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融合禽腺病毒4型和8a型Hexon蛋白亚单位疫苗免疫效果的评价
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作者 胡茜 赵超 +5 位作者 岳筠 韩帅博 李应分 张青艳 吴筑君 程振涛 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第10期1341-1349,共9页
为制备能够同时防控禽腺病毒4型(FAdV-4)和8a型(FAdV-8a)的亚单位多价疫苗,表达FAdV-4与FAdV-8a Hexon蛋白片段及其二价融合蛋白制备疫苗,并评价免疫效果。分别利用SDS-PAGE以及Westernblot鉴定重组蛋白的表达与免疫原性;用重组蛋白制... 为制备能够同时防控禽腺病毒4型(FAdV-4)和8a型(FAdV-8a)的亚单位多价疫苗,表达FAdV-4与FAdV-8a Hexon蛋白片段及其二价融合蛋白制备疫苗,并评价免疫效果。分别利用SDS-PAGE以及Westernblot鉴定重组蛋白的表达与免疫原性;用重组蛋白制备疫苗进行动物免疫并分别用FAdV-4与FAdV-8a进行攻毒;应用ELISA检测血清特异性抗体分泌水平及IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-6表达水平,并对实验动物进行剖检病变观察和组织病理学观察。结果可见:重组蛋白以包涵体形式进行表达并可与禽腺病毒阳性血清发生特异性反应;各组亚单位疫苗诱导产生的特异性抗体均极显著高于对照组(P<0.01),各组亚单位疫苗诱导产生的细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-6水平也均极显著高于对照组(P<0.01);攻毒组剖检后可见部分心包积液以及鸡的肝组织存在不同程度的出血点和黄染,而各免疫组鸡肝与对照组相比无明显变化;组织病理学观察可见攻毒组肝细胞中嗜碱性包涵体以及细胞间存在炎性细胞浸润等现象,而各免疫组未观察到明显病变。本研究表明构建的禽腺病毒4型和8a型Hexon二价融合蛋白疫苗能诱导高水平的免疫应答以提升对雏鸡的保护率并改善病毒感染所致的鸡肝组织损伤,为针对禽腺病毒的防控研究提供了依据。 展开更多
关键词 禽腺病毒4型 禽腺病毒8a型 hexon 亚单位疫苗 免疫效果
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周口地区D群禽腺病毒ZK01株Hexon和Fiber基因的克隆及遗传进化分析
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作者 尹坤 卢渊录 +2 位作者 梁路 田开月 黄玉波 《现代畜牧兽医》 2025年第11期1-6,共6页
研究旨在明确周口地区某肉鸡养殖场D群禽腺病毒(FAdV)Hexon和Fiber基因遗传变异情况,对疑似阳性的鸡肝脏样品进行PCR扩增、测序及序列分析。结果显示,克隆的ZK01株Hexon和Fiber基因与D群FAdV FJSW2021毒株亲缘关系较近,编码序列(CDS)大... 研究旨在明确周口地区某肉鸡养殖场D群禽腺病毒(FAdV)Hexon和Fiber基因遗传变异情况,对疑似阳性的鸡肝脏样品进行PCR扩增、测序及序列分析。结果显示,克隆的ZK01株Hexon和Fiber基因与D群FAdV FJSW2021毒株亲缘关系较近,编码序列(CDS)大小分别为2853 bp和1719 bp。ZK01株与FJSW2021毒株核苷酸同源性最高,分别为100.0%和99.9%;但与血清11型参考毒株380株差异性较大,同源性分别仅为97.9%和95.8%,且Hexon基因存在多处无义突变。研究表明,周口地区鸡群中存在D群FAdV流行株,这为该地区FAdV的分子流行病学监测及防控提供了一定参考。 展开更多
关键词 禽腺病毒 血清11型 hexon基因 Fiber基因 遗传进化分析
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鸽源禽腺病毒XY20株Hexon全基因克隆与序列分析 被引量:1
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作者 朱小甫 吴旭锦 +4 位作者 尹宝英 郑红青 彭腾 杨尚彤 李藤 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第17期102-107,119,共7页
为了明确鸽源禽腺病毒主要致病性相关基因的分子特征,试验对Hexon基因分段进行PCR扩增,并在测序后拼接为完整的XY20株Hexon基因,通过DNAStar 7.1软件将其与从GenBank中选择的49株参考毒株的核苷酸和氨基酸进行序列比对,绘制系统进化树,... 为了明确鸽源禽腺病毒主要致病性相关基因的分子特征,试验对Hexon基因分段进行PCR扩增,并在测序后拼接为完整的XY20株Hexon基因,通过DNAStar 7.1软件将其与从GenBank中选择的49株参考毒株的核苷酸和氨基酸进行序列比对,绘制系统进化树,分析氨基酸位点变异情况;通过SOPMA在线软件预测分析Hexon基因编码的Hexon蛋白的二级结构,通过http://www.cbs.dtu.dk/services/NetNGlyc/程序预测Hexon蛋白的N-糖基化位点。结果表明:XY20株Hexon基因序列全长为2814 bp,编码937个氨基酸;XY20株属于C群FAdV-4型,与各群代表毒株Hexon基因的核苷酸相似性在71.7%~100%之间,推导氨基酸序列相似性在76.8%~100%之间,与我国近几年禽腺病毒流行毒株GX-1、HB1510、HLJ 160826等的Hexon基因相似性为100%。与国外C群FAdV-4型毒株相比,XY20株的氨基酸中存在31个变异位点。XY20株Hexon蛋白的二级结构及11个N-糖基化位点与FAdV-4型早期毒株ON1相比没有发生明显变化。说明XY20株与早期FAdV-4型毒株Hexon蛋白抗原性一致,且极有可能源自鸡群FAdV-4型流行毒株。 展开更多
关键词 鸽源 禽腺病毒 hexon基因 序列分析 hexon蛋白
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4株禽腺病毒hexon基因片段序列分析 被引量:1
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作者 刘畅 李磊 +3 位作者 徐慧娟 赵磊 路振香 胡倩倩 《畜牧与饲料科学》 2019年第9期17-22,共6页
[目的]验证购自中国兽医微生物菌种保藏管理中心(China Veterinary Culture Collection Center,CVCC)的4株禽腺病毒(FAdV-1 AV208、FAdV-4 AV211、FAdV-8 AV215、FAdV-11 AV218)的血清型。[方法]采用PCR的方法对4株FAdV hexon基因片段... [目的]验证购自中国兽医微生物菌种保藏管理中心(China Veterinary Culture Collection Center,CVCC)的4株禽腺病毒(FAdV-1 AV208、FAdV-4 AV211、FAdV-8 AV215、FAdV-11 AV218)的血清型。[方法]采用PCR的方法对4株FAdV hexon基因片段进行特异性扩增、克隆与测序,并与GenBank上公布的FAdV各血清型进行亲缘性分析。[结果]hexon基因片段核苷酸及其编码Hexon蛋白氨基酸亲源性分析结果表明,FAdV-1 AV208为禽腺病毒A血清1型;FAdV-4 AV211为禽腺病毒C中的血清4型;FAdV-8 AV215为禽腺病毒E中的血清8b型;FAdV-11 AV218为禽腺病毒C中的血清10型。[结论]FAdV-1 AV208、FAdV-4 AV211的血清型与CVCC标注一致;FAdV-8 AV215为FAdV-8b,相比CVCC该研究进一步细化了其血清型;而FAdV-11 AV218为FAdV-10,与CVCC标注的血清型不一致。该研究为今后正确使用CVCC标准毒株FAdV-8 AV215、FAdV-11 AV218提供了参考。 展开更多
关键词 禽腺病毒 标准毒株 hexon基因 hexon蛋白
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Ⅰ群禽腺病毒12个血清型毒株Hexon蛋白全基因序列测定和酶切位点分析 被引量:20
5
作者 李海英 尹燕博 +3 位作者 徐守振 王建琳 王晓红 王守春 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期33-37,43,共6页
利用3对引物(A、B、C)分别进行Ⅰ群禽腺病毒的12个血清型毒株的Hexon全基因序列PCR扩增,并进行序列测定和PCR-RFLP分析,通过DNAStar软件和MEGA软件进行序列分析并绘制遗传发育进化树。结果显示,Hexon基因全长为2 800左右个核苷酸,编码约... 利用3对引物(A、B、C)分别进行Ⅰ群禽腺病毒的12个血清型毒株的Hexon全基因序列PCR扩增,并进行序列测定和PCR-RFLP分析,通过DNAStar软件和MEGA软件进行序列分析并绘制遗传发育进化树。结果显示,Hexon基因全长为2 800左右个核苷酸,编码约940个氨基酸,不同血清型之间的同源性为75.2%~99.5%,变异范围是0.0%~24.3%。推导的氨基酸同源性为20.7%~98.8%,差异性为0.0%~24.2%。12个血清型之间Hexon全基因序列信息用来评价Ⅰ群禽腺病毒家族的种系发育关系,构建的进化树显示出5个主要的分支。选用限制性内切酶HaeⅡ,利用存在差异的Hexon序列片段D特异性可以有效区分大部分血清型。结果表明,获得了Ⅰ群禽腺病毒12个血清型不同毒株的Hexon全基因序列并进行了分子进化分析,同时结合12个血清型PCR-RFLP分析,为进一步分析鉴别Ⅰ群禽腺病毒不同血清型提供依据。 展开更多
关键词 Ⅰ群禽腺病毒 hexon全基因 序列分析 PCR-RFLP
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鸭2型腺病毒的分离鉴定及hexon基因的序列分析 被引量:11
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作者 陈亮 黄路生 +3 位作者 刘晓文 刘玲 陈芳艳 王林川 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1538-1542,共5页
为了鉴定广东惠州某鸭场疑似鸭肝病患病鸭的病原,通过接种11日龄番鸭胚,从发病鸭群病料中分离出1株未知病毒,经PCR鉴定为鸭2型腺病毒。选取第6代毒株进行血凝性、鸭胚致病性、致细胞病变、动物回归试验以及六邻体(hexon)基因序列分析。... 为了鉴定广东惠州某鸭场疑似鸭肝病患病鸭的病原,通过接种11日龄番鸭胚,从发病鸭群病料中分离出1株未知病毒,经PCR鉴定为鸭2型腺病毒。选取第6代毒株进行血凝性、鸭胚致病性、致细胞病变、动物回归试验以及六邻体(hexon)基因序列分析。结果表明:接种病毒后第36~72小时,鸭胚集中出现死亡,胚体全身弥漫性出血,ELD_(50)为1×10^(6.31)/m L;分离的病毒不凝集鸡、鸭红细胞,在鸭胚成纤维细胞上可致细胞变圆、折光性增强等病变。将0.1 m L病毒液经肌肉接种1日龄泥鸭,主要引起雏鸭肝、脾出血和肿大。分离株hexon基因与GenBank数据库中CH-GD-12-2014株(登录号:KR135164.1)和GR株(登录号:NC_024486.1)的核苷酸同源性分别为100%和76.6%。本试验为深入研究鸭2型腺病毒的致病机制及综合防控提供了重要的基础数据。 展开更多
关键词 鸭2型腺病毒 分离鉴定 hexon基因
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禽腺病毒4型河南株Hexon全基因的克隆及遗传进化分析 被引量:12
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作者 张宇 乔涵 +3 位作者 徐朋丽 杨兴武 韩昊莹 陈红英 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2017年第6期30-36,共7页
【目的】分析禽心包积水-包涵体肝炎综合征的主要病原禽腺病毒4型(FAV-4)在河南省的流行和遗传变异情况。【方法】对2015年8-10月送检的40份疑似FAV-4感染的病料进行PCR阳性检测,同时根据采集地区与宿主的差异性,选取7份FAV-4阳性样品... 【目的】分析禽心包积水-包涵体肝炎综合征的主要病原禽腺病毒4型(FAV-4)在河南省的流行和遗传变异情况。【方法】对2015年8-10月送检的40份疑似FAV-4感染的病料进行PCR阳性检测,同时根据采集地区与宿主的差异性,选取7份FAV-4阳性样品进行了Hexon全基因的扩增、克隆、测序和遗传进化分析。【结果】通过扩增Hexon基因421bp的片段,成功建立了禽腺病毒4型的PCR检测方法;40份家禽肝脏样品中,PCR检测显示35份为FAV-4阳性,阳性率为87.5%;成功扩增了包含Hexon基因全序列的片段,长度为2 889bp;7株FAV-4河南株的Hexon基因与GenBank中的12株FAV-4参考毒株Hexon基因序列之间核苷酸序列同源性为98.5%~99.8%,与参考株相比存在碱基的插入、突变现象;FAV-4河南株Hexon全基因推导的氨基酸序列与参考株之间的同源性为98.2%~99.8%,且发生变化的位置集中在前段和中段。【结论】FAV-4河南株与印度分离株亲缘关系较近,但与韩国分离株亲缘关系相对较远。 展开更多
关键词 禽心包积水-包涵体肝炎综合征 禽腺病毒4型 hexon全基因
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犬传染性肝炎病毒Hexon蛋白基因的克隆和原核表达质粒的构建 被引量:5
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作者 陶玉成 马素贞 +3 位作者 陈胜男 刘腾飞 申卫红 简子健 《新疆农业大学学报》 CAS 北大核心 2010年第3期214-218,共5页
通过设计特异性引物,以犬传染性肝炎患犬的全血基因组DNA为模板,经PCR扩增,获得了犬传染性肝炎病毒Hexon蛋白基因,将其插入到pMD18-T载体进行测序、鉴定,构建原核表达质粒载体pGEX-6p-1-Hex-on。结果显示,犬传染性肝炎病毒Hexon基因已... 通过设计特异性引物,以犬传染性肝炎患犬的全血基因组DNA为模板,经PCR扩增,获得了犬传染性肝炎病毒Hexon蛋白基因,将其插入到pMD18-T载体进行测序、鉴定,构建原核表达质粒载体pGEX-6p-1-Hex-on。结果显示,犬传染性肝炎病毒Hexon基因已被成功地克隆,基因全长2 718 bp,包含从起始密码子ATG到终止密码子TAA的完整序列。与犬传染性肝炎病毒国际标准株Hexon蛋白基因的同源性为99.7%,通过实验鉴定表明pMD18-Hexon克隆载体和原核表达质粒载体pGEX-6p-1-Hexon已成功构建。 展开更多
关键词 犬传染性肝炎 hexon基因 克隆 原核表达质粒
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鸭腺病毒A型Hexon基因克隆与序列分析 被引量:5
9
作者 万春和 刘荣昌 +6 位作者 陈翠腾 程龙飞 傅光华 傅秋玲 施少华 陈红梅 黄瑜 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第10期3042-3048,共7页
为明确鸭腺病毒A型Hexon基因特征及其在腺病毒科病毒分类中的作用,本研究从前期分离鉴定的一株番鸭源鸭腺病毒A型分离株(JX2016株)中分段扩增获得其Hexon基因编码区。结果发现,鸭腺病毒A型JX2016株Hexon基因编码区为2 733 bp,编码910个... 为明确鸭腺病毒A型Hexon基因特征及其在腺病毒科病毒分类中的作用,本研究从前期分离鉴定的一株番鸭源鸭腺病毒A型分离株(JX2016株)中分段扩增获得其Hexon基因编码区。结果发现,鸭腺病毒A型JX2016株Hexon基因编码区为2 733 bp,编码910个氨基酸,与鸭腺病毒A型(FJ12025株)核苷酸同源性最高,达99.8%;与其他分离株Hexon基因核苷酸同源性均在99.4%以上;与鸭腺病毒2型(GR株,未明确分类地位)同源性仅为54.5%;与禽腺病毒A型Phelps株(鸡源)及P29株(鹅源)的核苷酸同源性分别为53.6%和55.2%。遗传进化树分析发现,所有鸭腺病毒A型分离株在遗传进化上均处于相同的亚分支,且与绵羊腺病毒D型(OAV287株)均处于富AT腺病毒属遗传进化分支。但鸭腺病毒2型(GR株)与禽腺病毒A型Phelps株(鸡源)、P29株(鹅源)却处于同一遗传进化分支,均属于禽腺病毒属遗传进化分支。基于Hexon蛋白的遗传进化分析,建议将鸭腺病毒A型重新命名为鸭源富AT腺病毒A型,将鸭腺病毒2型重新命名为鸭源禽腺病毒。 展开更多
关键词 鸭腺病毒A型 hexon基因 序列分析 遗传进化 分类
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禽腺病毒Hexon蛋白多克隆抗体制备及特异性鉴定 被引量:7
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作者 牛玉娟 孙芹芹 +6 位作者 赵君 孙伟 张会霞 张桂华 肖一红 商营利 刘思当 《山东农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2018年第6期928-932,共5页
本研究旨在制备禽腺病毒(FAd V)Hexon蛋白多克隆抗体并对其特异性进行分析鉴定。通过构建重组的原核表达载体p ET-28a-Hexon,转入表达菌E. coli BL21 (DE3),IPTG诱导,并运用SDS-PAGE进行重组蛋白的鉴定,最后纯化蛋白。利用纯化的融合蛋... 本研究旨在制备禽腺病毒(FAd V)Hexon蛋白多克隆抗体并对其特异性进行分析鉴定。通过构建重组的原核表达载体p ET-28a-Hexon,转入表达菌E. coli BL21 (DE3),IPTG诱导,并运用SDS-PAGE进行重组蛋白的鉴定,最后纯化蛋白。利用纯化的融合蛋白进行常规新西兰大白兔免疫,以制备Hexon蛋白的多克隆抗体。采用间接免疫荧光、免疫组织化学和Western blot的方法鉴定多克隆抗体的特异性。结果表明,Hexon蛋白的原核表达量较高,并且是以包涵体的形式存在,分子质量大小约为43 k Da;免疫兔后获得能与FAd V发生特异性反应且高效价的多克隆抗体。因此,本试验制备的FAd V Hexon蛋白的多克隆抗体证明特异性良好,为后期禽腺病毒病的诊断、致病机制研究及亚单位疫苗的研制提供了良好的物质基础。 展开更多
关键词 禽腺病毒 hexon基因 多克隆抗体 特异性
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鸭腺病毒3型Hexon基因的克隆及SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法的建立 被引量:4
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作者 陈翠腾 万春和 +6 位作者 程龙飞 傅光华 施少华 刘荣昌 陈珍 朱春华 黄瑜 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1104-1112,共9页
鸭腺病毒3型(duck adenovirus type 3,DAdV-3)是近年来我国新发鸭源禽腺病毒。本试验根据NCBI数据库中DAdV-3 Hexon基因特征,设计特异性引物,获得番鸭源DAdV-3福建株(命名为W1FJ株)Hexon基因全长,明确其分子特征,并基于此建立检测DAdV-3... 鸭腺病毒3型(duck adenovirus type 3,DAdV-3)是近年来我国新发鸭源禽腺病毒。本试验根据NCBI数据库中DAdV-3 Hexon基因特征,设计特异性引物,获得番鸭源DAdV-3福建株(命名为W1FJ株)Hexon基因全长,明确其分子特征,并基于此建立检测DAdV-3的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。结果表明,克隆的W1FJ株Hexon基因全长为2 814 bp,编码937个氨基酸,和DAdV-3(CH-GD-12-2014株)核苷酸同源性为100%,但和鸭源禽腺病毒B型(也称鸭腺病毒2型,DAdV-2,GR株)核苷酸同源性仅为76.6%。Hexon蛋白遗传进化分析表明,W1FJ株和CH-GD-12-2014株在遗传进化上形成一个独立的分支,与鸭源禽腺病毒B型和鹅源禽腺病毒A型(goose aviadenovirus A)在遗传进化上明显不同,建议将其命名为鸭源禽腺病毒C型(duck aviadenovirus C)。建立的检测DAdV-3的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,灵敏度高,最低检测限为61拷贝/μL;特异性强,和鸭群常见传染病病原均无交叉反应,扩增产物的熔解曲线只出现1个特异性单峰,Tm值为(81.48±0.25)℃;重复性好,组内和组间重复试验变异系数分别为0.49%~1.64%和0.67%~2.40%。本试验为DAdV-3的科学分类和后续开展DAdV-3感染的流行病学调查及致病机理研究奠定基础。 展开更多
关键词 鸭腺病毒3型 hexon基因 SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法
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Ⅰ群禽腺病毒Hexon蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立与应用 被引量:6
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作者 张曼 韩飞 +1 位作者 高睿 何亚鹏 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期634-640,共7页
旨在原核表达Ⅰ群禽腺病毒(Fowl adenovirus groupⅠ,FAVⅠ)的Hexon蛋白,并以Hexon蛋白为包被抗原建立血清的间接ELISA检测方法。将FAVⅠ群Hexon基因克隆至原核表达载体pET-28a(+)中进行重组Hexon蛋白的诱导表达,对表达产物进行纯化,并... 旨在原核表达Ⅰ群禽腺病毒(Fowl adenovirus groupⅠ,FAVⅠ)的Hexon蛋白,并以Hexon蛋白为包被抗原建立血清的间接ELISA检测方法。将FAVⅠ群Hexon基因克隆至原核表达载体pET-28a(+)中进行重组Hexon蛋白的诱导表达,对表达产物进行纯化,并进行Westernblot鉴定;纯化后的Hexon蛋白作为包被抗原,优化反应条件,建立血清的间接ELISA检测方法,并进行特异性、灵敏性和重复性试验,最后对临床样品进行检测。结果表明,原核表达获得大小约为37.4ku的重组Hexon蛋白;Westernblot结果表明重组蛋白有良好的特异性和抗原反应性。FAVⅠ间接ELISA法优化反应条件为:抗原最佳包被质量浓度为5.0mg/L,封闭条件为37℃作用1h,血清以1∶200倍稀释作用1h,酶标二抗以1∶5 000倍稀释作用1h,TMB显色时间为10min。在该优化条件下,OD_(450)≥0.322为阳性,反之为阴性;特异性试验结果表明,对鸡新城疫、禽流感、沙门菌、金黄色葡萄球菌、多杀性巴氏杆菌和大肠埃希菌阳性血清检测均为阴性;对阳性血清的敏感性可达1∶1 200,70份阳性血清的阳性率为97.1%;重复性试验结果表明,批内和批间OD_(450)值的变异系数分别为1.2%~3.5%和5.1%~8.3%;用此方法对临床279份鸡血清样品检测的阳性率为51.3%。表明建立的ELISA检测方法可用于FAVⅠ抗体水平的检测。 展开更多
关键词 Ⅰ群禽腺病毒 hexon蛋白 原核表达 间接ELISA
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猪腺病毒3型Hexon蛋白多克隆抗体制备与免疫活性鉴定 被引量:13
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作者 汪镇南 唐青海 +1 位作者 颜爱 刘云福 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第1期1-8,共8页
本研究旨在制备猪腺病毒3型(PADV-3)Hexon蛋白多克隆抗体。试验构建重组原核表达载体pET28a-Hexon,IPTG诱导重组蛋白的表达并进行Western blotting鉴定,目的蛋白与佐剂混合、乳化制备免疫原,免疫家兔制备Hexon蛋白多克隆抗体。采用免疫... 本研究旨在制备猪腺病毒3型(PADV-3)Hexon蛋白多克隆抗体。试验构建重组原核表达载体pET28a-Hexon,IPTG诱导重组蛋白的表达并进行Western blotting鉴定,目的蛋白与佐剂混合、乳化制备免疫原,免疫家兔制备Hexon蛋白多克隆抗体。采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)检测抗体的免疫活性与抗体滴度。结果显示,Hexon蛋白原核表达以包涵体形式存在,分子质量约为105ku;真核细胞表达的Hexon蛋白均定位于HEK293细胞质内,细胞核内无分布;IPMA测定所制备的多克隆抗体滴度为1∶1 600,该抗体与体外培养的PADV-3及稳定表达Hexon蛋白的细胞均呈特异性反应。结果表明本试验制备的PADV-3型Hexon蛋白多克隆抗体免疫活性和特异性良好。 展开更多
关键词 猪腺病毒3型 hexon基因 多克隆抗体
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Ⅰ群禽腺病毒hexon基因分型与序列分析 被引量:6
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作者 朱小甫 吴旭锦 《动物医学进展》 北大核心 2018年第10期46-49,共4页
对鸡群中感染的Ⅰ群禽腺病毒hexon基因进行分型与序列分析,以期明确Ⅰ群禽腺病毒基因型的分布和hexon基因变异情况。参考GenBank上FAdV基因序列,设计2对引物,采用套式PCR技术扩增临床病料中Ⅰ群禽腺病毒hexon基因,测序后获得了8株FAdV h... 对鸡群中感染的Ⅰ群禽腺病毒hexon基因进行分型与序列分析,以期明确Ⅰ群禽腺病毒基因型的分布和hexon基因变异情况。参考GenBank上FAdV基因序列,设计2对引物,采用套式PCR技术扩增临床病料中Ⅰ群禽腺病毒hexon基因,测序后获得了8株FAdV hexon基因片段。结果表明,构建系统进化树发现,其中HM、SXFS、LQQD、HXGB、GSPL、DYQY和FP共7株属于FAdV-4型,而GS株属于FAdV-1型。7株FAdV-4型毒株核苷酸同源性在99.9%~100%之间,推导的氨基酸序列同源性均为100%,提示这7株FAdV-4型流行毒株高度同源。FAdV-1型的GS与CELO株核苷酸、推导的氨基酸序列同源性均为99.2%,提示GS与CELO株亲缘关系较近。在鸡群中发现存在FAdV-1型和FAdV-4型Ⅰ群禽腺病毒,各血清型毒株之间高度同源,毒株遗传稳定性高。 展开更多
关键词 I群禽腺病毒 hexon基因 序列分析 基因分型
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鸭源血清4型Ⅰ亚群禽腺病毒Hexon蛋白的原核表达与初步应用 被引量:3
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作者 粟元文 王怀禹 魏玲 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第9期77-80,共4页
为了获得鸭源血清4型禽腺病毒(FAdV-4)重组Hexon蛋白,并掌握重组蛋白的免疫学活性和应用前景,试验采用PCR方法、原核表达技术、Western-blot检测和间接ELISA方法对鸭源FAdV-4 Hexon蛋白的主要抗原区域进行截短表达、鉴定与初步应用研究... 为了获得鸭源血清4型禽腺病毒(FAdV-4)重组Hexon蛋白,并掌握重组蛋白的免疫学活性和应用前景,试验采用PCR方法、原核表达技术、Western-blot检测和间接ELISA方法对鸭源FAdV-4 Hexon蛋白的主要抗原区域进行截短表达、鉴定与初步应用研究。结果表明:PCR方法扩增得到大小为1 011 bp的FAdV-4 Hexon主要抗原区域基因;将目的片段定向克隆至pET-30a(+)原核表达载体,经IPTG诱导获得以包涵体形式表达的重组蛋白;重组蛋白变性纯化后进行Western-blot检测,其可与FAdV-4阳性血清发生特异性反应,具有良好的免疫学活性;以纯化蛋白为包被抗原,初步建立检测FAdV-4抗体的间接ELISA方法,用该方法进行检测,FAdV-4灭活疫苗免疫鸭场的免疫合格率为96.46%,FAdV-4感染鸭场的阳性感染率为99.46%,无FAdV-4免疫史和感染史鸭场的阳性感染率为0。说明试验获得了具有良好生物学活性的FAdV-4 Hexon重组蛋白。 展开更多
关键词 血清4型Ⅰ亚群禽腺病毒 hexon蛋白 原核表达 初步应用
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2017年黑龙江省禽腺病毒4型分离株Hexon基因的遗传特征分析
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作者 王天 步梦娇 +5 位作者 刘增禄 周金玲 刘宇 刘通 岳山 朱战波 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第9期965-968,973,共5页
目的分析2017年黑龙江省禽腺病毒4型(fowl adenovirus-4,FAd V-4)分离株Hexon基因的遗传特征。方法提取疑似心包积液综合征(hydropericardium syndrome,HPS)的病鸡肝脏DNA,以其为模板,经PCR扩增Hexon基因,并进行测序。采用BLAST软件对He... 目的分析2017年黑龙江省禽腺病毒4型(fowl adenovirus-4,FAd V-4)分离株Hexon基因的遗传特征。方法提取疑似心包积液综合征(hydropericardium syndrome,HPS)的病鸡肝脏DNA,以其为模板,经PCR扩增Hexon基因,并进行测序。采用BLAST软件对Hexon基因序列进行数据库比对;采用Meg Align软件进行核苷酸和氨基酸同源性比对;采用Mega 6软件将分离获得的FAd V-4菌株及35个参考FAd V菌株的全长Hexon基因构建系统进化树。结果 Hexon基因PCR产物长度为1 204 bp,将分离株命名为FAd V-4-DQ。与其他8个FAd V分离株核苷酸和氨基酸的同源性分别为34.6%~98.7%和22.0%~95.7%,其中与中国2015年FAd V-4 HNHB分离株及2016年FAd V-4 HN151025分离株的核苷酸和氨基酸的同源性较高,分别为98.7%、95.7%和98.6%、95.2%;其次是与印度2008年的FAd V-4 PJ-06分离株的核苷酸和氨基酸的同源性较高,分别为98.2%和94.4%。基因进化树分析显示,FAd V-4-DQ株与中国2015及2016年的15个分离株基因型属于同一个进化分枝,并由同一祖先进化。结论本研究获得的FAd V分离株属血清型FAd V-4型,FAd V-C种,与中国2015及2016年流行毒株同属一个基因簇,并推测该分离株起源于印度早期菌株。 展开更多
关键词 禽腺病毒4型 hexon基因 序列分析 同源性
原文传递
高致病性血清4型禽腺病毒hexon基因在昆虫细胞中的表达及鉴定
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作者 梅梅 陆吉虎 +2 位作者 张雪花 唐应华 侯继波 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期862-865,共4页
为获得杆状病毒表达的重组高致病性血清4型禽腺病毒(Fowl adenovirus serotype 4,FAd V-4)六邻体蛋白(Hexon),本研究通过PCR从高致病性血清4型禽腺病毒基因组中扩增到hexon基因,克隆到杆状病毒转移载体p Fast Bac-1,获得重组转移质粒p F... 为获得杆状病毒表达的重组高致病性血清4型禽腺病毒(Fowl adenovirus serotype 4,FAd V-4)六邻体蛋白(Hexon),本研究通过PCR从高致病性血清4型禽腺病毒基因组中扩增到hexon基因,克隆到杆状病毒转移载体p Fast Bac-1,获得重组转移质粒p Fast Bac-hexon,将其转化DH10Bac大肠杆菌并筛选,获得重组杆状病毒穿梭质粒r Bacmid-hexon,将重组杆状病毒穿梭质粒转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒r BV-hexon。间接免疫荧光试验和免疫印迹试验结果显示,Sf9细胞中的Hexon蛋白能够与血清4型禽腺病毒阳性血清发生特异性反应,蛋白质分子量约110 000,表明Hexon蛋白在Sf9细胞中获得良好的表达。 展开更多
关键词 高致病性血清4型禽腺病毒 六邻体蛋白 hexon基因
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番鸭腺病毒的分离鉴定及hexon基因遗传变异研究
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作者 林锋强 陈小丽 +4 位作者 李典辉 沈华伟 董慧 朱小丽 王劭 《福建农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第12期1346-1353,共8页
【目的】研究福建省番鸭白肝病病原特性、流行病学特征及病毒遗传变异状况。【方法】从福建省福州、三明、莆田、漳州等地共收集临床疑似番鸭白肝病例9份,进行鸭腺病毒(duck adenovirus,DAdV)病原学检测,包括病原分离鉴定、血凝特性、... 【目的】研究福建省番鸭白肝病病原特性、流行病学特征及病毒遗传变异状况。【方法】从福建省福州、三明、莆田、漳州等地共收集临床疑似番鸭白肝病例9份,进行鸭腺病毒(duck adenovirus,DAdV)病原学检测,包括病原分离鉴定、血凝特性、致病性分析及hexon基因序列分析。【结果】鸭腺病毒感染主要在春秋两季发生;发病率15%~40%,死亡率5%~15%。采集病死鸭病料,检测到鸭腺病毒感染;利用番鸭胚进行病毒分离,分离毒均能致死番鸭胚。番鸭感染分离毒后发病率为60%~100%,死亡率为20%~40%。9株DAdV分离毒hexon基因核苷酸同源性在99.9%以上,序列特征与CH-GD-12-2014株一致,未发生碱基缺失、插入或基因重组,较为稳定;与法国分离株DAdV-GR株同源性在76.6%~76.7%;与禽腺病毒(fowl adenovirus,FAdV)同源性在64.1%~66.8%。进化树分析显示9株分离毒与GD-12-2014株和国外分离株GR株属于同一分支,而与FAdV属于不同分支。【结论】2022年福建省流行的番鸭腺病毒毒株为2型腺病毒。本研究结果为深入研究鸭2型腺病毒致病机理及其疫苗研制和综合防控措施提供了重要的临床资料和基础数据。 展开更多
关键词 番鸭腺病毒 流行病学 病原 hexon基因
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禽腺病毒Ⅰ型hexon蛋白部分基因的原核表达及纯化 被引量:2
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作者 文艳玲 《中国畜牧兽医文摘》 2014年第1期35-36,共2页
根据GenBank上的CELO病毒Hexon基因序列,设计并合成了一对特异性引物,对CELO株进行PCR扩增、与PGEX-4T-1原核表达载体连接,转化大肠杆菌DH5a感受态细胞,再经0.2 mmol/L的IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳分析表明,表达的融合蛋白分子量为46.6... 根据GenBank上的CELO病毒Hexon基因序列,设计并合成了一对特异性引物,对CELO株进行PCR扩增、与PGEX-4T-1原核表达载体连接,转化大肠杆菌DH5a感受态细胞,再经0.2 mmol/L的IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳分析表明,表达的融合蛋白分子量为46.64 kD,占全菌蛋白的34%。经不同浓度尿素纯化后,纯度达到85%。Western-blotting结果表明:纯化的hexon蛋白具有抗原性,能与感染FAV的阳性血清反应。 展开更多
关键词 CELO hexon PCR 原核表达 纯化
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鸡腺病毒血清4型Hexon蛋白的表达及与不同血清型抗体的交叉反应性评价 被引量:9
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作者 宋文平 李雪峰 +2 位作者 秦亚萍 刘胜旺 李慧昕 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期679-688,共10页
自2015年我国鸡群大面积暴发肝炎-心包积水综合征以来,我国鸡群鸡腺病毒流行呈现多血清型的复杂情况,甚至同一鸡群有多种血清型鸡腺病毒同时存在,其中鸡腺病毒血清4型(FAdV-4)对鸡的致病性最强。为了解FAdV-4衣壳蛋白Hexon蛋白与其他血... 自2015年我国鸡群大面积暴发肝炎-心包积水综合征以来,我国鸡群鸡腺病毒流行呈现多血清型的复杂情况,甚至同一鸡群有多种血清型鸡腺病毒同时存在,其中鸡腺病毒血清4型(FAdV-4)对鸡的致病性最强。为了解FAdV-4衣壳蛋白Hexon蛋白与其他血清型鸡腺病毒抗体之间的交叉反应性,本研究将FAdV-4 HN/151025毒株的Hexon基因进行分段表达,表达蛋白分别位于CH1(1~370 aa)、CH2(371~671aa)和CH3(672~937 aa)片段。将FAdV-4 HN/151025毒株的Hexon基因的3段表达产物分别与FAdV-4、FAdV-1、FAdV-8a、FAdV-8b和FAdV-11型抗血清进行Western-blot反应。结果显示,FAdV-4 Hexon蛋白与不同血清型抗体之间均有交叉反应,但不同片段的交叉反应强度有所差异。FAdV-1型血清可与FAdV-4Hexon蛋白CH1和CH2片段发生反应,说明FAdV-4 Hexon蛋白的1~671 aa与FAdV-1型血清有交叉反应。FAdV-8a和FAdV-8b型血清仅与FAdV-4 Hexon蛋白CH2片段发生反应,说明FAdV-8a和FAdV-8b型血清与FAdV-4 Hexon蛋白的交叉反应区域在371~671 aa内。FAdV-11型血清可与FAdV-4 Hexon蛋白的3个片段发生反应,提示FAdV-11与FAdV-4型之间有交叉保护。血清4型FAdV的Hexon蛋白与不同血清型FAdV抗体间的交叉反应及其主要反应区域的研究,将对不同血清型FAdV疫苗的研制及不同血清型FAdV鉴别诊断提供依据。 展开更多
关键词 鸡腺病毒 血清4型 hexon蛋白 交叉反应
原文传递
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