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Mcl-1在胆盐(GCDA)诱导的肝癌细胞耐药中的作用
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作者 廖明媚 张阳德 +4 位作者 段菁华 何剪太 潘一峰 邓星明 赵劲风 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期35-38,共4页
目的:探讨抗凋亡蛋白Mcl-1在GCDA诱导的肝癌细胞耐药中的作用及其机制。方法:培养3种肝癌细胞系,用免疫荧光法和Western blot技术检测Mcl-1的表达;GCDA±CYC处理HepG2细胞,采用Western blot技术检测Mcl-1的半衰期变化;用抗癌药物Iri... 目的:探讨抗凋亡蛋白Mcl-1在GCDA诱导的肝癌细胞耐药中的作用及其机制。方法:培养3种肝癌细胞系,用免疫荧光法和Western blot技术检测Mcl-1的表达;GCDA±CYC处理HepG2细胞,采用Western blot技术检测Mcl-1的半衰期变化;用抗癌药物Irinotecan与GCDA对HepG2细胞进行处理,采用MTT法和Western blot技术分别检测细胞增殖抑制率和Mcl-1的表达变化;用RNA干扰技术下调Mcl-1,检测化疗药物对HepG2细胞的敏感性。结果:Mcl-1在肝癌细胞中广泛表达;GCDA能延长Mcl-1的半衰期至6h以上,并明显减弱化疗药物对抗凋亡蛋白Mcl-1的抑制作用,降低癌细胞的药物敏感性;RNA干扰下调Mcl-1能增加癌细胞的药物敏感性。结论:胆盐(GCDA)能诱导HepG2细胞产生耐药性,其作用机制可能是通过延长Mcl-1半衰期增加其蛋白稳定性和抗凋亡作用来促使肝癌细胞抗药的。 展开更多
关键词 MCL-1 gcda 肝细胞癌 耐药 RNA干扰
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胆盐(GCDA)对肝癌细胞凋亡及其药物敏感性的影响
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作者 廖明媚 赵劲风 +4 位作者 邓星明 段菁华 潘一峰 何剪太 张阳德 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期1304-1307,共4页
目的探索胆盐(GCDA)环境下肝癌细胞株HepG2的生长情况及其对抗肿瘤药物的敏感性。方法用不同时间或浓度GCDA处理HepG2细胞,采用MTT法检测细胞活性与增殖性;用3种抗肿瘤药对HepG2细胞进行处理,采用流式细胞分析法检测GCDA存在与缺少时的... 目的探索胆盐(GCDA)环境下肝癌细胞株HepG2的生长情况及其对抗肿瘤药物的敏感性。方法用不同时间或浓度GCDA处理HepG2细胞,采用MTT法检测细胞活性与增殖性;用3种抗肿瘤药对HepG2细胞进行处理,采用流式细胞分析法检测GCDA存在与缺少时的细胞周期与凋亡。结果GCDA的处理浓度在200μM内对细胞有明显增殖作用(P<0.05);GCDA的处理时间在4h内对细胞有增殖作用,以10~20min最明显(P<0.05)。3种药物对肝癌HepG2细胞均有杀伤作用,阿霉素(ADM)对细胞周期的影响阻滞在G0/G1,Oxaplatin与Irinotecan阻滞在S期,GCDA使Irinotecan作用下细胞凋亡率明显下降(P<0.05)。结论GCDA能诱导肝细胞癌细胞株HepG2细胞存活与增殖,GCDA对Irinotecan的药性有抵制作用,使肿瘤细胞对其的敏感性降低。 展开更多
关键词 甘氨鹅脱氧胆酸钠(gcda) 肝细胞癌 凋亡 药物敏感性
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MOTS-c通过调节转运体MRP2表达对甘氨鹅脱氧胆酸诱导的肝细胞损伤的影响
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作者 敖宇 张旭阳 +3 位作者 唐聃 刘公伟 黄丹 蔡治方 《器官移植》 北大核心 2025年第3期425-434,共10页
目的探讨线粒体衍生肽MOTS-c对甘氨鹅脱氧胆酸(GCDCA)诱导的人肝细胞THLE-3损伤的影响及相关机制。方法体外培养THLE-3细胞,采用不同浓度的GCDCA和MOTS-c干预THLE-3细胞,通过细胞计数试剂盒(CCK-8)法筛选出GCDCA和MOTS-c的处理浓度。再... 目的探讨线粒体衍生肽MOTS-c对甘氨鹅脱氧胆酸(GCDCA)诱导的人肝细胞THLE-3损伤的影响及相关机制。方法体外培养THLE-3细胞,采用不同浓度的GCDCA和MOTS-c干预THLE-3细胞,通过细胞计数试剂盒(CCK-8)法筛选出GCDCA和MOTS-c的处理浓度。再采用GCDCA(200μmol/L)、MOTS-c(15、30、60μmol/L)、多药耐药蛋白2(MRP2)抑制剂Probenecid(500μmol/L)和核因子E2相关因子2(Nrf2)抑制剂ML385(10μmol/L)对THLE-3细胞进行处理或预处理,采用CCK-8法检测各组细胞增殖率;生化法检测各组细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)水平;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测细胞中MRP2信使RNA(mRNA)水平;蛋白质印迹法检测细胞中MRP2和Nrf2蛋白表达水平。结果随着GCDCA处理浓度的升高,THLE-3细胞增殖活性逐渐降低,细胞培养液中LDH活性及细胞凋亡水平逐渐升高,细胞中MRP2表达水平均逐渐降低(均为P<0.05)。30、60μmol/L MOTS-c干预均可提高GCDCA暴露下THLE-3细胞增殖活性,上调细胞中MRP2和Nrf2表达水平,而降低细胞培养液中LDH活性及细胞凋亡水平(均为P<0.05)。联合Probenecid干预可部分逆转MOTS-c对GCDCA诱导的THLE-3细胞损伤的改善作用,联合ML385干预则又可部分抑制MOTS-c干预对GCDCA暴露下THLE-3细胞中MRP2表达的诱导作用。结论MOTS-c可减轻GCDCA诱导的人肝细胞THLE-3损伤,其作用机制可能与促进Nrf2介导的MRP2表达上调有关。 展开更多
关键词 胆汁淤积 缺血-再灌注损伤 肝移植 肝损伤 甘氨鹅脱氧胆酸 MOTS-c 核因子E2相关因子2 多药耐药蛋白2
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牛胆汁的解热作用及作用机制研究 被引量:6
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作者 苏发智 白晨曦 +5 位作者 张文森 王雨 孙延平 杨炳友 匡海学 王秋红 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期3363-3374,共12页
目的基于干酵母混悬液诱导的发热大鼠模型,评价牛胆汁的解热效果,并进一步通过基于UPLC-MS/MS的代谢组学方法探索其潜在的作用机制。方法40只SD大鼠随机分为对照组、模型组、对乙酰氨基酚(200 mg/kg)组、牛胆汁(10 mL/kg)组及猪胆汁(10 ... 目的基于干酵母混悬液诱导的发热大鼠模型,评价牛胆汁的解热效果,并进一步通过基于UPLC-MS/MS的代谢组学方法探索其潜在的作用机制。方法40只SD大鼠随机分为对照组、模型组、对乙酰氨基酚(200 mg/kg)组、牛胆汁(10 mL/kg)组及猪胆汁(10 mL/kg)组,以背部sc 20%干酵母混悬液的方式构建发热大鼠模型,分别于造模前0.5 h及造模后3.5 h对各给药组大鼠给予药物干预,并于造模后第0、4、5、6、7、8小时测量大鼠肛温,收集造模后8 h大鼠血清及脑组织,采用ELISA法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL1β)、IL-6及下丘脑中前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)、环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)的含量;采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)对大鼠的血清及下丘脑进行代谢组学分析,探究其潜在的生物标志物,结合血清及下丘脑代谢组学的相关分析结果及ELISA指标,共同阐释牛胆汁的解热作用机制。结果造模4 h后模型组大鼠肛温显著升高(P<0.01),牛胆汁组大鼠肛温显著低于模型组(P<0.01),牛胆汁能够显著抑制发热导致的TNFα、IL-1β、IL-6、PGE2、cAMP含量增加(P<0.01)。代谢组学结果表明干酵母致大鼠发热后血清及下丘脑的代谢轮廓发生了显著的变化,分别从其中鉴定得到24、18种内源性代谢物,给予牛胆汁干预后其含量均显著回调,主要影响花生四烯酸代谢、甘油磷脂代谢、丙酮酸代谢、柠檬酸循环、鞘脂代谢、嘧啶代谢、氨基酸代谢、糖代谢等途径。结论牛胆汁对干酵母所致发热大鼠模型具有显著的解热作用,其作用机制可能与抑制内源性致热源的释放及调节机体的脂质代谢、氨基酸代谢、糖代谢有关,具有多靶点、多途径的特征。 展开更多
关键词 牛胆汁 解热 下丘脑 血清 代谢组学 胆酸 去氧胆酸 鹅去氧胆酸 猪去氧胆酸 甘氨胆酸 甘氨去氧胆酸 甘氨猪去氧胆酸 甘氨鹅去氧胆酸 牛磺胆酸 牛磺猪去氧胆酸 牛磺鹅去氧胆酸
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甘氨鹅脱氧胆酸钠通过MAPK/ERK1/2介导Bcl-2在Ser70位点的磷酸化引起人肝细胞癌的抗药 被引量:6
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作者 陈磊 周茂军 +2 位作者 肖湘成 李霞 杨满意 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期97-102,共6页
B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)是一种重要的抗凋亡蛋白质,在多种人类肿瘤中普遍过表达。甘氨鹅脱氧胆酸钠(GCDA)与消化道肿瘤的发生发展密切相关,并能介导肝癌细胞对化疗药物的抵抗。本文旨在探讨在GCDA介导的人肝细胞癌(HCC)耐药性中Bcl-2的作... B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)是一种重要的抗凋亡蛋白质,在多种人类肿瘤中普遍过表达。甘氨鹅脱氧胆酸钠(GCDA)与消化道肿瘤的发生发展密切相关,并能介导肝癌细胞对化疗药物的抵抗。本文旨在探讨在GCDA介导的人肝细胞癌(HCC)耐药性中Bcl-2的作用及其机制。本研究以肝癌细胞系为研究对象,Western印迹结果显示,Bcl-2在多种肝癌细胞系中均有表达。设计靶向Bcl-2的siRNA沉默HCC细胞系内源性Bcl-2的表达,发现Bcl-2沉默之后促进了化疗药物5-FU介导的HCC细胞凋亡。机制上,GCDA可介导Bcl-2在Ser70位点的磷酸化,而Ser70位点的磷酸化能够被PD98059(MAPK/ERK1/2抑制剂)所抑制。构建huBcl2-WT和huBcl2-S70A真核表达载体,脂质体转染HCC细胞系。用Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测凋亡细胞。结果显示,huBcl2-WT过表达能抑制5-FU介导的凋亡,S70位点失活突变成A后,Bcl-2的过表达不能抑制5-FU介导的凋亡。本研究提示,GCDA通过MAPK/ERK1/2通路介导的Bcl-2 Ser70位点的磷酸化,在肝癌细胞的存活和抗药中发挥重要作用。抑制Bcl-2能够促进化疗药物5-FU介导的HCC细胞凋亡,该结果为治疗GCDA介导的耐药性肝癌提供新的思路。 展开更多
关键词 肝细胞癌 甘氨鹅脱氧胆酸钠 B细胞淋巴瘤-2 磷酸化
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胆盐诱导肝细胞癌生存与耐药的实验研究 被引量:2
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作者 廖明媚 张阳德 +3 位作者 邓星明 段菁华 潘一峰 赵劲风 《中国医院药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期446-448,共3页
目的:探索胆盐(GCDA)环境下肝癌细胞株HepG2的生长情况及其对抗肿瘤药物的作用研究。方法:用GCDA处理HepG2细胞,采用MTT法检测细胞活性与增殖性;用抗肿瘤药物与/或GCDA对HepG2细胞进行处理,采用流式细胞术检测凋亡率,用WesternBlotting... 目的:探索胆盐(GCDA)环境下肝癌细胞株HepG2的生长情况及其对抗肿瘤药物的作用研究。方法:用GCDA处理HepG2细胞,采用MTT法检测细胞活性与增殖性;用抗肿瘤药物与/或GCDA对HepG2细胞进行处理,采用流式细胞术检测凋亡率,用WesternBlotting技术检测Bcl-2家族凋亡调控蛋白的表达变化。结果:GCDA能使HepG2细胞增殖;GCDA使抗凋亡基因Mcl-1增强,促凋亡基因Bak、Bim与Bax减弱;GCDA使抗肿瘤药物作用下细胞凋亡率明显下降(P<0.05)。结论:GCDA能诱导肝癌细胞株HepG2细胞存活与增殖,并通过上调抗凋亡蛋白和下调促凋亡蛋白对抗肿瘤药物产生耐药。 展开更多
关键词 甘氨鹅脱氧胆酸钠(gcda) 肝细胞癌 耐药性 凋亡调控
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猪胆粉HPLC-ELSD全轮廓谱图主要胆汁酸测定及化学计量学分析 被引量:22
7
作者 石岩 耿颖 +3 位作者 郑天骄 魏锋 林瑞超 马双成 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期283-289,共7页
目的:建立测定猪胆粉中主要胆汁酸类成分的HPLS-ELSD法,并对样品的全轮廓色谱图进行化学计量学分析。方法:采用SB-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温为40℃,流动相为0.2%甲酸水溶液-乙腈,梯度洗脱,流速1.0 m L·min^(-1);... 目的:建立测定猪胆粉中主要胆汁酸类成分的HPLS-ELSD法,并对样品的全轮廓色谱图进行化学计量学分析。方法:采用SB-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温为40℃,流动相为0.2%甲酸水溶液-乙腈,梯度洗脱,流速1.0 m L·min^(-1);ELSD漂移管温度为110℃,氮气流量为2.8 L·h^(-1),增益为1。使用COW法校正样品的色谱峰,并对数据进行聚类分析和主成分分析。结果:有2批样品未检出甘氨猪去氧胆酸和甘氨鹅去氧胆酸,另外20批样品的甘氨猪去氧胆酸和甘氨鹅去氧胆酸的含量分别在6.4%~36.5%和4.5%~27.0%之间。化学计量学分析结果表明,自制样品与对照药材图谱更接近,而与市售样品差异较大。结论:该法适合从定性和定量的角度对猪胆粉进行质量评价与控制。 展开更多
关键词 动物药 猪胆粉 胆汁酸 甘氨猪去氧胆酸 甘氨鹅去氧胆酸 高效液相色谱 蒸发光散射检测器 聚类分析 主成分分析
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PI3K/AKT/mTOR信号通路对甘氨鹅脱氧胆酸钠诱导的肝细胞凋亡的机制研究 被引量:9
8
作者 翁丹丹 王俊波 郦光晓 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2019年第2期121-127,共7页
目的:探讨PI3K/AKT/mTOR信号通路对甘氨鹅脱氧胆酸钠(GCDC)诱导的人肝正常细胞HL-7702增殖、凋亡的影响。方法:将HL-7702细胞分为对照组、GCDC组(1 mmol/L的GCDC预处理细胞4 h)、GCDC+LY294002组(GCDC处理细胞4 h后,使用15μmol/L的LY29... 目的:探讨PI3K/AKT/mTOR信号通路对甘氨鹅脱氧胆酸钠(GCDC)诱导的人肝正常细胞HL-7702增殖、凋亡的影响。方法:将HL-7702细胞分为对照组、GCDC组(1 mmol/L的GCDC预处理细胞4 h)、GCDC+LY294002组(GCDC处理细胞4 h后,使用15μmol/L的LY294002处理细胞24 h)和GCDC+IGF-1组(GCDC处理细胞4 h后,使用20 nmol/L的IGF-1处理细胞24 h)。处理结束后,通过Western blot检测PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR、Bcl-2、Bax和Nrf2蛋白表达;MTT法及Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞增殖和凋亡率;DCFH-DA探针法检测细胞活性氧(ROS)含量。结果:GCDC可明显下调HL-7702细胞PI3K、p-AKT、p-mTOR、Bcl-2和Nrf2表达,上调Bax表达,抑制细胞增殖,诱导凋亡,诱导细胞ROS产生(P<0.05),LY294002可增强GCDC对HL-7702细胞增殖、凋亡、ROS水平及PI3K、p-AKT、p-mTOR、Bcl-2、Bax和Nrf2表达影响,IGF-1反之。结论:激活PI3K/AKT/mTOR信号通路可改善胆汁性肝纤维化,机制可能与抗凋亡和抗氧化有关。 展开更多
关键词 PI3K/AKT/mTOR信号通路 甘氨鹅脱氧胆酸钠 肝细胞损伤 氧化应激
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胆汁酸对胃癌细胞株MKN-28生长的影响 被引量:1
9
作者 王学伟 曹勤 《胃肠病学》 2012年第3期176-178,共3页
胆汁反流是常见现象,其对胃上皮细胞生长的影响尚不明确。目的:探讨胆汁酸体外对胃癌细胞株MKN-28生长的影响。方法:采用Mr丌法测定不同浓度牛磺石胆酸钠(TLC)和甘氨鹅脱氧胆酸钠(GCDC)对胃癌细胞株MKN.28生长的影响。结果:第1... 胆汁反流是常见现象,其对胃上皮细胞生长的影响尚不明确。目的:探讨胆汁酸体外对胃癌细胞株MKN-28生长的影响。方法:采用Mr丌法测定不同浓度牛磺石胆酸钠(TLC)和甘氨鹅脱氧胆酸钠(GCDC)对胃癌细胞株MKN.28生长的影响。结果:第1-6d,60-300μmol/LTLC可明显抑制MKN-28细胞生长,且呈剂量依赖性。300μmol/LGCDC干预24h可显著抑制MKN-28细胞生长。结论:脂溶性胆汁酸TLC和水溶性胆汁酸GCDC体外均可直接抑制胃癌细胞生长。 展开更多
关键词 胆汁酸类和盐类 牛磺石胆酸钠 甘氨鹅脱氧胆酸钠 上皮细胞 生长
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HPLC-ELSD测定胆益宁片中甘氨猪去氧胆酸和甘氨鹅去氧胆酸含量 被引量:1
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作者 马若飞 陈勇 陈碧莲 《中国现代应用药学》 CAS CSCD 2017年第7期1018-1020,共3页
目的建立HPLC-ELSD测定胆益宁片中的甘氨猪去氧胆酸和甘氨鹅去氧胆酸的含量测定方法。方法采用Welch Ultimate Plus C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:乙腈-0.1%甲酸溶液(40∶60),柱温:35℃,流速:1.0 mL·min^(-1),检... 目的建立HPLC-ELSD测定胆益宁片中的甘氨猪去氧胆酸和甘氨鹅去氧胆酸的含量测定方法。方法采用Welch Ultimate Plus C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:乙腈-0.1%甲酸溶液(40∶60),柱温:35℃,流速:1.0 mL·min^(-1),检测器为ELSD6000型蒸发光散射检测器,漂移管温度为105℃,氮气流速为2.5 L·min^(-1)。结果甘氨猪去氧胆酸和甘氨鹅去氧胆酸分别在0.206~3.090μg(r=0.999 5)和0.180~2.693μg(r=0.999 4)内呈良好的线性,平均加样回收率分别为99.54%(RSD=0.99%)和100.58%(RSD=1.70%)。结论该方法简便、准确、重复性好,可用于胆益宁片的质量控制。 展开更多
关键词 胆益宁片 甘氨猪去氧胆酸 甘氨鹅去氧胆酸 HPLC-ELSD
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TMEM39A在原发性胆汁性胆管炎中的作用机制
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作者 孙晓彤 韩崇旭 +2 位作者 王婵 任传利 张明明 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2023年第17期2176-2182,共7页
目的探讨TMEM39A在原发性胆汁性胆管炎中的作用机制。方法为研究TMEM39A在原发性胆汁性胆管炎中如何调节自噬的表达,选用人肝胆管癌细胞RBE来进行研究。并用疏水性胆汁酸甘氨鹅脱氧胆酸(GCDC)处理人肝胆管癌细胞RBE分为3组:control组、... 目的探讨TMEM39A在原发性胆汁性胆管炎中的作用机制。方法为研究TMEM39A在原发性胆汁性胆管炎中如何调节自噬的表达,选用人肝胆管癌细胞RBE来进行研究。并用疏水性胆汁酸甘氨鹅脱氧胆酸(GCDC)处理人肝胆管癌细胞RBE分为3组:control组、500μmol/L组和1000μmol/L组。细胞计数试剂盒(CCK-8)、细胞克隆、细胞划痕和Hoechst染色实验检测细胞活力、增殖、伤口愈合率和凋亡。qPCR检测细胞中TMEM39A mRNA表达量;Western blot检测TMEM39A和LC3的蛋白表达量。结果与control组相比较,1000μmol/L组的细胞活力、增殖和伤口愈合率降低,细胞凋亡现象最明显。在构建的原发性胆汁性胆管炎的模型中,过表达TMEM39A会促进LC3的表达。结论TMEM39A的表达增高引起胆管细胞自噬增强使胆管受损,可能是引起原发性胆汁性胆管炎的机制之一。 展开更多
关键词 TMEM39A 原发性胆汁性胆管炎 人肝胆管癌细胞 微管相关蛋白3β 甘氨鹅脱氧胆酸
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