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禽网状内皮组织增生症病毒囊膜糖蛋白gp90的原核表达 被引量:16
1
作者 吉荣 崔治中 +3 位作者 丁家波 秦爱建 刘岳龙 金文杰 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期28-30,共3页
根据禽网状内皮组织增生症病毒 (REV) SNV株的前病毒基因组 c DNA序列 ,设计并合成 1对引物 ,以 SNV株前病毒 c DNA全基因组克隆为模板 ,通过 PCR技术 ,扩增出该病毒囊膜糖蛋白 (env) gp90基因部分片段。将 PCR产物按正确的阅读框架定... 根据禽网状内皮组织增生症病毒 (REV) SNV株的前病毒基因组 c DNA序列 ,设计并合成 1对引物 ,以 SNV株前病毒 c DNA全基因组克隆为模板 ,通过 PCR技术 ,扩增出该病毒囊膜糖蛋白 (env) gp90基因部分片段。将 PCR产物按正确的阅读框架定向克隆进 p GEX- 5 X- 3载体中谷胱甘肽 - S-转移酶 (GST)的下游 ,将重组质粒转化进宿主菌BL2 1 中 ,在 1.0 mm ol/ L IPTG(37℃ )诱导下 ,gp90基因部分片段以融合蛋白的形式获得了良好的表达。表达产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定 ,确定其表达的融合蛋白相对分子质量为 6 40 0 0。将表达产物从凝胶中回收后免疫小鼠 ,所得的抗血清可与 REV野毒株感染的鸡胚成纤维细胞 (CEF)在免疫荧光试验中起反应。由此表明 ,体外表达的 SNV株gp90 - GST融合蛋白保留了天然蛋白所具有的抗原性。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 囊膜糖蛋白gp90 原核表达
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马传染性贫血弱毒疫苗株致弱过程中表面蛋白gp90的进化分析 被引量:6
2
作者 王雪峰 王帅 +6 位作者 韩秀娥 林跃智 姜成刚 吕晓玲 赵利平 王凤龙 周建华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期93-96,共4页
为进一步研究马传染性贫血病毒(EIAV)弱毒疫苗的减毒机制,本实验对EIAV弱毒疫苗的原始种毒EIAVLN40、亲本病毒株EIAVDV、驴白细胞弱毒疫苗EIAVDLV121和EIAVDV减毒过程中的3个中间代次病毒(EIAVDLV32、EIAVDLV62和EIAVDLV92)的gp90基因... 为进一步研究马传染性贫血病毒(EIAV)弱毒疫苗的减毒机制,本实验对EIAV弱毒疫苗的原始种毒EIAVLN40、亲本病毒株EIAVDV、驴白细胞弱毒疫苗EIAVDLV121和EIAVDV减毒过程中的3个中间代次病毒(EIAVDLV32、EIAVDLV62和EIAVDLV92)的gp90基因进行测序分析。结果显示,适应白细胞培养的病毒株的进化距离更接近,与亲本病毒株处于进化树的不同分支。与强毒株相比,适应白细胞培养的病毒株在9个位点发生优势氨基酸的转换和V3区糖基化位点191NSSN194的缺失。此外,伴随EIAV毒力减弱的过程,有8个位点出现优势氨基酸残基的转换,在各代次病毒株中V4区具有糖基化位点237NNTW240和246NETW249的克隆所占的比例逐渐降低,其中EIAVDLV121的糖基化位点237NNTW240完全缺失。 展开更多
关键词 马传染性贫血病毒 gp90基因 进化分析
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禽网状内皮增生症病毒gp90蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 被引量:4
3
作者 石星明 张晶 +7 位作者 赵妍 王玫 魏秀英 胡顺磊 全炎铭 闫帅 崔红玉 王云峰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1289-1294,共6页
为获得分泌抗禽网状内皮增生症病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞,通过表达pET32a-gp90重组蛋白,以纯化的gp90蛋白为抗原,免疫BALB/c鼠,筛选分泌抗REV McAb的杂交瘤细胞株。经过细胞的融合及筛选,共获得能稳定分泌抗REV gp90的McAb细胞系2株,... 为获得分泌抗禽网状内皮增生症病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞,通过表达pET32a-gp90重组蛋白,以纯化的gp90蛋白为抗原,免疫BALB/c鼠,筛选分泌抗REV McAb的杂交瘤细胞株。经过细胞的融合及筛选,共获得能稳定分泌抗REV gp90的McAb细胞系2株,分别命名为A9E8和B3F8。2株细胞培养上清的效价均在1∶4×102以上,腹水效价均在1∶8×103以上。亚型鉴定结果表明,2株皆为IgG型,轻链均为κ链;Western blot及间接免疫荧光结果显示,这2株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体均能识别REV全病毒抗原,与其发生特异性反应,并且不与禽类其他病毒发生反应;病毒中和试验结果表明,获得的单克隆抗体均能REV临床分离株发生中和反应,具有较好的中和活性。利用制备的单克隆抗体建立了REV的间接免疫荧光检测方法,临床病料检测结果表明,该方法与病毒分离及PCR的检测结果基本一致,阴、阳性符合率分别为100%和90%。作者制备了针对REV gp90的McAb,为REV的快速诊断及抗原表位分析与鉴定等奠定了基础。 展开更多
关键词 禽网状内皮增生症病毒 gp90基因 单克隆抗体
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禽网状内皮增生症病毒gp90基因真核表达及ELISA检测方法的建立 被引量:3
4
作者 石星明 赵妍 +9 位作者 王玫 张晶 魏秀英 杨桂花 高宏博 全炎铭 黄婷婷 张晓艳 崔红玉 王云峰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期862-866,共5页
为建立禽网状内皮增生症病毒(REV)的ELISA检测方法,本研究通过RT-PCR方法扩增gp90基因,构建杆状病毒重组质粒,转化DH10Bac后,通过转座获得重组杆粒,并将其转染Sf9昆虫细胞,SDS-PAGE及western blot分析表明,表达的重组蛋白分子量约为45 ... 为建立禽网状内皮增生症病毒(REV)的ELISA检测方法,本研究通过RT-PCR方法扩增gp90基因,构建杆状病毒重组质粒,转化DH10Bac后,通过转座获得重组杆粒,并将其转染Sf9昆虫细胞,SDS-PAGE及western blot分析表明,表达的重组蛋白分子量约为45 ku,具有良好的反应原性。将表达的重组蛋白纯化后包被ELISA反应板,建立检测REV抗体的rgp90-ELISA方法。特异性试验结果表明该方法具有良好的特异性;将该方法与IDEXX公司生产的试剂盒共同检测包括63份已知背景的血清在内的黑龙江省和广东省的临床血清样品共477份,符合率分别为90.5%和86.4%。该方法的建立为禽群REV抗体的监测提供了方便、快捷、准确的技术手段。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 gp90基因 真核表达 ELISA
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Molecular Characteristics of gp90 Gene of 14 Reticuloendotheliosis Viruses Isolated in China 被引量:3
5
作者 邓小芸 祁小乐 +6 位作者 高玉龙 秦立廷 高立 吴关 王永强 高宏雷 王笑梅 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2011年第12期1954-1957,共4页
[Objective] The paper was to study molecular characteristics of gp90 gene of 14 Reticuloendotheliosis viruses isolated in China.[Method] The surface envelop gene gp90 of 14 REV strains isolated from different commerci... [Objective] The paper was to study molecular characteristics of gp90 gene of 14 Reticuloendotheliosis viruses isolated in China.[Method] The surface envelop gene gp90 of 14 REV strains isolated from different commercial layer farms in China were amplified,and their nucleotide sequences were determined.[Result] Sequence analysis showes that 14 REV strains are more identical to the subtype 3 isolates than to the early Chinese REV isolates.In addition,14 REV strains have a high identity with some REV strains in US and Taiwan.[Conclusion] The study provided necessary information for further understanding the evolution of REV. 展开更多
关键词 Reticuloendotheliosis virus(REV) gp90 Sequence analysis
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马传染性贫血病毒阿根廷流行毒株前病毒gag和gp90基因在马体内的变异分析 被引量:1
6
作者 耿庆华 王晓钧 +1 位作者 相文华 沈荣显 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期270-273,共4页
为建立美洲马传贫毒株和我国弱毒疫苗株鉴别诊断PCR,对接种马传贫阿根廷流行毒株后马4个发热期(23、40、51和70d)外周血单核细胞前病毒DNA gag基因和gP90基因的核苷酸序列进行了监测,经过序列分析发现4个发热期中前病毒gag基因核苷... 为建立美洲马传贫毒株和我国弱毒疫苗株鉴别诊断PCR,对接种马传贫阿根廷流行毒株后马4个发热期(23、40、51和70d)外周血单核细胞前病毒DNA gag基因和gP90基因的核苷酸序列进行了监测,经过序列分析发现4个发热期中前病毒gag基因核苷酸序列变化不明显,变异率在1%之内,表明前病毒gag基因在马体内比较保守,可以作为设计鉴别诊断引物的区域;gp90区的基因变化比较大,核苷酸序列变异率在8%~10%之间,通过对几个发热期核苷酸序列推导氨基酸的分析,可以划分出A1、A2、A3和A44个可变区,但其中A1和A4变异都很稳定,在马体发病的整个过程中均只发生1次变异,而A2区第3个发热期变异后,在第4个发热期又回复了突变。对马传染性贫血病毒阿根廷代表毒株前病毒gag和gp90基因核甘酸序列的动念检测结果表明,马传贫病毒在马体整合为前病毒之后比较稳定,这就为建立PCR鉴别诊断方法提供了依据。 展开更多
关键词 马传贫病毒 前病毒 GAG gp90
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禽网状内皮组织增生病病毒gp90基因在杆状病毒中的表达及其产物的活性分析
7
作者 高立 祁小乐 +4 位作者 高玉龙 高宏雷 秦立廷 邓小芸 王笑梅 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期973-977,共5页
以质粒pMD18T-env为模板,利用PCR技术扩增禽网状内皮组织增生病病毒的gp90基因,酶切、纯化后,克隆至载体pFastBacHTA中,构建了重组供体载体pFgp90,并将其转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,使gp90基因整合到Bacmid穿梭载体中,获得重组穿梭... 以质粒pMD18T-env为模板,利用PCR技术扩增禽网状内皮组织增生病病毒的gp90基因,酶切、纯化后,克隆至载体pFastBacHTA中,构建了重组供体载体pFgp90,并将其转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,使gp90基因整合到Bacmid穿梭载体中,获得重组穿梭载体Bacmidgp90。通过脂质体介导将其转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBacgp90。抗gp90蛋白小鼠超免疫血清介导的Western-blot分析和间接免疫荧光试验(IFA)结果显示,gp90蛋白被正确表达,分子质量约为45 ku;gp90蛋白在变性和自然状态下均能够被识别,具有良好的生物活性。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生病病毒 gp90基因 SF9细胞 杆状病毒 生物活性
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马传染性贫血病毒env gp90基因在实验感染马体内的遗传变异(英文)
8
作者 王全凯 庞海 +4 位作者 孔宪刚 宣华 章金刚 卢景良 费恩阁 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期207-211,共5页
为确定马传染性贫血病毒(EIAV)envgp90基因的遗传变异特性,本研究应用EIAV日本分离强毒株P337-V70实验感染了1匹健康马,经第2次感染后,实验马未呈现临床症状。gp90基因的核苷酸序列被直接从这匹马的... 为确定马传染性贫血病毒(EIAV)envgp90基因的遗传变异特性,本研究应用EIAV日本分离强毒株P337-V70实验感染了1匹健康马,经第2次感染后,实验马未呈现临床症状。gp90基因的核苷酸序列被直接从这匹马的外周血和肝脏所获得的前病毒DNA扩增。通过克隆和测序从这匹马获得了覆盖EIAVgp90基因主要中和抗原功能区(PND)的17个前病毒序列。通过对这些序列的比较分析,发现一些序列在PND功能区含有核苷酸的插入变异。为揭示PND基因中插入基因片段的产生原因,应用计算机软件对这些片段可能的复制和片段的移位进行了推测。结果显示,这些不同长度的基因插入片段可能是由于其PND基因序列片段的直接重复和移位所产生。鉴于本研究所作序列分析的EIAV变异株是从感染马组织直接获得的,而EIAV的基因组结构在慢病毒中较为简单,故可作为感染模型用于慢病毒持续感染机理的研究。 展开更多
关键词 传染性贫血病毒 gp90基因 前病毒 变异 遗传
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马传染性贫血驴强毒gp90基因的克隆和序列分析
9
作者 刘永刚 张宝山 +3 位作者 孔宪刚 杨威 刘胜旺 贾永清 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期244-248,共5页
以EIAV驴强毒株D_AmRNA为模板 ,利用RT_PCR技术 ,扩增了约 1 .4kb的gp90基因。将其克隆后进行了测序 ,测序结果表明所扩增的 1 3 3 8个核苷酸片段含有完整的gp90基因全序列。核苷酸和氨基酸序列比较分析结果表明 :D_AEIAV与国内分离株... 以EIAV驴强毒株D_AmRNA为模板 ,利用RT_PCR技术 ,扩增了约 1 .4kb的gp90基因。将其克隆后进行了测序 ,测序结果表明所扩增的 1 3 3 8个核苷酸片段含有完整的gp90基因全序列。核苷酸和氨基酸序列比较分析结果表明 :D_AEIAV与国内分离株辽系强毒L株差异率仅有 1 .8% ,而与国外毒株 (克隆 1 3 69,WENV1 7、WENV1 6、PSPEIAV1 9)核苷酸差异率在 3 5 .5 %~ 3 7.2 %之间 ;D_A株与国内分离株L株氨基酸水平差异率在 2 .9% ,而与国外毒株氨基酸水平上的差异率在 42 .6%~ 46.0 % ;D_AEIAV有 1 9个N_连接糖基化位点 ,L株、WENV1 7和WENV1 6是 1 8个 ,克隆 1 3 69、WENV1 6和WENV1 7亲本毒株PSPEIAV1 9是 1 2个。 展开更多
关键词 马传染性贫血 gp90基因 克隆 序列分析
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禽网状内皮组织增生病毒gp90全长蛋白的原核表达、表达形式鉴定与纯化
10
作者 王豪举 李天兰 +3 位作者 高彤 孟向阁 索化夷 丁红雷 《西南师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2017年第1期66-69,共4页
该研究将禽网状内皮组织增生病毒gp90基因克隆至原核表达载体pET-30a(+),转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导,并通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定蛋白表达情况和蛋白表达.结果发现,将gp90基因连接表达载体转化宿主菌后,... 该研究将禽网状内皮组织增生病毒gp90基因克隆至原核表达载体pET-30a(+),转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导,并通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定蛋白表达情况和蛋白表达.结果发现,将gp90基因连接表达载体转化宿主菌后,成功在大肠杆菌以包涵体形式表达.纯化的蛋白纯度超过90%. 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生病毒 gp90蛋白 原核表达 包涵体
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蛋鸡REV HB2015株的分离鉴定及gp90基因分析
11
作者 梁雄燕 刘兰 +3 位作者 李拓凡 顾玉芳 方守国 杨玉莹 《中国家禽》 北大核心 2016年第13期14-17,共4页
采用Multi-PCR分别对湖北某蛋鸡场送检的腺胃肿大、出血,心、肺、脾有肿瘤结节的14周龄海兰褐蛋鸡进行A、B、J亚群禽白血病病毒、马立克氏病病毒(MDV)和禽网状内皮增生症病毒(REV)进行检测,结果表明病鸡感染REV。取病鸡肝组织制备病毒... 采用Multi-PCR分别对湖北某蛋鸡场送检的腺胃肿大、出血,心、肺、脾有肿瘤结节的14周龄海兰褐蛋鸡进行A、B、J亚群禽白血病病毒、马立克氏病病毒(MDV)和禽网状内皮增生症病毒(REV)进行检测,结果表明病鸡感染REV。取病鸡肝组织制备病毒悬液接种DF-1细胞,用含1%FBS的DMEM培养7 d,传代至12孔细胞培养板培养5 d,以鼠抗REV gp90蛋白抗体为一抗,FITC标记的羊抗鼠Ig G为二抗进行间接免疫荧光试验,接毒细胞呈现亮绿荧光,表明分离到1株REV,命名为REV HB2015。用特异性引物gp90F/gp90R对分离株gp90基因进行PCR扩增和克隆测序,结果分离毒株的gp90基因全长1 191 bp,经DNAStar分析显示分离毒株的gp90与REVⅢ型代表株CSV同源性最高(98.9%),且处于进化树同一分支上,表明REV HB2015株与CSV同型,属于REVⅢ型。 展开更多
关键词 蛋鸡 REV 分离鉴定 gp90基因
原文传递
马传染性贫血病毒gp90蛋白的表达及其在诊断中的潜在应用
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作者 陈新江 毛洁 +2 位作者 孟庆来 张晓燕 张耀洲 《科技通报》 北大核心 2009年第3期300-304,共5页
以质粒pVRCSV1.0-syn-gp90为模板,利用PCR扩增马传染性贫血病毒外膜蛋白基因(gp90),构建了原核表达质粒pET-28a(+)-gp90,然后转化大肠杆菌Rosetta(DE3),诱导表达并纯化该重组蛋白,ELISA和Western blot证明马的阳性血清可以识别该重组蛋... 以质粒pVRCSV1.0-syn-gp90为模板,利用PCR扩增马传染性贫血病毒外膜蛋白基因(gp90),构建了原核表达质粒pET-28a(+)-gp90,然后转化大肠杆菌Rosetta(DE3),诱导表达并纯化该重组蛋白,ELISA和Western blot证明马的阳性血清可以识别该重组蛋白。以纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,测定的效价为1∶13,000。 展开更多
关键词 gp90基因 原核表达 纯化 EIAV 诊断
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中国马传染性贫血病毒DLV株前病毒gp90基因在马体内的变异分析
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作者 杨彬 王雪峰 +1 位作者 周建华 王凤龙 《动物医学进展》 CSCD 2008年第11期20-24,共5页
分别以EIAV辽宁马强毒株(EIAVliao)前病毒DNA和马传染性贫血驴白细胞弱毒疫苗株(EIAVDLV)前病毒DNA为模板,从免疫接种后不同时期马血清中利用nested-PCR技术,扩增了约1.4kb的gp90基因。将其克隆后进行了测序,测序结果表明,免疫EIAVDLV... 分别以EIAV辽宁马强毒株(EIAVliao)前病毒DNA和马传染性贫血驴白细胞弱毒疫苗株(EIAVDLV)前病毒DNA为模板,从免疫接种后不同时期马血清中利用nested-PCR技术,扩增了约1.4kb的gp90基因。将其克隆后进行了测序,测序结果表明,免疫EIAVDLV后的第1时期至第5时期,与EIAV-liao比较核苷酸序列平均差异率分别为3.2956%、3.1456%、3.36%、3.1856%和3.6456%。EIAVliao有20个N-连接糖基化位点,EIAVDLV平均是17.2个,其中有11个N-连接糖基化位点是高度保守的。 展开更多
关键词 马传染性贫血弱毒疫苗株 gp90基因 N-连接糖基化 序列分析 突变
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表达禽网状内皮组织增生病病毒gp90蛋白的重组马立克氏病病毒的构建及生物学特性分析 被引量:7
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作者 许曾焜 李凯 +7 位作者 刘永振 高立 刘长军 张艳萍 高玉龙 祁小乐 崔红玉 王笑梅 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期867-871,共5页
禽网状内皮组织增生病(RE)是禽类一种重要免疫抑制性疾病,目前尚无有效的商品化疫苗预防该病。为研制表达RE病毒(REV)gp90蛋白的重组鸡马立克氏病病毒(MDV),本研究构建了含有REV保护性抗原基因gp90的pCAGGS-gp90表达质粒,将gp90表达框... 禽网状内皮组织增生病(RE)是禽类一种重要免疫抑制性疾病,目前尚无有效的商品化疫苗预防该病。为研制表达RE病毒(REV)gp90蛋白的重组鸡马立克氏病病毒(MDV),本研究构建了含有REV保护性抗原基因gp90的pCAGGS-gp90表达质粒,将gp90表达框架克隆入pENTR1载体,获得重组质粒pENTR1-gp90。通过pENTR1-gp90与p814-5US2KanccdB重组粘粒的LR反应,将gp90表达框架插入p814-5粘粒中MDV 814疫苗株基因组US2基因内,构建重组粘粒p814-5-gp90。将该重组粘粒转染鸡胚成纤维细胞(CEF),获得重组MDV r814-gp90株。将该重组病毒在CEF中连续传至20代后对第5、10、15、20代病毒经PCR扩增并测序鉴定;利用间接免疫荧光试验(IFA)和western blot检测重组MDV感染细胞中gp90蛋白的表达;绘制重组MDV的生长曲线,分析其体外复制特性。结果显示,正确构建了含有gp90表达框架的重组粘粒p814-5-gp90。将该重组粘粒转染CEF后能够引起典型的蚀斑病变,且蚀斑形态大小与亲本病毒814株无明显差异。PCR及测序鉴定结果显示,重组病毒r814-gp90基因组中正确插入gp90基因表达框架,且其能够在该重组病毒中稳定存在。IFA及western blot检测结果表明,r814-gp90株能够在感染的CEF中表达gp90蛋白。体外生长曲线显示,r814-gp90株在CEF中的复制能力与亲本病毒无明显差异。以上结果表明,本研究正确构建了表达REV保护性抗原gp90基因的重组MDV,为研制RE重组MDV活载体疫苗奠定了基础,对RE以及REV与MDV混合感染的防控具有重要意义。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生病 gp90蛋白 马立克氏病病毒 重组病毒
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马传染性贫血病毒弱毒疫苗gp90多样性及其对病毒体外增殖的影响 被引量:1
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作者 秦玉寅 王雪峰 +6 位作者 韦华冕 王帅 林跃智 杜承 王晓钧 周建华 胡建军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期182-186,共5页
为研究马传染性贫血病毒(EIAV)弱毒疫苗gp90基因多样性的生物学意义,本研究对EIAV驴胎皮肤细胞弱毒疫苗(EIAVFDDV13)gp90基因进行测序,在随机获得的15个克隆中,不同克隆推导的氨基酸平均差异率为2.7%(0~5.8%),其中克隆F13-15与感染性克... 为研究马传染性贫血病毒(EIAV)弱毒疫苗gp90基因多样性的生物学意义,本研究对EIAV驴胎皮肤细胞弱毒疫苗(EIAVFDDV13)gp90基因进行测序,在随机获得的15个克隆中,不同克隆推导的氨基酸平均差异率为2.7%(0~5.8%),其中克隆F13-15与感染性克隆pLGFD3-8的gp90之间的差异率均为4.8%。以pLGFD3-8为骨架,通过对gp90基因的替换方法构建了感染性克隆pLGFD13-15。将pLGFD13-15转染驴胎皮肤细胞后,拯救出一株衍生病毒vpLGFD13-15。比较vpLGFD13-15和vpLGFD3-8在驴胎皮肤细胞和马单核细胞来源的巨噬细胞中的复制特性显示,vpLGFD13-15在感染驴胎皮肤细胞后4 d^6 d内,上清液中的病毒含量明显高于vpLGFD3-8。但vpLGFD13-15在巨噬细胞中的复制较vpLGFD3-8明显延迟。结果表明,EIAV疫苗株中不同gp90基因的病毒克隆在体外复制特性存在差异。该研究结果为进一步分析EIAV弱毒疫苗基因多样性的生物学意义,特别是对其诱导免疫保护作用的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 马传染性贫血病毒 弱毒疫苗 gp90 基因多样性
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禽网状内皮增生病毒囊膜基因gp90的克隆表达及ELISA方法的初步建立 被引量:1
16
作者 余冲 黄勇 +3 位作者 田明星 石敏 李敏 赵芳芳 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期363-370,共8页
根据禽网状内皮组织增生症病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)SNV株前基因组cDNA序列,经生物信息学分析,设计并合成引物,以四川分离株REV-SC1为模板,扩增囊膜基因gp90抗原性、亲水性较高的121~1 023 bp基因片段;将目的基因克隆至p... 根据禽网状内皮组织增生症病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)SNV株前基因组cDNA序列,经生物信息学分析,设计并合成引物,以四川分离株REV-SC1为模板,扩增囊膜基因gp90抗原性、亲水性较高的121~1 023 bp基因片段;将目的基因克隆至pMD-19T载体,进行测序和比对;将基因片段按正确的阅读框架定向克隆至pET-32a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导表达,包涵体洗涤纯化,探讨以重组gp90蛋白为包被抗原初步建立检测REV的间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法.结果表明:1)REV-SC1株gp90核苷酸序列与在GenBank上已发表序列的同源性最高为99%,于231位、870位发生了2个碱基突变;2)SDS-PAGE分析表明表达蛋白分子质量约为45 ku,与预期分子质量大小相符;免疫印迹(Western-blot)结果表明重组蛋白具有生物学活性;3)间接ELISA检测方法的最佳抗原包被质量浓度为1.5 mg·mL-1,一抗稀释度为1∶320,临界值为0.126;特异性、敏感性试验结果良好.综上,本试验成功表达了REVgp90蛋白,并对其在ELISA检测方面的应用作了初步探讨. 展开更多
关键词 网状内皮组织增生症病毒四川分离株 gp90基因 克隆表达 间接酶联免疫吸附试验
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禽网状内皮组织增殖病病毒gp90蛋白单克隆抗体的制备及其识别区分析 被引量:1
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作者 孙明铭 李晓齐 +2 位作者 曹红 王永强 郑世军 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期75-85,共11页
为了制备禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)gp90蛋白的单克隆抗体,应用His-gp90融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,经过筛选、3次亚克隆后获得3株稳定分泌抗REV-gp90蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别... 为了制备禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)gp90蛋白的单克隆抗体,应用His-gp90融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,经过筛选、3次亚克隆后获得3株稳定分泌抗REV-gp90蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为3G5-B8、3G5-A10和1G12。经间接ELISA(Enzyme-linked immunosorbent assay)方法检测,单克隆抗体的亲和力解离常数(Kd)分别为6.483×10–10、4.844×10–10和9.330×10–10,3株单抗的亚型分别为Ig G1、Ig G1和Ig G2b。经Western blotting和间接免疫荧光实验检测,3株单抗均能识别REV感染DF-1细胞后产生的gp90蛋白。以Western blotting方法利用单抗检测不同截短的gp90蛋白,初步确定3G5-B8和3G5-A10 2株单抗抗原识别区均位于gp90蛋白第200-245位氨基酸,而1G12株单抗识别区包含第230-235位氨基酸。这些单抗为REV的诊断和致病机理研究奠定了基础。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增殖病病毒 gp90蛋白 单克隆抗体 亲和力 抗原表位
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REV Gp90亚单位疫苗联合核酸缓释佐剂对雏鸡的免疫保护作用 被引量:1
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作者 袁霏 王康 +3 位作者 郭道磊 马文杰 褚颖 郭慧君 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1856-1861,共6页
主要探讨禽网状内皮组织增生症病毒(REV)亚单位疫苗联合CpG-ODN/Poly(I:C)缓释佐剂对雏鸡的免疫保护作用。根据已发表的REV囊膜蛋白Gp90的基因序列,设计引物,从感染REV的细胞中扩增出目的基因,构建原核重组表达载体,在Rosseta(E.coli)... 主要探讨禽网状内皮组织增生症病毒(REV)亚单位疫苗联合CpG-ODN/Poly(I:C)缓释佐剂对雏鸡的免疫保护作用。根据已发表的REV囊膜蛋白Gp90的基因序列,设计引物,从感染REV的细胞中扩增出目的基因,构建原核重组表达载体,在Rosseta(E.coli)菌中诱导表达,对表达蛋白进行纯化和Western blot鉴定;制备的重组蛋白与CpG-ODN/Poly(I:C)缓释佐剂联合接种7日龄雏鸡,2次加强免疫后第2周进行REV攻毒,接种后每周检测血清抗体和攻毒后检测REV病毒血症,评价免疫保护效果。结果显示,成功构建重组原核表达质粒,并获得相对分子质量为51 000的重组表达产物,该产物能够与REV单克隆抗体特异性结合;与CpG-ODN/Poly(I:C)缓释佐剂联合接种后能够诱导雏鸡产生较单一免疫Gp90蛋白抗体效价显著增加的血清抗体,经二次加强免疫全部鸡只产生抗体;攻毒后接种雏鸡病毒血症为0%(0/13),而对照组和单一免疫Gp90蛋白组分别为69%(9/13)和15%(2/13)。结果表明,本研究制备的REV Gp90重组蛋白联合CpG-ODN/Poly(I:C)缓释佐剂对雏鸡具有完全的保护力,这为开展REV疫苗防控提供科学数据。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 gp90囊膜蛋白 CpG ODN Poly(I:C) 核酸缓释佐剂 免疫保护
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基于p30-gp90融合蛋白的禽网状内皮组织增生症病毒抗体间接ELISA方法的建立 被引量:2
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作者 栾晓宁 郭龙宗 +3 位作者 马广斌 李玉燕 王一新 巩新民 《中国动物检疫》 CAS 2021年第10期107-114,共8页
禽网状内皮组织增生症病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)既可以诱发禽的肿瘤性疾病,又能引起感染禽群免疫抑制,给养禽业带来重大经济损失。REV抗体监测对于该病的诊断、预防和控制具有重要意义。本试验首先通过大肠杆菌表达系统表... 禽网状内皮组织增生症病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)既可以诱发禽的肿瘤性疾病,又能引起感染禽群免疫抑制,给养禽业带来重大经济损失。REV抗体监测对于该病的诊断、预防和控制具有重要意义。本试验首先通过大肠杆菌表达系统表达了重组REV p30-gp90融合蛋白,随后建立了基于该融合蛋白的REV抗体间接酶联免疫吸附试验(ELISA),并对反应条件进行了优化。结果显示,p30-gp90间接ELISA的灵敏度(1:51200)是间接免疫荧光法(IFA)(1:6400)的8倍,与其他常见禽类病毒无交叉反应,且具有良好的批内和批间重复性。对从山东省部分地区养殖场采集的690份血清样品,同时利用p30-gp90间接ELISA和IFA进行检测,发现20.87%的血清样品经间接ELISA检测为阳性,间接ELISA和IFA的总体符合率为96.96%。结果表明,本研究建立的间接ELISA检测方法具有特异性强、敏感性高和重复性好的优势,为REV的快速诊断、流行病学调查和血清学监测提供了技术支持。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 p30-gp90融合蛋白 间接ELISA 抗体
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雀形目野生鸟类REV感染状况的调查及分离株gp90基因序列分析
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作者 郝瑞军 庄艳娜 +6 位作者 燕超 么帅 高宏雷 秦立廷 高玉龙 曾祥伟 王笑梅 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1078-1082,1113,共6页
为了解雀形目野生鸟类感染禽内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)的情况,采集了352份样品,应用PCR方法进行了初筛。然后将阳性样品适当处理后接种CEF细胞,利用IFA等方法进一步鉴定。结果分离到2株病毒WB11042和WB110... 为了解雀形目野生鸟类感染禽内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)的情况,采集了352份样品,应用PCR方法进行了初筛。然后将阳性样品适当处理后接种CEF细胞,利用IFA等方法进一步鉴定。结果分离到2株病毒WB11042和WB11043,分别来自黄喉鹀和燕雀。对2株REV分离株的gp90基因进行扩增、测序和序列分析。结果显示,其gp90序列与REV亚型Ⅲ的代表毒株(CSV、APC-566)亲缘关系最近,高达99%以上;与亚型Ⅱ代表株(SNV)和亚型Ⅰ代表株(HA9901)的亲缘关系相对较远,在95.5%~97.1%之间。遗传进化树分析也表明这2株野生鸟类分离株属于REV亚型Ⅲ。结果表明,雀形目野生鸟类也可以感染REV。 展开更多
关键词 野生鸟类 REV gp90 序列分析
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