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基于新型昆虫杆状病毒flashBACTM表达系统表达鸭腺病毒3型Fiber-1蛋白
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作者 肖雅清 孟凯 +4 位作者 董雯雯 袁小远 李桂明 刘明超 翟向和 《山东农业科学》 北大核心 2025年第7期139-144,共6页
鸭腺病毒3型(DAdV-3)近些年来被多地报道,给我国的养禽业带来较大损失。纤突蛋白(Fiber)在介导鸭腺病毒感染和诱导体液免疫中发挥着重要作用。本研究基于昆虫杆状病毒flashBACTM表达系统对DAdV-3的Fiber-1蛋白进行重组表达,获得目的蛋... 鸭腺病毒3型(DAdV-3)近些年来被多地报道,给我国的养禽业带来较大损失。纤突蛋白(Fiber)在介导鸭腺病毒感染和诱导体液免疫中发挥着重要作用。本研究基于昆虫杆状病毒flashBACTM表达系统对DAdV-3的Fiber-1蛋白进行重组表达,获得目的蛋白。因该系统将LacZ基因整合到苜蓿银纹蛾核型多角体病毒(AcMNPV),重组后开启LacZ表达,其借助蓝白斑实现对阳性病毒的筛选,免除空斑筛选过程,大大节省实验时间;通过Western blot验证Fiber-1蛋白在昆虫Sf9细胞中成功表达。本研究结果可为深入探究Fiber-1蛋白在DAdV-3感染机制中的作用以及相关的生物制品制备奠定基础。 展开更多
关键词 昆虫杆状病毒表达系统 鸭腺病毒3型 蛋白表达 fiber-1
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禽腺病毒血清4型fiber-2蛋白的制备与鉴定
2
作者 姚自萌 王启佩 +5 位作者 周晓琳 王称心 宋鹏 丁晨梦 杨霞 王彦辉 《上海畜牧兽医通讯》 2025年第5期1-6,共6页
为利用原核表达系统表达禽腺病毒血清4型fiber-2蛋白,并评估其免疫原性。从禽腺病毒血清4型病毒中提取fiber-2基因,经密码子优化后构建重组表达载体pET-30a-fiber-2;将所获得的质粒转入原核表达系统,经诱导表达获得fiber-2蛋白;利用获得... 为利用原核表达系统表达禽腺病毒血清4型fiber-2蛋白,并评估其免疫原性。从禽腺病毒血清4型病毒中提取fiber-2基因,经密码子优化后构建重组表达载体pET-30a-fiber-2;将所获得的质粒转入原核表达系统,经诱导表达获得fiber-2蛋白;利用获得的fiber-2蛋白制备疫苗,并以7日龄无特定病原(specific pathogen free,SPF)鸡为免疫对象,采用琼脂凝胶免疫扩散试验(agar gel precipitation,AGP)测定抗体效价,并开展攻毒保护试验。结果显示:重组表达载体pET-30a-fiber-2构建成功,fiber-2蛋白为部分可溶性表达;免疫后,SPF鸡体内产生的抗体效价为1∶2~1∶16,且保护效率达到100%。结果表明,该研究成功利用原核表达系统高效表达禽腺病毒血清4型fiber-2蛋白,且该蛋白具有良好的免疫原性,为禽腺病毒相关亚单位疫苗的研发提供新的思路。 展开更多
关键词 禽腺病毒血清4型 原核表达 fiber-2蛋白 亚单位疫苗 免疫原性
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血清4型禽腺病毒Fiber-1蛋白截短表达及多克隆抗体制备 被引量:2
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作者 罗昕雨 赵磊 +5 位作者 陈玉晴 缪欣怡 石家鑫 顾有方 李文超 刘欣超 《安徽科技学院学报》 2024年第2期25-30,共6页
目的:制备血清4型禽腺病毒(FAdV-4)Fiber-1基因截短蛋白多克隆抗体,为FAdV-4病的诊断、检测及致病机制研究奠定基础。方法:对FAdV-4的CH/AHMC/2015分离株Fiber-1基因序列(MG148335.1:30459-31754)进行信号肽、疏水性和抗原决定簇分析,... 目的:制备血清4型禽腺病毒(FAdV-4)Fiber-1基因截短蛋白多克隆抗体,为FAdV-4病的诊断、检测及致病机制研究奠定基础。方法:对FAdV-4的CH/AHMC/2015分离株Fiber-1基因序列(MG148335.1:30459-31754)进行信号肽、疏水性和抗原决定簇分析,截取具有较高免疫原性的片段,设计合成特异性引物,以CH/AHMC/2015分离株基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得截短Fiber-1(sFiber-1)基因片段,将其连接至原核表达载体pET-32a,验证后转化至大肠杆菌BL21感受态中,诱导表达sFiber-1蛋白。纯化后的蛋白与佐剂乳化后免疫SD大鼠,制备多克隆抗体,并测定多克隆抗体效价。用Western-blot检测抗体免疫原性。结果:成功构建了sFiber-1的原核表达载体,获得FAdV-4的sFiber-1重组蛋白,经SDS-PAGE鉴定,重组sFiber-1蛋白大小约为52 kDa,主要以包涵体形式表达;间接ELISA法测得sFiber-1多克隆抗体效价为1∶2^(13);Western blot结果显示制备的多克隆抗体能特异性识别出重组sFiber-1蛋白。结论:本研究成功表达了FAdV-4的重组sFiber-1蛋白,制备了具有较高免疫活性的sFiber-1多克隆抗体,可为FAdV-4的检测及诊断奠定基础。 展开更多
关键词 血清4型禽腺病毒 fiber-1基因 重组蛋白 多克隆抗体
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基于血清4型禽腺病毒Fiber-2间接ELISA方法的建立 被引量:8
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作者 梅楠 孙海伟 +3 位作者 李允章 汪凯 王桂军 陈鸿军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期807-811,共5页
为建立一种快速监测鸡群中血清4型禽腺病毒(FAdV-4)的方法,本研究通过PCR扩增FAd V-4 AQ强毒株的fiber-2基因截短体(112 bp^1 440 bp),克隆至p ET-32a(+)载体中进行原核表达,以重组表达的Fiber-2蛋白作为包被抗原,经优化反应条件,建立... 为建立一种快速监测鸡群中血清4型禽腺病毒(FAdV-4)的方法,本研究通过PCR扩增FAd V-4 AQ强毒株的fiber-2基因截短体(112 bp^1 440 bp),克隆至p ET-32a(+)载体中进行原核表达,以重组表达的Fiber-2蛋白作为包被抗原,经优化反应条件,建立了快速检测FAd V-4的间接ELISA方法,该方法特异性试验结果显示,除FAd V-4外,与其它病原无交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法检测血清最低稀释度为1∶12 800,具有较高的敏感性;重复性试验结果显示,该方法批内、批间变异系数均小于10%。该方法对FAd V-4临床感染的阳性血清检出率为100%,与琼脂扩散试验结果完全吻合。本研究建立的以Fiber-2重组蛋白为包被抗原的间接ELISA方法能够用于FAd V-4灭活疫苗免疫后的血清学调查。 展开更多
关键词 血清4型禽腺病毒 FAdV-4 fiber-2 原核表达 间接ELISA
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Characterization and Modeling of Mechanical Properties of Additively Manufactured Coconut Fiber-Reinforced Polypropylene Composites
5
作者 George Mosi Bernard W. Ikua +1 位作者 Samuel K. Kabini James W. Mwangi 《Advances in Materials Physics and Chemistry》 CAS 2024年第6期95-112,共18页
In the face of the increased global campaign to minimize the emission of greenhouse gases and the need for sustainability in manufacturing, there is a great deal of research focusing on environmentally benign and rene... In the face of the increased global campaign to minimize the emission of greenhouse gases and the need for sustainability in manufacturing, there is a great deal of research focusing on environmentally benign and renewable materials as a substitute for synthetic and petroleum-based products. Natural fiber-reinforced polymeric composites have recently been proposed as a viable alternative to synthetic materials. The current work investigates the suitability of coconut fiber-reinforced polypropylene as a structural material. The coconut fiber-reinforced polypropylene composites were developed. Samples of coconut fiber/polypropylene (PP) composites were prepared using Fused Filament Fabrication (FFF). Tests were then conducted on the mechanical properties of the composites for different proportions of coconut fibers. The results obtained indicate that the composites loaded with 2 wt% exhibited the highest tensile and flexural strength, while the ones loaded with 3 wt% had the highest compression strength. The ultimate tensile and flexural strength at 2 wt% were determined to be 34.13 MPa and 70.47 MPa respectively. The compression strength at 3 wt% was found to be 37.88 MPa. Compared to pure polypropylene, the addition of coconut fibers increased the tensile, flexural, and compression strength of the composite. In the study, an artificial neural network model was proposed to predict the mechanical properties of polymeric composites based on the proportion of fibers. The model was found to predict data with high accuracy. 展开更多
关键词 Additive Manufacturing Artificial Neural Network Mechanical Properties Natural Fibers POLYPROPYLENE
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血清4型禽腺病毒Fiber-2蛋白截短表达及单克隆抗体制备 被引量:8
6
作者 韦悠 谢芝勋 +6 位作者 邓显文 李小凤 谢志勤 范晴 张艳芳 黄娇玲 王盛 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期2341-2349,共9页
【目的】获得截短表达的血清4型禽腺病毒(FAdV-4)Fiber-2重组蛋白及其单克隆抗体,为建立快速灵敏的病毒检测方法提供基础材料。【方法】对Fiber-2基因序列进行密码子优化,截取Fiber-2蛋白抗原性集中片段,PCR扩增其基因序列,连接至pET-32... 【目的】获得截短表达的血清4型禽腺病毒(FAdV-4)Fiber-2重组蛋白及其单克隆抗体,为建立快速灵敏的病毒检测方法提供基础材料。【方法】对Fiber-2基因序列进行密码子优化,截取Fiber-2蛋白抗原性集中片段,PCR扩增其基因序列,连接至pET-32a(+)构建原核表达载体。将表达的重组蛋白进行纯化,并通过Western blotting验证其在大肠杆菌中的表达情况。将重组蛋白免疫BALB/c小鼠后取脾细胞与SP2/0细胞融合,利用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法筛选阳性细胞株,再利用秋水仙素裂解法、间接ELISA法和间接免疫荧光法(IFA)对其进行鉴定。【结果】成功构建Fiber-2基因截短片段的原核表达系统,获得大小约为67 kD的Fiber-2截短蛋白,以包涵体的形式出现,经纯化后可获得单一的特异性条带,经Western blotting鉴定证明其可与FAdV-4阳性血清结合从而产生一条特异性条带。经过4次亚克隆后筛选到5株能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株(2C2、4F6、5A5、6G10和10B5),其抗体分泌稳定性、特异性好,诱生的细胞上清液抗体效价为1:1600~1:6400,腹水抗体效价为1:320000~1:1280000,秋水仙素裂解检测染色体数目为94~110条。2C2、4F6和10B5杂交瘤细胞分泌的抗体重链为IgG2b亚型,轻链为Kappa链;5A5和6G10杂交瘤细胞分泌的抗体重链为IgG1亚型,轻链为Kappa链。5株杂交瘤细胞株与感染FAdV-4的鸡肝癌上皮细胞系(LMH)进行IFA检测,结果均为阳性。【结论】制备的Fiber-2截短重组蛋白及单克隆抗体具有良好的反应原性和特异性,可用于FAdV-4病毒检测试剂盒研发。 展开更多
关键词 血清4型禽腺病毒(FAdV-4) fiber-2 基因克隆 重组蛋白 单克隆抗体 Western blotting
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禽腺病毒血清4型Fiber-2蛋白在毕赤酵母中的优化表达及其免疫原性分析 被引量:6
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作者 袁枫 宋慧琦 +8 位作者 侯磊 韦莉 朱珊珊 全荣 王菁 王丹 姜海军 刘浩 刘爵 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期132-142,共11页
为研制禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)亚单位疫苗,本研究对FAdV-4的Fiber-2蛋白在毕赤酵母中的发酵工艺进行了优化。首先根据酵母密码子偏好性优化Fiber-2基因,并且构建了重组真核表达载体pPIC9K-Fiber-2。将该质... 为研制禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)亚单位疫苗,本研究对FAdV-4的Fiber-2蛋白在毕赤酵母中的发酵工艺进行了优化。首先根据酵母密码子偏好性优化Fiber-2基因,并且构建了重组真核表达载体pPIC9K-Fiber-2。将该质粒转化至毕赤酵母GS115菌株,经不同质量浓度G418筛选获得高拷贝重组菌。随后在摇瓶中进行诱导发酵时温度、时间和甲醇浓度的优化。用优化后的条件进行发酵表达并将上清液通过镍柱纯化得到了重组的Fiber-2蛋白。最后将蛋白与ISA-201-VG油佐剂混合并免疫21日龄SPF鸡进行免疫保护性试验。结果表明:在毕赤酵母中成功且高效的分泌表达了Fiber-2蛋白,分子量约为60ku,在摇瓶发酵中诱导的最佳甲醇浓度、时间和温度分别为1.0%、72h和30℃。优化后发酵液上清中的总蛋白量约为50mg/L,重组Fiber-2蛋白达到8.7mg/L。SDS-PAGE和Western blot结果表明采用镍柱对蛋白进行纯化可得到条带单一且具有良好免疫原性的重组Fiber-2蛋白。免疫保护性试验显示,由优化后的毕赤酵母表达Fiber-2蛋白制备的亚单位疫苗免疫雏鸡后,可以诱导较高的抗体水平并提供高达100%的超强FAdV-4毒株(GD616)的攻击保护。本研究为进一步采用毕赤酵母表达的重组Fiber-2蛋白制备FAdV-4亚单位疫苗的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 禽腺病毒血清4-型 fiber-2蛋白 毕赤酵母 亚单位疫苗
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Fiber-FISH在植物基因组研究中的应用
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作者 刘国庆 朱立煌 《生物工程进展》 CSCD 2001年第3期71-73,共3页
Fiber FISH是近几年发展起来的一项高分辨率和高灵敏度的荧光原位杂交技术 ,已被广泛应用于人类及动植物基因组的研究。本文对Fiber FISH在植物基因组研究中的特点及其在染色体物理图谱的构建 ,染色体结构与分子构成分析和在比较基因组... Fiber FISH是近几年发展起来的一项高分辨率和高灵敏度的荧光原位杂交技术 ,已被广泛应用于人类及动植物基因组的研究。本文对Fiber FISH在植物基因组研究中的特点及其在染色体物理图谱的构建 ,染色体结构与分子构成分析和在比较基因组中的应用等进行了探讨。 展开更多
关键词 fiber-FISH 植物 基因组 应用
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1群4型禽腺病毒的分离鉴定及Fiber-2蛋白的免疫效果分析 被引量:7
9
作者 程增青 范根成 +4 位作者 窦小龙 刘红祥 申茂欣 徐全刚 杨汉春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期2463-2471,共9页
旨在鉴定河南某蛋鸡场以心包积液、肝肿大出血为特征的病原,并对病原的免疫原性蛋白进行表达和效果分析。本研究采用病毒分离、血清学试验、PCR检测及测序分析、动物回归试验、大肠杆菌表达、蛋白纯化、攻毒保护等方法进行研究。结果显... 旨在鉴定河南某蛋鸡场以心包积液、肝肿大出血为特征的病原,并对病原的免疫原性蛋白进行表达和效果分析。本研究采用病毒分离、血清学试验、PCR检测及测序分析、动物回归试验、大肠杆菌表达、蛋白纯化、攻毒保护等方法进行研究。结果显示,所采集样品经卵黄囊途径接种7日龄SPF鸡胚,盲传2代后获得病毒;PCR可扩增出约900 bp的Hexon基因片段,经测序,其Hexon基因与血清C4型毒株的相似性为100%;血清中和试验结果表明分离的禽腺病毒为1群血清4型禽腺病毒,命名为HN-ZK株。该毒株可在鸡胚原代肝细胞上产生CPE,病毒含量可达10^(7.5)TCID50·0.1 mL^-1。动物回归试验表明,该分离毒株可使35日龄SPF鸡100%(10/10)表现出发病症状。以分离株的DNA为模板,利用大肠杆菌原核表达系统,获得相对分子质量约为33 ku的Fiber-2蛋白,离心浓缩、纯化后蛋白含量为300 mg·mL^-1。将表达的Fiber-2蛋白用不同的剂量免疫SPF鸡,结果表明20μg·只^-1的剂量能使鸡完全抵抗强毒株的攻击,说明Fiber-2蛋白具有较好的免疫原性。本研究可为禽心包积水-肝炎综合征的诊断和基因工程亚单位疫苗的研制提供数据参考。 展开更多
关键词 I群禽腺病毒 鉴定 fiber-2蛋白 亚单位疫苗
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Ⅳ型禽腺病毒Fiber-2(knob)蛋白的表达及免疫效力评价 被引量:2
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作者 程慧敏 刘小晓 +9 位作者 林健 刘立新 赵际成 段会娟 王小蕾 范维 刘月焕 钱泓 张强 杨志远 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期218-222,共5页
表达Ⅰ群Ⅳ型禽腺病毒(FAdV-4)Fiber-2(knob)蛋白,以制备Fiber-2(knob)蛋白亚单位疫苗并对其免疫效力进行评价。将FAdV-4 Fiber-2的knob基因克隆至原核表达载体pET28a,构建重组质粒pET28a-Fiber-2(knob)。将重组质粒转化至大肠杆菌BL-21... 表达Ⅰ群Ⅳ型禽腺病毒(FAdV-4)Fiber-2(knob)蛋白,以制备Fiber-2(knob)蛋白亚单位疫苗并对其免疫效力进行评价。将FAdV-4 Fiber-2的knob基因克隆至原核表达载体pET28a,构建重组质粒pET28a-Fiber-2(knob)。将重组质粒转化至大肠杆菌BL-21(DE3),以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达,采用镍离子亲和层析柱纯化,SDS-PAGE检测纯化后的目的蛋白。将蛋白抗原与佐剂1∶3乳化,分组免疫100,50,25,0 mg/0.5 L FAdV Fiber-2(knob)蛋白亚单位疫苗,攻毒剂量为10^(4.5) ELD_(50)/只,免疫后24 d攻毒,比较不同免疫剂量攻毒保护效果。又制备4批蛋白含量为24 mg/0.5 L FAdV Fiber-2(knob)蛋白亚单位疫苗,比较不同批次间免疫效力差异。结果显示,成功构建pET28a-Fiber-2(knob)重组质粒,纯化后的蛋白纯度达到90%,质量浓度为3269 mg/L。当攻毒剂量为10^(4.5) ELD_(50)时,FAdV Fiber-2(knob)蛋白亚单位疫苗攻毒保护率可达到100%(免疫蛋白抗原量为25~100μg/只),当攻毒剂量为5×10^(3.9) ELD_(50)时,最小免疫蛋白抗原含量为14.4μg/只时也可产生100%保护。不同批次间FAdV Fiber-2(knob)蛋白亚单位疫苗均能刺激机体产生抗体,有效保护SPF鸡抵御FAdV强毒攻击,具有良好的免疫保护效力。 展开更多
关键词 Ⅳ型禽腺病毒 fiber-2蛋白 亚单位疫苗 免疫效力
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基于抗原蛋白Fiber-2及细胞因子佐剂的Ⅰ群4型禽腺病毒亚单位疫苗的开发 被引量:6
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作者 匡露寒 季国荣 +2 位作者 杨灿灿 张元兴 刘琴 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期452-458,共7页
为了开发一种抗I群4型禽腺病毒(FAd V-4)的亚单位疫苗,选择I群禽腺病毒血清4型流行毒株衣壳蛋白Fiber-2作为保护性抗原蛋白。利用昆虫细胞-杆状病毒系统生产Fiber-2蛋白,通过Westernblot检测重组蛋白的表达情况,利用双向琼脂扩散法检测... 为了开发一种抗I群4型禽腺病毒(FAd V-4)的亚单位疫苗,选择I群禽腺病毒血清4型流行毒株衣壳蛋白Fiber-2作为保护性抗原蛋白。利用昆虫细胞-杆状病毒系统生产Fiber-2蛋白,通过Westernblot检测重组蛋白的表达情况,利用双向琼脂扩散法检测重组Fiber-2的免疫原性。为了增强亚单位疫苗的免疫保护效果,添加鸡源白细胞介素2(chIL-2)和鸡源γ-干扰素(ch IFN-γ)作为免疫佐剂,与重组Fiber-2单独或混合使用,制备多种形式的亚单位疫苗,并进行动物攻毒保护试验。重组蛋白的Western-blot鉴定结果显示,63 ku处出现Fiber-2蛋白目的条带;双向琼脂扩散试验结果显示,重组蛋白效价达到1∶128,表现出良好的反应原性。动物攻毒保护试验结果显示,单独使用Fiber-2免疫SPF鸡,在50 μg/只的剂量下,可为SPF鸡提供100%的保护效果,以chIL-2和chIFN-γ为免疫佐剂,与重组Fiber-2联合免疫SPF鸡,可显著增强Fiber-2在低剂量(10 μg/只)下的免疫保护效果,上述结果表明重组Fiber-2联合chIL-2和chIFN-γ细胞因子佐剂所制备的亚单位疫苗在抗I群4型禽腺病毒感染领域具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 I群4型禽腺病毒 fiber-2 chIL-2 chIFN-γ 亚单位疫苗
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禽腺病毒血清4型fiber-2和penton蛋白亚单位疫苗初步研究及免疫效果评价 被引量:4
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作者 刘世佳 尚宵敏 +5 位作者 王浩 周睿 李博硕 孙晰瑶 韩静静 杜恩岐 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1162-1166,1186,共6页
选取禽腺病毒血清4型(fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)JLJ13株的fiber-2和penton蛋白作为保护性抗原,利用SWISS-MODEL网站对fiber-2蛋白空间结构进行模拟,截取其主要功能区fiber-2-Shaft 2替代fiber-2,进行密码子优化后,将fiber-2-S... 选取禽腺病毒血清4型(fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)JLJ13株的fiber-2和penton蛋白作为保护性抗原,利用SWISS-MODEL网站对fiber-2蛋白空间结构进行模拟,截取其主要功能区fiber-2-Shaft 2替代fiber-2,进行密码子优化后,将fiber-2-Shaft 2和penton蛋白基因序列克隆到pET28a(+)载体上并送至北京天一辉远生物科技有限公司进行基因合成,将合成的质粒分别命名为pET-28a-msyb-fiber-2-Shaft 2和pET-28a-msyb-penton。通过原核表达系统进行蛋白表达并使用镍柱纯化。经BCA定量后,用PBS分别将fiber-2-Shaft 2和penton蛋白质量浓度稀释至1000,500,250 mg/L,再将相同质量浓度的fiber-2-Shaft 2和penton蛋白按1∶1体积比混合后作为抗原,配伍ISCOMs佐剂,0.2 mL/只免疫30日龄SPF鸡,即高剂量组免疫fiber-2-Shaft 2和penton蛋白各100μg、中剂量组各50μg、低剂量组各25μg。一免后14 d进行二次免疫,采集二免后7,14,21 d血清检测特异性抗体和中和抗体,并在二免后21 d攻毒。结果显示,成功表达出fiber-2-Shaft 2和penton蛋白,大小分别为69,93 kDa,镍柱纯化后可获得高纯度的蛋白;二免后14 d高中低量组的中和效价依次为1280,640,640,攻毒后阴性对照组表现出明显的临床症状,2~3 d后死亡,疫苗组均未出现任何临床症状。结果表明,利用禽腺病毒血清4型JLJ13株fiber-2-Shaft 2和penton蛋白混合配伍ISCOMs佐剂制备的亚单位疫苗免疫保护效果明显。 展开更多
关键词 禽腺病毒血清4型 fiber-2 PENTON 亚单位疫苗 免疫效果评价
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鸭腺病毒3型Fiber-2蛋白单克隆抗体的制备及初步应用 被引量:5
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作者 魏常青 史馨瑾 +4 位作者 吕璐 刘英楠 谢振华 陈宗艳 陈鸿军 《中国家禽》 北大核心 2023年第2期46-51,共6页
为进一步研究鸭腺病毒3型(DAdV-3)Fiber-2蛋白,研究通过PCR扩增fiber-2基因,构建p ET32a-DAdV3-fiber2原核质粒,表达并纯化蛋白,以纯化的蛋白为免疫原,免疫6周龄雌性BALB/c小鼠制备抗Fiber-2单克隆抗体杂交瘤细胞,采用间接免疫荧光试验... 为进一步研究鸭腺病毒3型(DAdV-3)Fiber-2蛋白,研究通过PCR扩增fiber-2基因,构建p ET32a-DAdV3-fiber2原核质粒,表达并纯化蛋白,以纯化的蛋白为免疫原,免疫6周龄雌性BALB/c小鼠制备抗Fiber-2单克隆抗体杂交瘤细胞,采用间接免疫荧光试验和免疫印迹试验进行鉴定,并用于DAdV-3 Fiber-2杆状病毒表达产物的鉴定。结果显示:原核表达获得1.77 mg/mL Fiber-2蛋白,筛选获得2株阳性单克隆细胞株2E10E4和4F7F10,两株单克隆抗体均为IgG 1型,轻链类型为κ;DAdV-3感染的LMH细胞中存在特异性荧光,免疫印迹试验确认在约59 ku处出现特异性条带;采用制备的单克隆抗体确认了表达Fiber-2蛋白的重组杆状病毒。研究获得了针对DAdV-3 Fiber-2蛋白的单克隆抗体,为深入探究Fiber-2在DAdV-3感染机制中的作用以及为建立DAdV-3抗原免疫测定技术奠定了基础。 展开更多
关键词 DAdV-3 fiber-2 单克隆抗体
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血清1型Ⅰ群禽腺病毒Fiber-2蛋白的表达及其中和作用研究 被引量:2
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作者 高永娟 栾庆东 +6 位作者 曲雪婷 原昆鹏 王潘龙 赵梓靓 卢艳敬 尹燕博 王建琳 《中国家禽》 北大核心 2022年第8期35-41,共7页
为研究血清1型Ⅰ群禽腺病毒(FAdV-1)的Fiber-2蛋白对FAdV-1在细胞水平上的中和作用,研究根据FAdV-1亚型Fiber-2基因序列设计引物,进行Fiber-2全基因序列PCR扩增并构建重组质粒,转入BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,表达产物纯化后免... 为研究血清1型Ⅰ群禽腺病毒(FAdV-1)的Fiber-2蛋白对FAdV-1在细胞水平上的中和作用,研究根据FAdV-1亚型Fiber-2基因序列设计引物,进行Fiber-2全基因序列PCR扩增并构建重组质粒,转入BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,表达产物纯化后免疫SPF鸡制备抗血清,通过鸡LMH细胞研究Fiber-2蛋白抗血清对FAdV-1感染的中和作用。结果显示,FAdV-1 Fiber-2基因扩增产物大小为1 233 bp,构建了pCold-FAdV-1-Fiber-2重组质粒,表达的FAdV-1 Fiber-2蛋白分子量大小为105 ku;FAdV-1 Fiber-2蛋白的抗血清孵育LMH细胞后,与阳性对照组相同第4天细胞出现病变,而阴性对照组细胞均无病变。结果表明,FAdV-1 Fiber-2蛋白抗血清在体外试验中不能中和本血清型病毒的感染,FAdV-1 Fiber-2蛋白作为亚单位疫苗的研究存在风险。 展开更多
关键词 血清1型Ⅰ群禽腺病毒 fiber-2蛋白 LMH细胞 中和作用
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禽腺病毒4型Fiber-2蛋白原核表达及间接ELISA的构建 被引量:1
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作者 潘静 孟凯 秦晓冰 《山东农业科学》 北大核心 2021年第11期100-105,共6页
禽腺病毒(FAdV)是世界范围内流行的禽类常见传染病病原,2015年暴发的由新型血清4型禽腺病毒(FAdV-4)引起的急性传染病,给养殖户造成巨大的经济损失。为做到早期诊断和检测,并防控、净化该病毒病,本试验利用Fiber-2蛋白建立了检测FAdV-4... 禽腺病毒(FAdV)是世界范围内流行的禽类常见传染病病原,2015年暴发的由新型血清4型禽腺病毒(FAdV-4)引起的急性传染病,给养殖户造成巨大的经济损失。为做到早期诊断和检测,并防控、净化该病毒病,本试验利用Fiber-2蛋白建立了检测FAdV-4的ELISA方法。根据禽腺病毒4型SDJN0105株Fiber-2基因的核苷酸序列,经序列优化后合成1 440 bp基因序列,连入pET-30a(+)载体构建pET-30a(+)-Fiber-2重组质粒,在BL21(DE3)感受态细胞中诱导表达Fiber-2蛋白,利用亲和层析柱纯化重组Fiber-2蛋白,经SDS-PAGE和Western-Blot鉴定后,以Fiber-2蛋白作为包被抗原,通过反应条件优化建立检测禽腺病毒4型抗体的间接ELISA方法。结果表明,获得了以上清形式表达的重组Fiber-2蛋白,Western-Blot鉴定表明重组Fiber-2蛋白具有良好的免疫学活性;重组Fiber-2蛋白的最佳包被浓度为4.0μg/mL,待检血清最佳稀释度为1∶400;该方法特异性好,仅与禽腺病毒4型阳性抗体发生反应,敏感度可达1∶6400;批内和批间重复性变异系数均小于5%;构建的间接ELISA试剂盒在4℃环境下放置12个月仍然有效。本研究建立的禽腺病毒4型抗体间接ELISA检测方法特异性强、敏感性高、重复性好、保质期长,可用于禽腺病毒4型的监测和流行病学调查。 展开更多
关键词 禽腺病毒4型 fiber-2蛋白 原核表达 间接ELISA
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血清4型禽腺病毒fiber-2基因在昆虫细胞中的表达及其免疫原性分析 被引量:7
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作者 梅梅 陆吉虎 +3 位作者 张雪花 唐应华 卢宇 侯继波 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期1251-1255,共5页
为研究I群血清4型禽腺病毒(FAdV-4)fiber-2蛋白的免疫原性,本研究利用杆状病毒表达系统构建了含fiber-2基因的重组杆状病毒穿梭载体,将其转染Sf9细胞后获得重组杆状病毒rBA-fiber-2,并采用悬浮放大工艺表达重组fiber-2蛋白。通过间接免... 为研究I群血清4型禽腺病毒(FAdV-4)fiber-2蛋白的免疫原性,本研究利用杆状病毒表达系统构建了含fiber-2基因的重组杆状病毒穿梭载体,将其转染Sf9细胞后获得重组杆状病毒rBA-fiber-2,并采用悬浮放大工艺表达重组fiber-2蛋白。通过间接免疫荧光试验(IFA)和western blot鉴定重组蛋白fiber-2的表达,并采用免疫琼扩试验(AGP)检测fiber-2蛋白效价。以fiber-2蛋白作为免疫原制备油乳剂疫苗免疫SPF鸡进行免疫效力试验,分别设fiber-2疫苗组、fiber-2疫苗配伍免疫增强剂CVCVA5组及生理盐水对照组。免疫后14 d、21 d和28 d采集SPF鸡外周血分离血清,利用AGP法检测其血清抗体水平。IFA结果显示fiber-2蛋白在昆虫细胞中获得表达;western blot结果显示该蛋白能够与FAdV-4阳性血清发生特异性免疫反应,蛋白分子量约62 ku;AGP结果显示fiber-2蛋白AGP效价达1:16。免疫后14 d两组实验组鸡均可检测到特异性琼扩抗体,免疫后28 d fiber-2疫苗组SPF鸡抗体AGP效价平均值可达1:24,配伍CVCVA5疫苗组SPF鸡抗体AGP效价平均值可达1:104。以上结果表明fiber-2蛋白具有一定的免疫原性,免疫后可诱导机体产生特异性抗体,本研究为进一步研制FAdV-4亚单位疫苗提供实验依据。 展开更多
关键词 血清4型禽腺病毒 纤突蛋白 表达 免疫原性
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基于血清4型禽腺病毒fiber-1蛋白间接ELISA检测方法的建立 被引量:6
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作者 武晓倩 谢芝勋 +7 位作者 罗思思 韦悠 邓显文 李小凤 万丽军 曾婷婷 谢丽基 任红玉 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期1131-1136,1183,共7页
为了获得血清4型禽腺病毒(fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)fiber-1重组表达蛋白,并建立快速鉴别检测方法,本试验将FAdV-4 fiber-1基因连入pET-32a表达载体,转化BL21(DE3)感受态细胞,将测序正确的重组蛋白经IPTG诱导表达、纯化和West... 为了获得血清4型禽腺病毒(fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)fiber-1重组表达蛋白,并建立快速鉴别检测方法,本试验将FAdV-4 fiber-1基因连入pET-32a表达载体,转化BL21(DE3)感受态细胞,将测序正确的重组蛋白经IPTG诱导表达、纯化和Western blot鉴定。以纯化的pET-32a-fiber-1重组蛋白作为ELISA包被抗原,优化反应条件,建立了检测FAdV-4抗体的fiber-1-ELISA方法。结果成功表达pET-32a-fiber-1蛋白,证实可与FAdV-4阳性血清特异性结合,具有良好的反应原性。特异性结果显示,除FAdV-4与FAdV-10外,与其他病原的抗体无交叉反应;阳性血清稀释1 600倍仍可检测到,批内和批间最大变异系数均小于10%。检测了176份临床样品,75份为阳性,101份为阴性。fiber-1-ELISA方法易于操作,特异性强,重复性好,为FAdV-4抗体监测提供了有效方法。 展开更多
关键词 血清4型禽腺病毒 fiber-1蛋白 原核表达 间接ELISA
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Ⅰ群禽腺病毒(4型)Fiber-2蛋白亚单位疫苗免疫效果研究 被引量:6
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作者 杜东颖 盛东北 +7 位作者 霍环艳 段佳蕾 王孟月 谭镜明 陈宇明 胡鹏辉 刘武杰 田克恭 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第6期77-82,共6页
为评价Ⅰ群禽腺病毒(4型)Fiber-2重组蛋白亚单位疫苗的免疫保护效果,本研究利用FAV-HN株Fiber-2基因构建pET-30a-Fiber-2重组质粒,转化至BL21感受态诱导表达Fiber-2重组蛋白;Fiber-2蛋白纯化后制备不同抗原含量的亚单位疫苗,免疫SPF鸡... 为评价Ⅰ群禽腺病毒(4型)Fiber-2重组蛋白亚单位疫苗的免疫保护效果,本研究利用FAV-HN株Fiber-2基因构建pET-30a-Fiber-2重组质粒,转化至BL21感受态诱导表达Fiber-2重组蛋白;Fiber-2蛋白纯化后制备不同抗原含量的亚单位疫苗,免疫SPF鸡进行免疫效力评价。结果表明,Fiber-2蛋白部分为可溶性表达,纯化后纯度约90%,AGP效价达1∶64。亚单位疫苗抗原含量AGP效价不低于1∶2时,SPF鸡免疫后第21 d AGP抗体10/10阳性,可抵抗Ⅰ群禽腺病毒(4型)强毒株的攻击,提供100%的免疫攻毒保护。 展开更多
关键词 禽腺病毒 fiber-2蛋白 亚单位疫苗 免疫攻毒保护
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Fiber-reinforced Mechanism and Mechanical Performance of Composite Fibers Reinforced Concrete 被引量:6
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作者 申俊敏 ZHANG Yancong 《Journal of Wuhan University of Technology(Materials Science)》 SCIE EI CAS 2020年第1期121-130,共10页
To understand the enhancing effect and fiber-reinforced mechanism of composite fibers reinforced cement concrete, the influences of composite fibers on micro-cracks and the distribution of composite fibers were evalua... To understand the enhancing effect and fiber-reinforced mechanism of composite fibers reinforced cement concrete, the influences of composite fibers on micro-cracks and the distribution of composite fibers were evaluated by optical electron micrometer(OEM) and scanning electron microscope(SEM). Three kinds of fiber, such as polyacrylonitrile-based carbon fiber, basalt fiber, and glass fiber, were used in the composite fibers reinforced cement concrete. The composite fibers could form a stable structure in concrete after the liquid-phase coupling treatment, gas-liquid double-effect treatment, and inert atmosphere drying. The mechanical properties of composite fibers reinforced concrete(CFRC) were studied by universal test machine(UTM). Moreover, the effect of composite fibers on concrete was analyzed based on the toughness index and residual strength index. The results demonstrated that the composite fibers could improve the mechanical properties of concrete, while the excessive amount of composite fibers had an adverse effect on the mechanical properties of concrete. The composite fibers could significantly improve the toughness index of CFRC, and the increment rate is more than 30%. The composite fibers could form a mesh structure, which could promote the stability of concrete and guarantee the excellent mechanical properties. 展开更多
关键词 CEMENT CONCRETE composite fibers mechanical performance fiber-reinforced mechanism
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Ⅰ群禽腺病毒(4型)Fiber-2蛋白亚单位疫苗与全病毒灭活疫苗的免疫效果比较 被引量:2
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作者 杜东颖 霍环艳 +5 位作者 田辉 王璐璐 王孟月 洪素梅 高晓静 田克恭 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第3期67-73,共7页
为了比较不同抗原含量的Ⅰ群禽腺病毒(4型)Fiber-2蛋白亚单位疫苗与全病毒灭活疫苗的免疫效力差异,本研究制备不同抗原含量的亚单位疫苗和全病毒灭活疫苗,采用超低免疫剂量20μL/只免疫SPF鸡,免疫21 d后攻毒,通过死亡率、临床症状、大... 为了比较不同抗原含量的Ⅰ群禽腺病毒(4型)Fiber-2蛋白亚单位疫苗与全病毒灭活疫苗的免疫效力差异,本研究制备不同抗原含量的亚单位疫苗和全病毒灭活疫苗,采用超低免疫剂量20μL/只免疫SPF鸡,免疫21 d后攻毒,通过死亡率、临床症状、大体剖检病变、免疫组化和泄殖腔拭子排毒等进行免疫效力比较。试验结果表明,亚单位疫苗抗原含量AGP效价不低于1∶8,全病毒灭活疫苗抗原含量为10^(7.0)TCID_(50)/0.1 mL时,可抵抗Ⅰ群禽腺病毒(4型)强毒株的攻击,提供100%的免疫攻毒保护,攻毒后3、5、7 d泄殖腔拭子均未见排毒,且免疫组化均为阴性。亚单位疫苗抗原含量AGP效价为1∶4,全病毒灭活疫苗抗原含量为106.5 TCID_(50)/0.1 mL时,在超低免疫剂量情况下,仍可提供至少80%的免疫攻毒保护,且攻毒后3、5、7 d泄殖腔拭子排毒率仅为2/10~3/10,免疫组化阳性率仅为1/10。但全病毒灭活疫苗抗原含量为106.0 TCID_(50)/0.1 mL时,免疫攻毒保护效果不理想。综合以上结果表明,Fiber-2蛋白具有良好的免疫原性,抗原含量AGP效价不低于1∶4,与全病毒灭活疫苗抗原含量为106.5 TCID_(50)/0.1 mL免疫效力相当,可用于疫苗研制开发。 展开更多
关键词 禽腺病毒 fiber-2蛋白 亚单位疫苗 全病毒灭活疫苗 免疫攻毒保护
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