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Human ACE2-Functionalized Gold“Virus-Trap”Nanostructures for Accurate Capture of SARS-CoV-2 and Single-Virus SERS Detection 被引量:12
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作者 Yong Yang Yusi Peng +10 位作者 Chenglong Lin Li Long Jingying Hu Jun He Hui Zeng Zhengren Huang Zhi-Yuan Li Masaki Tanemura Jianlin Shi John R.Lombardi Xiaoying Luo 《Nano-Micro Letters》 SCIE EI CAS CSCD 2021年第7期105-117,共13页
The current COVID-19 pandemic urges the extremely sensitive and prompt detection of SARS-CoV-2 virus.Here,we present a Human Angiotensin-converting-enzyme 2(ACE2)-functionalized gold“virus traps”nanostructure as an ... The current COVID-19 pandemic urges the extremely sensitive and prompt detection of SARS-CoV-2 virus.Here,we present a Human Angiotensin-converting-enzyme 2(ACE2)-functionalized gold“virus traps”nanostructure as an extremely sensitive SERS biosensor,to selectively capture and rapidly detect S-protein expressed coronavirus,such as the current SARS-CoV-2 in the contaminated water,down to the single-virus level.Such a SERS sensor features extraordinary 106-fold virus enrichment originating from high-affinity of ACE2 with S protein as well as“virus-traps”composed of oblique gold nanoneedles,and 109-fold enhancement of Raman signals originating from multi-component SERS effects.Furthermore,the identification standard of virus signals is established by machine-learning and identification techniques,resulting in an especially low detection limit of 80 copies mL^(−1) for the simulated contaminated water by SARS-CoV-2 virus with complex circumstance as short as 5 min,which is of great significance for achieving real-time monitoring and early warning of coronavirus.Moreover,here-developed method can be used to establish the identification standard for future unknown coronavirus,and immediately enable extremely sensitive and rapid detection of novel virus. 展开更多
关键词 SERS SARS-CoV-2 human ace2 “Virus-trap”nanostructure Single-virus detection
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Characterization of a pangolin SARS-CoV-2-related virus isolate that uses the human ACE2 receptor
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作者 Luo-Yuan Xia Xue-Feng Wang +26 位作者 Xiao-Ming Cui Yi-Ming Zhang Zhen-Fei Wang En-Tao Li Chang-Fa Fan Ke Song Yuan-Guo Li Run-Ze Ye Fang-Xu Li Dai-Yun Zhu Jie Zhang Zhuang-Zhuang Shi Ming-Zhu Zhang Liang-Jing Li Shi-Jing Shen Song Jin Ya-Wei Zhang Wei-Guang Fu Lin Zhao Wen-Hao Wang Tie-Cheng Wang You-Chun Wang Jia-Fu Jiang Yan-Ling Hu Na Jia Yu-Wei Gao Wu-Chun Cao 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS CSCD 2024年第7期1502-1513,共12页
Various SARS-CoV-2-related coronaviruses have been increasingly identified in pangolins,showing a potential threat to humans.Here we report the infectivity and pathogenicity of the SARS-CoV-2-related virus,PCoV-GX/P2V... Various SARS-CoV-2-related coronaviruses have been increasingly identified in pangolins,showing a potential threat to humans.Here we report the infectivity and pathogenicity of the SARS-CoV-2-related virus,PCoV-GX/P2V,which was isolated from a Malayan pangolin(Manis javanica).PCoV-GX/P2V could grow in human hepatoma,colorectal adenocarcinoma cells,and human primary nasal epithelial cells.It replicated more efficiently in cells expressing human angiotensin-converting enzyme 2(hACE2)as SARS-CoV-2 did.After intranasal inoculation to the hACE2-transgenic mice,PCoV-GX/P2V not only replicated in nasal turbinate and lungs,but also caused interstitial pneumonia,characterized by infiltration of mixed inflammatory cells and multifocal alveolar hemorrhage.Existing population immunity established by SARS-CoV-2 infection and vaccination may not protect people from PCoV-GX/P2V infection.These findings further verify the hACE2 utility of PCoV-GX/P2V by in vivo experiments using authentic viruses and highlight the importance for intensive surveillance to prevent possible cross-species transmission. 展开更多
关键词 PANGOLIN SARS-CoV-2-related virus infectivity pathogenicity human cell lines human ace2 receptor hace2-transgenic mice
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醛固酮通过调节ACE2—Ang(1-7)—Mas受体轴诱导内皮细胞凋亡的研究 被引量:1
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作者 张霞 潘瑜 金惠敏 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期6-11,共6页
目的探讨醛固酮对内皮细胞ACE2-Ang(1-7)-Mas受体轴的影响及其与凋亡的关系。方法将体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分为对照组(DMEM/F12培养基)、醛固酮组(10、100、1 000 nmol/L醛固酮干预)和醛固酮拮抗组(100 nmol/L醛固酮+1μmo... 目的探讨醛固酮对内皮细胞ACE2-Ang(1-7)-Mas受体轴的影响及其与凋亡的关系。方法将体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分为对照组(DMEM/F12培养基)、醛固酮组(10、100、1 000 nmol/L醛固酮干预)和醛固酮拮抗组(100 nmol/L醛固酮+1μmol/L醛固酮受体拮抗剂共同干预)。采用免疫荧光细胞化学染色法观察细胞ACE2蛋白的表达;Western blotting检测细胞中ACE2和Mas受体的表达;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养上清中AngⅡ和Ang(1-7)蛋白的含量以及凋亡相关蛋白caspase-3的活性;流式细胞术结合FITC-Annexin V/PI荧光染色检测细胞凋亡。结果与对照组比较,醛固酮组细胞ACE2和Mas受体的表达明显下调(P<0.01),并呈浓度依赖性。在100 nmol/L醛固酮组,随着干预时间的延长,细胞ACE2和Mas受体的表达明显下调(P<0.01),呈时间依赖性;而醛固酮拮抗组细胞ACE2和Mas受体的表达显著高于100 nmol/L醛固酮组(P<0.01)。ELISA检测结果显示,随着干预时间的延长,醛固酮组细胞培养上清中AngⅡ浓度和caspase-3活性均显著升高,而Ang(1-7)浓度降低。流式细胞术检测结果显示:醛固酮组细胞凋亡率显著高于对照组,醛固酮拮抗组细胞凋亡率显著低于醛固酮组(P<0.05)。结论醛固酮具有调节ACE2-Ang(1-7)-Mas受体轴的作用,并可能通过此轴诱导内皮细胞凋亡。 展开更多
关键词 醛固酮 人脐静脉内皮细胞 ace2-Ang(1-7)-Mas受体轴
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稳定表达hACE2的293T细胞系的建立及功能分析 被引量:2
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作者 黄楠 郎巧利 +2 位作者 李莉萍 杨希 刘春麟 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2022年第2期306-313,共8页
该研究旨在利用hACE2真核表达载体,通过电转法获得具有新型冠状病毒易感性的稳定表达hACE2的293T细胞株。将线性表达质粒pCMV-hACE2电转至293T细胞,经潮霉素B筛选后,利用间接免疫荧光(IFA)、RT-PCR、Western blot、流式分析法鉴定hACE2... 该研究旨在利用hACE2真核表达载体,通过电转法获得具有新型冠状病毒易感性的稳定表达hACE2的293T细胞株。将线性表达质粒pCMV-hACE2电转至293T细胞,经潮霉素B筛选后,利用间接免疫荧光(IFA)、RT-PCR、Western blot、流式分析法鉴定hACE2的表达,S-RBD蛋白和SARS-CoV-2假病毒分析细胞功能活性。利用250 μg/mL潮霉素B筛选获得了稳定高表达hACE2的细胞系293T-hACE2-D4。在该细胞中,RT-PCR检测到了大量hACE2基因的mRNA,Western blot、间接免疫荧光和流式分析法检测细胞表面hACE2蛋白表达情况(阳性细胞率为86.86%)。功能分析中,293T-hACE2-27-D4细胞不仅能够与SARS-Cov-2 S-RBD蛋白相结合(结合率达84.26%),并且能够成功感染新型冠状病毒假病毒。该研究构建的稳定表达hACE2的293T细胞不仅能与S-RBD蛋白结合,还对新冠假病毒具有易感性,是探究病毒感染机制的有利工具。 展开更多
关键词 hace2 稳定转染 293T细胞 新型冠状病毒
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人血管紧张素转化酶2(ACE2)BAC转基因小鼠模型的制备及鉴定
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作者 朱孟敏 刘玲玲 +5 位作者 牛博文 彭秀华 陈丽香 秦波音 杨华 李峰 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期230-238,共9页
目的期望获得含有全长hACE2基因序列的hACE2人源化小鼠模型,为心血管疾病、新冠肺炎发病机制研究、药物与疫苗研发提供重要工具。方法将纯化含有hACE2完整编码序列的BAC质粒,利用小鼠受精卵显微注射和输卵管移植技术获得多个首建鼠,分... 目的期望获得含有全长hACE2基因序列的hACE2人源化小鼠模型,为心血管疾病、新冠肺炎发病机制研究、药物与疫苗研发提供重要工具。方法将纯化含有hACE2完整编码序列的BAC质粒,利用小鼠受精卵显微注射和输卵管移植技术获得多个首建鼠,分别育种建系,通过杂交育种获得稳定遗传F2代小鼠品系,进一步对F2代小鼠hACE2基因整合、基因拷贝数、相对荧光定量PCR、Western Blot和免疫荧光进行分析。结果育种获得hACE2-6-9、hACE2-14-3、hACE2-15-1和hACE2-15-2共4个小鼠品系。基因整合结果显示,hACE2-6-9、hACE2-15-1和hACE2-15-2小鼠品系含有完整的hACE2基因座位点及较长的基因调控区,hACE2-14-3含有完整的hACE2基因座位点及3’UTR较短的基因调控区。相对荧光定量PCR和Western Blot检测结果显示,hACE2-6-9、hACE2-15-1和hACE2-15-2品系小鼠肠道中hACE2 mRNA和蛋白表达水平较低,而整合较短调控序列的hACE2-14-3小鼠品系则表达水平较高。免疫荧光染色结果显示hACE2-15-1品系小鼠肾小管和肺血管内皮细胞中均有hACE2表达。结论获得了含有全长基因序列的hACE2人源化BAC转基因小鼠,保留完整的hACE2启动子及基因调控区,从而为心血管疾病、新冠肺炎发病机制研究、hACE2基因表达调控机制研究和药物、疫苗的研发提供重要工具。 展开更多
关键词 ace2 人源化小鼠 细菌人工染色体 基因表达
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定心方Ⅳ上调ACE2减轻人脐静脉内皮细胞损伤机制
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作者 蒋晶 刘林凌 +6 位作者 顾毓艳 张雅心 崔小冰 吴雪滢 余文彬 冯莎 周凤华 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期72-77,共6页
目的 研究由黄连、丹参、酸枣仁、灵芝组成的定心方Ⅳ(Dingxin Recipe Ⅳ,DXR Ⅳ)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的作用机制。方法 正常培养HUVECs并随机分为5组,分别予以空白血清及定心方Ⅳ含药血清5%... 目的 研究由黄连、丹参、酸枣仁、灵芝组成的定心方Ⅳ(Dingxin Recipe Ⅳ,DXR Ⅳ)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的作用机制。方法 正常培养HUVECs并随机分为5组,分别予以空白血清及定心方Ⅳ含药血清5%、10%、20%进行预处理4 h,再采用50μg·mL^(-1)ox-LDL诱导细胞损伤。采用CCK-8法观察HUVECs增殖情况;Western Blotting和q PCR法检测血管紧张素转换酶2(ACE2)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)和E选择素(E-selectin)等蛋白和基因的表达;ELISA法检测细胞上清中白细胞介素6(IL-6)水平。采用miR-421 mimics干预细胞,分别检测相关蛋白及基因表达情况。结果 定心方Ⅳ中剂量组可抑制IL-6分泌(P<0.01);同时,定心方Ⅳ可促进血管紧张素(1-7)、ACE2基因表达,抑制E-selectin、VCAM-1、MMP-9、ICAM-1、miR-421基因表达(P<0.05,P<0.01,P<0.001);定心方Ⅳ可上调ACE2蛋白表达(P<0.05,P<0.01),高剂量组可抑制E-selectin、VCAM-1蛋白表达(P<0.05)。与模型组比较,过表达miR-421可降低ACE2蛋白和基因的表达(P<0.001),增加ICAM-1、MMP-9基因表达(P<0.05)。结论 定心方Ⅳ可能通过激活ACE2蛋白,抑制E-selection、VCAM-1和IL-6等炎性因子表达,起到保护内皮细胞的作用。 展开更多
关键词 定心方Ⅳ 人脐静脉内皮细胞(HUVECs) miR-421 ace2
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