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细菌表达dsRNA介导桔小实蝇flightin基因的RNA干扰 被引量：1
1
作者 袁瑞玲 郑传伟 +3 位作者 冯丹 王艺璇 杜春花 陈鹏 《广东农业科学》 CAS 2020年第2期118-124,共7页
【目的】探索饲喂细菌表达目标基因dsRNA介导桔小实蝇flightin基因RNAi的可行性。【方法】将桔小实蝇flightin基因的相应干扰片段构建至L4440干扰载体,并转化大肠杆菌HT115(DE3)菌株,利用IPTG诱导表达flightin基因对应的dsRNA,命名为fli... 【目的】探索饲喂细菌表达目标基因dsRNA介导桔小实蝇flightin基因RNAi的可行性。【方法】将桔小实蝇flightin基因的相应干扰片段构建至L4440干扰载体,并转化大肠杆菌HT115(DE3)菌株,利用IPTG诱导表达flightin基因对应的dsRNA,命名为flightin-dsRNA。【结果】通过饲喂表达flightin-dsRNA的大肠杆菌10倍浓缩菌液,桔小实蝇flightin基因的表达普遍出现了不同程度的上调,其中,雌虫饲喂后5、10、20 d,雄虫饲喂后5 d与对照差异显著,雄虫饲喂后15 d诱发约43%的下调;该方法对桔小实蝇飞行能力及胸部肌肉发育未产生明显影响。【结论】通过饲喂表达flightin-dsRNA的大肠杆菌对桔小实蝇flightin基因进行RNA干扰不可行或干扰效果不明显。 展开更多
关键词 桔小实蝇 flightin基因 HT115(DE3)菌株 荧光定量PCR RNA干扰
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家蚕flightin基因的克隆 被引量：1
2
作者 徐升胜 许西奎 +1 位作者 李兵 沈卫德 《中国蚕业》 2009年第1期13-16,共4页
Flightin蛋白对于粗肌丝的组装和性能有着重要的作用。为调查家蚕的粗肌丝结构,通过PCR和RACE技术,我们在家蚕中获得了家蚕flightin基因的全长cDNA序列,并通过对家蚕wgs数据库的检索,获得了蚕flightin基因的结构,家蚕flightin基因由4个... Flightin蛋白对于粗肌丝的组装和性能有着重要的作用。为调查家蚕的粗肌丝结构,通过PCR和RACE技术,我们在家蚕中获得了家蚕flightin基因的全长cDNA序列,并通过对家蚕wgs数据库的检索,获得了蚕flightin基因的结构,家蚕flightin基因由4个外显子和3个内含子组成。家蚕flightin基因的cDNA全长为661bp,编码158个氨基酸残基。家蚕flightin蛋白与黑腹果蝇flightin蛋白的氨基酸同源性为29.67%,但存在保守区域。 展开更多
关键词 家蚕 肌肉 粗肌丝 flightin 肌球蛋白结合蛋白
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褐飞虱flightin的原核表达及其差异表达检测 被引量：2
3
作者 张小琴 胡玉琼 张传溪 《应用昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期1006-1012,共7页
flightin最早发现于果蝇Drosophila melanogaster的间接飞行肌中,并且定位于粗肌丝。这种蛋白对维持肌节的结构和功能起到了重要的作用,但其在具有长短翅型分化的褐飞虱Nilaparvata lugens Stl的不同翅型间差异并不清楚。本研究以长... flightin最早发现于果蝇Drosophila melanogaster的间接飞行肌中,并且定位于粗肌丝。这种蛋白对维持肌节的结构和功能起到了重要的作用,但其在具有长短翅型分化的褐飞虱Nilaparvata lugens Stl的不同翅型间差异并不清楚。本研究以长翅型雌虫褐飞虱cDNA为模板,通过PCR扩增得到褐飞虱flightin基因ORF全长,将其连接到表达载体pGEX-6P-1中以与谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合表达。将表达载体转入大肠杆菌表达株Rosseta,在不同温度、不同浓度IPTG的条件下诱导表达flightin,得到了最优表达条件,获得了高水平可溶性表达。在用GST抗体进行Western blotting验证GST-flightin融合重组蛋白表达的正确性后,我们通过GST柱纯化了的GST-flightin,进而用纯化后的蛋白免疫新西兰兔制备了高特异性的多克隆抗体。最后,我们用制备的多克隆抗体检测了长、短翅型雌成虫和不同发育阶段的褐飞虱体内flightin的表达差异。结果显示,flightin仅在长翅型成虫中表达,在短翅型雌成虫中未检测到其明显表达,而且flightin只在成虫期表达。本研究为进一步研究褐飞虱的flightin与其它蛋白互作、翅肌发育和翅型分化打下了基础。 展开更多
关键词 褐飞虱 flightin 原核表达 多克隆抗体 翅型差异 发育差异
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褐飞虱flightin基因多克隆抗体的制备及应用 被引量：2
4
作者 何海芳 张超 +3 位作者 张洁 杨靓 李为民 吴祖建 《中国科技论文》 CAS 北大核心 2015年第6期724-727,734,共5页
为探讨不同翅型和龄期褐飞虱体内的flightin蛋白表达情况,通过Gateway重组技术构建原核表达载体pDEST17-flightin,以终浓度为1mmol/L的IPTG诱导的蛋白为抗原,免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体。Western blotting检测表明,制备的flightin... 为探讨不同翅型和龄期褐飞虱体内的flightin蛋白表达情况,通过Gateway重组技术构建原核表达载体pDEST17-flightin,以终浓度为1mmol/L的IPTG诱导的蛋白为抗原,免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体。Western blotting检测表明,制备的flightin抗体可特异性地检测褐飞虱体内的flightin蛋白。间接ELISA检测结果表明,所制备的抗体效价达1∶6 400。flightin蛋白在褐飞虱长翅成虫中大量表达,在短翅雄虫中也检测到有微量表达,而在短翅雌虫和若虫中则检测不到。 展开更多
关键词 褐飞虱 翅型分化 flightin基因 多克隆抗体
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桔小实蝇flightin基因RNAi载体构建 被引量：1
5
作者 袁瑞玲 郑传伟 +3 位作者 冯丹 王艺璇 杜春花 陈鹏 《西部林业科学》 CAS 北大核心 2020年第4期171-175,共5页
以云南省林业和草原科学院森保所室内饲养的桔小实蝇为材料,采用RT-PCR技术,克隆桔小实蝇(Bactrocera dorsalis Hendel.)flightin的基因片段,并以此为靶标,设计有效的干扰片段,以线虫RNAi干扰载体L4440为载体,构建桔小实蝇flightin基因R... 以云南省林业和草原科学院森保所室内饲养的桔小实蝇为材料,采用RT-PCR技术,克隆桔小实蝇(Bactrocera dorsalis Hendel.)flightin的基因片段,并以此为靶标,设计有效的干扰片段,以线虫RNAi干扰载体L4440为载体,构建桔小实蝇flightin基因RNAi载体。通过PCR、酶切检测及测序,证明表达载体构建正确。本研究为通过RNAi研究桔小实蝇flightin的基因功能奠定了基础。 展开更多
关键词 桔小实蝇 flightin基因 L4440载体 RNA干扰
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