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人胶质细胞源性神经营养因子(hGDNF)成熟肽基因的克隆及原核表达
1
作者 王金志 缪竞诚 +2 位作者 盛伟华 谢宇锋 杨吉成 《苏州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2005年第1期34-37,共4页
目的分离人胶质细胞源性神经营养因子(hGDNF)成熟肽基因,并在E.coil中获得表达。方法以人的白细胞基因组DNA为模板,合成特异引物,采用PCR技术分离得到hGDNF成熟肽基因,并构建表达载体pET-21a(+)-hGDNF,转化大肠杆菌BL21(DE3),分别用IPT... 目的分离人胶质细胞源性神经营养因子(hGDNF)成熟肽基因,并在E.coil中获得表达。方法以人的白细胞基因组DNA为模板,合成特异引物,采用PCR技术分离得到hGDNF成熟肽基因,并构建表达载体pET-21a(+)-hGDNF,转化大肠杆菌BL21(DE3),分别用IPTG和乳糖诱导表达,SDS-PAGE电泳检测hGDNF蛋白表达。结果PCR扩增出了400bp的DNA片段,构建的表达载体pET-21a(+)-hGDNF经酶切、PCR鉴定均出现400bp左右的条带,测序结果正确,用IPTG或乳糖诱导转化菌均有15kd大小的目的条带,表达的目的蛋白占菌体总蛋白30%以上,以包涵体形式存在。结论克隆得到人GDNF成熟肽基因并在大肠杆菌中得到了高效表达。 展开更多
关键词 hgdnf 基因表达
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人GDNF在原代培养的大鼠成纤维细胞中的表达 被引量：3
2
作者 段德义 杨慧 +4 位作者 赵春礼 于凤山 李淑婷 鲁强 徐群渊 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期101-104,T003,共5页
目的　研究人脑胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)在治疗神经系统疾病中的作用 ,克隆其前体蛋白 c DNA序列 ,并用于真核细胞表达。　方法　提取我国自建的脑胶质瘤 BT32 5细胞总 RNA,用逆转录 PCR法扩增 GDNF全长 c DNA并构建其真核表达... 目的　研究人脑胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)在治疗神经系统疾病中的作用 ,克隆其前体蛋白 c DNA序列 ,并用于真核细胞表达。　方法　提取我国自建的脑胶质瘤 BT32 5细胞总 RNA,用逆转录 PCR法扩增 GDNF全长 c DNA并构建其真核表达载体 p CI- neo- GDNF,然后转染原代培养的成纤维细胞 ,免疫组织化学及原位杂交检测 GDNF在细胞中的表达。　结果　从国人脑胶质瘤细胞中扩增到 5 5 8bp的 GDNF全长 c DNA,并在GDNF转基因原代成纤维细胞中检测到重组 GDNF的转录和表达。　结论　克隆到的 GDNF全长 c DNA片段 ,可用于真核细胞表达 ;其转基因细胞脑内移植后应能治疗包括帕金森病在内的神经系统变性疾病。 展开更多
关键词 胶质细胞源性神经营养因子 GDNF 逆转录-聚合酶链反应 RT-PCR 基因重组表达 大鼠
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