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融合蛋白hCGβ-hC3d3增强人免疫活性细胞对hCGβ抗原的免疫原性
1
作者 李华萍 李大金 +1 位作者 贺晓菊 袁敏敏 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期878-882,共5页
目的:探讨分子佐剂hC3d3与hCGβ的融合蛋白hCGβ-hC3d3作用于人外周血单个核细胞(PBMC)对hCGβ抗原的免疫原性的影响.方法:对人PBMC进行细胞分离纯化,分别用1、10、100 nmol/L的hCGβ、hCGβ-hC3d3及PWM等抗原体外作用于B细胞、B+T细胞... 目的:探讨分子佐剂hC3d3与hCGβ的融合蛋白hCGβ-hC3d3作用于人外周血单个核细胞(PBMC)对hCGβ抗原的免疫原性的影响.方法:对人PBMC进行细胞分离纯化,分别用1、10、100 nmol/L的hCGβ、hCGβ-hC3d3及PWM等抗原体外作用于B细胞、B+T细胞、PBMC和Raji细胞8～12天,用3H-TdR掺入法了解不同抗原刺激后各组细胞增殖情况;用ELISA检测培养上清中总免疫球蛋白(Ig)水平;而ELISPOT可测定各种抗原刺激后Ig分泌细胞数量.结果:用不同浓度hCGβ、hCGβ-hC3d3及PWM作用于B细胞、B+T细胞、PBMC、Raji细胞8～12天后,3H-TdR掺入法分析显示:与hCGβ处理组相比,融合蛋白hCGβ-hC3d3能使各组细胞增殖明显升高,且呈浓度依赖性;100 nmol/L hCGβ-hC3d3与前3组细胞共培养上清中总Ig的含量分别为hCGβ刺激组的4倍、10倍和10.85倍,且呈浓度依赖性.ELISPOT结果与培养上清液检测结果类似,经与hCGβ-hC3d3共培养后Ig生成细胞较hCGβ组明显增加.结论:融合蛋白hCGβ-hC3d3明显增强人免疫活性细胞抗hCGβ的免疫原性. 展开更多
关键词 HCGΒ hc3d3 外周血单个核细胞 免疫活性细胞
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人源分子佐剂hC3d3促进人免疫活性细胞协同刺激分子表达及对hCGβ抗原的反应性
2
作者 李华萍 李大金 +1 位作者 朱影 袁敏敏 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1023-1027,共5页
目的探讨分子佐剂hC3d3与hCGβ的融合蛋白hCGβ-hC3d3对人外周血单个核细胞(PBMC)中的B细胞与T细胞表面协同刺激分子表达及对hCGβ抗原反应性的影响。方法从人肝细胞cDNA文库克隆hC3d基因片段;构建pCI-gs-signal-6His-hCGβ及pCI-gs-sig... 目的探讨分子佐剂hC3d3与hCGβ的融合蛋白hCGβ-hC3d3对人外周血单个核细胞(PBMC)中的B细胞与T细胞表面协同刺激分子表达及对hCGβ抗原反应性的影响。方法从人肝细胞cDNA文库克隆hC3d基因片段;构建pCI-gs-signal-6His-hCGβ及pCI-gs-signal-6His-hCGβ-hC3d3真核表达质粒,表达和纯化重组蛋白抗原hCGβ及hCGβ-hC3d3融合蛋白。实验分组:将B细胞、B+T细胞组或PBMC,分别应用hCGβ、hCGβ-hC3d3或美洲商陆(PWM)等抗原进行体外处理48 h。用流式细胞术分析培养后的上述淋巴细胞表面的CD80、CD86、CD154、CD25等协同刺激分子的表达;用ELISA检测培养上清中IL-2的含量。结果本研究成功克隆了hC3d基因,构建了真核表达质粒pCI-gs-signal- 6His-hCGβ及pCI-gs-signal-6His-hCGβ-hC3d3;经转染CHO细胞,获得了目的蛋白高效分泌表达。经鉴定及纯化成功获得了较高纯度的目的蛋白hCGβ及hCGβ-hC3d3。hCGβ-hC3d3蛋白能够显著上调B细胞表面CD80、CD86分子的表达,尤其是CD86分子的表达(P<0．01);能明显增强T细胞表面CD154、CD25分子的表达(P<0．05)。hCGβ-hC3d3蛋白提高B细胞抗原提呈能力及T细胞活化后分泌IL-2的能力(P<0．05)。结论人源分子佐剂hC3d3明显促进人免疫活性细胞协同刺激分子表达及对hCGβ抗原的反应性。 展开更多
关键词 HCGΒ hc3d3 免疫活性细胞 协同刺激分子 白细胞介素2
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人源分子佐剂C3d3促进人免疫活性细胞抗绒毛膜促性腺激素β亚基的免疫效应
3
作者 李华萍 李大金 +1 位作者 贺晓菊 袁敏敏 《上海医学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期273-277,共5页
目的探讨3个拷贝人源分子佐剂C3d(hC3d3)与绒毛膜促性腺激素β亚基(hCGβ)的融合蛋白hCGβ-hC3d3作用于人外周血单个核细胞(PBMC)对hCGβ抗原免疫原性的影响。方法用L-亮氨酸甲基酯(L- LME)或B细胞磁珠阴性分离试剂盒对人PBMC进行细胞... 目的探讨3个拷贝人源分子佐剂C3d(hC3d3)与绒毛膜促性腺激素β亚基(hCGβ)的融合蛋白hCGβ-hC3d3作用于人外周血单个核细胞(PBMC)对hCGβ抗原免疫原性的影响。方法用L-亮氨酸甲基酯(L- LME)或B细胞磁珠阴性分离试剂盒对人PBMC进行细胞分离纯化;实验分成B细胞、B+T细胞、PBMC和Raji细胞4组。分别应用1、10及100 nmol／L不同浓度的hCGβ、hCGβ-hC3d3及美洲商陆(PWM)等抗原体外作用于以上细胞10～12 d,采用氚标记的胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法了解不同抗原刺激后各组细胞的增殖情况;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养上清液中抗hCGβ抗体的分泌水平;而酶联免疫斑点法(ELISpot)可测定各种抗原刺激后特异抗体分泌的细胞数量。结果与hCGβ相比,融合蛋白hCGβ-hC3d3能使各组细胞增殖明显升高,且呈浓度依赖性。应用100 nmol／L的不同抗原培养12 d后,取培养上清液进行ELISA检测,经hCGβ及PWM刺激后,上清液中均未检测到抗hCGβ特异性抗体;经hCGβ-hC3d3培养后则在B+T细胞及PBMC组中见低水平抗hCGβ抗体。采用ELISpot法分析抗hCGβ特异性抗体生成细胞,经hCGβ刺激的细胞仅有数个散在的阳性细胞;而经hCGβ-hC3d3刺激后,阳性细胞明显增多(P<0．05)。结论hC3d3明显促进人免疫活性细胞对hCGβ抗原的免疫原性。 展开更多
关键词 绒毛膜促性腺激素β亚基 人源分子佐剂C3d 免疫活性细胞
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