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Theoretical Basis of Gene Splitting Technique and Its Application in the Control of Transgene Flow
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作者 Yufeng DONG Xujing WANG +1 位作者 Qiaoling TANG Zhixing WANG 《Agricultural Biotechnology》 CAS 2015年第3期1-4,共4页
Transgenic safety issues cause more and more controversies with the planting area of transgenie crops increased year by year. Gene flow from transgenie crops to wild relatives through pollen dispersal is one of the fo... Transgenic safety issues cause more and more controversies with the planting area of transgenie crops increased year by year. Gene flow from transgenie crops to wild relatives through pollen dispersal is one of the focus problems. Gene splitting technique provides a new strategy for the control of transgene flow by bio-logical containment. The construction of gene splitting technique is based on protein trans-splicing mediated by intein. Currently, it has been proved in Arabidopsis, tabaoco, wheat, etc. that active and functional proteins can be reassembled by intein mediated protein trans-splicing after gene splitting, which provides theoretical basis and experimental supporting for the limit of transgene flow by gene splitting technique. The theoretical basis of gene splitting technique and research progresses of its application on the control of transgene flow were reviewed in this paper. 展开更多
关键词 gene splitting INTEIN gene flow
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尖孢镰刀菌亚麻专化型FolSid1基因敲除及功能分析
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作者 高芳 侯占铭 《华北农学报》 北大核心 2025年第1期189-198,共10页
通过克隆尖孢镰刀菌亚麻专化型FolSid1基因,确定该基因在镰刀菌中的生物学功能以及蛋白定位。通过与尖孢镰刀菌近缘菌同源比对,克隆得到FolSid1的基因序列,基于同源重组原理,使用Split Marker法构建含有潮霉素抗性基因(hph)的基因缺失盒... 通过克隆尖孢镰刀菌亚麻专化型FolSid1基因,确定该基因在镰刀菌中的生物学功能以及蛋白定位。通过与尖孢镰刀菌近缘菌同源比对,克隆得到FolSid1的基因序列,基于同源重组原理,使用Split Marker法构建含有潮霉素抗性基因(hph)的基因缺失盒,通过PEG介导法转入野生型原生质体中,获得基因敲除突变体(ΔFolSid1),对突变菌株做表型鉴定和致病力分析,分析该基因在尖孢镰刀菌亚麻专化型中的功能。构建含有FolSid1基因的绿色荧光表达载体pZESH1,对FolSid1-EGFP融合蛋白进行亚细胞定位。结果表明,FolSid1基因序列全长5 392 bp,含有3个内含子。与野生型和外插入突变体相比,尽管敲除突变体ΔFolSid1分生孢子形态和大小没有不同,但产量显著下降;形态学观察发现,敲除突变体的生长速度明显减慢;亚麻试验显示,缺失突变体的致病力明显降低;基因的亚细胞定位试验显示,FolSid1蛋白主要定位于菌丝细胞的细胞膜上。FolSid1基因能够调控尖孢镰刀菌亚麻专化型的菌丝营养生长、分生孢子发生且对亚麻具有致病性。 展开更多
关键词 尖孢镰刀菌亚麻专化型 FolSid1 split Marker 基因敲除
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苎麻疫霉激发蛋白基因断裂现象初探 被引量:5
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作者 谢丙炎 朱国仁 +1 位作者 罗宽 李宗道 《菌物系统》 CSCD 北大核心 1999年第2期154-158,共5页
苎麻疫霉(PhytophthoraboehmeriaeSaw.)可分泌具有诱抗作用的激发蛋白(α-elicihn),根据α-elicitin第24~30和56~63位保守区氨基酸推导的寡核苷酸引物序列,对苎麻疫霉基因组DNA进行特异PCR扩增反应,发现其扩增的DNA片段大... 苎麻疫霉(PhytophthoraboehmeriaeSaw.)可分泌具有诱抗作用的激发蛋白(α-elicihn),根据α-elicitin第24~30和56~63位保守区氨基酸推导的寡核苷酸引物序列,对苎麻疫霉基因组DNA进行特异PCR扩增反应,发现其扩增的DNA片段大于预计的片段。回收纯化的特异扩增DNA,并进行克隆和测序分析,结果表明特异扩增的elicihn基因亚克隆DNA为570hp,大于预计的117bp。在特异片段中,存在3个内含子将基因断裂成4个阅读框架,即ORF1、ORF2、ORF3和ORF4,其中ORF1和ORF4含有与引物相同的序列,但与其它序列与已克隆的elicihn基因无同源性。因此,芒麻疫霉基因组中的elicitin基因可能存在断裂现象。 展开更多
关键词 苎麻疫霉 激发蛋白 Elicitin基因 基因断裂现象
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薏苡仁不同组分干预脾虚水湿不化大鼠细胞间隙基因变化 被引量:6
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作者 韩晓春 季旭明 +7 位作者 王彦芳 张亚楠 陈倩 庞张祥 王海瑞 岳静 任莹 王世军 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期1955-1958,共4页
目的:探讨薏苡仁不同组分对脾虚水湿不化模型大鼠空肠extracellular space组件的影响。方法:以高脂低蛋白饮食+游泳建立脾虚水湿不化大鼠模型,基因芯片技术进行空肠全基因组测定,以Quick-GO注释到的extracellular space组件进行PCA分析... 目的:探讨薏苡仁不同组分对脾虚水湿不化模型大鼠空肠extracellular space组件的影响。方法:以高脂低蛋白饮食+游泳建立脾虚水湿不化大鼠模型,基因芯片技术进行空肠全基因组测定,以Quick-GO注释到的extracellular space组件进行PCA分析。结果:模型组和正常对照组具有非常清楚的差异,模型组主要出现了Sepp1、Lamc2、Csn1s1、Mmp8、Ccl20、Apoe、Apoa5、Pyy、Ccl19、Np4基因的上调和Gnrh1、Col6a3基因的下调,薏苡仁水煎液和各拆分组分均能够对模型大鼠的差异基因进行调节,改善机体微环境,主要起作用的基因是Col6a3、Sepp1、Lamc2、Gnrh1、Myoc、Csn1s1、Mmp8、Ccl20、Arg1、Apoe等。结论:脾虚水湿不化的运化失常应该是以物质由小肠上皮细胞向其他组织器官运送过程的异常为主,薏苡仁各组分的治疗都可使失衡的细胞微环境得到改善。 展开更多
关键词 脾虚水湿不化 细胞间隙 基因芯片 拆分 主成分分析
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MALToma Ig重链蛋白、IgH基因重排/断裂检测的临床意义 被引量:3
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作者 王红霞 陈昊 +3 位作者 林海月 聂艳红 齐冬雪 江亚军 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期902-906,共5页
目的探讨Ig重链蛋白、IgH基因重排/断裂在黏膜相关淋巴组织淋巴瘤(mucosa-associated lymphoid tissue lymphoma,MALToma)诊断中的应用价值。方法选取40例MALToma作为实验组,15例反应性淋巴组织增生(reactive lymphoid hyperplasia,RLH... 目的探讨Ig重链蛋白、IgH基因重排/断裂在黏膜相关淋巴组织淋巴瘤(mucosa-associated lymphoid tissue lymphoma,MALToma)诊断中的应用价值。方法选取40例MALToma作为实验组,15例反应性淋巴组织增生(reactive lymphoid hyperplasia,RLH)作为对照组,应用免疫组化、PCR、FISH技术分别检测两组中Ig重链蛋白、IgH基因重排、IgH基因断裂情况。结果(1)Ig重链蛋白表达根据免疫组化结果可分为三种模式:单种Ig重链蛋白表达(模式Ⅰ)、Ig重链蛋白全阴性(模式Ⅱ)、多种Ig重链蛋白表达(模式Ⅲ)。实验组模式Ⅰ/Ⅱ的阳性率(87.5%)显著高于对照组(0)(P<0.01)。(2)实验组IgH基因重排、IgH基因断裂的阳性率分别为72.5%(29/40)、32.5%(13/40),而对照组未检出IgH基因重排、IgH基因断裂(P<0.01,P<0.05)。(3)Ig重链蛋白模式Ⅰ/Ⅱ和IgH基因重排联合检测以及Ig重链蛋白模式Ⅰ/Ⅱ、IgH基因重排和IgH基因断裂联合检测的阳性率均高达97.5%。(4)在Ig重链蛋白模式Ⅱ中,有9例检出IgH基因断裂(90%);在模式Ⅰ/Ⅲ中,仅有4例检出IgH基因断裂(13.3%),两组相比差异有统计学意义(P<0.01)。Ig重链蛋白表达和IgH基因断裂呈正相关(r s=0.323,P<0.05)。结论联合检测Ig重链蛋白表达模式和IgH基因重排可有效辅助鉴别MALToma和RLH;IgH基因断裂可能与Ig重链蛋白表达缺失高度相关。 展开更多
关键词 淋巴瘤 MALToma Ig重链蛋白 IGH基因重排 IgH基因断裂
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利用基因拆分技术培育耐草甘膦转基因水稻的研究 被引量:1
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作者 董玉凤 王旭静 +2 位作者 宋亚亚 靳茜 王志兴 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期344-353,共10页
耐除草剂转基因水稻基因飘流可能产生的环境安全问题是人们关注的焦点之一,并已成为耐除草剂转基因水稻能否在我国生产上发挥效益的限制因素。基因拆分技术能够有效地控制转基因目标性状飘流,为培育耐除草剂转基因水稻提供新的途径和思... 耐除草剂转基因水稻基因飘流可能产生的环境安全问题是人们关注的焦点之一,并已成为耐除草剂转基因水稻能否在我国生产上发挥效益的限制因素。基因拆分技术能够有效地控制转基因目标性状飘流,为培育耐除草剂转基因水稻提供新的途径和思路。本研究将耐除草剂基因G2-aroA拆分成N端(EPSPSn,1~295aa)和C端(EPSPSc,296~435aa),分别与SspDnaE蛋白内含肽的N端(Intein-N)和C端(Intein-C)连接形成融合基因EPSPSn-In与Ic-EPSPSc,并分别通过农杆菌介导法转入受体材料中花11。Southern杂交证明转基因水稻En-12和Ec-22中外源基因为单拷贝插入。侧翼序列分析证明转基因水稻En-12和Ec-22中外源基因分别插入第2和第6染色体。利用四引物法筛选出转基因水稻En-12和Ec-22的纯合系,并通过有性杂交获得同时含有EPSPSn-In与Ic-EPSPSc的转基因水稻En×Ec。草甘膦抗性分析发现,单独含有1个基因片段的转基因水稻En-12和Ec-22不具有耐受草甘膦特性,而同时含有2个基因片段的转基因水稻En×Ec具有耐受草甘膦的特性,说明拆分后的2个蛋白片段在intein的介导下重新组装成完整有功能蛋白,并赋予转基因水稻耐受草甘膦的特性。转基因水稻En×Ec与含有完整G2-aroA转基因水稻G2-6相比,其耐受草甘膦的能力有所下降,但能够满足生产需求。本研究结果为利用基因拆分技术培育转基因耐草甘膦水稻提供了科学依据,同时也为利用基因工程手段培育转基因杂交稻提供了新的技术平台。 展开更多
关键词 耐草甘膦 转基因水稻 基因拆分技术
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结球甘蓝耐裂球性状遗传分析 被引量:21
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作者 苏彦宾 刘玉梅 +5 位作者 方智远 杨丽梅 庄木 张扬勇 张小丽 孙培田 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1482-1490,共9页
以结球甘蓝‘79-156’和‘96-100’为亲本配制的6个联合世代(P1、P2、F1、B1、B2、F2)群体为试材,采用主基因+多基因混合遗传模型对耐裂球性状进行了遗传分析。两年结果均表明,耐裂球性状的最适遗传模型为E-0模型,即两对加性–显性–上... 以结球甘蓝‘79-156’和‘96-100’为亲本配制的6个联合世代(P1、P2、F1、B1、B2、F2)群体为试材,采用主基因+多基因混合遗传模型对耐裂球性状进行了遗传分析。两年结果均表明,耐裂球性状的最适遗传模型为E-0模型,即两对加性–显性–上位性主基因+加性–显性–上位性多基因控制。两对主基因均以加性效应为主,且存在明显的互作效应。2010年该组合B1、B2、F2分离群体的主基因遗传率分别为67.3%、1.4%和59.1%,多基因遗传率分别为0、56.2%和0,遗传变异平均值占表型变异的60.9%,环境变异平均值占表型变异的39.1%;2011年该组合B1、B2、F2分离群体的主基因遗传率分别为85.5%、22.3%和84%,多基因遗传率分别为0、24.3%和0,遗传变异平均值占表型变异的63.9%,环境变异平均值占表型变异的36.1%。表明该性状以主基因遗传为主,同时受环境影响较大,应在早期世代进行选择,B1、F2主基因选择效率较高。 展开更多
关键词 结球甘蓝 耐裂球 主基因+多基因 遗传分析
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先天性肛门直肠畸形合并少见型手足畸形一家系调查及其病因研究 被引量:2
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作者 苏朋俊 袁宇航 +2 位作者 张志波 黄英 王大佳 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期38-41,共4页
目的探讨先天性肛门直肠畸形合并少见型手足畸形一家系患者的临床表现及其致病原因。方法在患者家系调查的基础上,设立正常对照组与患者组,应用聚合酶链反应技术对候选基因P63第3-14、DLX5、DLX6、DAC和HOXD13外显子DNA序列测定,对两组... 目的探讨先天性肛门直肠畸形合并少见型手足畸形一家系患者的临床表现及其致病原因。方法在患者家系调查的基础上,设立正常对照组与患者组,应用聚合酶链反应技术对候选基因P63第3-14、DLX5、DLX6、DAC和HOXD13外显子DNA序列测定,对两组的外显子进行分析。结果根据病史及体检提示,该家系患者祖孙三代均患有畸形程度进行性加重的肛门直肠畸形及手足畸形,其中2例肢体畸形符合缺指裂掌畸形;病因研究提示,将患者扩增的片段DNA序列分别与正常对照组以及人类基因库DNA序列进行比较,发现位于P63基因第6外显子的第797位碱基对发生突变,即由G突变为A,密码子CGA->CAA,该突变结果为错义突变,导致相对应的第227位氨基酸由精氨酸->谷氨酰胺。结论肛门直肠畸形合并缺指裂掌畸形可能是1个新的综合征表现型,由P63基因第6外显子基因组的第797位碱基对突变所致。 展开更多
关键词 肛门直肠畸形 并指(趾) 缺指裂掌 家系 P63 基因突变
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植物安全转基因技术研究现状与展望 被引量:22
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作者 王根平 杜文明 夏兰琴 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期823-843,共21页
转基因技术是进行基因功能研究和作物遗传改良的重要工具。根癌农杆菌介导转化法和基因枪轰击法是两种主要的遗传转化方法。从1996年首例转基因作物商业化种植以来,2012年全球有28个国家和地区种植转基因作物,种植面积已达1.7亿公顷。... 转基因技术是进行基因功能研究和作物遗传改良的重要工具。根癌农杆菌介导转化法和基因枪轰击法是两种主要的遗传转化方法。从1996年首例转基因作物商业化种植以来,2012年全球有28个国家和地区种植转基因作物,种植面积已达1.7亿公顷。随着全球转基因作物的大面积商业化种植,转基因植物的安全性越来越多地受到公众关注。安全转基因技术的研发对于转基因植物的商业化生产具有重要意义。文章详细介绍了目前已报道的安全转基因技术原理及其应用现状。按其作用原理和目的将其分为4类:安全选择标记、标记基因删除及基因叠加、基因漂移防控法和基因定点编辑整合技术。其中,安全选择标记按其筛选原理分为糖代谢相关标记、氨基酸代谢相关标记、激素相关标记和抗逆相关标记。与抗生素和除草剂抗性标记相比,这类标记基因及其表达产物对人和其他生物更安全。标记基因删除及基因叠加技术包括共转化法、位点特异性重组法、转座子法、同源重组法以及基于位点特异性重组的基因叠加技术,其中共转化法又包括农杆菌介导的共转化法和基因枪介导的表达盒共转化法。基因叠加技术为复合性状转基因植物研发奠定了基础,有望成为未来多性状转基因植物研发的重要技术之一。基因漂流防控法包括叶绿体转化法和基因拆分法。基因定点编辑和整合技术包括锌指核酸酶、TALEN和CRISPR/Cas9系统介导的基因定点编辑和整合技术。其中,TALEN和CRISPR/Cas9技术,设计简单,成本低,易操作,靶点分布广泛,有望成为安全转基因研发和应用的重要技术。文章对这些技术原理及其应用现状进行了综述,讨论了其优缺点,并展望了安全转基因技术研发重点和发展趋势。 展开更多
关键词 转基因植物 安全标记基因 标记基因删除法 基因叠加 叶绿体转化法 基因拆分法 基因定点修饰
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基因拆分技术的理论基础及其在限控转基因飘流中的应用
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作者 董玉凤 王旭静 +1 位作者 唐巧玲 王志兴 《生物技术进展》 2014年第2期85-89,共5页
随着转基因作物种植面积的逐年增长,转基因安全性问题引起越来越多的争论,其中花粉扩散引起的转基因向近缘种飘流的问题是人们关注的焦点问题之一。基因拆分技术为采用生物学措施控制转基因飘流提供了新的思路和途径。基因拆分技术是基... 随着转基因作物种植面积的逐年增长,转基因安全性问题引起越来越多的争论,其中花粉扩散引起的转基因向近缘种飘流的问题是人们关注的焦点问题之一。基因拆分技术为采用生物学措施控制转基因飘流提供了新的思路和途径。基因拆分技术是基于内含肽intein介导的蛋白剪接功能而建立起来的。目前已在拟南芥、烟草、小麦等作物中证明多个基因拆分后能重新组装成有活性的功能蛋白,这为通过基因拆分技术控制转基因飘流提供了理论基础和实验支撑。本文对基因拆分技术的理论基础及其用于限控转基因飘流方面的研究进展进行了综述。 展开更多
关键词 基因拆分 内含肽 基因飘流
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铵硝营养对番茄幼苗根系中NR、GS活性及表达的影响 被引量:3
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作者 魏丽娜 周文灵 +4 位作者 陈迪文 黄莹 敖俊华 江永 卢颖林 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第9期2093-2099,共7页
为探讨不同形态氮(N)素对番茄幼苗根系中N素代谢相关酶活性及其基因表达差异,揭示不同形态N素影响番茄幼苗吸收和同化NO_3^-、NH_4^+差异的机理,本文采用全根和分根两种培养方式,研究了番茄幼苗在不同形态N素处理下,硝酸还原酶(NR)、谷... 为探讨不同形态氮(N)素对番茄幼苗根系中N素代谢相关酶活性及其基因表达差异,揭示不同形态N素影响番茄幼苗吸收和同化NO_3^-、NH_4^+差异的机理,本文采用全根和分根两种培养方式,研究了番茄幼苗在不同形态N素处理下,硝酸还原酶(NR)、谷氨酰胺合成酶(GS)活性以及NR基因(Le NR)、GS基因(Le GS)表达差异。结果表明,在全根培养下,当营养液中NO_3^-/NH_4^+为50/50处理下根系干重分别是NO_3^-/NH_4^+为100/0和75/25的50.00%和28.5 7%;在分根培养下,在N|A处理下,供单一NO_3^-和单一NH_4^+营养根系干重分别是N|N处理下的176.76%和133.28%。在全根培养下,随着营养液中NH_4^+比例的增加,根系中NR活性显著降低,GS活性呈先增加后降低的趋势,Le NR的表达量逐渐降低。在分根培养下,与N|N处理相比,局部根系供单一NH_4^+营养显著降低了自身根系中NR活性和Le NR表达量,显著提高了GS活性,但对另一侧(供NO_3^-)根系中Le NR的表达量没有影响。局部根系供NO_3^-、NH_4^+混合营养对自身根系中Le NR的表达量没有显著影响,但显著抑制了另一侧(供NO_3^-)根系中Le NR的表达量。在不同培养方式和不同形态N素处理下,Le GS表达量均没有显著性差异。由此可得,介质中NH_4^+营养降低了根系中NR活性和Le NR的表达量,提高了根系中GS活性但对Le GS表达量无显著影响。 展开更多
关键词 番茄 全根 分根 NR GS 基因表达
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先天性脊柱侧凸发状分裂相关增强子-7基因外显子突变的筛查
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作者 丁旗 邱旭升 +5 位作者 孙旭 季明亮 吕峰 江华 张兴 邱勇 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期252-257,共6页
目的:探讨汉族人群中发状分裂相关增强子-7(hairy-and-enhancer-of-split-7,HES7)基因外显子(exon)突变与先天性脊柱侧凸(congenital scoliosis,CS)发病的关系。方法:2009年6月~2010年12月在我院行手术治疗且有完整影像学资料的汉族散... 目的:探讨汉族人群中发状分裂相关增强子-7(hairy-and-enhancer-of-split-7,HES7)基因外显子(exon)突变与先天性脊柱侧凸(congenital scoliosis,CS)发病的关系。方法:2009年6月~2010年12月在我院行手术治疗且有完整影像学资料的汉族散发非综合征型CS患者60例(病例组),其中男23例,女37例,年龄12.9±4.4岁;对照组为80例正常汉族人,其中男32例,女48例,年龄13.7±3.2岁。从每例受检者外周血中提取基因组DNA,设计引物扩增HES7基因exon(共4个:exon 1~4)序列,目的产物纯化后DNA自动测序,应用DNAstar软件的MegAlign将两组测序结果进行对比,并与美国NCBI基因库所公布的HES7基因exon序列进行比对分析,比较两组exon突变情况。结果:病例组和对照组HES7基因exon 1和exon 4序列均与基因库HES7基因exon序列一致;exon 2第81位点在两组中均存在G/A多态性,但基因多态性分布频率无显著性差异(P=0.727);exon 3第37位点在两组中均存在T/C多态性,但基因多态性分布频率也无显著性差异(P=1.000)。结论:中国汉族散发非综合征型CS患者HES7基因exon无突变,在中国汉族人群中HES7基因exon突变与散发非综合征型CS的发病可能无关。 展开更多
关键词 先天性脊柱侧凸 HES7基因 外显子 突变分析
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禾谷镰刀菌中FgPDE1基因的敲除及其功能的研究 被引量:5
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作者 常玉梅 侯占铭 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期59-67,共9页
目的:旨在敲除禾谷镰刀菌Fusarium graminearum Fg PDE1基因,确定其缺失突变体表型,从而分析该基因的生物学功能。方法:应用Split-marker技术构建含有潮霉素基因敲除盒,通过PEG介导原生质体转化,PCR筛查抗潮霉素转化子以获得缺失突变体... 目的:旨在敲除禾谷镰刀菌Fusarium graminearum Fg PDE1基因,确定其缺失突变体表型,从而分析该基因的生物学功能。方法:应用Split-marker技术构建含有潮霉素基因敲除盒,通过PEG介导原生质体转化,PCR筛查抗潮霉素转化子以获得缺失突变体ΔFg PDE1,根据突变体表型变化及致病性的检测对Fg PDE1基因的功能进行分析。结果:采用Split-marker技术,成功构建了Fg PDE1基因敲除盒;PEG介导转化禾谷镰刀菌原生质体后成功获得转化子。经PCR筛查,得到3个PCR确认的敲除突变体;表型观察发现,ΔFg PDE1菌落的外型及菌落生长速度与野生型没有明显差异。孢子侵染西红柿果实实验证明:以西红柿为侵染宿主,相对于野生型,突变体致病性没有明显减弱;但突变体分生孢子产量显著下降。结论:Fg PDE1基因可能与禾谷镰刀菌分生孢子的形成有关。 展开更多
关键词 禾谷镰刀菌 FgPDE1 基因敲除 split-Marker
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小麦赤霉菌FGSG__04871基因敲除及功能研究 被引量:6
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作者 彭海丽 侯占铭 《内蒙古师范大学学报(自然科学汉文版)》 CAS 北大核心 2017年第3期394-400,共7页
应用Split-Marker基因敲除技术,构建含有潮霉素抗性基因hph的基因敲除盒,由PEG介导,进行原生质体转化,在含有潮霉素的培养基上筛选转化子,应用PCR正负筛查确定缺失突变体.根据缺失突变体致病性的检测及表型变化对FGSG_04871基因的生物... 应用Split-Marker基因敲除技术,构建含有潮霉素抗性基因hph的基因敲除盒,由PEG介导,进行原生质体转化,在含有潮霉素的培养基上筛选转化子,应用PCR正负筛查确定缺失突变体.根据缺失突变体致病性的检测及表型变化对FGSG_04871基因的生物学功能进行分析.通过PCR正负筛选成功获得了3个敲除突变体,分别命名为△FGSG_04871 1-1、△FGSG_04871 1-3、△FGSG_04871 2-1.以野生型PH-1作为对照,敲除突变体的菌落形态没有明显变化,菌落生长速度略微滞后,致病力没有减弱.但是,突变体的产孢量低于野生型PH-1,因此,FGSG_04871基因可能与小麦赤霉菌分生孢子的生长能力有关. 展开更多
关键词 小麦赤霉菌 FGSG__04871 split-marker 基因敲除 致病力
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桃果实裂核的研究进展 被引量:3
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作者 辛阅军 王有年 《北京农学院学报》 2008年第1期77-80,共4页
裂核的发生可引起果实品质的下降,导致种植者遭受巨大经济损失。裂核的发生受到遗传和环境的因素影响。探讨栽培因子对桃裂核发生的影响,并对裂核基因的研究进展进行总结分析,为探究桃裂核发生机理提供理论依据,对桃的优质栽培具有实践... 裂核的发生可引起果实品质的下降,导致种植者遭受巨大经济损失。裂核的发生受到遗传和环境的因素影响。探讨栽培因子对桃裂核发生的影响,并对裂核基因的研究进展进行总结分析,为探究桃裂核发生机理提供理论依据,对桃的优质栽培具有实践指导意义。 展开更多
关键词 裂核 基因
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TMD2前断裂CFTR翻译后的连接及氯离子通道功能 被引量:1
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作者 朱甫祥 宫贤弟 +3 位作者 刘泽隆 杨树德 屈慧鸽 迟晓艳 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1710-1716,共7页
CFTR基因突变导致一种常染色体隐性遗传疾病——囊性纤维化(CF)。利用split Ssp DnaB intein的蛋白质反式剪接技术的真核细胞双载体转CFTR基因,旨在研究翻译后水平CFTR的连接,以及由其建立的氯离子通道功能。于CFTR膜内第2个跨膜结构域(... CFTR基因突变导致一种常染色体隐性遗传疾病——囊性纤维化(CF)。利用split Ssp DnaB intein的蛋白质反式剪接技术的真核细胞双载体转CFTR基因,旨在研究翻译后水平CFTR的连接,以及由其建立的氯离子通道功能。于CFTR膜内第2个跨膜结构域(TMD2)前的Glu838密码子后将其cDNA断裂为N端和C端两部分,与具有蛋白质反式剪接作用的split Ssp DnaB intein编码序列融合,分别插入到载体pEGFP-N1和pEYFP-N1,构建一对真核表达载体pEGFP-NInt和pEYFP-IntC。用脂质体将这对载体共转染至幼年仓鼠肾细胞(BHK),瞬时表达实验用Western blotting观察CFTR蛋白质的连接,并用膜片钳技术记录Cl-通道电流。结果显示,基因共转染细胞呈现完整的CFTR蛋白条带,膜片钳记录到全细胞Cl-电流和单个Cl-通道开放活性。结果表明split Ssp DnaB intein的蛋白质反式剪接技术可用于双载体共转移CFTR基因,为CF基因治疗应用双腺相关病毒载体(AAV)转运CFTR基因,克服AAV的容量限制提供了依据。 展开更多
关键词 CFTR Cl-通道 split SSP DNAB INTEIN 蛋白质反式剪接 双载体基因转移
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尖孢镰刀菌亚麻专化型Folprp4基因参与调控菌丝生长和分生孢子发生 被引量:6
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作者 董慧霞 侯占铭 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期13-26,共14页
目的:通过对尖孢镰刀菌中Folprp4基因的鉴定,揭示其在尖孢镰刀菌中的功能及致病相关性。方法:基于同源重组原理,根据测定出的Folprp4基因序列,应用Split-Marker重组技术构建含有潮霉素抗性基因(hph)的基因缺失盒。将基因缺失盒经PEG介... 目的:通过对尖孢镰刀菌中Folprp4基因的鉴定,揭示其在尖孢镰刀菌中的功能及致病相关性。方法:基于同源重组原理,根据测定出的Folprp4基因序列,应用Split-Marker重组技术构建含有潮霉素抗性基因(hph)的基因缺失盒。将基因缺失盒经PEG介导转化到野生型原生质体中,在含有潮霉素B的TCC培养基上筛选转化子,通过PCR正负筛查获得Folprp4基因缺失突变株(ΔFolprp4)。构建含有Folprp4基因的载体pZDH1,并将其转化到敲除突变体中进行互补测验。结果:与野生型(hm)和异位插入突变体(ecFolprp4)相比,敲除突变体菌丝生长受到严重阻碍,当野生型和异位插入突变体长满整个平板时,敲除突变体菌落呈小点状。敲除突变体的另一个显著变化是ΔFolprp4的分生孢子产量显著下降。侵染实验表明,ΔFolprp4对亚麻幼苗的毒力显著降低。互补实验表明,该互补载体的回复子(Folprp4-C)在菌落形态、生长速率、分生孢子产量和毒力方面均恢复到了野生型菌株。结论:Folprp4基因与尖孢镰刀菌的菌丝生长、分生孢子发生和致病性有关。 展开更多
关键词 Folprp4基因 尖孢镰刀菌亚麻专化型 split-Marker 基因敲除 致病性
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Folpcs1基因对尖孢镰刀菌亚麻专化型的无性繁殖和营养生长的调控 被引量:4
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作者 郭晶 侯占铭 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期48-64,共17页
背景:尖孢镰刀菌亚麻专化型[Fusarium oxysporum Schl. f. sp. Lini (Bolley) Snyder&Hansen]是一种引起亚麻枯萎病的土传真菌,对亚麻的产量及质量有严重的危害。研究表明,在小麦赤霉菌中C2H2型锌指转录因子Pcs1调控中间瓶梗(interc... 背景:尖孢镰刀菌亚麻专化型[Fusarium oxysporum Schl. f. sp. Lini (Bolley) Snyder&Hansen]是一种引起亚麻枯萎病的土传真菌,对亚麻的产量及质量有严重的危害。研究表明,在小麦赤霉菌中C2H2型锌指转录因子Pcs1调控中间瓶梗(intercalary phialides)产生分生孢子。目的:鉴定pcs1同源基因Folpcs1在镰刀菌中的作用。方法:对Folpcs1的基因组DNA及cDNA测序后,利用Split-Marker基因敲除技术破坏该基因。构建含有潮霉素抗性基因(hph)的基因缺失盒。通过聚乙二醇(PEG)转化野生型原生质体法,获得了Folpcs1基因缺失突变株(ΔFolpcs1),并利用PCR法进行正负筛选。为了对缺失突变体互补,将pcs1及其上下游侧翼序列构建到pZWH1中后,回复到ΔFolpcs1中。结果:测序结果表明,有一个654bp的内含子,cDNA序列长度为2 846bp。通过观察发现,敲除突变体的生长速率明显降低,培养基中几乎观察不到分生孢子。回复突变体回复了野生型菌株的生长速率及分生孢子产生过程。结论:说明Folpcs1负责菌丝的营养生长和分生孢子的产生。 展开更多
关键词 尖孢镰刀菌亚麻专化型 Folpcs1 split-Marker 基因敲除
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小麦赤霉菌FGSG_05656基因敲除及功能分析 被引量:2
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作者 张艳君 侯占铭 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期3125-3132,共8页
小麦赤霉菌FGSG05656基因在MGV1敲除突变体中显著下调,为了进一步研究其生物学功能,本研究采用Split-Marker基因敲除技术,构建了含有潮霉素抗性基因(hph)的基因缺失盒。通过聚乙二醇(PEG)法转化野生型原生质体。潮霉素(Hygromycin)选择... 小麦赤霉菌FGSG05656基因在MGV1敲除突变体中显著下调,为了进一步研究其生物学功能,本研究采用Split-Marker基因敲除技术,构建了含有潮霉素抗性基因(hph)的基因缺失盒。通过聚乙二醇(PEG)法转化野生型原生质体。潮霉素(Hygromycin)选择培养基筛选转化子后,PCR正负筛选鉴定敲除突变体。基于缺失突变体的表型和感染能力的变化来分析FGSG05656基因的生物学功能。与野生型PH-1相比,敲除突变体的生长速率和分生孢子数显著减少,表明FGSG05656基因可能参与菌丝体的生长和分生孢子的发生。植物感染试验显示缺失突变体与野生型之间没有显著差异。分生孢子是病原菌感染寄主的主要器官,它的减少可以显著减弱病原菌的扩散,FGSG05656基因敲除突变体分生孢子显著减少,这一结果对于进一步研究分生孢子发生的分子机理具有重要意义,同时为小麦抗病分子育种提供依据。 展开更多
关键词 小麦赤霉菌 FGSG_05656 split-Marker 基因敲除
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