采用传统纯培养方法对内蒙古不同地区的12份绵羊奶油样品中的乳酸菌进行分离纯化,运用16S r DNA序列分析方法进行属种鉴定,同时采用实时荧光定量聚合酶链反应(q-PCR)技术对包头地区样品中优势菌群数量进行了定量研究。分离鉴定结果表明...采用传统纯培养方法对内蒙古不同地区的12份绵羊奶油样品中的乳酸菌进行分离纯化,运用16S r DNA序列分析方法进行属种鉴定,同时采用实时荧光定量聚合酶链反应(q-PCR)技术对包头地区样品中优势菌群数量进行了定量研究。分离鉴定结果表明三个地区绵羊发酵奶油中分离鉴定的44株乳酸菌,其中Lactococcus lactis subsp.Lactis为优势菌群。q-PCR定量结果表明3种优势菌属的数量关系为Lac.Lactis.subsp.lactis>L.plantarum>Leu.Mesenteroides。展开更多
本研究建立了检测牛副流感病毒3型的SYBR Green Ⅰ Q-PCR方法。根据Gen Bank发表的BPIV3序列进行对比分析,选取P基因上保守区域设计特异性引物。优化反应体系,建立Q-PCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行验证。结果显示...本研究建立了检测牛副流感病毒3型的SYBR Green Ⅰ Q-PCR方法。根据Gen Bank发表的BPIV3序列进行对比分析,选取P基因上保守区域设计特异性引物。优化反应体系,建立Q-PCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行验证。结果显示,构建的标准曲线在10~4~10~8copies.μL^(-1)内具有较好的线性关系,相关系数达到0.998,斜率为-3.370,Q-PCR扩增效率为98%。特异性试验中,利用该方法对BPIV3a及BPIV3c进行检测为阳性,对牛疱疹病毒I型、牛病毒性腹泻病毒进行检测,结果呈阴性。敏感性试验中,该方法对标准品的最小检出量为1.0×10~3 copies.μL^(-1)。重复性试验中,Ct值变异系数均小于1.0%。表明SYBR Green Ⅰ Q-PCR法能够快速地对病原进行诊断,该方法具有较强的特异性、良好的敏感性及重复性,为实验室诊断及定量分析提供了更快速、稳定、可靠的方法。展开更多
目的建立快速、敏感、特异检测鼠痘病毒的Taq Man MGB探针实时荧光定量PCR方法。方法针对鼠痘病毒血凝素HA基因设计特异性引物和探针,构建含有HA基因的标准质粒进行定量分析,建立Taq Man MGB探针实时荧光定量PCR检测方法,评价其敏感性...目的建立快速、敏感、特异检测鼠痘病毒的Taq Man MGB探针实时荧光定量PCR方法。方法针对鼠痘病毒血凝素HA基因设计特异性引物和探针,构建含有HA基因的标准质粒进行定量分析,建立Taq Man MGB探针实时荧光定量PCR检测方法,评价其敏感性、特异性和稳定性。对临床标本中的鼠痘病毒进行检测。结果研究结果显示,建立的鼠痘病毒Taq Man MGB探针实时荧光定量PCR检测方法特异性为100%,与其他正痘病毒属病毒、非正痘病毒属病毒、细菌、真菌、寄生虫和细胞均无交叉反应。该技术灵敏度高,能精确定量检测鼠痘病毒DAN线性范围达10个数量级(100—109拷贝),最低检测限度为4拷贝。该方法重复性非常好,组内变异系数和组间变异系数均小于3%。测试中相关系数、斜率和效率测量线性没有显著变化,表明该方法准确度高、精密度好。将其成功应用于临床标本中鼠痘病毒载量的定量检测,用普通PCR和测序进行确证。整个检测过程可在2 h内完成,可以用作快速诊断方法。结论本研究新建立的鼠痘病毒Taq Man MGB探针实时荧光定量PCR方法,具有快速简便、特异性强、灵敏度高的特性,适用于动物源性产品中鼠痘病毒检测、食品和药品安全检查、环境监测、流行病毒调查,为临床标本中鼠痘病毒的快速定量检测提供了一种特异有效的评价工具,值得推广应用。展开更多
文摘采用传统纯培养方法对内蒙古不同地区的12份绵羊奶油样品中的乳酸菌进行分离纯化,运用16S r DNA序列分析方法进行属种鉴定,同时采用实时荧光定量聚合酶链反应(q-PCR)技术对包头地区样品中优势菌群数量进行了定量研究。分离鉴定结果表明三个地区绵羊发酵奶油中分离鉴定的44株乳酸菌,其中Lactococcus lactis subsp.Lactis为优势菌群。q-PCR定量结果表明3种优势菌属的数量关系为Lac.Lactis.subsp.lactis>L.plantarum>Leu.Mesenteroides。
文摘本研究建立了检测牛副流感病毒3型的SYBR Green Ⅰ Q-PCR方法。根据Gen Bank发表的BPIV3序列进行对比分析,选取P基因上保守区域设计特异性引物。优化反应体系,建立Q-PCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行验证。结果显示,构建的标准曲线在10~4~10~8copies.μL^(-1)内具有较好的线性关系,相关系数达到0.998,斜率为-3.370,Q-PCR扩增效率为98%。特异性试验中,利用该方法对BPIV3a及BPIV3c进行检测为阳性,对牛疱疹病毒I型、牛病毒性腹泻病毒进行检测,结果呈阴性。敏感性试验中,该方法对标准品的最小检出量为1.0×10~3 copies.μL^(-1)。重复性试验中,Ct值变异系数均小于1.0%。表明SYBR Green Ⅰ Q-PCR法能够快速地对病原进行诊断,该方法具有较强的特异性、良好的敏感性及重复性,为实验室诊断及定量分析提供了更快速、稳定、可靠的方法。
文摘目的建立快速、敏感、特异检测鼠痘病毒的Taq Man MGB探针实时荧光定量PCR方法。方法针对鼠痘病毒血凝素HA基因设计特异性引物和探针,构建含有HA基因的标准质粒进行定量分析,建立Taq Man MGB探针实时荧光定量PCR检测方法,评价其敏感性、特异性和稳定性。对临床标本中的鼠痘病毒进行检测。结果研究结果显示,建立的鼠痘病毒Taq Man MGB探针实时荧光定量PCR检测方法特异性为100%,与其他正痘病毒属病毒、非正痘病毒属病毒、细菌、真菌、寄生虫和细胞均无交叉反应。该技术灵敏度高,能精确定量检测鼠痘病毒DAN线性范围达10个数量级(100—109拷贝),最低检测限度为4拷贝。该方法重复性非常好,组内变异系数和组间变异系数均小于3%。测试中相关系数、斜率和效率测量线性没有显著变化,表明该方法准确度高、精密度好。将其成功应用于临床标本中鼠痘病毒载量的定量检测,用普通PCR和测序进行确证。整个检测过程可在2 h内完成,可以用作快速诊断方法。结论本研究新建立的鼠痘病毒Taq Man MGB探针实时荧光定量PCR方法,具有快速简便、特异性强、灵敏度高的特性,适用于动物源性产品中鼠痘病毒检测、食品和药品安全检查、环境监测、流行病毒调查,为临床标本中鼠痘病毒的快速定量检测提供了一种特异有效的评价工具,值得推广应用。
