沙门氏菌fimY基因的原核表达及禽沙门氏菌抗体检测ELISA研究 被引量：4

1

作者 陈小玲 李永清 +3 位作者 孙慧玲 徐福洲 章振华 杨兵 《中国家禽》 北大核心 2012年第13期18-22,共5页

为研发禽沙门氏菌抗体检测方法,采用大肠杆菌系统表达沙门氏菌属保守的菌毛fimY基因,纯化的目的蛋白经Western blot分析,能与免疫鸡血清和感染鸡血清产生特异性反应条带,证明该重组蛋白既有反应原性也有免疫原性。以此纯化蛋白为抗原建... 为研发禽沙门氏菌抗体检测方法,采用大肠杆菌系统表达沙门氏菌属保守的菌毛fimY基因,纯化的目的蛋白经Western blot分析,能与免疫鸡血清和感染鸡血清产生特异性反应条带,证明该重组蛋白既有反应原性也有免疫原性。以此纯化蛋白为抗原建立了间接ELISA(fimY-ELISA)。通过检验已知沙门氏菌鸡源血清、相关非沙门氏菌鸡源血清对fimY-ELISA进行评价,发现其在敏感性方面高于快速平板凝集试验(RPA)和自制的脂多糖抗原ELISA(LPS-ELISA)、肠炎沙门氏菌抗原ELISA(SE-ELISA),但在特异性方面不如LPS抗原ELISA;在与RPA的符合率方面与LPS-ELISA、SE-ELISA基本一致。 展开更多

关键词 禽沙门氏菌抗体 fimy基因 表达 ELISA 特异性

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马流产沙门菌fimY基因同源性分析及蛋白表达 被引量：4

2

作者 王世民 王彩蝶 +1 位作者 张艳楠 苏艳 《动物医学进展》 北大核心 2015年第6期39-42,共4页

为对马群中沙门菌进行快速、准确检测,根据GenBank公布的沙门菌菌毛蛋白fimY基因为模板设计一对特异性引物,用PCR方法扩增fimY部分基因。将fimY目的基因亚克隆至PGEX-4T-2原核表达载体,转入BL21(DE3)感受态细胞后用IPTG进行诱导表达,并... 为对马群中沙门菌进行快速、准确检测,根据GenBank公布的沙门菌菌毛蛋白fimY基因为模板设计一对特异性引物,用PCR方法扩增fimY部分基因。将fimY目的基因亚克隆至PGEX-4T-2原核表达载体,转入BL21(DE3)感受态细胞后用IPTG进行诱导表达,并对目的蛋白进行反应性检测。结果表明,克隆fimY基因大小为490bp;成功构建fimY原核表达载体PGEX-fimY,经SDS-PAGE显示带有GST标签的目的蛋白大小为47ku,与预期相符;Western blot证明,目的蛋白fimY能够结合沙门菌标准阳性血清,为建立马流产沙门菌间接ELISA检测方法奠定了基础。 展开更多

关键词 马流产沙门菌 fimy 抗原性 同源性

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建立基于fimY基因的LAMP技术检测食源性沙门菌 被引量：2

3

作者 王西 胡仲皓 +6 位作者 杜晓莉 徐欣欣 何晓花 田祥强 邹作成 刘雪兰 胡青海 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第5期100-106,共7页

沙门菌是人类一种常见的食源性致病菌,沙门菌主要污染肉类、鱼、禽、奶、蛋等食品。食用了这些未煮透的污染食品是引起沙门菌食物中毒的最主要原因。研制能对食品中的沙门菌进行现场快速精准检测的试剂盒,对于保障人们的食品安全具有重... 沙门菌是人类一种常见的食源性致病菌,沙门菌主要污染肉类、鱼、禽、奶、蛋等食品。食用了这些未煮透的污染食品是引起沙门菌食物中毒的最主要原因。研制能对食品中的沙门菌进行现场快速精准检测的试剂盒,对于保障人们的食品安全具有重要意义。本研究以沙门菌的fimY基因作为特异性的检测靶基因,建立一种可视化、低成本的环介导等温扩增技术,以快速检测食源性沙门菌。建立的LAMP方法具有良好的特异性,对肠出血性大肠杆菌O157、肠毒性大肠杆菌ETEC、空肠弯曲菌、小肠结肠炎耶尔森菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌等其他食源性致病菌和空白对照(水)的检测结果均为阴性。灵敏性检测结果表明,建立的LAMP检测沙门菌的灵敏度为3.8×10^(1)CFU/mL,而常规PCR检测沙门菌的灵敏度为3.8×10^(4)CFU/mL,LAMP法检测比常规PCR检测的灵敏度高1000倍。另外,采用建立的LAMP方法对18株鸡源和猪源的沙门菌分离株进行检测,结果均为阳性,与基于invA基因的常规PCR结果的一致。本研究中建立的LAMP检测方法为食源性沙门菌的检测提供一种可视化、灵敏、成本低的快速检测技术。 展开更多

关键词 食源性致病菌 沙门菌 环介导等温核酸扩增技术(LAMP) fimy 可视化检测

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沙门氏菌SYBR GreenⅠ实时荧光PCR检测方法的建立

4

作者 张晓倩 陈林军 +9 位作者 郝静云 焦迪 延涵 崔强 王海艳 罗小平 李军燕 靳木子 王瑞 赵治国 《中国动物检疫》 2025年第11期71-76,共6页

沙门氏菌病是一种常见的人兽共患病,对人类健康和养殖业发展造成危害。为建立一种特异、灵敏的沙门氏菌检测方法,根据沙门氏菌fimY基因保守区域设计特异性引物,通过对反应体系和条件进行优化建立了沙门氏菌SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法... 沙门氏菌病是一种常见的人兽共患病,对人类健康和养殖业发展造成危害。为建立一种特异、灵敏的沙门氏菌检测方法,根据沙门氏菌fimY基因保守区域设计特异性引物,通过对反应体系和条件进行优化建立了沙门氏菌SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法,并对该方法的特异性、敏感性、重复性进行了验证。结果显示:该方法与其他病原无交叉反应,最低检测限为4.47×10~1 copies/μL,组内和组间试验变异系数均小于1.5%,临床样品检测结果与普通PCR方法的符合率为97.78%。结果表明,该方法具有较高的特异性、敏感性和重复性,为沙门氏菌病的流行病学调查和筛查提供了技术支撑。 展开更多

关键词 沙门氏菌 fimy基因 实时荧光PCR

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动物性食品中沙门菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立 被引量：8

5

作者 李丹丹 徐义刚 +2 位作者 王绥家 高慎阳 马广鹏 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第5期24-30,共7页

根据沙门菌属高度保守的fimY基因序列设计探针和引物,通过优化反应条件,建立检测动物性食品中沙门菌实时荧光定量PCR方法,应用于动物性食品中沙门菌的快速检验。建立的荧光PCR方法灵敏度约为5.2cfu/mL,经对781份肉类、蛋、奶及水产品进... 根据沙门菌属高度保守的fimY基因序列设计探针和引物,通过优化反应条件,建立检测动物性食品中沙门菌实时荧光定量PCR方法,应用于动物性食品中沙门菌的快速检验。建立的荧光PCR方法灵敏度约为5.2cfu/mL,经对781份肉类、蛋、奶及水产品进行检测,共检出56份阳性样本,与国标(GB/T4789.4——2008)方法的检测结果一致。建立的荧光PCR方法操作简便、特异性强、灵敏度高,具有良好的实用性。 展开更多

关键词 沙门菌 fimy基因 实时荧光定量PCR 快速检测

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食品中沙门菌变性高效液相色谱检测技术的研究与方法建立 被引量：4

6

作者 闫平平 曹际娟 +3 位作者 郑秋月 徐君怡 徐杨 谢明杰 《中国卫生检验杂志》 CAS 2008年第9期1739-1741,1750,共4页

目的:应用PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术建立食品中沙门菌的快速检测方法。方法:根据沙门菌fimY基因序列的特点设计特异性引物,PCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测。以沙门菌等89株参考菌株做特异性检测;沙门菌液体培养物稀释... 目的:应用PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术建立食品中沙门菌的快速检测方法。方法:根据沙门菌fimY基因序列的特点设计特异性引物,PCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测。以沙门菌等89株参考菌株做特异性检测;沙门菌液体培养物稀释成不同梯度,做灵敏度检测。结果:试验结果表明该方法有很好的特异性,而其它非沙门菌均为阴性。该方法灵敏度较高,检测低限可达到45 cfu/ml。结论:该方法可以快速、准确检测食品中沙门菌,是食品中致病菌检测的新技术和新方法。 展开更多

关键词 DHPLC 沙门菌 fimy基因

暂未订购

环介导等温扩增方法在食品中沙门菌检测的应用和评价 被引量：2

7

作者 张蕾 张海予 +3 位作者 魏海燕 张西萌 程晋霞 曾静 《中国食品卫生杂志》 北大核心 2013年第6期520-524,共5页

目的将环介导等温扩增检测方法应用于食品中沙门菌的检验,并在检测方法特异性、灵敏度等方面与实时荧光PCR和传统检测方法进行比较。方法针对沙门菌属高度保守的fimY基因设计环介导等温扩增检测引物并优化反应体系,在特异性、灵敏度和... 目的将环介导等温扩增检测方法应用于食品中沙门菌的检验,并在检测方法特异性、灵敏度等方面与实时荧光PCR和传统检测方法进行比较。方法针对沙门菌属高度保守的fimY基因设计环介导等温扩增检测引物并优化反应体系,在特异性、灵敏度和实际样品检测等方面与实时荧光PCR及传统检测方法比对。结果本研究建立的LAMP方法检测沙门菌93株和非目标菌31株,具有良好的特异性。在纯培养、无需增菌情况下,其检测灵敏度为6.4×102cfu/ml,与实时荧光PCR方法相当。食品基质添加试验中,环介导等温扩增方法检测低限为2 cfu/25 g样品;对45份实际食品样品检测结果表明,该方法实际样品检出率为11.1%,与实时荧光PCR及传统方法检测结果一致。结论本研究建立的沙门菌环介导等温扩增检测方法具有良好的特异性,检测灵敏度与实时荧光PCR相当,适用于沙门菌的快速筛选。 展开更多

关键词 沙门菌 fimy基因 环介导等温扩增 实时荧光PCR 食源性致病菌

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双重PCR检测肠炎沙门氏菌方法的建立 被引量：2

8

作者 段小丽 董立伟 +1 位作者 朱国强 朱晓演 《中国家禽》 北大核心 2012年第17期20-22,共3页

沙门氏菌是引起人类食物中毒事件的主要病原之一,其中,肠炎沙门氏菌因其可感染家禽、污染禽蛋而受到广泛关注。本试验根据沙门氏菌属特异性基因片段fimY和肠炎沙门氏菌特异性基因片段sdfI分别设计一对引物,对25株沙门氏菌和大肠杆菌进... 沙门氏菌是引起人类食物中毒事件的主要病原之一,其中,肠炎沙门氏菌因其可感染家禽、污染禽蛋而受到广泛关注。本试验根据沙门氏菌属特异性基因片段fimY和肠炎沙门氏菌特异性基因片段sdfI分别设计一对引物,对25株沙门氏菌和大肠杆菌进行双重PCR扩增,结果显示22株沙门氏菌均出现与理论值大小497bp相符的属特异性条带,作为对照的3株大肠杆菌则未显示该条带,并且7株肠炎沙门氏菌均出现与理论值大小293bp相符的特异性条带。另外,敏感性试验结果显示肠炎沙门氏菌50336和鸡白痢沙门氏菌SP1的模板浓度分别为18ng和15ng时仍能清晰扩增出特异性条带。上述结果表明建立的PCR方法具有快速简便、灵敏性高、特异性强等特点,为公共卫生、食品安全、畜牧兽医及出入境安检等多部门检测和监测沙门氏菌提供了前提基础和技术保障。 展开更多

关键词 肠炎沙门氏菌 fimy sdfI 双重PCR

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单核细胞增生李斯特氏菌PCR-DHPLC检测新技术的建立

9

作者 曹际娟 闫平平 +3 位作者 徐君怡 郑秋月 马惠蕊 谢明杰 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第S1期415-419,共5页

应用PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术建立食品中单核细胞增生李斯特氏菌fimY的快速检测方法。根据单核细胞增生李斯特氏菌prfA和hlyA基因序列的特点设计特异性引物,PCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测。以单核细胞增生李斯特氏菌... 应用PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术建立食品中单核细胞增生李斯特氏菌fimY的快速检测方法。根据单核细胞增生李斯特氏菌prfA和hlyA基因序列的特点设计特异性引物,PCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测。以单核细胞增生李斯特氏菌等61株参考菌株做特异性试验;单核细胞增生李斯特氏菌菌株稀释成不同梯度,进行灵敏度试验。试验结果表明该方法具有很好的特异性,灵敏度较高,检测低限可达到为181CFU/ml。可以快速、准确检测单核细胞增生李斯特氏菌,是食品中致病菌快速检测的新技术。 展开更多

关键词 DHPLC 单核细胞增生李斯特氏菌 fimy基因

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食品中沙门氏菌DNA环介导等温扩增快速检测方法的建立 被引量：10

10

作者 徐义刚 崔丽春 +4 位作者 杨君宏 李苏龙 李丹丹 姜艳春 张子群 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期452-458,共7页

根据沙门氏菌属高度保守的fimY基因序列设计了2对特异性引物,采用环介导等温扩增方法(LAMP)建立了食品中沙门氏菌的LAMP快速检测方法。结果表明,建立的LAMP方法具有高度特异性,经对40种共68株细菌进行扩增,所试32株沙门氏菌均为LAMP阳性... 根据沙门氏菌属高度保守的fimY基因序列设计了2对特异性引物,采用环介导等温扩增方法(LAMP)建立了食品中沙门氏菌的LAMP快速检测方法。结果表明,建立的LAMP方法具有高度特异性,经对40种共68株细菌进行扩增,所试32株沙门氏菌均为LAMP阳性,其他菌株为LAMP阴性。建立的LAMP方法对培养的沙门氏菌的检测灵敏度为5CFU/管,对污染食品中沙门氏菌的检测灵敏度为9CFU/管,60min内即可完成检测。用建立的LAMP方法对802份肉类、蛋、奶及其制品和动物腹泻物、人工污染样品等进行检测,共检出165份LAMP阳性样本,与国标(GB/T4789.4-2008)方法的检测结果一致。建立的LAMP方法操作简便、特异性强、灵敏度高,具有良好的实用性。 展开更多

关键词 沙门氏菌 fimy基因 环介导等温扩增 快速检测

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Taqman MGB PCR定量检测水产品中沙门氏菌的方法建立 被引量：9

11

作者 麻丽丹 王殿夫 +1 位作者 巴中华 李春丽 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第20期303-307,共5页

建立采用Taqman MGB实时荧光PCR法快速定量检测水产品中沙门氏菌。根据沙门氏菌fimY基因保守序列,设计引物和Taqman MGB探针,建立Taqman MGB实时PCR定量检测体系。采用本方法对24株共14种血清型沙门氏菌和17株与沙门氏菌亲缘关系比较近... 建立采用Taqman MGB实时荧光PCR法快速定量检测水产品中沙门氏菌。根据沙门氏菌fimY基因保守序列,设计引物和Taqman MGB探针,建立Taqman MGB实时PCR定量检测体系。采用本方法对24株共14种血清型沙门氏菌和17株与沙门氏菌亲缘关系比较近,以及在样品中能同时存在的常见食源性致病菌菌株进行PCR扩增。结果显示:所有的沙门氏菌菌株结果均为阳性,而非沙门氏菌菌株检测结果均为阴性,反应特异性为100%。本方法的纯菌最低检测低限为13CFU/ml,样品江瑶贝和蚬子肉中添加肠炎沙门氏菌的最低检测低限为130CFU/ml;香螺肉中添加肠炎沙门氏菌的最低检测低限为1300CFU/ml。定量关系式为y=-3.381418lnx+45.115715,R2=0.964878。整个实验2h即可完成,可应用于水产品中沙门氏菌污染状况调查及快速检测。 展开更多

关键词 实时荧光PCR 定量检测 沙门氏菌 fimy基因 TAQMAN MGB探针 水产品

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沙门菌LAMP检测方法的建立 被引量：9

12

作者 李迎晓 焦凤超 +5 位作者 赵瑜 刘锦妮 李洵 吴海港 曲哲会 易本驰 《畜牧与兽医》 北大核心 2017年第12期111-114,共4页

建立了一种沙门菌环介导等温扩增(LAMP)检测方法。依据GenBank公布的沙门菌属fimY基因序列,利用Primer Explorer V5软件设计LAMP扩增所需引物,通过LAMP反应条件的优化,建立沙门菌LAMP快速检测方法,并对其特异性和敏感性进行了评价。结... 建立了一种沙门菌环介导等温扩增(LAMP)检测方法。依据GenBank公布的沙门菌属fimY基因序列,利用Primer Explorer V5软件设计LAMP扩增所需引物,通过LAMP反应条件的优化,建立沙门菌LAMP快速检测方法,并对其特异性和敏感性进行了评价。结果表明,针对fimY基因建立的LAMP方法具有较强的特异性,最低可检出浓度为56×102CFU/mL,灵敏度高于PCR方法 10倍。 展开更多

关键词 沙门菌 环介导等温扩增技术 fimy基因

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