目的研究FIP200(FAK-family interacting protein of 200 kDa)对细胞外基质成份诱导的呼吸道上皮细胞粘附和迁移的影响及其作用机制。方法通过纤连接蛋白(finbronectin,FN)诱导培养呼吸道上皮细胞的粘附迁移,以FIP200反义寡核苷酸(ODN)...目的研究FIP200(FAK-family interacting protein of 200 kDa)对细胞外基质成份诱导的呼吸道上皮细胞粘附和迁移的影响及其作用机制。方法通过纤连接蛋白(finbronectin,FN)诱导培养呼吸道上皮细胞的粘附迁移,以FIP200反义寡核苷酸(ODN)经脂质体转染细胞;以计数法测定细胞粘附率,以损伤实验测定细胞迁移速度,以Western blot检测FIP200和FAK蛋白表达水平;以免疫共沉淀检测FIP200和FAK结合情况和FAK磷酸化程度。结果与40 mg/L FN组相比,经脂质体转染了FIP200反义寡核苷酸的气道上皮细胞粘附率和迁移速度明显增高,FIP200表达水平显著降低,FAK表达水平无明显变化,与FIP200结合的FAK显著降低,FAK酪氨酸磷酸化程度明显增高。结论内源性FIP200和FAK的结合抑制FAK的活化,从而抑制呼吸道上皮细胞的粘附和迁移,内源性FIP200作为FAK的抑制剂而存在;FN能够促使FAK和FIP200结合的解离而活化FAK,从而促进细胞粘附和迁移。展开更多
目的:研究香烟烟雾提取物(CSE)对气道上皮细胞增殖和细胞周期的影响及其作用机制.方法:利用MTT法研究CSE对气道上皮细胞增殖的影响,采用流式细胞术分析气道上皮细胞细胞周期的影响,以RT-PCR和W estern b lot检测气道上皮细胞FIP200 mRN...目的:研究香烟烟雾提取物(CSE)对气道上皮细胞增殖和细胞周期的影响及其作用机制.方法:利用MTT法研究CSE对气道上皮细胞增殖的影响,采用流式细胞术分析气道上皮细胞细胞周期的影响,以RT-PCR和W estern b lot检测气道上皮细胞FIP200 mRNA和蛋白表达,以免疫共沉淀检测FIP200与局灶粘着斑激酶(FAK)连接状况.结果:CSE干预的气道上皮细胞MTT吸光度比对照组明显降低,G1期细胞增多,S和G2期细胞明显减少(P<0.01),FIP200 mRNA,FIP200的表达水平以及FIP200与FAK的连接均显著增高(P<0.01),且随CSE干预时间和CSE浓度而增大;气道上皮细胞FIP200表达水平和FIP200与FAK连接的增高均与G1期细胞增多呈正相关(P<0.01),与S和G2期细胞减少呈负相关(P<0.01).结论:CSE显著抑制气道上皮细胞的增殖,FIP200的高表达可能是其作用机制之一.展开更多
文摘目的研究FIP200(FAK-family interacting protein of 200 kDa)对细胞外基质成份诱导的呼吸道上皮细胞粘附和迁移的影响及其作用机制。方法通过纤连接蛋白(finbronectin,FN)诱导培养呼吸道上皮细胞的粘附迁移,以FIP200反义寡核苷酸(ODN)经脂质体转染细胞;以计数法测定细胞粘附率,以损伤实验测定细胞迁移速度,以Western blot检测FIP200和FAK蛋白表达水平;以免疫共沉淀检测FIP200和FAK结合情况和FAK磷酸化程度。结果与40 mg/L FN组相比,经脂质体转染了FIP200反义寡核苷酸的气道上皮细胞粘附率和迁移速度明显增高,FIP200表达水平显著降低,FAK表达水平无明显变化,与FIP200结合的FAK显著降低,FAK酪氨酸磷酸化程度明显增高。结论内源性FIP200和FAK的结合抑制FAK的活化,从而抑制呼吸道上皮细胞的粘附和迁移,内源性FIP200作为FAK的抑制剂而存在;FN能够促使FAK和FIP200结合的解离而活化FAK,从而促进细胞粘附和迁移。
