 杆状病毒 真核表达 蛋白纯化 间接elisa

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甘蔗宿根矮化病的I-ELISA快速检测 被引量：10

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作者 李文凤 黄应昆 +5 位作者 卢文洁 杨显华 李俊 赵俊 杨洪昌 罗志明 《中国糖料》 2008年第1期33-34,共2页

利用从澳大利亚引进的RSD标准抗原抗体,研究建立了I-ELISA检测甘蔗宿根矮化病(RSD)的方法。通过对田间采集的样本进行检测,同时以电镜负染检测法印证,检测结果一致,表明I-ELISA能简便、快速、准确、有效地检测出RSD,为甘蔗宿根矮化病的... 利用从澳大利亚引进的RSD标准抗原抗体,研究建立了I-ELISA检测甘蔗宿根矮化病(RSD)的方法。通过对田间采集的样本进行检测,同时以电镜负染检测法印证,检测结果一致,表明I-ELISA能简便、快速、准确、有效地检测出RSD,为甘蔗宿根矮化病的诊断和防治、脱毒种苗的生产、对外甘蔗品种/材料交换检疫检测提供了技术支撑。 展开更多

关键词 甘蔗宿根矮化病 I-elisa 检测

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检测猪肺炎支原体抗体间接ELISA方法的建立 被引量：16

16

作者 刘茂军 靳岷 +2 位作者 杜改梅 邵国青 张映 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2007年第5期437-441,共5页

选用猪肺炎支原体Mhp J株培养物制备抗原,建立检测猪肺炎支原体抗体的间接ELISA(酶联免疫吸附)方法。结果显示,ELISA试验的最佳反应条件为:抗原包被浓度为1.5μg/ml,待检血清的最佳稀释浓度1∶100,2%明胶作封闭液,抗原抗体最佳结合时间... 选用猪肺炎支原体Mhp J株培养物制备抗原,建立检测猪肺炎支原体抗体的间接ELISA(酶联免疫吸附)方法。结果显示,ELISA试验的最佳反应条件为:抗原包被浓度为1.5μg/ml,待检血清的最佳稀释浓度1∶100,2%明胶作封闭液,抗原抗体最佳结合时间为90 min,酶标抗体1∶10 000(体积比)稀释,最佳作用时间为60 min。对136份样品检测结果表明,建立的猪肺炎支原体间接ELISA抗体检测方法与美国IDEXX公司生产的猪肺炎支原体抗体检测试剂盒检测的符合率达到83.8%,假阴性率8.8%,假阳性率1.5%。 展开更多

关键词 猪肺炎支原体 检测方法 间接elisa

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肠出血性大肠杆菌O157∶H7脂多糖抗原的提取鉴定及间接ELISA法的建立 被引量：8

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作者 刘红亮 陈学忠 +6 位作者 李克生 杜惠芬 陈应泰 连晓雯 鲁学萍 袁明 叶文华 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期637-640,644,共5页

目的提取并纯化具有强免疫反应性和高特异性的肠出血性大肠杆菌O157∶H7(E.coliO157∶H7)脂多糖(LPS)抗原,并研究其在E.coliO157∶H7 LPS抗体检测中的应用。方法应用热酚水法提取E.coliO157∶H7 LPS抗原,同时收集水相和酚相LPS,并对其... 目的提取并纯化具有强免疫反应性和高特异性的肠出血性大肠杆菌O157∶H7(E.coliO157∶H7)脂多糖(LPS)抗原,并研究其在E.coliO157∶H7 LPS抗体检测中的应用。方法应用热酚水法提取E.coliO157∶H7 LPS抗原,同时收集水相和酚相LPS,并对其产率、纯度及免疫反应性进行分析比较,用酸解法制备O-特异性多糖(O-SP),并以不同的LPS为包被抗原,建立间接ELISA法检测E.coliO157∶H7 LPS抗体。结果大分子量的E.coliO157∶H7 LPS优先溶于酚相,而水相中含有更多的小分子量LPS,与水相LPS相比酚相LPS具有更高的免疫反应性和纯度,酚相LPS经酸解去脂得到的O-SP具有更高的反应特异性。结论酚相LPS和O-SP都可用于E.coliO157∶H7 LPS抗体的ELISA检测,O-SP具有更高的特异性,是检测E.coliO157∶H7 LPS特异性抗体的理想材料。 展开更多

关键词 大肠杆菌O157∶H7 热酚水法 脂多糖 O-SP 间接elisa

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环丙沙星完全抗原的制备和间接竞争ELISA检测方法的初步研究

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作者 赵银丽 刘庆堂 +2 位作者 藤蔓 柴书军 张改平 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第2期11-13,共3页

为了研究检测环丙沙星（CIP）残留的间接竞争ELISA方法，试验采用1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙基）碳化二亚胺盐酸盐（EDC）一步法将环丙沙星分别与牛血清白蛋白（BSA）和鸡卵清白蛋白（OVA）偶联制备免疫原（CIP—BSA）和包被原（CIP—OV... 为了研究检测环丙沙星（CIP）残留的间接竞争ELISA方法，试验采用1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙基）碳化二亚胺盐酸盐（EDC）一步法将环丙沙星分别与牛血清白蛋白（BSA）和鸡卵清白蛋白（OVA）偶联制备免疫原（CIP—BSA）和包被原（CIP—OVA），用免疫原免疫Balb／c小鼠制备血清多克隆抗体（CIPpAb），并对其血清抗体效价、灵敏度、半数抑制浓度（IC50）、特异性等进行测定。结果表明：血清抗体的效价为1：25600，间接竞争ELISA的线性检测范围为O．54～500ng／mL，灵敏度为0．54ng／mL，IC50为8．13ng／mL，与恩诺沙星的交叉反应率（CR）为100％，与达氟沙星的交叉反应率为50％，与其他化合物的交叉反应率均小于0．8％。说明这种研究方法可以同时检测食品中的环丙沙星和恩诺沙星残留。 展开更多

关键词 环丙沙星 完全抗原 间接竞争elisa 检测方法

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不同包被抗原检测PRRS抗体间接ELISA方法的建立 被引量：6

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作者 马思续 崔春晓 +6 位作者 张留君 冯延 魏凤灵 许瑞勤 杨国宇 夏平安 张改平 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期1082-1087,共6页

为了建立更加敏感、特异、准确、有效地检测抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）抗体的间接ELISA方法，本研究利用RT—PCR方法分别扩增出PRRSVVR2332毒株的GP4和N蛋白完整编码基因，将2种基因片段分别和共同插入原核表达载体pET-32a中，... 为了建立更加敏感、特异、准确、有效地检测抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）抗体的间接ELISA方法，本研究利用RT—PCR方法分别扩增出PRRSVVR2332毒株的GP4和N蛋白完整编码基因，将2种基因片段分别和共同插入原核表达载体pET-32a中，成功构建重组质粒pET32a—GP4、pET-32a-N和pET-32a—GP4-N。将3种重组质粒分别转化至大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达出GP4蛋白、N蛋白和GP4N融合蛋白，并对表达出的蛋白进行纯化。将3种已纯化的重组蛋白分别作为间接ELISA的包被抗原，通过不断优化反应条件，最终建立了检测抗PRRSV抗体的间接ELISA方法。分别使用该3种方法检测从河南省多个地区收集的200份猪血清样品中的抗PRRSV抗体，并与商品化试剂盒进行比较，结果显示，GP4蛋白做抗原时检测阳性符合率为82．7％，N蛋白做抗原时检测阳性符合率为87．2％，GP4-N融合蛋白做抗原时检测阳性符合率为85．5％；因此，N蛋白是间接ELISA方法检测抗PRRSV抗体的优势包被抗原。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) GP4蛋白 N蛋白 原核表达 间接elisa方法

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牛乳中庆大霉素间接竞争酶联免疫吸附测定法的建立

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作者 刘颖沙 雷红梅 +1 位作者 邢维维 吕紫怡 《热带农业科学》 2025年第5期98-103,共6页

庆大霉素作为一种氨基糖苷类抗生素,常被用于禽畜疾病防治,但过量使用会导致其在牛乳中残留,威胁人体健康。文章旨在优化庆大霉素间接竞争酶联免疫吸附测定法(ELISA),建立适用于生鲜乳现场检测的最佳反应体系。通过方阵滴定法确定包被... 庆大霉素作为一种氨基糖苷类抗生素,常被用于禽畜疾病防治,但过量使用会导致其在牛乳中残留,威胁人体健康。文章旨在优化庆大霉素间接竞争酶联免疫吸附测定法(ELISA),建立适用于生鲜乳现场检测的最佳反应体系。通过方阵滴定法确定包被原和单抗最佳稀释浓度,优化包被条件、包被液、一抗孵育条件、二抗稀释度等多种反应条件,并以生鲜乳为样品进行添加回收试验、准确度和特异性研究。结果显示,最佳包被原稀释倍数为1∶40000,最佳单抗稀释倍数为1∶10000;最佳反应条件下,线性检测范围为0~5 ng/mL,生鲜乳中庆大霉素检测限为15μg/L,加标回收率在72.3%~96.5%,与其他抗生素无交叉反应,检测结果与高效液相色谱法符合率良好。本研究建立的庆大霉素间接竞争ELISA方法灵敏度高、特异性好、准确度高,为生鲜乳中庆大霉素的快速检测提供了有效手段,后续将进一步扩大样品量探究试剂盒精确度,以提升其应用价值。 展开更多

关键词 庆大霉素 间接竞争elisa法 生鲜乳 快速检测

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