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麻鸭钙非依赖性磷脂酶A2ε(iPLA2ε)的克隆和表达纯化
1
作者 张玉梅 李鹏鹏 +2 位作者 王晶晶 王道营 徐为民 《江苏农业科学》 2018年第17期170-175,共6页
肉品风味与肌内磷脂的水解密切相关,磷脂酶A2对肌内磷脂的水解起主导作用,其中钙非依赖性磷脂酶A2ε(i PLA2ε)是重要的一种。采用逆转录PCR技术,从麻鸭肌肉中克隆到i PLA2ε的编码基因。该基因开放阅读框长1 425 bp,编码474个氨基酸,... 肉品风味与肌内磷脂的水解密切相关,磷脂酶A2对肌内磷脂的水解起主导作用,其中钙非依赖性磷脂酶A2ε(i PLA2ε)是重要的一种。采用逆转录PCR技术,从麻鸭肌肉中克隆到i PLA2ε的编码基因。该基因开放阅读框长1 425 bp,编码474个氨基酸,分子量约为54 ku,理论等电点为7.86。生物信息学分析表明,i PLA2ε蛋白含有2个明显的跨膜区,为疏水性膜蛋白;i PLA2ε的氨基酸序列包含1个Patatin样磷脂酶结构域,该结构域中含有保守的丝氨酸-天冬氨酸催化水解二元体。采用大肠杆菌p Cold1表达系统构建i PLA2ε基因的重组表达质粒,并在i PLA2ε基因的5'端连接大肠杆菌mal E基因,该基因编码的麦芽糖结合蛋白能提高在原核中过量表达的真核融合蛋白的溶解性,最终在大肠杆菌中实现了i PLA2ε的可溶性表达。结果显示,利用蛋白C端的组氨酸标签亲和纯化法及凝胶过滤层析法获得了i PLA2ε的纯化蛋白,表明该研究为进一步研究肉品中i PLA2ε的功能奠定了工作基础。 展开更多
关键词 麻鸭 ipla2ε 克隆 原核表达 纯化
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iPLA2在人胰岛β细胞的表达和对胰岛素分泌功能的影响
2
作者 王瑞涛 宋科瑛 +4 位作者 施杰毅 卢列盛 杨静 王庆萍 李克 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第20期1426-1429,共4页
目的探讨Ca^2＋-非依赖性磷酸脂酶A2（iPLA2）在人胰岛的表达及在胰岛素分泌功能中的作用。方法正常人胰腺组织切片免疫组织化学染色及人胰岛Western印迹方法检测，观察iPLA2在人胰岛中的表达情况；随机分组对照研究iPLA2选择性抑制剂... 目的探讨Ca^2＋-非依赖性磷酸脂酶A2（iPLA2）在人胰岛的表达及在胰岛素分泌功能中的作用。方法正常人胰腺组织切片免疫组织化学染色及人胰岛Western印迹方法检测，观察iPLA2在人胰岛中的表达情况；随机分组对照研究iPLA2选择性抑制剂溴烯醇内酯（BEL）对离体人胰岛的葡萄糖刺激引起胰岛素分泌反应的影响。结果在人胰岛iPLA2高表达，与抗胰岛素染色分布一致，而外分泌腺很少表达；与对照组相比，BEL处理组胰岛素分泌反应明显减弱[（0．8285±0．0803）ng·胰岛^-1·h^-1，P〈0．01]，BEL通过抑制iPLA2活性抑制了葡萄糖刺激引起的离体人胰岛胰岛素分泌。结论iPLA2在人胰岛β细胞高表达并在葡萄糖刺激胰岛β细胞胰岛素分泌过程起到重要的作用。 展开更多
关键词 胰岛 磷脂酶A类 溴烯醇内酯
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胡蜂蜇伤患者早期血清钙非依赖磷脂酶 A2水平的变化及其临床研究 被引量：5
3
作者 杨敬宁 肖敏 +3 位作者 杨贤义 孙钰文 陈立东 孙毓徽 《中国急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1015-1018,共4页
目的：探讨秦巴山区胡蜂蜇伤患者血清钙非依赖磷脂酶A2（iPLA2）水平的变化及其临床意义。方法将34例来我院就诊的胡蜂蜇伤患者，依据实验室检查分为非溶血组、溶血组，采集血清备用；另以10例健康体检者血清作为正常对照组。依据实验... 目的：探讨秦巴山区胡蜂蜇伤患者血清钙非依赖磷脂酶A2（iPLA2）水平的变化及其临床意义。方法将34例来我院就诊的胡蜂蜇伤患者，依据实验室检查分为非溶血组、溶血组，采集血清备用；另以10例健康体检者血清作为正常对照组。依据实验室检查和临床指征，比较非溶血组、溶血组患者多器官功能障碍综合征（MODS）的发生情况。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清 iPLA2、前列腺素 E2（PGE2）和血栓素 A2（TXA2）水平，各组之间比较并进行统计学分析。结果溶血组患者发生MODS比例明显高于非溶血组（16/19 vs.5/15，P＜0.01）。胡蜂蜇伤患者血清TXA2水平均明显高于正常对照组（P＜0.01）；溶血组TXA2水平高于胡蜂蜇伤非溶血组患者，但差异无统计学意义（P＞0.05）。溶血组患者血清 PGE2水平明显高于非溶血组患者（P＜0.01）。溶血组患者血清iPLA2水平明显高于胡蜂蜇伤非溶血组和正常对照组（P＜0.01）。胡蜂蜇伤患者iPLA2水平与PGE2水平呈正相关（r＝0.867，P＝0.000），也与TXA2水平呈正相关（r＝0.543，P＝0.004）。结论胡蜂蜇伤患者发生溶血是引起MODS重要因素之一。胡蜂蜇伤溶血患者血清iPLA2明显升高，它可能参与胡蜂蜇伤重症患者MODS的发生、发展，动态监测iPLA2水平的变化，可以评估患者病情、指导治疗及帮助判断患者的预后。 展开更多
关键词 胡蜂 蜇伤 钙非依赖磷脂酶 A2(ipla2) 多器官功能障碍综合征(MODS) 溶血
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单纯性胰腺创伤后大鼠胰腺磷脂酶A2活性及其亚型表达特点 被引量：1
4
作者 陈光宇 戴睿武 +5 位作者 汤礼军 田伏洲 文艺 罗皓 邓超 曹均强 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期776-781,共6页
目的构建大鼠单纯性胰腺创伤模型并观察大鼠血清与胰腺组织中磷脂酶A2(PLA2)活性及其亚型表达特点。方法将120只Wistar大鼠按1:2随机分为对照组及撞击组,并分别分为6h、24h、72h、7d 4个亚组,对照组每个时间点10只,撞击组每个时间点20... 目的构建大鼠单纯性胰腺创伤模型并观察大鼠血清与胰腺组织中磷脂酶A2(PLA2)活性及其亚型表达特点。方法将120只Wistar大鼠按1:2随机分为对照组及撞击组,并分别分为6h、24h、72h、7d 4个亚组,对照组每个时间点10只,撞击组每个时间点20只。各撞击组采用BIM-Ⅲ生物撞击机构建胰腺创伤大鼠模型;对照组仅行开腹手术,翻动胰腺数次后关腹。检测各组大鼠血清与胰腺组织PLA2活性及PLA2各亚型在胰腺组织中的表达与分布特点。结果撞击组大鼠血清与胰腺组织中PLA2活性在创伤后6h开始升高,血清PLA2于72h达高峰,胰腺组织PLA2于24h达高峰,7d时血清与胰腺组织PLA2活性仍高于对照组(P<0.05)。胰腺组织中分泌型磷脂酶A2(sPLA2)在RNA水平及蛋白水平表达均高于胞质型磷脂酶A2(cPLA2)与钙非依赖型磷脂酶A2(iPLA2)。结论胰腺创伤后,血清与胰腺组织PLA2活性均显著增高,PLA2各亚型中,sPLA2在胰腺表达增强最为显著。胰腺创伤后6h^7d均可检出血PLA2活性,有助于胰腺创伤的辅助诊断。 展开更多
关键词 胰腺创伤 动物模型 SPLA2 CPLA2 ipla2
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