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转hMCP/hCD_(59)双基因小鼠的构建、传代及功能测试
1
作者 魏庆信 陈实 +6 位作者 魏雁 郑新民 李莉 乔宪风 刘西梅 周荆荣 田永祥 《实验动物与比较医学》 CAS 2007年第1期1-5,共5页
目的比较转染两个补体调节蛋白(CRP)基因与转染单一CRP基因对异种细胞的保护作用。方法采用双基因混合注射的方法,将人MCP(膜辅因子蛋白)和CD59(膜反应性溶解抑制物)两种基因导入521枚KM小鼠的受精卵原核。结果得到原代转hCD59基因小鼠1... 目的比较转染两个补体调节蛋白(CRP)基因与转染单一CRP基因对异种细胞的保护作用。方法采用双基因混合注射的方法,将人MCP(膜辅因子蛋白)和CD59(膜反应性溶解抑制物)两种基因导入521枚KM小鼠的受精卵原核。结果得到原代转hCD59基因小鼠14只,转hMCP基因小鼠12只,hCD59/hMCP双基因共整合的小鼠7只,转基因效率5%。通过5只G0代转双基因小鼠和非转基因小鼠的繁殖,得到F1转hMCP小鼠14只,转hCD59小鼠16只,转双基因小鼠10只,F1双基因占33.3%。用10%新鲜人血浆体外灌注小鼠离体心脏,转双基因组心脏搏动时间(138±25min)明显长于单基因组(hCD59组78±27min,hMCP组43±21min)和非转基因对照组(20±12min)。结论转染两个CRP基因比转染单一CRP基因对异种细胞有更好的保护作用。 展开更多
关键词 补体调节蛋白 hmcp hCD59 转双基因小鼠 人血灌注
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与凡纳滨对虾抗副溶血弧菌有关的6.0 kD血蓝蛋白降解肽段 被引量：4
2
作者 张泽蕙 黄河 +3 位作者 文英 钟名其 伦镜盛 章跃陵 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期218-224,共7页
以凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）为研究对象，采用人工感染、Tricine．SDS．PAGE、Western．blotting、MALDI-TOF／TOF、抑菌实验等方法对血蓝蛋白小分子降解肽段进行研究。结果发现，副溶血弧菌（Vibriopara-haemolyticus）刺激... 以凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）为研究对象，采用人工感染、Tricine．SDS．PAGE、Western．blotting、MALDI-TOF／TOF、抑菌实验等方法对血蓝蛋白小分子降解肽段进行研究。结果发现，副溶血弧菌（Vibriopara-haemolyticus）刺激对虾24h后，与对照组相比，其血淋巴中新出现5个分子量为6．0～31．0kD的与兔抗血蓝蛋白抗体呈阳性的小分子条带。其中，分子量为6．0kD的a条带（命名为HMCp6肽段）与凡纳滨对虾血蓝蛋白具有高度同源性，对副溶血弧菌具有明显的抑菌活性，与对照组相比，存在极显著性差异（P〈0．01）。由此说明，HMCp6应该是对虾感染副溶血弧菌后所产生的一种新的小分子降解肽段，推测其在对虾抗感染防御中发挥重要作用。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 血蓝蛋白 降解肽段 hmcp6 抑菌活性
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人类MCP和CD_(59)双基因导入小鼠的整合及传代研究
3
作者 魏雁 郑新民 +5 位作者 李莉 乔宪风 刘西梅 周荆荣 田永祥 魏庆信 《湖北农业科学》 北大核心 2005年第5期17-19,共3页
将人类MCP(膜辅因子蛋白)和CD59(终末阶段同源限制因子)两种基因采用混合注射的方法,导入521枚昆明小鼠的受精卵原核中,得到原代转CD59基因小鼠14只,CD59的整合率为18.4%;转MCP基因小鼠12只,MCP的整合率为15.7%;转CD59+MCP双基因小鼠7只... 将人类MCP(膜辅因子蛋白)和CD59(终末阶段同源限制因子)两种基因采用混合注射的方法,导入521枚昆明小鼠的受精卵原核中,得到原代转CD59基因小鼠14只,CD59的整合率为18.4%;转MCP基因小鼠12只,MCP的整合率为15.7%;转CD59+MCP双基因小鼠7只,双基因整合率为9.2%;转基因效率5%。通过5只存活的G0代转双基因小鼠和非转基因小鼠的繁殖,得到F1代转MCP小鼠14只,转CD59小鼠16只,转双基因小鼠10只;F1代双基因占33.3%。 展开更多
关键词 膜辅因子蛋白MCP 终末阶段同源限制因子CD59 转双基因小鼠
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表达人膜辅助因子蛋白基因的猪内皮细胞可抑制人血清补体的细胞毒作用 被引量：3
4
作者 白成 乔殿华 孙方臻 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期133-136,共4页
目的研究转染人膜辅助因子蛋白基因的猪内皮细胞抗补体的细胞毒作用。方法从人胎盘组织提取总ＲＮＡ，用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增得到人膜辅助因子蛋白（ｈＭＣＰ）基因全长ｃＤＮＡ，将其克隆到带有巨细胞病毒（ＣＭＶ）ＩＥ启动子的ｐＣ... 目的研究转染人膜辅助因子蛋白基因的猪内皮细胞抗补体的细胞毒作用。方法从人胎盘组织提取总ＲＮＡ，用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增得到人膜辅助因子蛋白（ｈＭＣＰ）基因全长ｃＤＮＡ，将其克隆到带有巨细胞病毒（ＣＭＶ）ＩＥ启动子的ｐＣＩ－ｎｅｏ哺乳动物表达载体和以ｐＣＩ－ｎｅｏ为基础构建成的带有人ＥＦ－１α启动子的ｐＥＦ－ｎｅｏ哺乳动物表达载体上，得到质粒ｐＣＩＭ和ｐＥＦＭ。利用电穿孔基因转移方法分别转染猪内皮细胞（ＰＥＣ），以Ｇ４１８筛选稳定表达克隆。用正常人血清处理此转基因细胞来检测其抗补体作用。结果Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果表明，在ＥＦ－１α启动子引导下的ｈＭＣＰ基因得到了高效表达。死细胞计数和ＬＤＨ释放实验结果表明，表达ｈＭＣＰ基因的ＰＥＣ可有效抑制人血清补体对其的裂解作用（Ｐ＜０．０１）。结论克隆的ｈＭＣＰ基因在ＥＦ－１α启动子引导下于ＰＥＣ可高效表达，且使ＰＥＣ能够抗人补体的细胞毒作用。 展开更多
关键词 细胞毒作用 内皮细胞 表达 hmcp 基因 补体
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