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SUMO融合系统表达人白细胞介素17及其活性的研究 被引量：3
1
作者 朱慧萌 谷学佳 +4 位作者 任桂萍 孙阳 彭中宜 徐彤 李德山 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期595-600,605,共7页
目的:克隆、表达和纯化人白细胞介素17(hIL-17),并对其生物学活性进行研究。方法:采用RT-PCR的方法从活化的人T细胞中克隆获得hIL-17cDNA。构建了含羟胺切割位点的重组载体pHisSUMO-hIL-17,导入宿主菌Rosetta中,经IPTG诱导后得到表达。... 目的:克隆、表达和纯化人白细胞介素17(hIL-17),并对其生物学活性进行研究。方法:采用RT-PCR的方法从活化的人T细胞中克隆获得hIL-17cDNA。构建了含羟胺切割位点的重组载体pHisSUMO-hIL-17,导入宿主菌Rosetta中,经IPTG诱导后得到表达。用Ni-NTA琼脂糖颗粒层析纯化融合蛋白,经羟胺切割,复性,通过Western blot实验进行确认,并从核酸水平和蛋白水平鉴定其活性。结果:克隆表达出了hIL-17,利用Ni-NTA琼脂糖颗粒层析纯化得到的纯品蛋白经体外活性实验表明,该蛋白具有刺激3T3-L1细胞和HeLa细胞分泌IL-6、IL-8、G-CSF的作用。结论:制备了具有生物学活性的成熟hIL-17蛋白,为进一步研究该分子在疾病中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 hil-17 表达 纯化 活性试验
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重组人白细胞介素17的原核表达、纯化及鉴定 被引量：2
2
作者 王永红 陈国友 +3 位作者 曹雪涛 胡晋红 原永芳 苏晴 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1999年第4期273-276,共4页
目的:优化重组人白细胞介素17的原核表达条件,选择不同的路线进行分离纯化.方法:利用SDS-PAGE方法分析比较重组人白细胞介素17在不同培养基、不同诱导时间的表达量,选择最适条件,大量扩增后,分离出包涵体,分别采用盐酸胍溶解法和SDS溶... 目的:优化重组人白细胞介素17的原核表达条件,选择不同的路线进行分离纯化.方法:利用SDS-PAGE方法分析比较重组人白细胞介素17在不同培养基、不同诱导时间的表达量,选择最适条件,大量扩增后,分离出包涵体,分别采用盐酸胍溶解法和SDS溶解法两条纯化路线进行进一步的分离和纯化,并对所纯化产物进行常规分析鉴定.结果:采用上述两种不同的溶解包涵体方法,通过后续复性及纯化,均可得到高纯度具有生物学活性的重组IL-17.采用SDS溶解法具有较高的得率,采用盐酸胍溶解法纯化得率较低,得产物的生物学活性较高.结论:通过表达及纯化,得到了大量高纯度具有活性的rhIL-17,为进一步研究IL-17的体内外生物学效应打下了基础. 展开更多
关键词 原核表达 纯化 鉴定 IL-17 γhil-17
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人白介素17受体样分子的克隆及表达
3
作者 黄益玲 黄利鸣 +1 位作者 熊士勤 常智杰 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期307-309,共3页
目的　构建带有 6×myc的人白介素 17受体样分子的重组表达质粒 ,以便检测hIL 17RLM L基因在真核细胞中的特异性表达。方法　设计带有酶切位点 (EcoRⅠ和XhoⅠ )的特异性引物 ,用PCR方法扩增hIL 17RLM L片段回收后插入带有 6×... 目的　构建带有 6×myc的人白介素 17受体样分子的重组表达质粒 ,以便检测hIL 17RLM L基因在真核细胞中的特异性表达。方法　设计带有酶切位点 (EcoRⅠ和XhoⅠ )的特异性引物 ,用PCR方法扩增hIL 17RLM L片段回收后插入带有 6×myc标签的 pcDNA3.0真核表达载体 ,转染COS7细胞后作Westernblot检测其表达。结果　成功地构建了带有 6×myc标签的 pcDNA3.0 6×myc /hIL 17RLM L重组质粒 ,Westernblot检测到该质粒可在真核细胞中表达。结论　用分子生物学的方法成功地构建了真核表达质粒pcDNA3.0 6×myc /hIL 17RLM L ,使该基因的特异性检测成为可能 ,为进一步研究hIL 17RLM L的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 人白介素17受体样分子 真核表达 克隆
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人白细胞介素17基因的克隆及序列测定
4
作者 杨斌 王斌 +2 位作者 冯炼强 任秀容 李树浓 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期15-17,共3页
应用逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，参照国外发表的人白细胞介素１７（ｈＩＬ－１７）ｃＤＮＡ全基因序列，利用自行设计合成的１对引物，从ＰＨＡ活化的正常人外周血单个核细胞中，扩增出ｈＩＬ－１７ｃＤＮＡ基因，并定向... 应用逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，参照国外发表的人白细胞介素１７（ｈＩＬ－１７）ｃＤＮＡ全基因序列，利用自行设计合成的１对引物，从ＰＨＡ活化的正常人外周血单个核细胞中，扩增出ｈＩＬ－１７ｃＤＮＡ基因，并定向插入ｐＵＣ１８载体，构建了ｈＩＬ－１７基因重组体，经ＤＮＡ序列测定，确认为ｈＩＬ－１７基因，这为今后进一步研究ｈＩＬ－１７的生物学功能提供可靠的物质基础。 展开更多
关键词 白细胞介素17 分子克隆 序列测定
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人白介素17基因的分离及其在大肠杆菌中的表达
5
作者 周俐梅 王嘉玺 +3 位作者 周泾 王利红 蔡欣 段聚宝 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 1997年第3期161-163,共3页
用ＲＴ－ＰＣＲ方法从活化的人外周血淋巴细胞中分离了人白介素１７（ｈＩＬ－１７）基因，序列分析结果表明与文献报道的完全相符。以质粒ｐＢＶ２２０为表达载体，在大肠杆菌中高效表达了ｈＩＬ－１７基因，重组蛋白以包涵体的形式存... 用ＲＴ－ＰＣＲ方法从活化的人外周血淋巴细胞中分离了人白介素１７（ｈＩＬ－１７）基因，序列分析结果表明与文献报道的完全相符。以质粒ｐＢＶ２２０为表达载体，在大肠杆菌中高效表达了ｈＩＬ－１７基因，重组蛋白以包涵体的形式存在，约占菌体总蛋白的量４０％。 展开更多
关键词 白细胞介素17 基因表达 大肠杆菌 分离
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