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人F1F0-ATP合成酶β亚基的原核表达、纯化及抗体制备 被引量：2
1
作者 俞丽丽 张元军 +4 位作者 张霞 王怡波 林建波 倪健 彭艳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期253-255,259,共4页
目的:原核表达、纯化人F1F0-ATP合成酶β亚基(hATP5B)并制备其多克隆抗体。方法:以人脐带静脉内皮细胞(HUVEC)总RNA为模板,通过RT-PCR扩增hATP5B成熟肽编码序列,克隆入原核表达载体pET28a(+),转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3)并诱导表达,... 目的:原核表达、纯化人F1F0-ATP合成酶β亚基(hATP5B)并制备其多克隆抗体。方法:以人脐带静脉内皮细胞(HUVEC)总RNA为模板,通过RT-PCR扩增hATP5B成熟肽编码序列,克隆入原核表达载体pET28a(+),转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3)并诱导表达,表达产物用Ni2+螯合层析纯化,纯化产物用透析复性,产物用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。复性产物免疫家兔,制备多克隆抗体;多抗的效价用间接ELISA法检测,并用Western blot和细胞免疫荧光分析多抗的特异性和抗原结合性。结果:测序证实获得hATP5B成熟肽编码序列。SDS-PAGE鉴定表明,表达、纯化、复性产物的相对分子质量(Mr)均约55000,与理论值相符。灰度扫描分析重组hATP5B(recombinant hATP5B,rhATP5B)的表达量占菌体蛋白总量的36.8%,纯化产物纯度达98.3%,复性产物纯度达99.2%。Western blot反应阳性。多抗的平均抗体效价为1∶640000,可特异识别HUVEC中的天然抗原。结论:原核表达的hATP5B具有良好的免疫原性,其免疫家兔后获得的多抗具有高效价和特异性。hATP5B的原核高效表达和其抗体制备为进一步研究hATP5B的功能奠定了实验基础。 展开更多
关键词 hatp5b rhatp5b 原核表达 多克隆抗体
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