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人CD40L真核表达体系的建立 被引量：3
1
作者 田坤 钱桂生 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期963-966,共4页
目的构建人CD40L真核表达体系并鉴定其在转染细胞中的表达。方法以DNA重组技术构建CD40L的真核表达载体pcDNA3.1(+)-CD40L,脂质体法转染于人小细胞肺癌细胞株h446,流式细胞技术鉴定其在转染细胞中的表达。结果双酶切及DNA测序证明,CD40L... 目的构建人CD40L真核表达体系并鉴定其在转染细胞中的表达。方法以DNA重组技术构建CD40L的真核表达载体pcDNA3.1(+)-CD40L,脂质体法转染于人小细胞肺癌细胞株h446,流式细胞技术鉴定其在转染细胞中的表达。结果双酶切及DNA测序证明,CD40L DNA插入表达载体pcDNA3.1(+)序列及方向正确,转染肺小细胞肺癌细胞株h446后,经流式细胞仪鉴定转染细胞中存在CD40L表达。结论成功地建立人CD40L表达体系,为构建以人CD40L为组件的抗肿瘤疫苗的临床研究奠定基础。 展开更多
关键词 人cd40l 真核表达载体 肿小细胞肺癌细胞
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共表达IκBα-IRES2-CD40L胞外区双基因的腺病毒载体构建及鉴定 被引量：1
2
作者 丁小明 牛晓丽 +1 位作者 薛武军 李杨 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期416-419,共4页
目的:构建含有分泌型人CD40L胞外区(shCD40L)和IκB的双基因共表达的腺病毒载体。方法:分别扩增出目的基因片段shCD40L、IκB和IRES2,将目的基因进行连接,得到IκB-IRES2和shCD40L两个基因片段,将其分别导入pGEMT-easy载体进行亚克隆扩... 目的:构建含有分泌型人CD40L胞外区(shCD40L)和IκB的双基因共表达的腺病毒载体。方法:分别扩增出目的基因片段shCD40L、IκB和IRES2,将目的基因进行连接,得到IκB-IRES2和shCD40L两个基因片段,将其分别导入pGEMT-easy载体进行亚克隆扩增,测序正确后,再将连接成功地两个目的基因片段与分别与载体pshuttle-CMV连接获得穿梭质pshuttle-CMV-shCD40L和pshuttle-cmv-IκB-IRES2,将穿梭质粒在DH5α感受态细胞中扩增。再与AdEasy-1-BJ5183菌同源重组,得到含有两个目的基因的腺病毒骨架,脂质体法转染293细胞,包装成具有感染能力的共表达IκB-IRES2-shCD40L腺病毒颗粒。PCR法对腺病毒的上清液中的表达差异进行鉴定,检测病毒滴度,并用其感染细胞PK15和293细胞以检验其安全性。结果:所构建的IκB-IRES2-shCD40L基因的重组腺病毒,经酶切和PCR鉴定正确,原代腺病毒的滴度达到6.561×1012pfu/L,PCR法从提取的病毒上清液中分别扩增出了是shCD40L(600bp)和IKBa(700bp)的特异性片段,感染了腺病毒后的PK15细胞形态未见明显异常,但293细胞出现了明显的气球样变。结论:成功构建了共表达IκBα-IRES2-shCD40L双基因的腺病毒载体。 展开更多
关键词 分泌型人cd40l胞外区 IΚBΑ 重组腺病毒 免疫耐受
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脱氢表雄酮对人脐静脉内皮细胞CD40/CD40L表达的影响 被引量：1
3
作者 夏尊恩 李艳 +1 位作者 汪明 潘小平 《微循环学杂志》 2008年第1期39-41,44,共4页
目的:探讨脱氢表雄酮(DHEA)对干扰素-γ(I NF-γ)刺激下的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)CD40/CD40L表达的影响。方法:原代培养人脐静脉内皮细胞,给予I NF-γ刺激和不同浓度DHEA干预。采用流式细胞术检测CD40/CD40L在细胞表面的表达,通过反转... 目的:探讨脱氢表雄酮(DHEA)对干扰素-γ(I NF-γ)刺激下的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)CD40/CD40L表达的影响。方法:原代培养人脐静脉内皮细胞,给予I NF-γ刺激和不同浓度DHEA干预。采用流式细胞术检测CD40/CD40L在细胞表面的表达,通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测CD40/CD40L mRNA的表达。结果:I NF-γ刺激HUVECs表达CD40/CD40L,DHEA下调I NF-γ诱导的HUVECs表面CD40/CD40L的表达,同时对I NF-γ刺激下的CD40/CD40L mRNA的表达有抑制作用,并且呈剂量依赖性。结论:DHEA能减轻I NF-γ刺激下的人脐静脉内皮细胞CD40/CD40L的表达。 展开更多
关键词 cd40l表达 脱氢表雄酮 人脐静脉内皮细胞 雄激素水平 流行病学调查 动脉粥样硬化 脂质代谢异常 独立危险因子
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hCGβ-TT-IRES-CD40L真核表达载体的构建
4
作者 卢明 王其龙 +1 位作者 刘静 刘胜武 《武汉大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2010年第2期259-262,280,共5页
目的:构建含有分子佐剂CD40L的真核表达质粒hCGβ-TT,以提高hCGβ的免疫原性。方法:用分段PCR的方法构建了hCGβ-TT,然后插入双元真核表达质粒IRES的A位点,将CD40L插入pIRES的B位点构建hCGβ-TT-IRES-CD40L。结果:经测序所克隆的基因hCG... 目的:构建含有分子佐剂CD40L的真核表达质粒hCGβ-TT,以提高hCGβ的免疫原性。方法:用分段PCR的方法构建了hCGβ-TT,然后插入双元真核表达质粒IRES的A位点,将CD40L插入pIRES的B位点构建hCGβ-TT-IRES-CD40L。结果:经测序所克隆的基因hCGβ-TT和CD40L序列正确。结论:利用分子佐剂CD40L与hCGβ-TT的连接,构建了hCGβ-TT-IRES-CD40L真核细胞表达质粒,为检测hCGβDNA免疫避孕疫苗的免疫原性及抗生育作用奠定了基础。 展开更多
关键词 人绒毛膜促性腺激素β cd40l 基因疫苗 真核表达载体pIRES
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腺病毒介导的人CD40配体基因抑制裸鼠卵巢癌生长的实验研究
5
作者 吴红兵 田聆 +3 位作者 王虎 文艳君 魏于全 郑广宁 《现代预防医学》 CAS 北大核心 2008年第9期1736-1737,1740,共3页
[目的]探讨重组腺病毒人CD40配体基因(Ad-hCD40L)对卵巢癌的治疗作用。[方法]建立卵巢癌裸鼠动物模型,检测腺病毒介导的人CD40配体基因对肿瘤生长的抑制作用。[结果]瘤内注射Ad-hCD40L明显抑制裸鼠卵巢癌生长,Tunel法检测和HE染色肿瘤... [目的]探讨重组腺病毒人CD40配体基因(Ad-hCD40L)对卵巢癌的治疗作用。[方法]建立卵巢癌裸鼠动物模型,检测腺病毒介导的人CD40配体基因对肿瘤生长的抑制作用。[结果]瘤内注射Ad-hCD40L明显抑制裸鼠卵巢癌生长,Tunel法检测和HE染色肿瘤组织石腊切片观察调亡细胞明显增多,并可见大量肿瘤细胞坏死。[结论]腺病毒介导的人CD40配体基因抑制裸鼠肿瘤生长,增强诱导肿瘤细胞调亡,为卵巢癌的基因治疗提供了新的途径。 展开更多
关键词 人CD40配体 重组腺病毒载钵 裸鼠卵巢癌 基因治疗
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人脐静脉内皮细胞CD40L、MMP-8的分泌及其相互关系和药物干预影响
6
作者 刘群威 周胜华 +1 位作者 沈向前 海志杰 《临床心血管病杂志》 CSCD 北大核心 2011年第11期870-874,共5页
目的:探讨人脐静脉内皮(HUVE)细胞分化抗原40L(CD40L)、基质金属蛋白酶-8(MMP-8)的分泌及其相互关系和辛伐他汀、厄贝沙坦对其干预影响。方法:分组培养HUVE细胞株ECV-304,加入不同浓度的血管紧张素Ⅱ(AngⅡ),并用不同浓度的厄贝沙坦干预... 目的:探讨人脐静脉内皮(HUVE)细胞分化抗原40L(CD40L)、基质金属蛋白酶-8(MMP-8)的分泌及其相互关系和辛伐他汀、厄贝沙坦对其干预影响。方法:分组培养HUVE细胞株ECV-304,加入不同浓度的血管紧张素Ⅱ(AngⅡ),并用不同浓度的厄贝沙坦干预,ELISA法测定细胞培养上清液CD40L和MMP-8的浓度;分组培养ECV-304细胞,加入不同浓度的人重组CD40L因子(r-CD40L),之后再用不同浓度的抗CD40抗体干预,用ELISA法分别测定细胞培养上清液MMP-8的浓度;另分组培养ECV-304细胞,加入不同浓度的r-CD40L并用不同浓度的辛伐他汀和厄贝沙坦干预,用ELISA法测定细胞培养上清液MMP-8的浓度变化。观察AngⅡ对HUVE细胞CD40L和MMP-8分泌的直接影响及厄贝沙坦的干预作用、CD40和CD40L相互作用对HUVE细胞MMP-8分泌的影响及辛伐他汀和厄贝沙坦的干预作用。结果:体外实验显示,随AngⅡ刺激浓度增加,HUVE细胞CD40L和MMP-8分泌水平增加,且呈浓度和时间依赖性;厄贝沙坦干预后可使AngⅡ刺激作用下降,且呈浓度依赖性;r-CD40L可促进HUVE细胞MMP-8的分泌,且呈浓度和时间依赖性,抗CD40抗体能抑制MMP-8的分泌;辛伐他汀可降低r-CD40L促进HUVE细胞分泌MMP-8的作用,而厄贝沙坦则无显著影响。结论:AngⅡ能明显刺激HUVE细胞CD40L的分泌水平,厄贝沙坦能抑制AngⅡ的上述刺激作用;CD40和CD40L相互作用可促进HUVE细胞MMP-8的分泌增加,辛伐他汀能明显抑制此作用,而厄贝沙坦则无明显抑制作用。 展开更多
关键词 人脐静脉内皮细胞 细胞分化抗原40L 基质金属蛋白酶-8 厄贝沙坦 辛伐他汀
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DFMG对LPC诱导的人脐静脉内皮细胞的CD40/CD40L相互作用及E-选择素的释放的影响
7
作者 杨慧琼 戴哲娟 +2 位作者 张婧 曹建国 符晓华 《晓庄学院学报（医学版）》 2013年第1期1-5,共5页
目的:7-二氟甲氧基-5,4'-二甲氧基金雀异黄素(7-difluoromethoxy-5,4'-dimethoxygenistein,dFMG)对溶血性磷脂酰胆碱(lysophosphatidylcholine,LPC)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVE-12)损伤模型的保护作用,探讨其是否通过抑制CD40/CD... 目的:7-二氟甲氧基-5,4'-二甲氧基金雀异黄素(7-difluoromethoxy-5,4'-dimethoxygenistein,dFMG)对溶血性磷脂酰胆碱(lysophosphatidylcholine,LPC)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVE-12)损伤模型的保护作用,探讨其是否通过抑制CD40/CD40L相互作用E-选择素的释放相关。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVE-12)。Annexin V/PI染色流式细胞术(FCM)分析细胞凋亡率,用流式细胞仪检测CD40/CD40L的表达,酶联免疫吸附法检测E-选择素的释放。结果:LPC(10μmol/L)处理HUVE-12(6h、12h、24h和48h),24h的细胞凋亡率为(30.98%±2,04%)(P<0.05)。DFMG预孵育降低LPC诱导HUVE-12的细胞凋亡率,CD40/CD40L的表达降低及E-选择素的释放减少(P<0.05)。结论:DFMG拮抗LPC诱导HUVE-12细胞凋亡作用与减少CD40的表达及E-选择素的释放有关。 展开更多
关键词 7-二氟甲氧基-5、4’-二甲氧基金雀异黄素 人脐静脉内皮细胞 溶血性磷脂酰胆碱 细胞凋亡 CD40
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DFMG对TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞CD40/CD40L相互作用的影响
8
作者 戴哲娟 张勇 +2 位作者 刘诗炜 张婧 符晓华 《晓庄学院学报（医学版）》 2014年第1期1-5,共5页
目的:观察7-二氟甲氧基-5,4'-二甲氧基金雀异黄素(DFMG)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVE-12)损伤模型的保护作用,探讨其保护作用的发挥是否与抑制CD40/CD40L相互作用相关。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVE-... 目的:观察7-二氟甲氧基-5,4'-二甲氧基金雀异黄素(DFMG)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVE-12)损伤模型的保护作用,探讨其保护作用的发挥是否与抑制CD40/CD40L相互作用相关。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVE-12),20ng/mL TNF-α孵育诱导细胞损伤模型;加入不同浓度的DFMG,台盼蓝拒染法检测细胞活力、AnnexinⅤ-FITC/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡、流式细胞仪检测CD40/CD40L的表达。结果:DFMG呈浓度依赖性的升高TNF-α诱导的HUVEC-12细胞存活率;DFMG呈浓度依赖性的降低TNF-α诱导的HUVEC-12细胞凋亡;DFMG呈浓度依赖性降低CD40/CD40L表达。结论:DFMG保护TNF-α诱导的HUVEC-12细胞损伤,这种保护作用可能是通过抑制CD40/CD40L的表达发挥作用的。 展开更多
关键词 7-二氟甲氧基-5、4’-二甲氧基金雀异黄素 人脐静脉内皮细胞 肿瘤坏死因子-α 炎症反应 CD40
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