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hBMP-3m基因在烟草中的表达
1
作者 高书颖 范三红 +2 位作者 郭蔼光 朱帮福 陈苏民 《西北植物学报》 CAS CSCD 2003年第4期577-580,共4页
PCR扩增人骨形成蛋白-3成熟肽 hBMP-3m cDNA,纯化后连接入pUC19质粒,构建克隆载体pUC19B3m;用EcoR 和Hind 酶解pUC19B3m和pJIT163,将目的片段插入pJIT163,构建中间载体pJIT163-B3m;再构建植物表达载体pCAMBIA1300-B3m.利用冻融法将质粒p... PCR扩增人骨形成蛋白-3成熟肽 hBMP-3m cDNA,纯化后连接入pUC19质粒,构建克隆载体pUC19B3m;用EcoR 和Hind 酶解pUC19B3m和pJIT163,将目的片段插入pJIT163,构建中间载体pJIT163-B3m;再构建植物表达载体pCAMBIA1300-B3m.利用冻融法将质粒pCAMBIA-hBMP3m转入根癌农杆菌 A-grobacteriumtumefaciens LBA4404.以烟草 NicotianatabacumL. 无菌苗叶盘为外植体,通过根癌农杆菌介导法进行遗传转化,获得了在含25mg/L潮霉素 Hygromycin,Hyg 的筛选培养基上再生的抗性植株,经PCR证实其中部分植株已将人骨形成蛋白-3成熟肽基因整合到烟草基因组中,WesternBlot结果表明已有微量BMP表达. 展开更多
关键词 人骨形成蛋白-3成熟肽 hbmp-3m 基因表达 烟草 根癌农杆菌介导法
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hBMP-3成熟肽与人PDI分子片段在大肠杆菌中的共表达
2
作者 李毅 柴玉波 +2 位作者 蒲勤 陈南春 陈苏民 《医学争鸣》 CAS 北大核心 2002年第S1期130-131,共2页
0 引言 人骨形成蛋白-3(human Bone Morphogenetic Protein-3,hBMP-3)是TGF-β超家族成员之一,具有显著的诱骨功能,并且在胚胎发育、神经胶质细胞发育及诱导细胞凋亡方面有着重要作用,hBMP-3已在COS及CHO等真核系统中表达,产物具有良好... 0 引言 人骨形成蛋白-3(human Bone Morphogenetic Protein-3,hBMP-3)是TGF-β超家族成员之一,具有显著的诱骨功能,并且在胚胎发育、神经胶质细胞发育及诱导细胞凋亡方面有着重要作用,hBMP-3已在COS及CHO等真核系统中表达,产物具有良好活性,但真核系统表达产量低、生产成本高,限制了它的应用,大肠杆菌表达系统虽然有产量高。 展开更多
关键词 hbmp-3 PDI 共表达
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根癌农杆菌介导法获得烟草转人骨形成蛋白-3成熟肽基因植株 被引量：5
3
作者 高书颖 郭蔼光 《西北植物学报》 CAS CSCD 2001年第6期1128-1133,共6页
利用冻融法将质粒 p CAMBIA- h BMP- 3 m直接转入根癌农杆菌 LBA440 4 ,以烟草无菌苗叶盘为外植体 ,通过农杆菌介导法进行遗传转化 ,获得了在含 2 5 mg/L潮霉素 (Hy-gromycin,Hyg)的筛选培养基上再生的抗性植株 ,经 PCR检测呈阳性 ,初... 利用冻融法将质粒 p CAMBIA- h BMP- 3 m直接转入根癌农杆菌 LBA440 4 ,以烟草无菌苗叶盘为外植体 ,通过农杆菌介导法进行遗传转化 ,获得了在含 2 5 mg/L潮霉素 (Hy-gromycin,Hyg)的筛选培养基上再生的抗性植株 ,经 PCR检测呈阳性 ,初步鉴定并筛选整合了人骨形成蛋白 - 展开更多
关键词 烟草 人骨形成蛋白-3成熟肽 hbmp-3m 根癌农杆菌介导法 转基因
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人骨形成蛋白3基因cDNA部分序列的RT-PCR克隆 被引量：3
4
作者 张涌 戴博 +1 位作者 刘建忠 郑月茂 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2003年第2期1-5,共5页
针对人骨形成蛋白 3基因的 c DNA序列设计引物 ,通过反转录 PCR技术 ,从人骨纤维肉瘤组织中扩增出目的片段。从胶中回收目的片段 ,将其与 p MD18- T载体连接 ,转化大肠杆菌 DH 5α后 ,经 H ind 酶切鉴定 ,进行测序。结果显示所得到的片... 针对人骨形成蛋白 3基因的 c DNA序列设计引物 ,通过反转录 PCR技术 ,从人骨纤维肉瘤组织中扩增出目的片段。从胶中回收目的片段 ,将其与 p MD18- T载体连接 ,转化大肠杆菌 DH 5α后 ,经 H ind 酶切鉴定 ,进行测序。结果显示所得到的片段大小为 84 5 bp,与所设计的序列同源性为 10 0 % ,说明已经成功地扩增、克隆了人骨形成蛋白 3(h BMP- 3)基因 c DNA的大部分序列。 展开更多
关键词 人骨形成蛋白3基因 CDNA序列 RT-PCR 基因克隆 骨形成蛋白 转基因动物乳腺
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重组人骨形成蛋白-3成熟肽的表达、纯化及诱骨活性的研究 被引量：4
5
作者 朱帮福 蒲勤 +1 位作者 陈南春 陈苏民 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期288-292,共5页
推测人骨形成蛋白３羧基端的１２７氨基酸的肽段为其成熟肽（ｈＢＭＰ３ｍ）。将编码此成熟肽的ｃＤＮＡ插入含ＰＬ启动子的表达质粒ｐＤＨ中，构建表达质粒ｐＤＨＢ３ｍ，转化大肠杆菌ＤＨ５α。４２℃热诱导６ｈ后表达量达到最... 推测人骨形成蛋白３羧基端的１２７氨基酸的肽段为其成熟肽（ｈＢＭＰ３ｍ）。将编码此成熟肽的ｃＤＮＡ插入含ＰＬ启动子的表达质粒ｐＤＨ中，构建表达质粒ｐＤＨＢ３ｍ，转化大肠杆菌ＤＨ５α。４２℃热诱导６ｈ后表达量达到最高水平，约占菌体总蛋白２８％；表达产物以包涵体形式存在。包涵体经分离和洗涤后，溶解于尿素，在变性溶解状态下经阳离子交换层析，目的蛋白纯度至少在９５％以上。再经稀释复性。然后将纯化、复性的重组人骨形成蛋白３成熟肽（ｒｈＢＭＰ３ｍ）植入小鼠肌肉间隙，于不同时间取材观察，在局部可见典型的软骨形成、软骨内成骨以及骨组织形成的过程，证实所制备的ｒｈＢＭＰ３ｍ具有明显的异位诱骨活性。 展开更多
关键词 人骨形成蛋白-3 表达 蛋白质纯化 诱骨活性
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重组人骨形成蛋白-3羧基端肽在大肠杆菌中表达及其诱骨活性 被引量：15
6
作者 崔有宏 陈苏民 +2 位作者 刘新平 陈南春 薛泳涛 《生物化学杂志》 CSCD 1997年第5期513-519,共7页
以双顺反子表达载体，在大肠杆菌中经ＩＰＴＧ诱导表达了人骨形成蛋白－３羧基端肽段（ｈＢＭＰ－３Ｃ），表达量占菌体总蛋白量的１８．５％．目的蛋白为２５ｋＤ、含ｈＢＭＰ－３Ｃ端２１５个氨基酸残基组成的肽段，包括ｈＢＭＰ－３... 以双顺反子表达载体，在大肠杆菌中经ＩＰＴＧ诱导表达了人骨形成蛋白－３羧基端肽段（ｈＢＭＰ－３Ｃ），表达量占菌体总蛋白量的１８．５％．目的蛋白为２５ｋＤ、含ｈＢＭＰ－３Ｃ端２１５个氨基酸残基组成的肽段，包括ｈＢＭＰ－３成熟肽和一部分前肽．表达产物以包涵体的形式存在，用含ＴｒｉｔｏｎＸ－１００的洗涤液和５ｍｏｌ／Ｌ以下脲溶液连续洗涤，可获得较高纯度的重组人骨形成蛋白－３Ｃ端肽．经复性处理成可溶性蛋白，植入小鼠肌肉内，第１４ｄ组织切片显示有软骨细胞和软骨基质形成，第２１ｄ可见成骨细胞和骨基质形成．将ｒｈＢＭＰ－３Ｃ与脱矿去免疫原性异种骨粒复合后作小鼠肌肉植入试验，２１ｄ组织切片上可见硬质骨形成．结果表明：大肠杆菌表达的ｈＢＭＰ－３Ｃ经复性后具有诱骨活性，糖基化并非ＢＭＰ－３活性所必需． 展开更多
关键词 人骨形成蛋白 3羧基多肽 基因表达 诱骨活性
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根癌农杆菌介导的人骨形成蛋白-3成熟肽基因向油菜转化的研究 被引量：4
7
作者 张大鹏 郭蔼光 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2004年第5期41-44,共4页
　用根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)共培养法,将骨形成蛋白-3成熟肽(hBMP-3m)基因导入甘蓝型自交系油菜(BrassicanapusL.)品种秦油-3号,并获得了hBMP-3m基因整合到油菜基因组中的植株。试验所用外植体为油菜4～5d苗龄的下胚轴;... 　用根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)共培养法,将骨形成蛋白-3成熟肽(hBMP-3m)基因导入甘蓝型自交系油菜(BrassicanapusL.)品种秦油-3号,并获得了hBMP-3m基因整合到油菜基因组中的植株。试验所用外植体为油菜4～5d苗龄的下胚轴;根癌农杆菌为LBA4404,其Ti质粒pCAMBIA-hBMP3m含hBMP-3m基因。切取2mm左右的下胚轴侵染根癌农杆菌后在分化培养基(MS+5.0mg/L6-BA+0.3mg/LNAA)上共培养2d,然后转到附加25mg/L潮霉素和500mg/L羧苄青霉素的分化培养基上。切下分化出的茎芽,插入附加25mg/L潮霉素的生根培养基(MS+0.4mg/LIBA)中,形成完整的植株。经PCR检测和Southernblot分析,证实hBMP-3m基因已插入到油菜细胞基因组中。 展开更多
关键词 根癌农杆菌介导 人骨形成蛋白-3成熟肽基因 油菜 下胚轴 转基因 药用蛋白基因
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人骨形成蛋白3全长基因转化烟草的初步研究
8
作者 赵兴贵 郭蔼光 《西北农业学报》 CAS CSCD 2003年第4期24-27,共4页
将含有人骨形成蛋白3(hBMP-3)全长基因的质粒pCAMBIA1300-hBMP-3通过电激法转化到根癌农杆菌LBA4404中,以烟草无菌苗叶盘为外植体,通过农杆菌介导法进行遗传转化,获得了抗潮霉素(Hy-gromycin,Hyg)的再生植株,通过潮霉素抗性鉴定及PCR检... 将含有人骨形成蛋白3(hBMP-3)全长基因的质粒pCAMBIA1300-hBMP-3通过电激法转化到根癌农杆菌LBA4404中,以烟草无菌苗叶盘为外植体,通过农杆菌介导法进行遗传转化,获得了抗潮霉素(Hy-gromycin,Hyg)的再生植株,通过潮霉素抗性鉴定及PCR检测,初步确定人骨形成蛋白-3(hBMP-3)全长基因已整合到烟草的基因组中。 展开更多
关键词 人骨形成蛋白3全长基因 烟草 农杆菌介导 遗传转化 TGF-Β超家族 生物反应器
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