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杆状病毒表达的hZP3 B细胞表位嵌合肽的免疫活性研究
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作者 曹佐武 杨林 +4 位作者 郑辉 刘穗玲 肖銮娟 谢琪璇 王自能 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期70-73,共4页
为研究杆状病毒系统表达的人透明带ZP3的B细胞表位嵌合肽(BCP)的免疫原性及其抗血清与人透明带的免疫交叉反应,重组z3bcp病毒用于感染sf9细胞以表达BCP。Tricine_SDS_PAGE用于分离感染液中的小相对分子质量表达产物,表达产物用于免疫... 为研究杆状病毒系统表达的人透明带ZP3的B细胞表位嵌合肽(BCP)的免疫原性及其抗血清与人透明带的免疫交叉反应,重组z3bcp病毒用于感染sf9细胞以表达BCP。Tricine_SDS_PAGE用于分离感染液中的小相对分子质量表达产物,表达产物用于免疫小鼠制备抗血清,免疫细胞化学试验用于检验抗血清与人卵泡透明带的交叉反应性。结果显示,sf9细胞被z3bcp病毒感染后,培养液中分离出一条相对分子质量约为6000的特异带,而正常sf9细胞中没有等同的带。免疫细胞化学试验结果显示,该特异肽的抗血清能与人透明带特异结合,表明人透明带BCP嵌合肽在杆状病毒系统中成功表达,表达产物具有抗原性,抗血清能与人透明带特异结合。 展开更多
关键词 人透明带3 嵌合肽 免疫细胞化学试验 杆状病毒 透明带避孕疫苗
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重组人卵ZP3肽段在毕赤酵母中的表达 被引量:2
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作者 徐放 谢杏美 +1 位作者 孔明惠 曹佐武 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期533-538,共6页
目的:用毕赤酵母(Pichia pastoris)表达人透明带hZP3片段,研究其抗生育作用。方法:设计特定引物从hZP3全长序列中PCR扩增794-1282nt基因片段,将扩增片段克隆到酵母表达载体pPICZα上,构建成重组质粒pPICZα-hZP3CT,线性化后的重组... 目的:用毕赤酵母(Pichia pastoris)表达人透明带hZP3片段,研究其抗生育作用。方法:设计特定引物从hZP3全长序列中PCR扩增794-1282nt基因片段,将扩增片段克隆到酵母表达载体pPICZα上,构建成重组质粒pPICZα-hZP3CT,线性化后的重组质粒导入毕赤酵母中,筛选出高拷贝菌株,甲醇诱导目的蛋白表达。用SDS-PAGE和Western blotting分析表达产物。结果:成功构建酵母表达载体,并在酵母菌株X-33中诱导表达重组蛋白。重组蛋白可以与鼠抗重组人卵透明带hZP3融合肽段的抗血清发生特异结合,表明目的基因成功表达。结论:重组hZP3蛋白已在酵母中成功表达,目的蛋白能与相应的抗体结合。 展开更多
关键词 人卵透明带hzp3蛋白 毕赤酵母 表达载体pPICZα 酵母表达 高拷贝转化子
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人ZP3B-细胞表位嵌合肽DNA的设计和合成 被引量:2
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作者 曹佐武 杨林 +1 位作者 潘善培 王自能 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 2000年第4期42-45,共4页
目的 :设计和合成适合在昆虫细胞中表达的一个人ZP3B细胞表位的DNA序列。方法 :根据国外的研究基础 ,设计由人ZP3的B细胞表位肽段和外源Th细胞表位肽段串联而成的 4 5肽嵌合肽序列 ,并根据昆虫细胞对密码子的偏爱性设计出该嵌合肽的DNA... 目的 :设计和合成适合在昆虫细胞中表达的一个人ZP3B细胞表位的DNA序列。方法 :根据国外的研究基础 ,设计由人ZP3的B细胞表位肽段和外源Th细胞表位肽段串联而成的 4 5肽嵌合肽序列 ,并根据昆虫细胞对密码子的偏爱性设计出该嵌合肽的DNA序列。然后人工合成该嵌合肽的DNA链 ,并克隆到PUC18载体上。结果 :通过酶切分析和测序证明 ,合成的DNA与所设计的嵌合肽DNA序列一致。结论 : 按设计合成了人ZP3的B细胞表位和外源Th细胞表位串联而成的嵌合肽DNA序列。 展开更多
关键词 人ZP3 透明带基因 B细胞表位 嵌合肽 DNA序列
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人卵透明带3蛋白的二级结构和B细胞抗原表位预测 被引量:3
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作者 周勇 马玲 《新疆医科大学学报》 CAS 2008年第8期955-958,共4页
目的:预测并综合分析人卵透明带3(human zona pellucida 3,hZP3)蛋白的二级结构及其B细胞抗原表位。方法:以hZP3蛋白的基因序列为材料,采用Garnier-Robson法、Chou-Fasman法和Karplus-Schulz法预测其结构蛋白的二级结构及蛋白骨架... 目的:预测并综合分析人卵透明带3(human zona pellucida 3,hZP3)蛋白的二级结构及其B细胞抗原表位。方法:以hZP3蛋白的基因序列为材料,采用Garnier-Robson法、Chou-Fasman法和Karplus-Schulz法预测其结构蛋白的二级结构及蛋白骨架区的柔韧性,采用Kyte-Doolittle法对蛋白的亲水性进行分析,Emini法预测蛋白的表面可能性,Jameson-Wolf法预测蛋白的抗原指数。结果:hZP3蛋白含有较多的β折叠和转角结构。该蛋白第27~31、36~46、114~133、140~151、237~240和324~329区段可能是α-螺旋中心;hZP3蛋白分子第52~54、60~67、74~78、100~111、158~169、181~185、190~193、210~218、226~229、311~317、335~349和353~360区段可能是β-折叠中心。hZP3蛋白具有多处抗原指数较高的区段,其中近中部区段和近羧基端的第92~95、132~137、171~178、239~245、252~255、279~286、292~305和319~324区段含有潜在的B细胞优势抗原表位。结论:以蛋白质的二级结构预测作为辅助手段,用抗原指数、亲水性参数和表面可能性参数预测hZP3蛋白的B细胞抗原表位,为实验确定hZP3蛋白的B细胞抗原表位并以此进行免疫避孕研究奠定基础。 展开更多
关键词 人卵透明带3蛋白 B细胞抗原表位 二级结构 预测
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昆虫细胞杆状病毒表达系统表达重组人类ZP3蛋白的研究
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作者 卢慧 刁华 +3 位作者 肖玉芳 于合国 李铮 施惠娟 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2014年第11期978-983,共6页
目的:探讨利用重组表达系统制备重组人类ZP3(hZP3)蛋白的方法和技术难点,为hZP3蛋白的制备和应用打下技术基础。方法:构建hZP3的载体质粒pFASTBAC HTa-hZP3,在大肠杆菌宿主细胞中利用杆状病毒Bac-to-Bac系统同源重组构建重组的杆状... 目的:探讨利用重组表达系统制备重组人类ZP3(hZP3)蛋白的方法和技术难点,为hZP3蛋白的制备和应用打下技术基础。方法:构建hZP3的载体质粒pFASTBAC HTa-hZP3,在大肠杆菌宿主细胞中利用杆状病毒Bac-to-Bac系统同源重组构建重组的杆状病毒穿梭载体Bacmid,用重组的Bacmid转染Sf9细胞制备重组杆状病毒,分别表达带HIS标签的h ZP3全长蛋白(氨基酸1-424)和截短的hZP3蛋白(氨基酸23-348)。摸索重组hZP3蛋白的表达时间和纯化制备方法。结果:成功制备了表达重组人hZP3全长蛋白和截短体蛋白的Bacmid和杆状病毒颗粒,Western印迹检测表明,在Sf9细胞中较好的表达时间段为感染后72-96 h。重组表达的hZP3蛋白可以部分被钴柱亲和纯化,大量的重组hZP3蛋白不能结合到亲和介质而流穿,但确切的原因还未知。纯化得到的hZP3经荧光素Dylight Dye488标记,能与人精子结合。结论:利用昆虫细胞杆状病毒表达系统表达hZP3蛋白是可行的,可以进一步优化,但hZP3蛋白的有效富集和纯化方法是最大的瓶颈,还需要进一步摸索。 展开更多
关键词 人ZP3 精子 重组蛋白 昆虫细胞杆状病毒表达系统
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非全长型人卵透明带-3蛋白慢病毒表达载体的构建及其在中国仓鼠卵巢细胞中表达的研究
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作者 陈小佳 李丽玲 +4 位作者 朱伟杰 谢秋玲 洪岸 李菁 徐万祥 《生殖与避孕》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期161-165,177,共6页
目的:构建含非全长型人卵透明带-3蛋白(hZP3)的慢病毒载体,转染293FT细胞获得重组慢病毒颗粒,感染中国仓鼠卵巢细胞(CHO)使其表达hZP3。方法:将hZP3基因序列插入到慢病毒系统的入门载体pENTR-11中构建为pENTR-hZP3,采用LR重组酶将pENTR-... 目的:构建含非全长型人卵透明带-3蛋白(hZP3)的慢病毒载体,转染293FT细胞获得重组慢病毒颗粒,感染中国仓鼠卵巢细胞(CHO)使其表达hZP3。方法:将hZP3基因序列插入到慢病毒系统的入门载体pENTR-11中构建为pENTR-hZP3,采用LR重组酶将pENTR-hZP3和pLenti6/V5-DEST进行重组反应,形成新重组载体pLenti6/V5-DEST-hZP3。将该重组载体和其它viruspower 3个质粒载体充分混合,用阳离子脂质体转染293FT细胞,培养和待细胞完全裂解后收集富含hZP3基因的病毒颗粒上清液,取适量上清液感染CHO-K1细胞,采用杀稻瘟Blastcidin筛选,挑单克隆对其扩增培养,进行基因水平和蛋白水平的鉴定。结果:获得的含hZP3基因的病毒颗粒上清液滴度为1×105TU/ml,随机挑取的16株单克隆细胞中,有9株表达hZP3。结论:成功构建含hZP3的慢病毒表达载体,获得表达hZP3的CHO株,为后续研究与开发奠定了基础。 展开更多
关键词 人卵透明带 慢病毒载体 中国仓鼠卵巢细胞 表达
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