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长白落叶松无性系枝、叶性状分析与耐旱性评价
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作者 张曦文 陈廷廷 +4 位作者 王福德 郭琪 杨伟财 卫星 谷加存 《植物研究》 北大核心 2026年第1期145-157,共13页
为揭示长白落叶松(Larix olgensis)无性系在水分利用特征上的遗传变异规律,并筛选出耐旱性优良的无性系,该研究以25个37年生长白落叶松优良无性系为对象,测定9项与耐旱相关的枝、叶性状并分析其相关性,采用隶属函数法和聚类分析法对无... 为揭示长白落叶松(Larix olgensis)无性系在水分利用特征上的遗传变异规律,并筛选出耐旱性优良的无性系,该研究以25个37年生长白落叶松优良无性系为对象,测定9项与耐旱相关的枝、叶性状并分析其相关性,采用隶属函数法和聚类分析法对无性系耐旱性进行综合评价。结果表明:长白落叶松针叶性状在无性系之间均存在极显著差异(P<0.01),其中解剖和形态性状变异系数较小(11.06%~11.83%),而生理性状变异系数较大(22.15%~39.24%);枝条性状在无性系之间均无显著差异,其中水力直径变异系数最小(6.15%),细胞壁加固指数变异系数最大(25.26%)。枝、叶性状在各自器官内均呈较强的相关性:叶片表皮厚度与皮层厚度呈显著正相关(P<0.05),且二者与水分利用效率均呈显著负相关(P<0.01;P<0.05);气孔蒸腾指数与残余蒸腾指数呈显著负相关(P<0.01),与比叶面积呈显著正相关(P<0.05)。枝性状水力直径、理论导水率与细胞壁加固指数呈显著负相关(P<0.01)。然而,器官间仅针叶气孔蒸腾指数与枝条细胞壁加固指数呈显著负相关(P<0.05)。主成分分析显示,9个枝、叶性状组成2个相对独立的性状轴,枝性状构成的轴1反映水力效率与安全的权衡;叶性状构成的轴2反映水分策略从保守型到高效型的权衡。基于综合耐旱性评价结果,可将25个长白落叶松无性系分为综合强耐旱型、中等耐旱型和不耐旱型3类,其中无性系338、774、128、125、214和565表现出较强的耐旱性。研究结果为不同类型干旱地区筛选适宜的优良耐旱无性系造林材料提供理论依据和实践参考。 展开更多
关键词 长白落叶松 无性系 水力性状 水分利用效率 隶属函数 耐旱性
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紫丁香So4CL的克隆及功能分析
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作者 倪莹 李雷 +5 位作者 汪进萱 马波 孟昕 冷平生 吴静 胡增辉 《生物技术通报》 北大核心 2026年第1期139-149,共11页
【目的】4-香豆酸∶辅酶A连接酶(4-coumarate:CoA lig-ase,4CL)是苯丙烷代谢途径中的核心酶,克隆并探究4CL基因在紫丁香(Syringa oblata)花青苷合成中的功能。【方法】基于紫丁香基因组及转录组数据筛选并克隆出So4CL基因,对其编码的蛋... 【目的】4-香豆酸∶辅酶A连接酶(4-coumarate:CoA lig-ase,4CL)是苯丙烷代谢途径中的核心酶,克隆并探究4CL基因在紫丁香(Syringa oblata)花青苷合成中的功能。【方法】基于紫丁香基因组及转录组数据筛选并克隆出So4CL基因,对其编码的蛋白进行生物信息学分析和亚细胞定位;利用RT-qPCR研究So4CL在不同花期及不同组织的相对表达量;构建So4CL过表达和沉默载体,利用农杆菌侵染法分别转化紫丁香和烟草(Nicotiana benthamiana),观察其表型变化并测定花青苷含量;通过RTqPCR检测花青苷生物合成途径中So4CL上下游基因的表达水平。【结果】So4CL基因CDS区全长为1659 bp,编码552个氨基酸,具有BOXⅠ和BOXⅡ保守结构域。系统进化分析显示,紫丁香So4CL与水曲柳(Fraxinus mandshurica)的4CL蛋白相似性最高,为97%。RT-qPCR分析结果显示,随着花发育,紫丁香花瓣褪色,So4CL的表达整体呈降低的趋势;So4CL在盛花期中的根、茎、叶、花中均有表达。亚细胞定位分析显示,So4CL主要存在于细胞质上。过表达So4CL的紫丁香花瓣着色明显,花青苷含量显著升高,烟草叶片出现砖红色变化;沉默So4CL后花瓣显著褪色,花青苷含量显著降低;RT-qPCR分析表明,瞬时转化So4CL会影响花青苷生物合成途径中SoPAL、SoCHS、SoDFR和SoUFGT的表达。【结论】So4CL在紫丁香花瓣花青苷合成中发挥着重要作用,是合成关键基因。 展开更多
关键词 紫丁香 4-香豆酸:辅酶A连接酶 花青苷 基因克隆 功能验证 基因表达
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山药海藻糖-6-磷酸磷酸酯酶基因克隆及其功能分析
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作者 邵彦景 张艳芳 +3 位作者 孙怡青 邢丽南 葛明然 霍秀文 《西北农业学报》 北大核心 2026年第2期275-286,共12页
为探究海藻糖-6-磷酸磷酸酯酶(TPP)活性在山药生长发育中的功能及其调控基因在非生物胁迫条件下的表达水平变化规律,本研究以‘大和长芋’和‘毕克齐’山药为试验材料,结合山药转录组数据,克隆了山药 TPP6基因。对该基因进行生物信息学... 为探究海藻糖-6-磷酸磷酸酯酶(TPP)活性在山药生长发育中的功能及其调控基因在非生物胁迫条件下的表达水平变化规律,本研究以‘大和长芋’和‘毕克齐’山药为试验材料,结合山药转录组数据,克隆了山药 TPP6基因。对该基因进行生物信息学分析及亚细胞定位,并将其转化烟草过表达。通过对转基因烟草非生物胁迫、qPCR等分析该基因的功能。结果表明 DoTPP6基因包含1个1 152 bp的完整开放阅读框,编码383个氨基酸,为不稳定亲水性蛋白;亚细胞定位结果显示该基因定位于细胞核和细胞膜。山药 DoTPP6与参薯中同源基因的序列比对相似性达96.87%,表明其亲缘关系最近。DoTPP6在山药种植后165 d的块茎中表达量最高,利于块茎淀粉积累;且山药组培苗及转 DoTPP6烟草植株在低温、干旱胁迫处理下,DoTPP6表达量较对照分别显著提高51%、47%和6.96倍、99%。研究结果表明 DoTPP6在响应逆境胁迫时发挥作用,可为山药抗逆遗传改良提供候选基因。 展开更多
关键词 山药 海藻糖-6-磷酸磷酸酯酶 基因克隆 表达分析 功能验证
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RNA解旋酶DHX37基因不同功能结构域载体的构建及鉴定
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作者 黄立敏 张春丽 +2 位作者 孙晋 任松 田红卫 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2026年第1期10-17,共8页
目的:通过在线网站和软件预测人源RNA解旋酶DHX37基因的功能结构域,构建其不同功能结构域缺失载体,并验证构建载体的正确性。方法:以人源DEAH-box解旋酶37(hDHX37)质粒作为模板,基于同源重组克隆技术,应用SnapGene V 6.0.2软件设计截短... 目的:通过在线网站和软件预测人源RNA解旋酶DHX37基因的功能结构域,构建其不同功能结构域缺失载体,并验证构建载体的正确性。方法:以人源DEAH-box解旋酶37(hDHX37)质粒作为模板,基于同源重组克隆技术,应用SnapGene V 6.0.2软件设计截短体ATP结合结构域(ΔATP binding)、C末端结构域(CTD)、HA2亚基(HA2)和Oligos/Accharide结合折叠域(O/A binding fold)的功能结构域特异性引物;采用高保真DNA聚合酶Prime STAR GXL polymerase进行PCR扩增截短体目的片段ATP binding、c-terminal-1、c-terminal-2、HA2-1、HA2-2和O/A binding fold;利用重组克隆试剂盒将截短体片段定向克隆至经双酶切的pCMV-MCS-3×HA-Neo空载体;将重组载体转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞后,通过限制性内切酶HindⅢ酶切、琼脂糖凝胶电泳和DNA测序验证功能结构域载体的正确性。结果:PCR法扩增的目的片段ATP binding(2148 bp)、c-terminal-1(1326 bp)、c-terminal-2(1269 bp)、HA2-1(2205 bp)、HA2-2(894 bp)和O/A binding(2583 bp)长度与设计一致;HindⅢ单酶切突变质粒ΔATP binding、Δc-terminal、ΔHA2和ΔO/A binding fold,得到线性化DNA片段,长度分别为8939、7589、8036、8540和8027 bp,产物条带大小均与设计相符。DNA测序Blast对比分析,ΔATP binding缺失ATP binding结构域(1~442)、Δc-terminal缺失c-terminal结构域(443~735)、ΔHA2缺失HA2结构域(736~861)和ΔO/A binding fold缺失O/A binding fold结构域(862~1158),分别缺失1326、879、375和891 bp,各突变质粒缺失的结构域位置和长度与设计完全一致。结论:成功构建hDHX37基因的ΔATP binding、Δc-terminal、ΔHA2和ΔO/A binding fold 4个不同功能结构域载体。 展开更多
关键词 DEAH-box解旋酶37 功能结构域载体 重组克隆 限制性酶切 聚合酶链式反应
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草麻黄SDR基因克隆、表达及功能验证
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作者 陈星星 李佳谕 +4 位作者 张炳琪 郭帅 徐帆 徐江 焦晓林 《核农学报》 北大核心 2026年第2期234-242,共9页
为解析麻黄中苯丙胺类生物碱的生物合成途径,本试验从草麻黄草质茎中克隆了短链脱氢酶/还原酶基因(SDR),构建至pET-32a载体并转化大肠杆菌DH5α,将重组质粒转入大肠杆菌Rosetta(DE3),诱导表达并纯化SDR蛋白,采用气相色谱-质谱联用仪(GC-... 为解析麻黄中苯丙胺类生物碱的生物合成途径,本试验从草麻黄草质茎中克隆了短链脱氢酶/还原酶基因(SDR),构建至pET-32a载体并转化大肠杆菌DH5α,将重组质粒转入大肠杆菌Rosetta(DE3),诱导表达并纯化SDR蛋白,采用气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)对SDR蛋白体外酶促转化产物进行了检测,验证其还原功能。结果表明,克隆得到的草麻黄SDR基因长度为756 bp,编码251个氨基酸,相对分子质量为26.65 kDa,属NADB-Rossmann超家族,具有疏水性且无跨膜结构。系统进化分析结果显示草麻黄SDR氨基酸序列与裸子植物柳杉亲缘关系最近。通过原核表达系统,该重组蛋白在大肠杆菌中实现了高效表达。GC-MS检测体外酶促产物表明该重组蛋白可催化底物3,5-双(三氟甲基)苯乙酮还原生成1-(3,5-双(三氟甲基)苯基)乙-1-醇。本试验首次实现了草麻黄SDR基因的克隆与异源表达,并证实其催化氧化还原反应的生物活性。以上研究结果为解析草麻黄苯丙胺类生物碱的合成机制及基因工程改良提供了基础。 展开更多
关键词 草麻黄 短链还原酶 基因克隆 原核表达 功能验证
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紫花含笑McERF003调控苯丙烷代谢和高温抗性的功能验证
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作者 丁瑜 余秋岫 +3 位作者 胥芸 陈芷晴 何雯心 刘彩贤 《植物科学学报》 北大核心 2026年第1期74-84,共11页
ERF转录因子家族在植物生长发育、次生代谢以及生物和非生物胁迫响应中发挥重要作用。本研究以紫花含笑(Michelia crassipes Law.)的花被为材料,克隆得到McERF003基因的全长编码序列,对其进行生物信息学分析;利用qRT-PCR分析其在植物不... ERF转录因子家族在植物生长发育、次生代谢以及生物和非生物胁迫响应中发挥重要作用。本研究以紫花含笑(Michelia crassipes Law.)的花被为材料,克隆得到McERF003基因的全长编码序列,对其进行生物信息学分析;利用qRT-PCR分析其在植物不同组织以及非生物胁迫下的表达模式;并构建超表达载体转化烟草(Nicotiana tabacum L.)进行功能验证。结果显示,McERF003编码具有183个氨基酸的蛋白,等电点为9.10,蛋白分子量为20.286 kDa;McERF003基因主要在紫花含笑的根部表达,并响应高温、低温和盐胁迫。与野生型相比,过表达McERF003烟草的花冠和叶片内的类黄酮和木质素含量显著增加;高温胁迫后,转基因植株的萎蔫程度较低,相对电导率和丙二醛(MDA)含量显著低于野生型,可溶性蛋白、脯氨酸、类黄酮和木质素含量均显著高于野生型,抗氧化酶活性也显著增强,表明McERF003过量表达能够显著增加烟草中苯丙烷代谢物类黄酮和木质素的积累,同时增强其高温抗性。 展开更多
关键词 紫花含笑 McERF003 基因克隆 功能验证
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Cloning and Functional Analysis of Lycopene ε-Cyclase (IbLCYe) Gene from Sweetpotato, Ipomoea batatas (L.) Lam. 被引量:7
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作者 YU Ling ZHAI Hong +2 位作者 CHEN Wei HE Shao-zhen LIU Qing-chang 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2013年第5期773-780,共8页
This paper reported firstly successful cloning of lycopene ε-cyclase (lbLCYe) gene from sweetpotato, lpomoea batatas (L.) Lam. Using rapid amplification of cDNA ends (RACE), lbLCYe gene was cloned from sweetpot... This paper reported firstly successful cloning of lycopene ε-cyclase (lbLCYe) gene from sweetpotato, lpomoea batatas (L.) Lam. Using rapid amplification of cDNA ends (RACE), lbLCYe gene was cloned from sweetpotato cv. Nongdafu 14 with high carotenoid content. The 1 805 bp cDNA sequence oflbLCYe gene contained a 1236 bp open reading frame (ORF) encoding a 411 amino acids polypeptide with a molecular weight of 47 kDa and an isoelectric point (pI) of 6.95. IbLCYe protein contained one potential lycopene ε-cyclase domain and one potential FAD (flavinadenine dinucleotide)/NAD(P) (nicotinamide adenine dinucleotide phosphate)-binding domain, indicating that this protein shares the typical characteristics of LCYe proteins. The gDNA oflbLCYe gene was 4 029 bp and deduced to contain 5 introns and 6 exons. Real-time quantitative PCR analysis revealed that the expression level of IbLCYe gene was significantly higher in the storage roots of Nongdafu 14 than those in the leaves and stems. Transgenic tobacco (cv. Wisconsin 38) expressing [bLCYe gene accumulated significantly more ^-carotene compared to the untransformed control plants. These results showed that lbLCYe gene has an important function for the accumulation of carotenoids of sweetpotato. 展开更多
关键词 IbLCYe gene CLONING functional analysis carotenoid lpomoea batatas (L.) Lam.
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Cloning identification and functional analysis of human IL-17A promoter
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作者 Ming-Jie Hu Shou-Wei Wu +6 位作者 Mei-Li Wei Jun Xi Lu Wang Yu-Ze Han Bi-Kui Tang Qiang Fang Li Xu 《Asian Pacific Journal of Tropical Medicine》 SCIE CAS 2016年第8期755-758,共4页
Objective: To conduct the cloning identification and characterization of the sequence of human IL-17 A promoter so as to analyze the regulatory mechanism of the gene expression of IL-17. Methods: First of all, the pot... Objective: To conduct the cloning identification and characterization of the sequence of human IL-17 A promoter so as to analyze the regulatory mechanism of the gene expression of IL-17. Methods: First of all, the potential promoter region of IL-17 A was found by means of the bioinformatics methods. Then, it was cloned into the reporter vector with PCR technique. Finally, the activity of the test promoter was determined by dual luciferase reporter system. Results: Two transcriptional start points of the upper region, 600 bp and 1000 bp, of IL-17 A were obtained by PCR clone and proved to have certain activities by dual luciferase reporter system. Also, they could be activated by IL-17 A activator STAT3, which could start the expression of the reported gene. Conclusions: Clone established the regulatory region of human IL-17 A promoter, which provided bases to the subsequent function research. 展开更多
关键词 IL-17A PROMOTER clone functionAL analysis
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Cloning GhSCFP Gene and Its Function in Cotton Fiber Development
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作者 HOU Lei YANG Xia +2 位作者 LIU Hao LI Jia-bao PEI Yan 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2008年第S1期54-54,共1页
A s a major raw material for the textile industry and the most important fiber crop in the world,cotton is of great significance in Chinese economy.The development of cotton fiber can be divided into initiation,elonga... A s a major raw material for the textile industry and the most important fiber crop in the world,cotton is of great significance in Chinese economy.The development of cotton fiber can be divided into initiation,elongation,secondary wall synthesis,and maturation stages.The initiation and elongation stages of fiber,which determine the number of fibers on each seed and the final length of fiber,direct-ly affect the yield and quality of cottonfiber. 展开更多
关键词 GENE Cloning GhSCFP Gene and Its function in Cotton Fiber Development
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Molecular characterization, expression and function analysis of eukaryotic translation initiation factor(eIF1A) in Mangifera indica
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作者 LI Li-shu LUO Cong +4 位作者 AN Zhen-yu LIU Zhao-liang DONG Long YU Hai-xia HE Xin-hua 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2019年第11期2505-2513,共9页
Eukaryotic translation initiation factor 1A(eIF1A)functions as an important regulatory factor of protein synthesis and plays a crucial role in responses to abiotic stresses in plants.However,little is known about the ... Eukaryotic translation initiation factor 1A(eIF1A)functions as an important regulatory factor of protein synthesis and plays a crucial role in responses to abiotic stresses in plants.However,little is known about the eIF1A gene involved in fruit development and stress response of mango.In this study,the MieIF1A-b gene was isolated from Mangifera indica,and contains a 435-bp open reading frame,which encodes a putative protein of 144 amino acids(GenBank accession number:KP676599).The predicted MieIF1A-b protein had a molecular weight of 16.39 kDa with a pI of 4.6.Sequence homology analysis showed that MieIF1A-b shared high homology with Elaeis guineensis,Manihot esculenta,and Populus trichocarpa,with 96 and 95%identity,respectively.Quantitative reverse transcriptative PCR(qRT-PCR)analyses indicated that MieIF1A-b was expressed in all tested tissues,and had the highest expression level in fruit 80 d after flowering.The expression of MieIF1A-b was obviously regulated by NaCl and H2O2 treatments in leaves.Functional analysis indicated that the overexpression of MieIF1A-b in transgenic Arabidopsis thaliana enhanced the growth,phenotype and salinity tolerance compared with wild-type(WT)plants.The results indicated that MieIF1A-b may be correlated with the control of fruit development and salt adaptation,and it was a candidate gene for abiotic stress in mango. 展开更多
关键词 MANGIFERA INDICA MieIF1A-b GENE GENE clone EXPRESSION functional analysis
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甘薯抗病基因及其功能的研究进展 被引量:1
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作者 杨冬静 高方园 +5 位作者 马居奎 唐伟 陈晶伟 梁昭 张成玲 孙厚俊 《江苏农业学报》 北大核心 2025年第5期1021-1030,共10页
甘薯是重要的粮食、饲料和能源作物,中国是世界上最大的甘薯种植国,甘薯在中国国民经济中占有十分重要的地位。近年来随着气候变化和种薯、种苗地频繁调运,甘薯病害发生日趋严重,新病害不断产生,严重影响甘薯的产量和品质,制约了中国甘... 甘薯是重要的粮食、饲料和能源作物,中国是世界上最大的甘薯种植国,甘薯在中国国民经济中占有十分重要的地位。近年来随着气候变化和种薯、种苗地频繁调运,甘薯病害发生日趋严重,新病害不断产生,严重影响甘薯的产量和品质,制约了中国甘薯产业的健康发展。分子生物技术的快速发展给甘薯抗病分子育种研究提供了新的技术支撑和研究思路。本文主要从甘薯抗真菌病、抗细菌病、抗线虫病以及抗病毒病相关基因等方面概述了近年来甘薯抗病相关基因及其功能的研究进展,为甘薯抗病基因的进一步研究和抗病分子育种提供参考。 展开更多
关键词 甘薯 基因克隆 真菌 细菌 线虫 基因功能 抗病性
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知母糖基转移酶UGT708Z1基因的克隆与功能分析
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作者 张倩 纪中菊 +4 位作者 李志新 董子舒 刘红宁 王晓云 黄佳 《世界科学技术-中医药现代化》 北大核心 2025年第10期2800-2809,共10页
目的 克隆知母糖基转移酶基因UGT708Z1,对其进行生物信息学、原核表达分析以及功能鉴定。方法 基于转录组数据,从知母中挖掘并筛选到一条候选糖基转移酶基因UGT708Z1。根据其全长开放阅读框设计带有同源臂的特异性引物,采用PCR进行基因... 目的 克隆知母糖基转移酶基因UGT708Z1,对其进行生物信息学、原核表达分析以及功能鉴定。方法 基于转录组数据,从知母中挖掘并筛选到一条候选糖基转移酶基因UGT708Z1。根据其全长开放阅读框设计带有同源臂的特异性引物,采用PCR进行基因克隆;通过同源重组技术构建pET-32a(+)-UGT708Z1重组质粒,并利用原核表达和纯化蛋白技术获得可溶性目的蛋白。最后,采用体外酶促反应对UGT708Z1进行功能鉴定。结果 序列分析表明UGT708Z1的开放阅读框为1377 bp,编码458个氨基酸。原核表达结果显示,UGT708Z1成功表达出可溶性目的蛋白,纯化后重组蛋白大小为70.86 kDa。体外酶促反应结果表明,UGT708Z1具有类黄酮7-OH糖基化活性,能够催化淫羊藿素生成淫羊藿次苷Ⅰ。此外,UGT708Z1还具有催化槲皮素和芹菜素的7-O-糖基化活性的功能。结论 本研究从知母中成功克隆并鉴定出一个黄酮醇糖基转移酶UGT708Z1,为后续深入解析黄酮醇苷的生物合成奠定基础。 展开更多
关键词 知母 糖基转移酶 基因克隆 原核表达 功能表征
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茄子SmWRKY4的克隆及耐冷性功能验证 被引量:1
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作者 杨艳 刘军 +2 位作者 周晓慧 刘松瑜 庄勇 《园艺学报》 北大核心 2025年第1期101-110,共10页
前期研究发现茄子SmWRKY4的表达受到冷信号抑制。进一步以‘成都墨茄’为材料克隆出SmWRKY4全长序列,分析结果显示其开放阅读框为1518 bp,编码505个氨基酸,含有2个WRKY结构域,属于第Ⅰ类WRKY转录因子。SmWRKY4启动子含有茉莉酸甲酯和水... 前期研究发现茄子SmWRKY4的表达受到冷信号抑制。进一步以‘成都墨茄’为材料克隆出SmWRKY4全长序列,分析结果显示其开放阅读框为1518 bp,编码505个氨基酸,含有2个WRKY结构域,属于第Ⅰ类WRKY转录因子。SmWRKY4启动子含有茉莉酸甲酯和水杨酸等激素响应元件及缺氧和低温等逆境胁迫响应元件。系统进化树分析表明,SmWRKY4与番茄和马铃薯的同源蛋白在进化关系上更近。表达模式分析显示SmWRKY4能够响应脱落酸、水杨酸和茉莉酸甲酯等外源植物生长调节剂和冷胁迫,并在茄子茎和花药中高表达。敲除SmWRKY4的突变体能够增强光合作用,降低细胞通透性,提高耐冷性。推测SmWRKY4负调控茄子耐冷性。 展开更多
关键词 茄子 SmWRKY4 耐冷性 克隆 功能验证 光合作用 细胞通透性 激素
原文传递
水稻矮化多分蘖基因DT1的图位克隆与功能分析 被引量:3
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作者 李春梅 陈洁 +7 位作者 郎兴宣 庄海民 朱靖 杜梓君 冯浩天 金涵 朱国林 刘凯 《作物学报》 北大核心 2025年第2期347-357,共11页
分蘖是影响水稻株型和产量的重要性状。本研究获得一个稳定遗传的矮化多分蘖自然突变体dt1 (dwarf and tillering 1)。此外, dt1突变体穗长、结实率、粒长、粒宽、千粒重、维管束鞘细胞数量及大小较野生型均显著降低。图位克隆证实dt1... 分蘖是影响水稻株型和产量的重要性状。本研究获得一个稳定遗传的矮化多分蘖自然突变体dt1 (dwarf and tillering 1)。此外, dt1突变体穗长、结实率、粒长、粒宽、千粒重、维管束鞘细胞数量及大小较野生型均显著降低。图位克隆证实dt1突变体是由编码独脚金内酯生物合成途径关键酶类胡萝卜素裂解双加氧酶(Carotenoid Cleavage Dioxygenase7,CCD7)的D17/HTD1(LOC_Os04g46470)第2个外显子上8bp的插入导致的,是一个D17/HTD1的新等位突变。此外, dt1突变体萌发率、根长、根直径均显著降低,外施独脚金内酯类似物GR24能恢复dt1突变体的这些表型。转录组测序结果显示, dt1突变体有579个基因上调, 506个基因下调。GO分析显示上调基因显著富集在生长素响应、内源刺激响应和激素响应等通路,下调基因显著富集在胞内碳水化合物代谢和组蛋白甲基化等通路。KEGG分析显示上调基因在植物激素信号转导等通路显著富集,下调基因在氨基糖和核苷酸糖代谢及二萜生物合成等通路上显著富集。研究结果丰富和拓展了CCD7和独脚金内酯在水稻中的调控作用,对水稻育种具有重要理论意义。 展开更多
关键词 水稻 矮化多分蘖 图位克隆 生物学功能
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芦竹独脚金内酯受体基因克隆及功能验证
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作者 陈虞超 郭生虎 +3 位作者 田莉 钟楠 杨建国 甘晓燕 《中国农学通报》 2025年第5期50-55,共6页
本研究旨在探究芦竹(Arundo donax L)分蘖调控的分子机制,通过克隆其独脚金内酯(SL)受体基因AdD14,并进行生物信息学分析、基因功能验证。以芦竹幼苗为材料,同源克隆其SL受体基因AdD14(Genbank登陆号:OR915727);利用ExPASy、MEGA等软件... 本研究旨在探究芦竹(Arundo donax L)分蘖调控的分子机制,通过克隆其独脚金内酯(SL)受体基因AdD14,并进行生物信息学分析、基因功能验证。以芦竹幼苗为材料,同源克隆其SL受体基因AdD14(Genbank登陆号:OR915727);利用ExPASy、MEGA等软件对基因进行生物信息学分析;利用其原核表达蛋白体外催化的方法验证基因功能。结果发现,AdD14开放阅读框全长816 bp,编码分子量为29.75 kDa的271个氨基酸残基。AdD14蛋白预测属于不稳定的疏水性蛋白,不存在跨膜结构,无信号肽。系统进化树显示,AdD14与其他种类植物D14蛋白具有较高的同源性,保留了SL受体保守结构域和催化三联体,可水解SL受体荧光探针YLG(Yoshimulatone Green),显示AdD14为芦竹SL受体基因。本研究分离了芦竹AdD14基因,其编码蛋白与其他植物的SL受体D14蛋白结构及功能相一致,初步证实其为芦竹SL受体基因,为深入揭示芦竹分蘖调控分子机制奠定了一定基础。 展开更多
关键词 芦竹 独脚金内酯受体 基因克隆 AdD14基因 基因功能验证 生物信息学 分蘖调控
原文传递
木薯MeLHY基因克隆和功能分析
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作者 陈甘露 付莉莉 +3 位作者 颜彦 邱先进 丁泽红 胡伟 《福建农业学报》 北大核心 2025年第9期907-916,共10页
【目的】MYB转录因子在植物生长发育、非生物胁迫响应和淀粉代谢等方面起重要调控作用。克隆木薯(Manihot esculenta)MeLHY基因(属于MYB家族成员)并系统开展生物信息学分析、亚细胞定位、基因表达分析及酵母单杂交实验,可为后续深入解... 【目的】MYB转录因子在植物生长发育、非生物胁迫响应和淀粉代谢等方面起重要调控作用。克隆木薯(Manihot esculenta)MeLHY基因(属于MYB家族成员)并系统开展生物信息学分析、亚细胞定位、基因表达分析及酵母单杂交实验,可为后续深入解析该基因的生物学功能奠定基础。【方法】以木薯品种‘SC205’为材料,克隆MeLHY基因编码区序列,并通过生物信息学方法研究该基因的结构特征。分别构建pNC-Green-SubC与pNC-Green-CherryC亚细胞定位重组载体,通过农杆菌瞬时转化法侵染本氏烟草表皮细胞,利用激光共聚焦显微镜捕获荧光信号,明确MeLHY蛋白的亚细胞定位。基于qRT-PCR技术分析MeLHY基因在木薯不同组织及块根发育不同阶段的表达模式。通过酵母单杂交技术研究MeLHY与淀粉代谢基因启动子的结合特性,阐明MeLHY对淀粉代谢的潜在调控机制。【结果】MeLHY基因编码区全长2271 bp,编码756个氨基酸。MeLHY蛋白的分子量为83717.14 Da,理论等电点为5.92,属于不稳定亲水性蛋白。MeLHY蛋白包含MYB家族典型的DNA结合结构域。MeLHY与橡胶树(Hevea brasiliensis)MYB蛋白同源性最高,相似性为83.73%。MeLHY基因的启动子区包含光响应元件、生长素和茉莉酸响应元件以及非生物胁迫响应元件。MeLHY蛋白亚细胞定位于细胞核中。MeLHY基因在块根、叶片和中脉的表达量较高,且在块根发育早期的表达量要显著高于块根发育晚期。MeLHY与淀粉代谢基因MeAPL1和MeDPE1共表达,且MeLHY蛋白可以直接结合到他们的启动子上。【结论】MeLHY基因属于MYB基因家族成员,其表达呈现组织特异性及块根发育阶段性的特征,MeLHY蛋白定位于细胞核,可以与淀粉代谢基因MeAPL1和MeDPE1的启动子互作,可能调控木薯块根发育和淀粉代谢。 展开更多
关键词 木薯 MYB转录因子 MeLHY 基因克隆 功能分析
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蓝莓花青素相关VcGSTF19基因的克隆及功能研究 被引量:1
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作者 张永艳 郭思健 +4 位作者 李晶 郝思怡 李瑞得 刘嘉鹏 程春振 《生物技术通报》 北大核心 2025年第9期139-146,共8页
【目的】Phi亚家族谷胱甘肽转移酶(GSTF)在多种植物花青素积累和转运中发挥关键作用。为研究蓝莓GSTF的功能,对蓝莓花青素相关GSTF19基因进行克隆和功能研究。【方法】利用反转录PCR克隆获得蓝莓花青素相关GSTF19的编码序列并构建过表... 【目的】Phi亚家族谷胱甘肽转移酶(GSTF)在多种植物花青素积累和转运中发挥关键作用。为研究蓝莓GSTF的功能,对蓝莓花青素相关GSTF19基因进行克隆和功能研究。【方法】利用反转录PCR克隆获得蓝莓花青素相关GSTF19的编码序列并构建过表达载体,基于蓝莓果实瞬时转化和拟南芥tt19突变体互补实验研究其功能。【结果】VcGSTF19的瞬时过表达可以显著促进蓝莓果皮中花青素的积累。过表达VcGSTF19的蓝莓果皮花青素含量达到空载对照的6.61倍。其瞬时过表达显著提高了蓝莓果皮中VcCHS、VcCHI、VcF3H、VcDFR、VcANS和VcUFGT等花青素合成结构基因的表达水平。此外,VcGSTF19异源转化拟南芥tt19突变体恢复了突变体花青素积累,转基因莲座叶中花青素含量约为突变体的6.21倍。【结论】蓝莓VcGSTF19基因在花青素积累和转运中发挥着重要作用。 展开更多
关键词 花青素 蓝莓 Phi亚家族谷胱甘肽转移酶 基因克隆 功能研究
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大豆GmWRKY44生物信息学分析及功能验证 被引量:3
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作者 黄友举 于泳波 +3 位作者 逄翠晶 孙轼絮 路晨 于延冲 《华北农学报》 北大核心 2025年第1期29-35,共7页
WRKY是植物特有的一类转录因子,在非生物胁迫应答、种子休眠与发芽、生长发育等方面起重要作用。为揭示大豆WRKY转录因子家族中GmWRKY44基因的功能和潜在的分子机制,对大豆Williams 82中GmWRKY44基因进行了生物信息学分析及功能验证。... WRKY是植物特有的一类转录因子,在非生物胁迫应答、种子休眠与发芽、生长发育等方面起重要作用。为揭示大豆WRKY转录因子家族中GmWRKY44基因的功能和潜在的分子机制,对大豆Williams 82中GmWRKY44基因进行了生物信息学分析及功能验证。结果表明,GmWRKY44基因CDS全长1077 bp,编码358个氨基酸;结构预测与进化分析结果显示,其编码的蛋白质二级结构由23.46%α-螺旋、4.75%β-折叠、58.94%无规则卷曲和12.85%延伸链构成,三级结构与二级结构相统一;含一个保守的WRKY结构域,锌指结构为C_(2)H_(2)类型,属WRKY IIc亚家族;该基因是拟南芥AtWRKY71的同源基因,相似度为35.56%,两者具有相似的基因结构。RT-qPCR分析表明,GmWRKY44响应盐胁迫,表达量先下降后上升。在盐胁迫下,野生型(Col-0)和GmWRKY44过表达拟南芥株系的萌发率和根长均受到一定程度抑制,但GmWRKY44过表达株系明显优于Col-0。另外,在盐处理后,GmWRKY44过表达株系生长受抑制程度低于Col-0。生理指标分析发现,在盐胁迫下,GmWRKY44过表达株系的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性显著高于Col-0,而丙二醛(MDA)含量显著低于Col-0。以上表明,GmWRKY44过表达可以提高转基因拟南芥的耐盐性。 展开更多
关键词 大豆 GmWRKY44 基因克隆 生物信息学分析 功能验证 盐胁迫
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长牡蛎(Crassostrea gigas)环GMP-AMP合酶(cyclic GMP-AMP synthase,cGAS)的基因克隆与功能研究
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作者 白晶 毛帆 +3 位作者 刘客林 宋菁晨 喻子牛 张扬 《热带海洋学报》 北大核心 2025年第1期24-34,共11页
环GMP-AMP合酶(cyclic GMP-AMP synthase,cGAS)是一种关键的细胞内传感器,能够识别细胞质内异常存在的DNA并触发免疫反应。为了揭示cGAS在软体动物先天性免疫调控中的重要作用,本研究成功克隆了长牡蛎中的cGAS基因(CgcGAS),其开放阅读框... 环GMP-AMP合酶(cyclic GMP-AMP synthase,cGAS)是一种关键的细胞内传感器,能够识别细胞质内异常存在的DNA并触发免疫反应。为了揭示cGAS在软体动物先天性免疫调控中的重要作用,本研究成功克隆了长牡蛎中的cGAS基因(CgcGAS),其开放阅读框(open reading frame,ORF)全长1623bp,编码540个氨基酸,理论相对分子质量为62.3kDa,并具有保守的Mab21结构域。系统进化分析表明了CgcGAS为软体动物cGAS家族中的一员。定量逆转录聚合酶链式反应(qRTPCR)结果显示CgcGAS广泛表达于各组织,并在消化腺的相对表达量最高。亚细胞定位实验观察到CgcGAS蛋白在细胞核和细胞质中都有分布,主要定位于细胞核,提示其可能在细胞核内的DNA感应以及细胞质内的DNA结合和信号传递中发挥作用。另外,双荧光素酶报告基因系统和RNA干扰实验结果显示,CgcGAS能够显著激活核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)和干扰素刺激性反应元件(interferon-sensitive response element,ISRE)信号通路,及其下游的炎症相关因子干扰素诱导病毒抑制蛋白(virus inhibitory protein endoplasmic reticulum-associated interferon-inducible,viperin)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)、白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)及转录因子干扰素调节因子2/8(interferon regulatory factor 2/8,IRF2/8)的表达。综上所述,CgcGAS在长牡蛎的先天性免疫反应中的信号传递过程中发挥了关键作用。 展开更多
关键词 长牡蛎 先天性免疫 环GMP-AMP合酶 基因克隆 功能
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油桐VfICS2基因的克隆和功能分析
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作者 李俊倩 杨程博 +1 位作者 张琳 刘美兰 《植物生理学报》 北大核心 2025年第9期1271-1283,共13页
油桐(Vernicia fordii)是我国特有的经济林木,具有重要的经济价值。水杨酸(SA)在调节植物生长发育中发挥着重要作用,而异分支酸合酶(isochorismate synthase,ICS)在植物SA合成途径中能够催化分支酸生成异分支酸,正向调控SA的合成。本研... 油桐(Vernicia fordii)是我国特有的经济林木,具有重要的经济价值。水杨酸(SA)在调节植物生长发育中发挥着重要作用,而异分支酸合酶(isochorismate synthase,ICS)在植物SA合成途径中能够催化分支酸生成异分支酸,正向调控SA的合成。本研究利用基因克隆、生物信息学分析、表达模式分析和生物学功能分析等方法,全面探究了油桐中VfICS2基因的功能。结果表明,油桐中仅有1个ICS2成员,编码序列长为1656 bp,编码551个氨基酸,是一种无跨膜结构域的亲水性蛋白,含12个α螺旋和16个β折叠,β折叠上包含Ile292、Ala357、Pro448等3个保守位点;表达模式分析发现,VfICS2主要表达于根、茎、叶中,且在茎中的表达量分别是根和叶的21.44倍、18.62倍;功能研究发现外源SA可抑制油桐花序轴伸长和减少花序轴数量及其花数量,拟南芥中过表达VfICS2可以抑制根毛生长发育和增强植株的抗旱抗盐能力,烟草中过表达VfICS2可减少烟草花数量和降低结实率。以上研究为进一步探索VfICS2功能奠定了基础,同时也为油桐遗传改良提供了基因资源。 展开更多
关键词 油桐 ICS2基因 水杨酸 基因克隆 功能分析
原文传递
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