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hGLP-1类似物基因转染对糖尿病大鼠血糖、血清胰岛素水平及胰岛细胞的影响 被引量：2
1
作者 李晓丽 刘振 +1 位作者 马卫列 张志珍 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期260-263,共4页
目的研究尾静脉注射人胰高血糖素样肽-1(hGLP-1)类似物基因(2×Val2-hGLP-1)重组表达质粒对糖尿病模型大鼠血糖、血清胰岛素水平及胰岛细胞的影响。方法建立链脲佐菌素(STZ)诱导SD糖尿病大鼠模型,随机分为含有hGLP-1类似物基因的重... 目的研究尾静脉注射人胰高血糖素样肽-1(hGLP-1)类似物基因(2×Val2-hGLP-1)重组表达质粒对糖尿病模型大鼠血糖、血清胰岛素水平及胰岛细胞的影响。方法建立链脲佐菌素(STZ)诱导SD糖尿病大鼠模型,随机分为含有hGLP-1类似物基因的重组质粒(pIRES2-EGFP/Val2-hGLP-1)转染组、空质粒(pIRES2-EGFP)转染组、糖尿病模型对照组,每组8只。另取8只未经处理的SD大鼠作为正常对照组。重组质粒转染组和空质粒转染组分别通过尾静脉注射含相应质粒(110μg/只)的溶液,糖尿病模型对照组和正常对照组给予等量的生理盐水。实验动物共干预30d,实验结束后,观察各组大鼠血糖及血清胰岛素水平的变化,采用糖耐量及胰岛素耐量实验检测大鼠胰岛素敏感性然后处死动物,HE染色观察胰岛细胞病变情况,免疫组化法分析胰岛素分泌情况。结果与正常对照组、糖尿病模型对照组和空质粒转染组比较,重组质粒转染组血糖水平明显降低(P<0.01),血清胰岛素水平显著升高(P<0.01)。基因治疗改善了糖尿病大鼠的糖耐量,降低了胰岛素抵抗,提高了机体对胰岛素的敏感性(P<0.01)。空质粒转染组与糖尿病模型对照组比较,以上指标的差异均无统计学意义(P>0.05)。同时,重组质粒转染组的胰岛素分泌水平提高,与糖尿病模型对照组比较,胰岛细胞病变程度明显改善。结论hGLP-1类似物基因转染可促进胰岛细胞增殖,提高胰岛素敏感性,从而显著降低糖尿病大鼠的血糖水平,并改善胰岛组织病变程度。 展开更多
关键词 糖尿病 基因 hglp-1类似物 转染 葡萄糖耐量试验 胰岛
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新型hGLP-1基因对β-TC-6胰岛瘤细胞凋亡的影响
2
作者 黄常洪 李晓丽 +2 位作者 代国知 廖晓梅 袁红霞 《国际检验医学杂志》 CAS 2011年第13期1438-1440,共3页
目的探讨新型人胰高血糖素样肽-1(hGLP-1)类似物基因(2×Val2-hGLP-1)对四氧嘧啶(AXN)诱导凋亡的β-TC-6胰岛瘤细胞株的影响。方法脂质体介导重组质粒pIRES2-EGFP/2×Val2-hGLP-1转染β-TC-6胰岛瘤细胞,荧光显微镜观察绿色荧光... 目的探讨新型人胰高血糖素样肽-1(hGLP-1)类似物基因(2×Val2-hGLP-1)对四氧嘧啶(AXN)诱导凋亡的β-TC-6胰岛瘤细胞株的影响。方法脂质体介导重组质粒pIRES2-EGFP/2×Val2-hGLP-1转染β-TC-6胰岛瘤细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP),酶联免疫吸附法(ELISA)检测目的蛋白表达;以AXN诱导细胞凋亡后观察细胞形态,Hoechst染色及四甲基偶氮唑盐光吸收法(WST-1)检测目的基因表达对细胞凋亡的影响。结果荧光显微镜观察到GFP表达;ELISA显示重组质粒转染组细胞培养液吸光度值为(2.53±0.05),高于其他研究组(P<0.05);细胞形态观察及Hoechst染色显示,AXN可诱导β-TC-6细胞凋亡;WST-1显示转染重组质粒的细胞组存活率为66.23%,高于其他研究组(P<0.05);Hoechst染色显示,经重组质粒转染的细胞凋亡减少。结论 2×Val2-hGLP-1的表达对胰岛β细胞凋亡具有一定抑制作用,为糖尿病基因治疗提供了相关试验研究基础。 展开更多
关键词 细胞凋亡 新型hglp-1基因 β-TC-6胰岛瘤细胞
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口服和静脉注射重组hGLP-1类似物对糖尿病大鼠的影响
3
作者 马卫列 丁航 +2 位作者 廖霞 李晓丽 张志珍 《广东医学院学报》 2010年第5期497-500,共4页
目的观察口服和静脉注射重组hGLP-1类似物对糖尿病大鼠血糖、胰岛素及胰岛组织病变的影响。方法用链脲佐菌素(STZ)建立SD大鼠糖尿病模型,随机分为模型组、灌胃组和注射组,每组10只,分别给予生理盐水灌胃、重组hGLP-1类似物多肽灌胃、hGL... 目的观察口服和静脉注射重组hGLP-1类似物对糖尿病大鼠血糖、胰岛素及胰岛组织病变的影响。方法用链脲佐菌素(STZ)建立SD大鼠糖尿病模型,随机分为模型组、灌胃组和注射组,每组10只,分别给予生理盐水灌胃、重组hGLP-1类似物多肽灌胃、hGLP-1类似物基因重组载体尾静脉注射,观察4周内各组大鼠血糖、胰岛素、胰岛组织病理变化。结果与模型组比较,灌胃组和注射组的血糖水平在给药后1～4周明显下降,而血清胰岛素水平显著升高(P<0.01)。灌胃组在各时间点的血糖、胰岛素水平与注射组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。HE染色发现,灌胃组和注射组大鼠的胰岛组织病变有所改善。结论重组hGLP-1类似物可降低糖尿病大鼠的血糖、提高血清胰岛素水平。 展开更多
关键词 hglp-1类似物 血糖 胰岛素
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人胰高血糖素样肽-1类似物基因克隆及真核表达载体构建 被引量：5
4
作者 李晓丽 刘振 张志珍 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第20期3046-3049,共4页
目的利用pIRES2-EGFP作为载体,构建人胰高血糖素样肽-1类似物基因(2×Val2-hGLP-1)重组表达载体。方法化学合成14个2×Val2-hGLP-1寡核苷酸片段,退火拼接成完整的2×Val2-hGLP-1类似物基因。退火片段克隆至pBSSK(+/-)载体中... 目的利用pIRES2-EGFP作为载体,构建人胰高血糖素样肽-1类似物基因(2×Val2-hGLP-1)重组表达载体。方法化学合成14个2×Val2-hGLP-1寡核苷酸片段,退火拼接成完整的2×Val2-hGLP-1类似物基因。退火片段克隆至pBSSK(+/-)载体中,经双酶切和测序鉴定,将目的片段插入pIRES2-EGFP中,构建pIRES2-EGFP/2×Val2-hGLP-1基因表达载体。重组载体经脂质体转染HEK-293A细胞后,Westernblot分析目的蛋白表达。结果双酶切鉴定和测序分析均证实,已成功构建pIRES2-EGFP/2×Val2-hGLP-1基因治疗载体。重组载体转染HEK-293A细胞,观察到绿色荧光蛋白表达,其转染效率达80%以上。Westernblot分析,检测到目的蛋白表达。结论pIRES2-EGFP/2×Val2-hGLP-1表达载体的成功构建,为Val2-hGLP-1基因功能研究及基因治疗提供了工具。 展开更多
关键词 Val2-hglp-1 克隆 基因治疗
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重组人胰高血糖素样肽-1的表达、纯化及其生物学活性 被引量：11
5
作者 张志珍 杨生生 毛积芳 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期5-8,共4页
为获得重组人胰高血糖素样肽 1[recombinanthumanglucagon likepeptide 1(7～ 37) ,rhGLP 1]并研究其生物学活性 ,采用亚磷酸二酯法合成hGLP 1cDNA的 6个寡核苷酸片段 ,拼接成完整的hGLP 1cDNA ,构建重组质粒pGEX hGLP 1,转化大肠杆菌B... 为获得重组人胰高血糖素样肽 1[recombinanthumanglucagon likepeptide 1(7～ 37) ,rhGLP 1]并研究其生物学活性 ,采用亚磷酸二酯法合成hGLP 1cDNA的 6个寡核苷酸片段 ,拼接成完整的hGLP 1cDNA ,构建重组质粒pGEX hGLP 1,转化大肠杆菌BL2 1(DE3)获得表达菌株 .高密度发酵培养的菌体超声破碎后 ,裂解液用Glutathione Sepharose 4B亲和层析纯化得到GST融合蛋白 .经CNBr裂解、QAE SepharoseFF柱层析和脱盐 ,得到纯度大于 90 %的rhGLP 1,质谱测定分子量结果与理论值一致 .生物学活性分析表明 ,rhGLP 1具有明显的降血糖活性 . 展开更多
关键词 重组人胰高血糖素样肽-1 融合蛋白 纯化 生物学活性 表达
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人胰高血糖素样肽-1类似物基因治疗对STZ诱导糖尿病大鼠的拮抗作用 被引量：3
6
作者 李晓丽 刘振 +1 位作者 马卫列 张志珍 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第13期1639-1641,共3页
目的观察人胰高血糖素样肽-1(hGLP-1)类似物基因对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠的拮抗作用。方法将SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组、空载体对照组及基因治疗拮抗组,每组10只。应用小剂量、多次给药的方式诱导糖尿病大鼠模... 目的观察人胰高血糖素样肽-1(hGLP-1)类似物基因对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠的拮抗作用。方法将SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组、空载体对照组及基因治疗拮抗组,每组10只。应用小剂量、多次给药的方式诱导糖尿病大鼠模型,观察hGLP-1类似物基因对大鼠血糖、血清胰岛素及胆固醇水平的影响。借助荧光显微镜观察绿色荧光蛋白在不同组织中的表达情况;采用免疫组化分析胰岛细胞中胰岛素的表达水平。结果与糖尿病模型组和空载体对照组比较,基因治疗拮抗组糖尿病大鼠血糖水平下降、血清胰岛素水平升高、血清胆固醇水平下降。胰岛素免疫组化分析证实,胰岛细胞中胰岛素得以表达,基因治疗可使受损的胰岛细胞功能恢复。结论 hGLP-1类似物基因治疗对STZ诱导的糖尿病症状具有拮抗作用,改善糖尿病大鼠血糖、血清胰岛素和血脂水平。 展开更多
关键词 糖尿病 人胰高血糖素样肽-1类似物基因 基因治疗 拮抗
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人胰高血糖素样肽-1串联体的克隆及其表达 被引量：2
7
作者 左翼 黄静 +2 位作者 卞慧芳 郁正艳 吴自荣 《华东师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期110-114,122,共6页
为大量获取人胰高血糖素样肽-1,利用基因串联的方法构建了人胰高血糖素样肽-1的一组串联体．将化学合成的人胰高血糖素样肽-1(human glucagon-like peptide-1,hGLP-1)cDNA基因插入质粒载体pET-32a(+)中,构建成硫氧还蛋白(thioredoxin)... 为大量获取人胰高血糖素样肽-1,利用基因串联的方法构建了人胰高血糖素样肽-1的一组串联体．将化学合成的人胰高血糖素样肽-1(human glucagon-like peptide-1,hGLP-1)cDNA基因插入质粒载体pET-32a(+)中,构建成硫氧还蛋白(thioredoxin)及六聚组氨酸(hexahisti- dine)与rhGLP-1的融合表达载体pET32-GLP-1．在此基础上将该融合基因序列进行同向串联,获得二串和三串的表达载体pET32-GLP-1-2和pET32-GLP-1-3．将该三种表达载体转化大肠杆菌BLR(DE3)后获得相应的基因工程菌．结果表明：三种基因工程菌经发酵和IPTG诱导后均正确表达目的蛋白,目的蛋白表达量随着基因串数的增加而得到一定提高,重组蛋白经分离纯化后进行生物学活性测试具有明显的降低血糖浓度作用． 展开更多
关键词 胰高血糖素样肽-1 串联体 表达
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表达人胰高血糖素样肽前药工程菌遗传稳定性 被引量：3
8
作者 周颖 马雪 +3 位作者 侯征 薛小燕 陈瑛瑛 罗晓星 《生物加工过程》 CAS CSCD 2010年第2期61-64,共4页
通过传代培养的方法,研究高表达重组人胰高血糖素样肽前药(Pro-rhGLPs)的工程菌E.coliBL21(DE3)/pET41a(+)-hGLPs的遗传稳定性,观察菌体和菌落形态,比较在有无选择压力下的质粒稳定性,酶切和测序鉴定重组基因片断的正确性,SDS-PAGE电泳... 通过传代培养的方法,研究高表达重组人胰高血糖素样肽前药(Pro-rhGLPs)的工程菌E.coliBL21(DE3)/pET41a(+)-hGLPs的遗传稳定性,观察菌体和菌落形态,比较在有无选择压力下的质粒稳定性,酶切和测序鉴定重组基因片断的正确性,SDS-PAGE电泳证实重组蛋白质的表达量的稳定性,在C57BL/6小鼠上进行葡萄糖耐量实验检测重组蛋白生物学活性。结果显示:此工程菌连续传代过程中,保持大肠杆菌的典型特征,各代质粒的酶切鉴定和测序正确,重组蛋白表达水平及生物活性也无显著差异。因此,工程菌E.coliBL21(DE3)/pET41a(+)-hGLPs具有良好的遗传稳定性。 展开更多
关键词 人胰高血糖素样肽 遗传稳定性 前药
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