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禽腺病毒Fiber2蛋白抗原制备2种新型疫苗及保护效果试验
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作者 岳筠 刘霞 +3 位作者 胡茜 许力文 尹德晶 程振涛 《贵州畜牧兽医》 2025年第6期27-31,共5页
为提高禽腺病毒4型(FAdV-4)疫苗的免疫效果,以FAdV-4贵州分离株的纤突蛋白(Fiber2)为抗原,通过间接免疫荧光检测pVAX1-Fiber2重组质粒在LMH细胞内的表达情况,以此构建重组质粒,制备DNA疫苗;通过pColdⅠ载体对Fiber2进行原核表达,构建原... 为提高禽腺病毒4型(FAdV-4)疫苗的免疫效果,以FAdV-4贵州分离株的纤突蛋白(Fiber2)为抗原,通过间接免疫荧光检测pVAX1-Fiber2重组质粒在LMH细胞内的表达情况,以此构建重组质粒,制备DNA疫苗;通过pColdⅠ载体对Fiber2进行原核表达,构建原核表达载体,制备亚单位疫苗,并对2种新型疫苗与灭活疫苗的攻毒保护效果进行比较。结果:pVAX1-Fiber2重组质粒可在LMH细胞内有效表达Fiber2蛋白,原核表达的Fiber2重组蛋白具有良好的免疫原性;Fiber2亚单位疫苗、Fiber2 DNA疫苗、灭活疫苗的保护率分别为98%、58%、96%。组织病理学分析显示,3种疫苗均可减轻FAdV-4感染的病理变化程度,其中Fiber2亚单位疫苗与灭活疫苗的效果更好。结论:Fiber2亚单位疫苗具有良好的攻毒保护效果,可作为防控FAdV-4的候选疫苗。 展开更多
关键词 禽腺病毒4型 fiber2蛋白 DNA疫苗 亚单位疫苗 保护效果
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可表达禽腺病毒Fiber2基因的重组马立克病病毒疫苗株的构建
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作者 张子博 陈运通 +12 位作者 范文瑞 吴龙波 李雨萌 郭茹 张艳萍 刘长军 祁小乐 刘永振 王素艳 崔红玉 段雨路 李留安 高玉龙 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第7期884-890,共7页
为研制禽类肝炎-心包积液综合征(HHS)重组马立克病病毒(MDV)活载体疫苗,通过PCR扩增血清4型禽腺病毒(FAdV-4)强毒株Fiber2基因并克隆入pcDNA3.1载体,构建重组真核表达质粒pSV40-Fiber2,然后通过PCR扩增和同源重组构建表达黏粒pMS-Fiber2... 为研制禽类肝炎-心包积液综合征(HHS)重组马立克病病毒(MDV)活载体疫苗,通过PCR扩增血清4型禽腺病毒(FAdV-4)强毒株Fiber2基因并克隆入pcDNA3.1载体,构建重组真核表达质粒pSV40-Fiber2,然后通过PCR扩增和同源重组构建表达黏粒pMS-Fiber2,与其他4个相互重叠并覆盖MDV全基因组的黏粒共同转染至鸡胚成纤维细胞(CEF)拯救病毒rMDV-Fiber2,在CEF中传代后用PCR、间接免疫荧光试验和Western-blot进行鉴定,并绘制体外生长曲线,分析其体外复制特性。结果表明,rMDV-Fiber2能够稳定表达Fiber2蛋白,rMDV-Fiber2在CEF中的复制能力与亲本病毒rMSΔmeq无明显差异;攻毒保护试验结果表明,重组病毒rMDV-Fiber2免疫后鸡能够对FAdV-4强毒株感染有80%存活率。结论,构建成功的重组病毒rMDV-Fiber2与亲本株的复制力相似,为研制HHS重组MDV活载体疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 血清4型禽腺病毒 重组马立克病病毒活载体疫苗 fiber2
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表达禽腺病毒血清4型Fiber2蛋白的重组耐热新城疫病毒的构建及免疫效果评估 被引量:2
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作者 商雨 李林涛 +9 位作者 李丽 徐英英 冯贺龙 汪宏才 张蓉蓉 曾哲 王红琳 罗青平 邵华斌 温国元 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第2期650-659,共10页
【目的】研究针对新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)和禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)的耐热基因工程疫苗。【方法】利用反向遗传学操作技术将NDV耐热株的HN基因替换到LaSota疫苗株上,再将禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus sero... 【目的】研究针对新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)和禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)的耐热基因工程疫苗。【方法】利用反向遗传学操作技术将NDV耐热株的HN基因替换到LaSota疫苗株上,再将禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)的Fiber2基因插入到其基因组上,构建表达Fiber2蛋白的重组耐热NDV质粒pTS-HN-Fiber2。通过病毒拯救技术拯救重组NDV rTS-HN-Fiber2,并测定其生物学特性和作为疫苗候选株的免疫原性和攻毒保护性。【结果】rTS-HN-Fiber2的鸡胚平均致死时间>168 h,且脑内接种致病指数为0,属于弱毒的范畴;在细胞上的生长曲线结果表明,rTS-HN-Fiber2与亲本LaSota株有相似的生长曲线,但最终的生长滴度略低于LaSota株;rTS-HN-Fiber2在56℃处理15 min后,病毒滴度下降约10^(3) TCID_(50)/mL,而LaSota株56℃处理5 min几乎无感染性;间接免疫荧光试验结果表明,rTS-HN-Fiber2能表达Fiber2蛋白。免疫和攻毒试验结果显示,rTS-HN-Fiber2能产生NDV抗体,且能显著提高雏鸡在FAdV-4强毒下的存活率,减轻FAdV-4强毒引起的组织病变,降低组织中的病毒载量。【结论】本研究成功构建了表达FAdV-4 Fiber2蛋白的重组耐热NDV,该病毒保持了亲本LaSota株的弱毒生物学特性,但热稳定性有显著提升;重组NDV免疫雏鸡可产生针对NDV和FAdV-4强毒的保护,该重组NDV可作为开发针对FAdV-4和NDV二联基因工程疫苗的候选病毒株。 展开更多
关键词 禽腺病毒血清4型(FAdV-4) 新城疫病毒(NDV) fiber2蛋白 重组病毒 耐热
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基于FAdV-4中国流行株Fiber2蛋白的间接ELISA抗体检测方法的建立 被引量:6
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作者 万文妍 刘延珂 +10 位作者 王贝贝 吴艳阳 杨东东 高冬生 李永涛 王新卫 杨霞 常洪涛 陈陆 王川庆 赵军 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期883-888,共6页
利用在大肠杆菌中表达的FAdV-4中国流行株Fiber2蛋白作为包被抗原,建立了检测抗禽腺病毒血清4型(FAdV-4)中国流行株抗体的间接ELISA方法。所建立方法的最佳条件为:抗原最适包被量为0.25μg/μL,包被时间为37℃1h,然后4℃过夜;... 利用在大肠杆菌中表达的FAdV-4中国流行株Fiber2蛋白作为包被抗原,建立了检测抗禽腺病毒血清4型(FAdV-4)中国流行株抗体的间接ELISA方法。所建立方法的最佳条件为:抗原最适包被量为0.25μg/μL,包被时间为37℃1h,然后4℃过夜;被检血清的最佳稀释度为1:800,作用时间为2h;二抗选用HRP标记的兔抗鸡IgY,稀释度为1:4000,作用时间为1.5h;显色液TMB作用条件为室温5min。所建立ELISA的判定标准为:样品的S/P值大于或等于0.0553判为阳性,小于0.0418判为阴性。用建立的ELISA方法对抗鸡新城疫病毒、禽流感病毒、传染性法氏囊病病毒、传染性支气管炎病毒、减蛋综合征病毒阳性血清进行了检测,均无交叉反应,表明该方法有较好的特异性,组内和组间重复的最大变异系数为5.6%和5.7%,所建立的ELISA方法重复性良好。用所建立的ELISA方法对50份来自于疑似患肝炎-心包积液综合征病鸡的血清样品进行检测,阳性捡出率为98%,与FAdV-4病原学检测结果符合率为100%。结果表明:本试验所建立的ELISA方法可用于抗FAdV-4中国流行株抗体的检测,为肝炎-心包积液综合征病监测和流行病学调查提供了方法。 展开更多
关键词 禽腺病毒血清4型 fiber2蛋白 间接ELISA
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禽腺病毒血清4型Fiber2蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定 被引量:9
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作者 郭瑞珍 苏冰倩 +6 位作者 王棋 王一 于朋伟 孟洁洁 齐艳丽 杨国宇 褚贝贝 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期2000-2012,共13页
旨在制备禽腺病毒血清4型(FAdV-4)纤突蛋白(Fiber2)的特异性单克隆抗体(MAb),本研究将原核表达的可溶性重组蛋白NusA-Fiber2作为免疫原免疫BALB/c雌鼠,筛选获得3株能稳定分泌抗FAdV-4 Fiber2蛋白MAb的杂交瘤细胞株2G5、2G8、4C2,取细胞... 旨在制备禽腺病毒血清4型(FAdV-4)纤突蛋白(Fiber2)的特异性单克隆抗体(MAb),本研究将原核表达的可溶性重组蛋白NusA-Fiber2作为免疫原免疫BALB/c雌鼠,筛选获得3株能稳定分泌抗FAdV-4 Fiber2蛋白MAb的杂交瘤细胞株2G5、2G8、4C2,取细胞株2G5制备腹水并纯化,利用间接免疫荧光试验(immunofluorescence assay,IFA)和Western blot鉴定该单抗的特异性。用制备的单抗包被酶标板,通过一系列的优化,建立了FAdV-4 Fiber2双抗夹心ELISA检测方法。通过逐步截短分析鉴定出单克隆抗体识别的抗原表位区域。结果表明:成功获取3株单克隆细胞株2G5、2G8、4C2。MAb 2G5可与原核表达纯化的Fiber2蛋白及FAdV-4特异性反应。建立的双抗夹心ELISA检测方法具有很好的特异性、灵敏性和重复性。该MAb识别的表位序列是N端aa1—33。本研究成功制备了具有良好Western blot和IFA反应原性的单克隆抗体,为Fiber2蛋白功能研究和FAdV-4新型表位疫苗商品化研发奠定了基础。 展开更多
关键词 禽腺病毒血清4型 fiber2蛋白 单克隆抗体 双抗夹心ELISA 表位鉴定
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表达禽腺病毒4型中国流行株Fiber2蛋白重组新城疫病毒的构建与鉴定 被引量:3
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作者 田开月 张玉菡 +6 位作者 杨盼盼 郭慧芳 李宁 杨霞 边传周 王增 赵军 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1697-1702,共6页
利用NDV LaSota弱毒疫苗株反向遗传操作系统,将禽腺病毒4型(FAdV-4)中国流行株的全长Fiber2基因插入到NDV基因组的P和M基因之间,构建并拯救出重组病毒rLaSota-Fiber2。利用RT-PCR和序列测定,以及Western blot对重组病毒进行了鉴定。结... 利用NDV LaSota弱毒疫苗株反向遗传操作系统,将禽腺病毒4型(FAdV-4)中国流行株的全长Fiber2基因插入到NDV基因组的P和M基因之间,构建并拯救出重组病毒rLaSota-Fiber2。利用RT-PCR和序列测定,以及Western blot对重组病毒进行了鉴定。结果显示,Fiber2基因插入位置和方向正确,Fiber2蛋白得到正确表达,表达形式为可溶的游离形式而非嵌入到NDV颗粒中。第10代重组病毒的鸡胚致病性试验和在鸡胚中的生长特性研究结果显示,重组病毒的半数鸡胚感染量(EID50)最高可达108.5/100μL,鸡胚平均致死时间(MDT)为120 h, 1日龄雏鸡脑内接种指数(ICPI)和6周龄鸡静脉接种致病指数(IVPI)均为0,重组病毒保持了LaSota弱毒疫苗亲本毒株的低致病特性和对鸡胚良好的高滴度生长适应性。重组病毒与亲本LaSota株生长滴度在相近时间达到峰值,生长动力学特性与亲本株无明显差异。本试验构建的表达FAdV-4中国流行株Fiber2基因的重组病毒rLaSota-Fiber2有望为同时防控NDV和FAdV-4的感染提供安全、廉价和高效的辅助工具。 展开更多
关键词 禽腺病毒4型 fiber2蛋白 重组新城疫病毒 疫苗
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一株禽腺病毒4型Fiber2蛋白单克隆抗体的制备 被引量:3
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作者 谢明 李国攀 +6 位作者 胡基雄 张志翔 艾笑扬 陈帝斯 李杨 尹俊翔 荣俊 《湖北农业科学》 2022年第10期121-126,131,共7页
制备禽腺病毒4型(FAdV-4)Fiber2蛋白的特异性单克隆抗体,将重组蛋白FAdV-4 Fiber2纯化后作为免疫原免疫BALB/c小鼠,分离脾脏中的淋巴细胞,与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,筛选得到10株能稳定分泌抗FAdV-4 Fiber2蛋白单克隆抗体的阳性杂... 制备禽腺病毒4型(FAdV-4)Fiber2蛋白的特异性单克隆抗体,将重组蛋白FAdV-4 Fiber2纯化后作为免疫原免疫BALB/c小鼠,分离脾脏中的淋巴细胞,与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,筛选得到10株能稳定分泌抗FAdV-4 Fiber2蛋白单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株1B5F1、1B5G11、1B5C1、1B5D2、1B5E3、1B5F3、1B5E4、1B5G4、1B5A8、1B5G8,取分泌抗体水平最高的1B5F1细胞株制备腹水,利用斑点杂交(Dot blot)和间接免疫荧光试验(IFA)进行特异性检测。结果表明,成功制备10株杂交瘤细胞株;制备的腹水能与FAdV-4 Fiber2蛋白及FAdV-4攻毒后的鸡肝组织产生特异性反应,证明成功制备了FAdV-4 Fiber2蛋白特异性单克隆抗体。 展开更多
关键词 禽腺病毒4型 fiber2蛋白 单克隆抗体
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安卡拉病毒贵州分离株Fiber2基因的克隆及序列分析 被引量:1
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作者 方天 何玲 +4 位作者 尹德晶 岳筠 朱二鹏 文明 程振涛 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2022年第6期1603-1611,共9页
Fiber2蛋白是禽腺病毒血清4型(FAdV-4,又称安卡拉病毒)重要的免疫原蛋白,为深入了解FAdV-4贵州株Fiber2基因的遗传变异情况,本研究利用PCR技术扩增FAdV-4贵州晴隆株(GZ-QL)Fiber2基因,胶回收后将其连接至pMD19-T载体,转化入DH5α筛选阳... Fiber2蛋白是禽腺病毒血清4型(FAdV-4,又称安卡拉病毒)重要的免疫原蛋白,为深入了解FAdV-4贵州株Fiber2基因的遗传变异情况,本研究利用PCR技术扩增FAdV-4贵州晴隆株(GZ-QL)Fiber2基因,胶回收后将其连接至pMD19-T载体,转化入DH5α筛选阳性克隆质粒,经质粒PCR及双酶切鉴定后进行DNA测序,然后对测序结果进行生物信息学分析。结果显示,GZ-QL株Fiber2基因全长为1 440 bp,与四川分离的SCnj1601强毒株、北京分离的NIVD2强毒株Fiber2基因核苷酸同源性均为100.0%,与FAdV-4经典ON1株Fiber2基因核苷酸同源性为95.9%,两者位于相同进化分支。GZ-QL Fiber2蛋白共有33个氨基酸突变位点,其中,在第11~15位之间有5个氨基酸插入;蛋白质亲水性平均值为-0.031,其二级结构以无规则卷曲为主(占51.8%),无跨膜结构域或信号肽,抗原表位分布均匀,预测有8个优势抗原表位区域,且集中于N端。以上结果表明,FAdV-4贵州株GZ-QL Fiber2蛋白在禽腺病毒血清4型内相对保守且抗原性良好,具备成为优势抗原的潜力。 展开更多
关键词 禽腺病毒血清4型 fiber2基因 生物信息学分析
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禽腺病毒血清4型中国流行株fiber2蛋白单克隆抗体制备与鉴定 被引量:5
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作者 田开月 曲信芹 +4 位作者 韩城昊 尹坤 杨盼盼 黄玉波 赵军 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2023年第11期104-109,共6页
旨在制备禽腺病毒血清4型(fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)中国流行株的fiber2蛋白的特异性单克隆抗体。以纯化的FAdV-4中国流行株CH/HNJZ/2015免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾脏与SP2/0细胞融合,采用基于fiber2蛋白的间接ELISA筛选阳性杂... 旨在制备禽腺病毒血清4型(fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)中国流行株的fiber2蛋白的特异性单克隆抗体。以纯化的FAdV-4中国流行株CH/HNJZ/2015免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾脏与SP2/0细胞融合,采用基于fiber2蛋白的间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞,经过5次亚克隆,获得2株分泌抗fiber2蛋白抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2C3和7B4。以制备的2C3和7B4腹水进行亚型鉴定、反应原性、特异性以及中和活性测定。结果显示,成功制备了抗FAdV-4 fiber2蛋白的特异性单克隆抗体,获得的单克隆抗体均为IgM亚型,可特异性识别FAdV-4及其fiber2蛋白,为FAdV-4的免疫检测和fiber2蛋白功能研究提供了研究材料。 展开更多
关键词 禽腺病毒血清4型 fiber2蛋白 单克隆抗体
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高致病性FAdV-4分离株fiber2结构蛋白表达和细胞内定位的分析 被引量:1
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作者 李梅珍 洪琴 +1 位作者 邓翔飞 陈芳芳 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 2022年第2期259-264,共6页
初步鉴定一株高致病性4型禽腺病毒(fowl adenovirus serotype 4, FAdV-4)并研究其生物学特性。应用PCR、动物实验、免疫印迹技术和激光共聚焦鉴定其致病性和传播途径,分析fiber2蛋白的表达特性及其在细胞内定位。结果显示,所分离的毒株... 初步鉴定一株高致病性4型禽腺病毒(fowl adenovirus serotype 4, FAdV-4)并研究其生物学特性。应用PCR、动物实验、免疫印迹技术和激光共聚焦鉴定其致病性和传播途径,分析fiber2蛋白的表达特性及其在细胞内定位。结果显示,所分离的毒株为FAdV-4型强毒株,对鸡的致死率达100%,对鸭无明显致病性;病毒可以经过滴鼻点眼感染而非经过口腔感染;PCR扩增的fiber2基因的大小为1 440 bp,所构建的含fiber2基因的重组真核和原核表达质粒均可正确表达;共聚焦结果显示,fiber2蛋白主要定位于细胞核。结果可为进一步研究安徽省地区高致病性禽腺病毒的感染和疫苗制备提供基础。 展开更多
关键词 FAdV-4 分离鉴定 fiber2 蛋白表达 细胞定位
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禽腺病毒血清4型Fiber2 Head蛋白表达及其单克隆抗体筛选
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作者 朱荣芳 金前跃 +10 位作者 柴永笑 陈晓 李伟 郭振华 卢清侠 柴书军 邢云瑞 季辉 吕凤霞 邢广旭 张改平 《中国动物传染病学报》 北大核心 2024年第6期135-144,共10页
为制备抗禽腺病毒血清4型(FAdV4)Fiber2 Head蛋白的特异性单克隆抗体(mAb),本研究将纤突蛋白(Fiber2)截短,并利用大肠杆菌系统进行原核表达。将纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠,细胞融合后通过间接ELISA及免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)筛... 为制备抗禽腺病毒血清4型(FAdV4)Fiber2 Head蛋白的特异性单克隆抗体(mAb),本研究将纤突蛋白(Fiber2)截短,并利用大肠杆菌系统进行原核表达。将纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠,细胞融合后通过间接ELISA及免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)筛选单克隆抗体,并对单克隆抗体进行反应性测定、效价测定以及亚型鉴定。结果显示:Fiber2 Head蛋白在大肠杆菌中成功表达,且具有良好的生物活性,成功获得8株单克隆细胞株分别命名为5A5、1D5、7C9、4E5、3A11、5E11、9D7、6E3,均可分泌特异性识别Fiber2 Head蛋白及FAdV4的单克隆抗体。综上,本研究成功制备了能与Fiber2 Head蛋白和FAdV4病毒特异性反应的单克隆抗体,为FAdV4抗原和抗体检测试剂的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 禽腺病毒4型 fiber2蛋白 单克隆抗体 免疫检测
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禽腺病毒4型湖北株的分离鉴定及其Fiber2蛋白在乳酸菌中的表达
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作者 李剑 徐鹏飞 +4 位作者 叶十一 陈红心 周启立 翁长江 熊涛 《江苏农业科学》 北大核心 2022年第23期153-158,共6页
为研究湖北地区禽腺病毒4型遗传进化情况及其Fiber2蛋白在乳酸菌中的表达情况,将采集于湖北省某养鸡场的病变组织样处理后接种至LMH细胞,分离出2株禽腺病毒,通过PCR鉴定和Hexon基因测序分析表明为禽腺病毒4型,并命名为HBJZ2021A和HBJZ20... 为研究湖北地区禽腺病毒4型遗传进化情况及其Fiber2蛋白在乳酸菌中的表达情况,将采集于湖北省某养鸡场的病变组织样处理后接种至LMH细胞,分离出2株禽腺病毒,通过PCR鉴定和Hexon基因测序分析表明为禽腺病毒4型,并命名为HBJZ2021A和HBJZ2021B,遗传进化树分析结果表明,其与国内山东、浙江和北京等地区的毒株亲缘关系较近,处于同一进化分支。以其基因组DNA为模板扩增Fiber2基因并克隆至乳酸菌表达载体pNZ8148,通过酶切和测序表明成功构建了重组表达载体pNZ8148-Fiber2,并通过电转转化至NZ 9000乳酸菌,采用不同浓度梯度的Nisin进行诱导表达,SDS-PAGE及Western-Blot分析结果显示,成功在上清中表达了Fiber2蛋白。该研究结果为湖北地区禽腺病毒4型的流行情况及其口服疫苗的开发提供了参考依据。 展开更多
关键词 禽腺病毒4型 分离鉴定 遗传进化 fiber2蛋白表达 基因测序
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高致病性FAdV-4传代中的毒力和Fiber2基因的比对分析
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作者 洪琴 邓翔飞 +2 位作者 周香 徐彬 陈芳芳 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 2023年第2期249-254,共6页
为筛选禽腺病毒疫苗株和制备亚单位疫苗提供科学依据,探明高致病性禽腺病毒C亚型4血清型(FAdV-4)毒株在传代中的毒力变化以及不同感染方式对雏鸡死亡率的影响,首先制备2~15代的高致病性FAdV-4尿囊液,用LMH细胞检测第2、4、8和15代尿囊... 为筛选禽腺病毒疫苗株和制备亚单位疫苗提供科学依据,探明高致病性禽腺病毒C亚型4血清型(FAdV-4)毒株在传代中的毒力变化以及不同感染方式对雏鸡死亡率的影响,首先制备2~15代的高致病性FAdV-4尿囊液,用LMH细胞检测第2、4、8和15代尿囊液的半数细胞感染量(TCID_(50));其次选取的4个代次尿囊液分别通过黏膜(点眼)和颈背部皮下途径接种SPF雏鸡,观察动物的死亡率;最后应用PCR方法扩增主要结构蛋白Fiber2基因序列并进行比对分析。结果表明:所有制备的2~15代FAdV-4毒株均在5~7 d内致鸡胚死亡(100%),4个代次毒株的TCID_(50)为10^(6.5±0.2)/0.1 mL,不同代次毒株间的毒力差异不显著(P>0.05);选取的4个代次毒株经颈背部皮下接种雏鸡的死亡率为100%,死亡雏鸡出现典型的心包积液综合征。而经黏膜接种的雏鸡死亡率呈下降趋势,分别为80%、50%、30%和30%;不同代次毒株Fiber2基因序列没有发生变化。总之,不同代次毒株通过皮下接种后对雏鸡的致病力没有差异,但黏膜接种的死亡率则逐代下降,而主要结构蛋白Fiber2基因则没有出现碱基变异。 展开更多
关键词 强毒株FAdV-4 毒力 致病性 fiber2
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禽腺病毒4型中国流行株Fiber2蛋白的原核表达与间接ELISA抗体检测方法的建立 被引量:8
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作者 田开月 张玉菡 +4 位作者 郭慧芳 李宁 杨霞 王增 赵军 《畜牧与兽医》 北大核心 2019年第9期76-80,共5页
为建立禽腺病毒4型(FAdV-4)特异性抗体检测方法,将密码子优化合成的FAdV-4中国流行株Fiber2蛋白的编码基因克隆于pET-32a(+)载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。用纯化的Fiber2蛋白作为包被抗原,通过一系列条件的优化,建立了一种检测F... 为建立禽腺病毒4型(FAdV-4)特异性抗体检测方法,将密码子优化合成的FAdV-4中国流行株Fiber2蛋白的编码基因克隆于pET-32a(+)载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。用纯化的Fiber2蛋白作为包被抗原,通过一系列条件的优化,建立了一种检测FAdV-4抗体的间接ELISA方法。结果:该方法可以特异地检测抗FAdV-4抗体,与新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、传染性支气管炎病毒、减蛋综合征病毒、H5和H9亚型禽流感病毒等常见禽病毒的抗血清均无交叉反应,表明所建立ELISA具有较好的特异性;FAdV-4阳性血清经1?3 200稀释后检测结果仍为阳性,表明所建立ELISA方法具有较高的敏感性;所建立ELISA的批内和批间重复试验的变异系数分别为1.5%~5.2%和1.1%~5.6%,表明其重复性良好。应用建立的ELISA方法对河南省及周边部分地区养禽场内FAdV-4的感染情况进行了血清流行病学调查,结果显示被检地区养禽场均存在不同程度的FAdV-4型抗体阳性,平均阳性率为59.53%。由此表明本研究所建立的ELISA方法可以用于FAdV-4感染的监测和流行病学调查。 展开更多
关键词 禽腺病毒4型 fiber2蛋白 间接ELISA 流行病学调查
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新型鸭腺病毒4型Fiber2蛋白的表达 被引量:3
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作者 吕涵 黄允真 +2 位作者 张春红 孙敏华 瞿孝云 《养禽与禽病防治》 2023年第5期7-11,共5页
Fiber2是鸭腺病毒4型(DAdV-4)的主要结构蛋白和免疫原性蛋白。本研究以DAdV-4毒株DNA为模板进行PCR扩增Fiber2基因片段,转化DH5a,通过EcoRI和HindII酶切后与pET28α载体通过T4DNA连接酶进行连接,构建重组表达载体,经序列测序鉴定后转化B... Fiber2是鸭腺病毒4型(DAdV-4)的主要结构蛋白和免疫原性蛋白。本研究以DAdV-4毒株DNA为模板进行PCR扩增Fiber2基因片段,转化DH5a,通过EcoRI和HindII酶切后与pET28α载体通过T4DNA连接酶进行连接,构建重组表达载体,经序列测序鉴定后转化BL21(DE3)构建重组表达菌,利用IPTG诱导表达Fiber2重组蛋白,经用SDS-PAGE电泳检测,结果显示,Fiber2重组蛋白能在大肠杆菌以包涵体形式表达。上述研究为鸭腺病毒4型的防控提供物质基础。 展开更多
关键词 鸭腺病毒4型 fiber2蛋白 原核表达
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Differential plasticity of excitatory and inhibitory reticulospinal fibers after spinal cord injury:Implication for recovery
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作者 Rozaria Jeleva Carmen Denecke Muhr +1 位作者 Alina P.Liebisch Florence M.Bareyre 《Neural Regeneration Research》 2026年第5期2011-2020,共10页
The remodeling of axonal connections following injury is an important feature driving functional recovery.The reticulospinal tract is an interesting descending motor tract that contains both excitatory and inhibitory ... The remodeling of axonal connections following injury is an important feature driving functional recovery.The reticulospinal tract is an interesting descending motor tract that contains both excitatory and inhibitory fibers.While the reticulospinal tract has been shown to be particularly prone to axonal growth and plasticity following injuries of the spinal cord,the differential capacities of excitatory and inhibitory fibers for plasticity remain unclear.As adaptive axonal plasticity involves a sophisticated interplay between excitatory and inhibitory input,we investigated in this study the plastic potential of glutamatergic(vGlut2)and GABAergic(vGat)fibers originating from the gigantocellular nucleus and the lateral paragigantocellular nucleus,two nuclei important for locomotor function.Using a combination of viral tracing,chemogenetic silencing,and AI-based kinematic analysis,we investigated plasticity and its impact on functional recovery within the first 3 weeks following injury,a period prone to neuronal remodeling.We demonstrate that,in this time frame,while vGlut2-positive fibers within the gigantocellular and lateral paragigantocellular nuclei rewire significantly following cervical spinal cord injury,vGat-positive fibers are rather unresponsive to injury.We also show that the acute silencing of excitatory axonal fibers which rewire in response to lesions of the spinal cord triggers a worsening of the functional recovery.Using kinematic analysis,we also pinpoint the locomotion features associated with the gigantocellular nucleus or lateral paragigantocellular nucleus during functional recovery.Overall,our study increases the understanding of the role of the gigantocellular and lateral paragigantocellular nuclei during functional recovery following spinal cord injury. 展开更多
关键词 GABAergic(vGat)fibers gait features glutamatergic(vGlut2)fibers PLASTICITY recovery of function reticulospinal tract spinal cord injury
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含有FAdV-4 Fiber 2 B细胞表位的IBV S1融合蛋白的表达及免疫原性
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作者 高亚茹 王泱 +8 位作者 张瀚文 刘琳 曹晓阳 刘静瑞 李冰洁 常晶晶 宋亚鹏 高文明 李新生 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第8期1616-1623,共8页
为验证禽腺病毒4(FAdV-4)WZ株Fiber 2 B细胞表位Pep1和Pep4可作为多价表位疫苗的候选表位,将表位与鸡传染性支气管炎病毒M41株S1蛋白基因以不同模式进行串联,构建重组融合质粒,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。经Western blot和ELISA试验... 为验证禽腺病毒4(FAdV-4)WZ株Fiber 2 B细胞表位Pep1和Pep4可作为多价表位疫苗的候选表位,将表位与鸡传染性支气管炎病毒M41株S1蛋白基因以不同模式进行串联,构建重组融合质粒,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。经Western blot和ELISA试验证实,表达获得的4个融合蛋白均能特异性地与抗M41全病毒血清和WZ株抗Fiber 2-knob蛋白血清发生反应。纯化后免疫BALB/c小鼠,在小鼠血清中可检测出抗肽表位的特异性抗体,其中Pep4表位比Pep1表位能诱导更强的免疫反应。当Pep1分别连接在融合蛋白的氨基端和羧基端时,均能使免疫动物产生相同水平的抗Pep1抗体,而将Pep4连接在融合蛋白羧基端时,免疫动物产生的抗Pep4特异性抗体水平更高。结果表明,具有反应原性的WZ株Fiber 2的B细胞表位Pep1和Pep4在与蛋白偶联时形成的融合蛋白可以使Pep1和Pep4获得免疫原性,且不影响载体蛋白的抗原性,这为FAdV-4多价表位疫苗的设计和研发提供了技术支撑和参考依据。 展开更多
关键词 B细胞表位 FAdV-4 Fiber 2 传染性支气管炎 融合蛋白
原文传递
新型鸡心包炎—包涵体肝炎病毒的分离及鉴定 被引量:14
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作者 汪凯 蔡骁垚 +5 位作者 叶建强 刘红梅 张泉 刘芹防 李泽君 陈鸿军 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2016年第4期1-6,共6页
2015年在江苏省某养鸡场疑似心包炎-包涵体肝炎病死鸡肝脏中分离获得1株病毒,经SPF鸡胚4代纯化,并针对其hexon基因设计特异性引物进行PCR扩增,测序结果表明该分离株属于I群禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)血清4型,命名为JS7株。ORF29和f... 2015年在江苏省某养鸡场疑似心包炎-包涵体肝炎病死鸡肝脏中分离获得1株病毒,经SPF鸡胚4代纯化,并针对其hexon基因设计特异性引物进行PCR扩增,测序结果表明该分离株属于I群禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)血清4型,命名为JS7株。ORF29和fiber2基因测序分析表明,该毒株为最近在国内流行的新型突变株。JS7株以1000 ELD_(50)病毒量肌肉接种21日龄雏鸡,5 d内呈现80%死亡率,剖检可见典型的心包炎、肝炎症状,在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、气管、法氏囊、脑、小肠、盲肠、腺胃、胸腺、胰脏中均能检测到病毒分布;H&E染色结果显示,在组织切片中,肝脏呈现典型的嗜碱性核染色,其他组织脏器也呈现不同程度的病理变化。可见JS7株在雏鸡中具有较强的致病性及广泛的组织嗜性。 展开更多
关键词 包涵体肝炎 禽腺病毒 fiber2 分离 鉴定
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鸭腺病毒3型LAMP快速检测方法的建立 被引量:6
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作者 陈翠腾 黄瑜 +6 位作者 陈珍 朱春华 傅光华 程龙飞 刘荣昌 刘斌琼 万春和 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期289-294,共6页
鸭腺病毒3型(DAdV-3)是我国鸭群中出现的一种新型腺病毒,属于腺病毒科禽腺病毒属成员。为建立DAdV-3的快速检测方法,本研究根据DAdV-3的fiber2基因,设计特异性的LAMP检测引物,构建重组质粒标准品pT-DAdV-3,经各反应条件优化,建立了DAdV-... 鸭腺病毒3型(DAdV-3)是我国鸭群中出现的一种新型腺病毒,属于腺病毒科禽腺病毒属成员。为建立DAdV-3的快速检测方法,本研究根据DAdV-3的fiber2基因,设计特异性的LAMP检测引物,构建重组质粒标准品pT-DAdV-3,经各反应条件优化,建立了DAdV-3 LAMP快速检测方法。结果显示,建立的LAMP检测方法最佳反应条件为64℃40 min;该方法仅对DAdV-3呈阳性反应,与番鸭细小病毒、鸭圆环病毒、鸭源减蛋综合征病毒等其他常见鸭源传染病病原均无交叉反应,特异性强。该方法对重组质粒标准品的最低检测限为50拷贝/μL;利用本研究建立的LAMP方法、前期建立的PCR方法和基于MGB探针的荧光定量PCR方法对临床收集的66份鸭组织病料样品进行检测,结果显示阳性率分别为13.63%(9/66)、13.63%(9/66)和15.15%(10/66);且LAMP检测的阳性样品经PCR方法检测和荧光定量PCR方法检测均为阳性,符合率为100%。本研究首次建立了检测DAdV-3的LAMP方法,该方法快速敏感、特异性强,为该病的流行病学调查提供技术支撑。 展开更多
关键词 鸭腺病毒3型 fiber2基因 LAMP 检测
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“Zero‑Strain” NiNb_(2)O_(6) Fibers for All‑Climate Lithium Storage
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作者 Yan Zhao Qiang Yuan +5 位作者 Liting Yang Guisheng Liang Yifeng Cheng Limin Wu Chunfu Lin Renchao Che 《Nano-Micro Letters》 SCIE EI CAS 2025年第1期348-360,共13页
Niobates are promising all-climate Li^(+)-storage anode material due to their fast charge transport,large specific capacities,and resistance to electrolyte reaction.However,their moderate unit-cellvolume expansion(gen... Niobates are promising all-climate Li^(+)-storage anode material due to their fast charge transport,large specific capacities,and resistance to electrolyte reaction.However,their moderate unit-cellvolume expansion(generally 5%–10%)during Li^(+)storage causes unsatisfactory long-term cyclability.Here,“zero-strain”NiNb_(2)O_(6) fibers are explored as a new anode material with comprehensively good electrochemical properties.During Li^(+)storage,the expansion of electrochemical inactive NiO_(6) octahedra almost fully offsets the shrinkage of active NbO_(6) octahedra through reversible O movement.Such superior volume-accommodation capability of the NiO_(6) layers guarantees the“zero-strain”behavior of NiNb_(2)O_(6) in a broad temperature range(0.53%//0.51%//0.74%at 25//−10//60℃),leading to the excellent cyclability of the NiNb_(2)O_(6) fibers(92.8%//99.2%//91.1%capacity retention after 1000//2000//1000 cycles at 10C and 25//−10//60℃).This NiNb_(2)O_(6) material further exhibits a large reversible capacity(300//184//318 mAh g−1 at 0.1C and 25//−10//60℃)and outstanding rate performance(10 to 0.5C capacity percentage of 64.3%//50.0%//65.4%at 25//−10//60℃).Therefore,the NiNb_(2)O_(6) fibers are especially suitable for large-capacity,fast-charging,long-life,and all-climate lithium-ion batteries. 展开更多
关键词 NiNb_(2)O_(6)porous fiber “Zero-strain”mechanism Electrochemical property Harsh-temperature operation Operando characterization
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