人粒系集落刺激因子(hG-CSF)cDNA于P_RP_L启动子作用下在大肠杆菌中的表达

1

作者 贺福初 邢桂春 +3 位作者 瞿成奎 吴祖泽 薛惠华 刘福陆 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 1993年第2期149-153,共5页

hG—CSF cDNA在天然状态下很难在大肠杆菌中表达。本文以作者克隆的高活性形式hG—CSF cDNA为模板,经PCR扩增出含hG—CSF信号肽中丙氨酸(Ala)及成熟型全部氨基酸编码序列的cDNA片段,于NcoⅠ、BamHⅠ位点克隆于原核表达载体PJLA602中,用... hG—CSF cDNA在天然状态下很难在大肠杆菌中表达。本文以作者克隆的高活性形式hG—CSF cDNA为模板,经PCR扩增出含hG—CSF信号肽中丙氨酸(Ala)及成熟型全部氨基酸编码序列的cDNA片段,于NcoⅠ、BamHⅠ位点克隆于原核表达载体PJLA602中,用高活性hG—CSF特异探针菌落原位杂交筛选出阳性克隆。此克隆hG—CSF cDNA在λ噬菌体 P_RP_L串联启动子和大肠杆菌atpE翻译起始区(TIR)共同作用下,阳性菌株热诱导表达后经小鼠骨髓细胞体外CFU-G测试表明,表达产物具明显的粒细胞集落刺激活性。 展开更多

关键词 人粒系集落刺激因子 聚合酶链反应 CDNA克隆 基因表达 粒系集落形成单位 P_RP_L启动子 翻译起始区

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▽5-人粒系集落刺激因子(▽5-hG-CSF)的cDNA克隆、序列测定与表达

2

作者 贺福初 邢桂春 +3 位作者 瞿成奎 刘福陆 郭学敏 吳祖泽 《生物化学杂志》 CSCD 1993年第3期293-298,共6页

从LPS刺激的正常中国人外周血单核细胞中提取mRNA,经反转录(RT)-PCR扩增出不含信号肽和成熟型N端5氨基酸(V5-hG-CSF)的cDNA片段,酶切后组入大肠杆菌表达载体pJLA602中。序列测定表明,克隆片段与国外报道的高活性hG-CSF cDNA序列一致。... 从LPS刺激的正常中国人外周血单核细胞中提取mRNA,经反转录(RT)-PCR扩增出不含信号肽和成熟型N端5氨基酸(V5-hG-CSF)的cDNA片段,酶切后组入大肠杆菌表达载体pJLA602中。序列测定表明,克隆片段与国外报道的高活性hG-CSF cDNA序列一致。重组子经诱导表达、小鼠骨髓细胞体外CFU-G测试表明,表达产物具明显的粒细胞集落刺激活性。 展开更多

关键词 人粒系集落 刺激因子 CDNA 克隆

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启动子Ptac与PsbA在鱼腥藻7120中表达hG-CSF的效率比较 被引量：3

3

作者 宁文艳 吴先敏 +2 位作者 王春梅 陈伟东 施定基 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2014年第3期36-41,共6页

为了比较外源性启动子Ptac与内源性启动子PsbA在鱼腥藻7120中表达外源基因时的效率,构建了分别含Ptac和PsbA两种启动子的穿梭表达载体pRL-PsbA-GCSF、pRL-Tac-GCSF;利用三亲结合转移法转化鱼腥藻7120,利用抗生素筛选,通过质粒提取和PCR... 为了比较外源性启动子Ptac与内源性启动子PsbA在鱼腥藻7120中表达外源基因时的效率,构建了分别含Ptac和PsbA两种启动子的穿梭表达载体pRL-PsbA-GCSF、pRL-Tac-GCSF;利用三亲结合转移法转化鱼腥藻7120,利用抗生素筛选,通过质粒提取和PCR方法鉴定,获得了分别由2种启动子驱动表达hG-CSF的转基因蓝藻,转基因藻中目的基因以质粒形式存在;利用半定量RT-PCR方法对2种转基因藻的hG-CSF转录水平进行比较,发现PsbA启动子驱动效率与Ptac启动子没有明显差异;利用ELISA方法比较hG-CSF蛋白表达量,发现PsbA启动的蓝藻中hG-CSF表达量是Ptac诱导条件下表达量的1.17倍。 展开更多

关键词 鱼腥藻7120 人粒细胞集落刺激因子 PTAC PSBA 表达

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T7 RNA聚合酶基因表达系统在鱼腥藻7120中构建及hG-CSF的表达 被引量：1

4

作者 谢雪晴 田钰琪 +2 位作者 田敬欢 宁文艳 王春梅 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期2467-2477,共11页

外源基因的表达效率低是蓝藻基因工程发展的瓶颈之一,T7 RNA聚合酶表达系统实现了大肠杆菌中外源基因的高效表达,蓝藻与大肠杆菌同为革兰氏阴性菌,具有较高的遗传同源性,在蓝藻中构建T7 RNA聚合酶表达系统有可能提高外源基因在蓝藻中的... 外源基因的表达效率低是蓝藻基因工程发展的瓶颈之一,T7 RNA聚合酶表达系统实现了大肠杆菌中外源基因的高效表达,蓝藻与大肠杆菌同为革兰氏阴性菌,具有较高的遗传同源性,在蓝藻中构建T7 RNA聚合酶表达系统有可能提高外源基因在蓝藻中的表达效率。为了在鱼腥藻7120中构建T7 RNA聚合酶表达系统,采用重叠延伸PCR技术和酶切连接等方法构建能够表达T7 RNA聚合酶的定点整合载体pEASY-T1-F1-TacT7RNAPCmR-F2以及由T7启动子驱动hG-CSF基因表达的穿梭表达载体pRL-T7-hG-CSF;采用电击转化法将定点整合载体导入野生型鱼腥藻中,通过三亲接合的方法将穿梭表达载体转入已定点整合T7 RNA聚合酶的转基因鱼腥藻中。利用PCR技术鉴定外源基因在蓝藻中的存在;RT-PCR方法检测外源基因在蓝藻中的转录情况;Western blotting实验检测外源基因在蓝藻中的蛋白表达情况。结果表明两种载体构建成功,T7 RNA聚合酶基因和hG-CSF基因被转入鱼腥藻中,两个基因均在藻中表达,T7 RNA聚合酶表达系统在鱼腥藻中构建成功,与传统蓝藻表达系统相比,文中在鱼腥藻中构建的T7表达系统使hG-CSF基因的表达量提高2倍。该表达系统将为蓝藻基因工程的应用提供更优的工具,将促进蓝藻作为底盘细胞在合成生物学等领域的发展。 展开更多

关键词 T7 RNA聚合酶 T7启动子 鱼腥藻Anabaena sp.PCC 7120 人粒细胞集落刺激因子 电击转化 三亲结合

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hG-CSF cDNA 5′端序列修饰对其在原核细胞中表达的影响 被引量：2

5

作者 瞿成奎 贺福初 +1 位作者 刘福陆 吴祖泽 《中国科学（B辑）》 CSCD 北大核心 1993年第9期955-959,共5页

本文设计并构建了人粒细胞集落刺激因子(hG-CSF)三种cDNA突变体表达质粒,对影响hG-CSF cDNA在大肠杆菌中表达效率的因素进行了探讨。指出cDNA 5′端起始密码子ATG的上、下游序列对其表达有显著影响。不同因素影响hG-CSF cDNA在大肠杆菌... 本文设计并构建了人粒细胞集落刺激因子(hG-CSF)三种cDNA突变体表达质粒,对影响hG-CSF cDNA在大肠杆菌中表达效率的因素进行了探讨。指出cDNA 5′端起始密码子ATG的上、下游序列对其表达有显著影响。不同因素影响hG-CSF cDNA在大肠杆菌中表达效率的主要调控环节在转录水平;翻译水平的差别亦可能与其表达效率的不同有一定关系。 展开更多

关键词 CDNA 突变体 基因表达 hg-csf

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大肠杆菌表达重组人粒细胞集落刺激因子工程菌DH5α的发酵工艺研究 被引量：6

6

作者 胡志明 于琳 +3 位作者 刁志宏 郭志兵 车小燕 王小宁 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 1999年第2期55-57,共3页

研究大肠杆菌表达重组人粒细胞集落刺激；因子（ｒｈＧ－ＣＳＦ）工程菌ＤＨ５α的发酵工艺。方法：采用发酵罐发酵，对影响工程菌生长和目标蛋白的表达条件如：工程菌发酵的培养基配方、ｐＨ值、诱导时间、分批补加营养物质等进行了优... 研究大肠杆菌表达重组人粒细胞集落刺激；因子（ｒｈＧ－ＣＳＦ）工程菌ＤＨ５α的发酵工艺。方法：采用发酵罐发酵，对影响工程菌生长和目标蛋白的表达条件如：工程菌发酵的培养基配方、ｐＨ值、诱导时间、分批补加营养物质等进行了优化。结果：根据优化的条件，２０Ｌ罐发酵工程菌，菌体收得量可达湿重１５．６ｇ／Ｌ。目标蛋白表达量约占菌体总蛋白的３０％。结论：此发酵工艺可以提高ｒｈＧ－ＣＳＦ工程菌菌体的得率和目标蛋白的表达。 展开更多

关键词 发酵 大肠杆菌 hg-csf 工程菌DH5α

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表达人粒细胞集落刺激因子大肠杆菌的优化 被引量：3

7

作者 马骊 方向东 +1 位作者 高基民 王小宁 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 1999年第2期75-77,共3页

通过对hG CSF重组基因表达效率和工程菌遗传稳定性的比较 ,建立的一种全新的双质粒双重诱导的原核高效表达体系。构建了pGP1 2 pJGW1 hGCSF DH5α工程菌 ,经 42℃热诱导 ,hG CSF的表达率达 2 7%以上 ,经典质粒遗传稳定性实验 (140代 )... 通过对hG CSF重组基因表达效率和工程菌遗传稳定性的比较 ,建立的一种全新的双质粒双重诱导的原核高效表达体系。构建了pGP1 2 pJGW1 hGCSF DH5α工程菌 ,经 42℃热诱导 ,hG CSF的表达率达 2 7%以上 ,经典质粒遗传稳定性实验 (140代 )证实 ,具有良好的遗传稳定性。 展开更多

关键词 原核表达 稳定性 hg-csf

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人粒细胞集落刺激因子cDNA的克隆与表达 被引量：1

8

作者 朱圣庚 秦树林 +4 位作者 王爱霞 肖志壮 郭振泉 黄仪秀 张磊 《北京大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1993年第6期675-679,共5页

用脂多糖诱导正常人外周血单核细胞使产生粒细胞集落刺激因子。从诱导细胞中提取出总RNA,以特异引物经逆转录PCR扩增出粒细胞集落刺激因子mRNA的cDNA,将其插入经改造的分泌型表达载体pIN-omp A,并转化受体菌E.coli。克隆的cDNA通过限制... 用脂多糖诱导正常人外周血单核细胞使产生粒细胞集落刺激因子。从诱导细胞中提取出总RNA,以特异引物经逆转录PCR扩增出粒细胞集落刺激因子mRNA的cDNA,将其插入经改造的分泌型表达载体pIN-omp A,并转化受体菌E.coli。克隆的cDNA通过限制性酶双酶切和3′端、5′端及中间序列探针分子杂交鉴定,结果与预期一致。表达质粒在大肠杆菌中经IPTG诱导,粒细胞集落刺激因子被分泌到细菌的周质中。产物提取后,用双单抗夹心ELISA法检测具有粒细胞集落刺激因子的免疫活性。 展开更多

关键词 CDNA hg-csf 无性系

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格拉诺赛特与化疗药物联合动员自体外周血干细胞的临床研究 被引量：1

9

作者 艾斌 石远凯 +6 位作者 杨建良 何小慧 周生余 韩晓红 刘鹏 周爱萍 张长弓 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期635-637,共3页

目的:观察格拉诺赛特联合化疗对恶性实体瘤患者自体外周血造血干细胞(APBSC)的动员效果。方法:32例患者进入本研究,其中恶性淋巴瘤18例,乳腺癌11例,生殖细胞肿瘤3例。自化疗后白细胞降至最低点时开始皮下注射格拉诺赛特150～250μg/day1... 目的:观察格拉诺赛特联合化疗对恶性实体瘤患者自体外周血造血干细胞(APBSC)的动员效果。方法:32例患者进入本研究,其中恶性淋巴瘤18例,乳腺癌11例,生殖细胞肿瘤3例。自化疗后白细胞降至最低点时开始皮下注射格拉诺赛特150～250μg/day1,至APBSC采集结束前一天,白细胞恢复到5.0×109/L以上时开始连日采集APBSC;当累计采集的单核细胞≥5.0×108/kg或CD34+细胞≥2.0×106/kg时停止采集。结果:开始给予格拉诺赛特及开始采集APBSC的中位时间分别为化疗开始后的第12(5～15)天和第15(13～20)天,格拉诺赛特的中位给药次数为5(3～12)次,全组患者平均采集到的单核细胞及CD34+细胞总数分别为5.76±2.05×108/kg和15.58±10.36×106/kg,平均粒-单集落形成单位21.01±20.75×104/kg。动员过程中不良反应轻微,此后30例接受移植者全部获得造血功能重建。结论:格拉诺赛特联合化疗是一种安全、有效的APBSC的动员方法,国人采用150～250μg/day1的剂量即可得到满意的动员效果。 展开更多

关键词 Rhg-csf 实体瘤 自体外周血干细胞动员

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重组人粒细胞集落刺激因子在急性淋巴细胞白血病中的临床观察 被引量：3

10

作者 李英 徐功立 +1 位作者 马兰英 于桂兰 《白血病》 1995年第2期113-114,共2页

重组人粒细胞集落刺激因子在急性淋巴细胞白血病中的临床观察李英，徐功立，马兰英，于桂兰骨髓抑制性联合化疗，是治疗急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）的主要方法，它使ＡＬＬ患者长期生存乃至治愈成为可能。但联合化疗常发生骨髓抑制等... 重组人粒细胞集落刺激因子在急性淋巴细胞白血病中的临床观察李英，徐功立，马兰英，于桂兰骨髓抑制性联合化疗，是治疗急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）的主要方法，它使ＡＬＬ患者长期生存乃至治愈成为可能。但联合化疗常发生骨髓抑制等副作用，使粒细胞缺乏，从而限制进一... 展开更多

关键词 急性 淋巴细胞 白血病 γhg-csf 药物疗法

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人粒细胞集落刺激因子（hG－CSF）cDNA3′－UTR对其表达的影响

11

作者 瞿成奎 贺福初 +2 位作者 徐黎 魏汉东 吴祖泽 《生物化学杂志》 CSCD 1995年第3期243-246,共4页

利用人粒细胞集落刺激因子（ｈＧ－ＣＳＦ）ｃＤＮＡ３′端非翻译区（３′－ＵＴＲ）中存在的ＤｒａⅠ酶切位点，通过部分酶切与完全酶切，删除３′－ＵＴＲ不同长度，构建了四种ｈＧ－ＣＳＦｃＤＮＡ瞬时重组表达质粒。转染ＣＯＳ－７... 利用人粒细胞集落刺激因子（ｈＧ－ＣＳＦ）ｃＤＮＡ３′端非翻译区（３′－ＵＴＲ）中存在的ＤｒａⅠ酶切位点，通过部分酶切与完全酶切，删除３′－ＵＴＲ不同长度，构建了四种ｈＧ－ＣＳＦｃＤＮＡ瞬时重组表达质粒。转染ＣＯＳ－７细胞后，生物活性测定结果提示，ｈＧ－ＣＳＦｃＤＮＡ３′－ＵＴＲ对其表达起负调控作用，其关键性序列位于紧接终止密码子ＴＧＡ下游的６５ｂｐ范围内，３′－ＵＴＲ对ｈＧ－ＣＳＦｃＤＮＡ表达的影响与转录水平的差别有一定关系。 展开更多

关键词 hg-csf CDNA 3'-UTR 粒细胞 集落刺激因子

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人粒细胞集落刺激因子cDNA的克隆及其在CHO细胞的表达

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作者 王江方 张学光 +3 位作者 刘培岭 张雁云 顾宗江 HalletMM 《苏州医学院学报》 1998年第9期894-896,共3页

该文以PKCR6质粒为载体，构建了人体细胞集落刺激因子（hG－CSF）的次级克隆PKCR6－G－CSF，并成功转染CHO细胞，获得高表达、稳定分泌人G－CSF的转基因细胞，为扩大规模基因工程生产重组细胞因子奠定了一定的基础。

关键词 CHO细胞 hg-csf CDNA 克隆 PKCR6质粒

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人血清白蛋白和粒细胞集落刺激因子融合蛋白的克隆表达 被引量：4

13

作者 李道远 邹文艺 +1 位作者 范清林 宋礼华 《生物学杂志》 CAS CSCD 2009年第6期34-36,共3页

构建重组人血清白蛋白粒细胞集落刺激因子(HSA-hG-CSF)表达载体,用毕赤酵母表达该重组蛋白。PCR扩增出人血清白蛋白基因(HSA)和粒细胞集落刺激因子基因(hG-CSF),GGGGS作为小肽接头,采用重叠PCR的方法将HSA和hG-CSF拼接起来,与质粒载体pP... 构建重组人血清白蛋白粒细胞集落刺激因子(HSA-hG-CSF)表达载体,用毕赤酵母表达该重组蛋白。PCR扩增出人血清白蛋白基因(HSA)和粒细胞集落刺激因子基因(hG-CSF),GGGGS作为小肽接头,采用重叠PCR的方法将HSA和hG-CSF拼接起来,与质粒载体pPIC9K连接,转化大肠杆菌感受态细胞DH-5α。抽提质粒,用SalI酶切重组质粒,电转化法导入毕赤酵母SMD1168中,通过表型筛选和诱导表达实验得到蛋白表达工程菌。Western-blotting分析表明融合蛋白具有粒细胞集落刺激因子免疫原性。NFS-60细胞测活实验分析表明体外活性达到约4.0×107IU/mg。 展开更多

关键词 HSA-hg-csf 融合蛋白 毕赤酵母 表达

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人粒细胞集落刺激因子基因重组及在E.coli中的表达和鉴定 被引量：5

14

作者 方向东 马骊 +2 位作者 高基民 黄树其 王小宁 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 1998年第1期1-5,共5页

将RT－PCR扩增的人粒细胞集落刺激因子（hG－CSF）结构基因与表达载体pJGW1重组，转化含有pGP1－2质粒的E.coliDH5α，进行温度诱导表达。经SDS－PAGE分析，rhG－CSF表达量占菌体总蛋白量的30％以上。将其复性，经CM－52FF离子交换层析... 将RT－PCR扩增的人粒细胞集落刺激因子（hG－CSF）结构基因与表达载体pJGW1重组，转化含有pGP1－2质粒的E.coliDH5α，进行温度诱导表达。经SDS－PAGE分析，rhG－CSF表达量占菌体总蛋白量的30％以上。将其复性，经CM－52FF离子交换层析纯化，纯化后的rhG－CSF（纯度＞98％）经SDS－PAGE测定分子量约为19kD；经胰酶裂解、反相HPLC分析肽谱具有8条特异肽段；等电聚焦测定PI值约为5．8；免疫印迹实验证实其与标准hG－CSF具有相同的抗原反应特异性；NH2-末端氨基酸分析与文献报道一致，采用小鼠白血病细胞株NFS－60测定活性为I×108IU／mg。 展开更多

关键词 大肠杆菌 表达 hG-SCF 基因重组 鉴定 肿瘤

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人高活性粒系集落刺激因子的cDNA克隆与序列测定 被引量：1

15

作者 贺福初 邢桂春 +3 位作者 瞿成奎 刘福陆 郭学敏 吴祖泽 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1992年第7期8-11,共4页

关键词 单核细胞 外周血 测定 人体 细胞

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(△Ala)-人粒系集落刺激因子(hGCSF)在大肠杆菌中的表达 被引量：1

16

作者 贺福初 邢桂春 +3 位作者 瞿成奎 吴祖泽 薛惠华 刘福陆 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1992年第12期15-17,共3页

关键词 大肠杆菌 粒细胞减少症

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人G-CSF重组表达系统稳定性的实验研究 被引量：2

17

作者 方向东 黄树其 +5 位作者 周俊岭 马骊 刁志宏 陈泽洪 周明乾 王小宁 《第一军医大学学报》 CSCD 1997年第4期314-316,共3页

将构建好的人G－CSF表达工程菌（pJGW1-hGCSP／pGP1－2／DH5α），连续培养140代，其抗生素抗性无改变，重组质粒DNA酶切鉴定及目的蛋白表达率与原始苗基本一致。

关键词 基因重组 稳定性 hg-csf

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人G-CSF新型高效表达克隆的构建与鉴定

18

作者 方向东 高基民 +2 位作者 林来兴妹 马骊 王小宁 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第5期375-377,共3页

利用ＲＴＰＣＲ技术，自人的脾脏单核细胞ｍＲＮＡ扩增出人粒细胞集落刺激因子（ｈＧＣＳＦ）结构基因，ＤＮＡ序列分析表明与天然ｈＧＣＳＦ一致。将其克隆于表达载体ｐＪＧＷ１中，在大肠杆菌中进行诱导表达研究。结果表明：ｈ... 利用ＲＴＰＣＲ技术，自人的脾脏单核细胞ｍＲＮＡ扩增出人粒细胞集落刺激因子（ｈＧＣＳＦ）结构基因，ＤＮＡ序列分析表明与天然ｈＧＣＳＦ一致。将其克隆于表达载体ｐＪＧＷ１中，在大肠杆菌中进行诱导表达研究。结果表明：ｈＧＣＳＦ重组蛋白表达率在２５％以上，并具有与天然ｈＧＣＳＦ一致的生物学活性。 展开更多

关键词 G-CSF RT-PCR 基因表达 构建 鉴定 克隆

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冻存对复溶后人粒细胞刺激因子国家标准品生物学活性的影响

19

作者 朱留强 史新昌 +5 位作者 刘兰 裴德宁 于雷 秦玺 周勇 王军志 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期1093-1096,共4页

目的探讨冻存对复溶后人粒细胞刺激因子(human granulocyte colony-stimulating factor,hG-CSF)国家标准品生物学活性的影响,为hG-CSF国家标准品的使用提供参考。方法依据《中国药典》三部(2020版)通则3525测定标准品的生物学活性;将复... 目的探讨冻存对复溶后人粒细胞刺激因子(human granulocyte colony-stimulating factor,hG-CSF)国家标准品生物学活性的影响,为hG-CSF国家标准品的使用提供参考。方法依据《中国药典》三部(2020版)通则3525测定标准品的生物学活性;将复溶后的hG-CSF国家标准品分装后置于-80、-40、-20℃保存,分别于第1、2、3、5和6个月取样检测生物学活性,用临用前复溶的标准品定量-80℃存放不同时间的标准品,以-80℃存放的样品为100%活性对照品定量其余样品的相对生物学活性。结果热加速稳定试验拟合Eyrlng方程为:ln{k(t)}=6.75-3772.20/T+ln(T),R2=0.969,预测hG-CSF国家标准品于-80℃贮存时,生物学活性衰减5%约需93.4个月;-80℃冻存的复溶标准品生物学活性值下降约24%。结论hG-CSF国家标准品复溶分装后于-80℃可稳定保存半年以上。但冻融会引起活性值下降超过20%,因此不建议复溶后分装储存使用。 展开更多

关键词 复溶 人粒细胞刺激因子 国家标准品 生物学活性

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人粒细胞集落刺激因子在昆虫细胞中的表达

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作者 陈红星 秦浚川 +2 位作者 朱洁 藏宇辉 焦瑞卿 《南京大学学报（自然科学版）》 CSCD 1996年第4期616-620,共5页

利用苜蓿尺蠖核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）带β－Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ基因标志的非融合蛋白基因转移载体ｐＢＢ成功地构了重组杆状病毒ＡｃＮＰＶ－Ｇ－ＣＳＦ。在感染重组病毒的草地夜蛾细胞中ｈＧ－ＣＳＦ得到了高效表达。感... 利用苜蓿尺蠖核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）带β－Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ基因标志的非融合蛋白基因转移载体ｐＢＢ成功地构了重组杆状病毒ＡｃＮＰＶ－Ｇ－ＣＳＦ。在感染重组病毒的草地夜蛾细胞中ｈＧ－ＣＳＦ得到了高效表达。感染后的ＳＦ９、Ｈ５细胞培养液均能刺激小鼠骨髓细胞在体外形成典型的粒细胞集落，表达水平分别为１．５×１０６ＣＦＵ／ｍｌ、１．９×１０６ＣＦＵ／ｍｌ。表达产物由Ｗｅｓｔ－ｅｒｎＢｌｏｔ检出，其分子量约为１９ＫＤａ。 展开更多

关键词 粒细胞 集落刺激因子 重组杆状病毒 昆虫 细胞

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