期刊文献+
共找到712篇文章
< 1 2 36 >
每页显示 20 50 100
含有FAdV-4 Fiber 2 B细胞表位的IBV S1融合蛋白的表达及免疫原性
1
作者 高亚茹 王泱 +8 位作者 张瀚文 刘琳 曹晓阳 刘静瑞 李冰洁 常晶晶 宋亚鹏 高文明 李新生 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第8期1616-1623,共8页
为验证禽腺病毒4(FAdV-4)WZ株Fiber 2 B细胞表位Pep1和Pep4可作为多价表位疫苗的候选表位,将表位与鸡传染性支气管炎病毒M41株S1蛋白基因以不同模式进行串联,构建重组融合质粒,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。经Western blot和ELISA试验... 为验证禽腺病毒4(FAdV-4)WZ株Fiber 2 B细胞表位Pep1和Pep4可作为多价表位疫苗的候选表位,将表位与鸡传染性支气管炎病毒M41株S1蛋白基因以不同模式进行串联,构建重组融合质粒,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。经Western blot和ELISA试验证实,表达获得的4个融合蛋白均能特异性地与抗M41全病毒血清和WZ株抗Fiber 2-knob蛋白血清发生反应。纯化后免疫BALB/c小鼠,在小鼠血清中可检测出抗肽表位的特异性抗体,其中Pep4表位比Pep1表位能诱导更强的免疫反应。当Pep1分别连接在融合蛋白的氨基端和羧基端时,均能使免疫动物产生相同水平的抗Pep1抗体,而将Pep4连接在融合蛋白羧基端时,免疫动物产生的抗Pep4特异性抗体水平更高。结果表明,具有反应原性的WZ株Fiber 2的B细胞表位Pep1和Pep4在与蛋白偶联时形成的融合蛋白可以使Pep1和Pep4获得免疫原性,且不影响载体蛋白的抗原性,这为FAdV-4多价表位疫苗的设计和研发提供了技术支撑和参考依据。 展开更多
关键词 B细胞表位 FAdV-4 fiber 2 传染性支气管炎 融合蛋白
原文传递
鹌鹑源FAdV4 Fiber 2、ORF29区序列分析及其致病性研究 被引量:4
2
作者 卢琴 罗青平 +7 位作者 张腾飞 罗玲 汪宏才 王红琳 温国元 张蓉蓉 商雨 邵华斌 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第5期36-42,共7页
本实验室前期在鹌鹑中分离到了1株4型禽腺病毒(FAdV-4)HB1812株,为了解该病毒全基因组序列和致病性,进行了全基因组测序和致病性实验。结果显示:HB1812株与国内的FAdV-4型流行毒株HN151025和JSJ13株的同源性最高,Fiber 2序列中G219A/D、... 本实验室前期在鹌鹑中分离到了1株4型禽腺病毒(FAdV-4)HB1812株,为了解该病毒全基因组序列和致病性,进行了全基因组测序和致病性实验。结果显示:HB1812株与国内的FAdV-4型流行毒株HN151025和JSJ13株的同源性最高,Fiber 2序列中G219A/D、E230Q、S260T、I299V、S304A、P307A、V319I、A380T、S389T、A400G、Q403Q、S406I、T412S、T434S、D438E、S452A、A458N和V477L位点存在点突变,ORF29区缺失了RMITPLYTRPP共11个氨基酸;致病性试验结果,HB1812株对SPF鸡具有致病性,可见典型的心包积液及肝脏发黄等临床症状,HE镜检可见心肌纤维排列紊乱及部分心肌断裂,心肌间隙可见大量红细胞,肝脏可见炎性细胞浸润并伴随少量肝细胞坏死。该研究是国内首次报道鹌鹑源禽腺病毒,为我国FAdV-4的传播方式、灭活疫苗的研制奠定基础。 展开更多
关键词 鹌鹑源 FAdV-4 fiber 2 ORF29 致病性
在线阅读 下载PDF
可表达禽腺病毒Fiber2基因的重组马立克病病毒疫苗株的构建
3
作者 张子博 陈运通 +12 位作者 范文瑞 吴龙波 李雨萌 郭茹 张艳萍 刘长军 祁小乐 刘永振 王素艳 崔红玉 段雨路 李留安 高玉龙 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第7期884-890,共7页
为研制禽类肝炎-心包积液综合征(HHS)重组马立克病病毒(MDV)活载体疫苗,通过PCR扩增血清4型禽腺病毒(FAdV-4)强毒株Fiber2基因并克隆入pcDNA3.1载体,构建重组真核表达质粒pSV40-Fiber2,然后通过PCR扩增和同源重组构建表达黏粒pMS-Fiber2... 为研制禽类肝炎-心包积液综合征(HHS)重组马立克病病毒(MDV)活载体疫苗,通过PCR扩增血清4型禽腺病毒(FAdV-4)强毒株Fiber2基因并克隆入pcDNA3.1载体,构建重组真核表达质粒pSV40-Fiber2,然后通过PCR扩增和同源重组构建表达黏粒pMS-Fiber2,与其他4个相互重叠并覆盖MDV全基因组的黏粒共同转染至鸡胚成纤维细胞(CEF)拯救病毒rMDV-Fiber2,在CEF中传代后用PCR、间接免疫荧光试验和Western-blot进行鉴定,并绘制体外生长曲线,分析其体外复制特性。结果表明,rMDV-Fiber2能够稳定表达Fiber2蛋白,rMDV-Fiber2在CEF中的复制能力与亲本病毒rMSΔmeq无明显差异;攻毒保护试验结果表明,重组病毒rMDV-Fiber2免疫后鸡能够对FAdV-4强毒株感染有80%存活率。结论,构建成功的重组病毒rMDV-Fiber2与亲本株的复制力相似,为研制HHS重组MDV活载体疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 血清4型禽腺病毒 重组马立克病病毒活载体疫苗 fiber2
在线阅读 下载PDF
“Zero‑Strain” NiNb_(2)O_(6) Fibers for All‑Climate Lithium Storage
4
作者 Yan Zhao Qiang Yuan +5 位作者 Liting Yang Guisheng Liang Yifeng Cheng Limin Wu Chunfu Lin Renchao Che 《Nano-Micro Letters》 SCIE EI CAS 2025年第1期348-360,共13页
Niobates are promising all-climate Li^(+)-storage anode material due to their fast charge transport,large specific capacities,and resistance to electrolyte reaction.However,their moderate unit-cellvolume expansion(gen... Niobates are promising all-climate Li^(+)-storage anode material due to their fast charge transport,large specific capacities,and resistance to electrolyte reaction.However,their moderate unit-cellvolume expansion(generally 5%–10%)during Li^(+)storage causes unsatisfactory long-term cyclability.Here,“zero-strain”NiNb_(2)O_(6) fibers are explored as a new anode material with comprehensively good electrochemical properties.During Li^(+)storage,the expansion of electrochemical inactive NiO_(6) octahedra almost fully offsets the shrinkage of active NbO_(6) octahedra through reversible O movement.Such superior volume-accommodation capability of the NiO_(6) layers guarantees the“zero-strain”behavior of NiNb_(2)O_(6) in a broad temperature range(0.53%//0.51%//0.74%at 25//−10//60℃),leading to the excellent cyclability of the NiNb_(2)O_(6) fibers(92.8%//99.2%//91.1%capacity retention after 1000//2000//1000 cycles at 10C and 25//−10//60℃).This NiNb_(2)O_(6) material further exhibits a large reversible capacity(300//184//318 mAh g−1 at 0.1C and 25//−10//60℃)and outstanding rate performance(10 to 0.5C capacity percentage of 64.3%//50.0%//65.4%at 25//−10//60℃).Therefore,the NiNb_(2)O_(6) fibers are especially suitable for large-capacity,fast-charging,long-life,and all-climate lithium-ion batteries. 展开更多
关键词 NiNb_(2)O_(6)porous fiber “Zero-strain”mechanism Electrochemical property Harsh-temperature operation Operando characterization
在线阅读 下载PDF
Differential plasticity of excitatory and inhibitory reticulospinal fibers after spinal cord injury:Implication for recovery
5
作者 Rozaria Jeleva Carmen Denecke Muhr +1 位作者 Alina P.Liebisch Florence M.Bareyre 《Neural Regeneration Research》 2026年第5期2011-2020,共10页
The remodeling of axonal connections following injury is an important feature driving functional recovery.The reticulospinal tract is an interesting descending motor tract that contains both excitatory and inhibitory ... The remodeling of axonal connections following injury is an important feature driving functional recovery.The reticulospinal tract is an interesting descending motor tract that contains both excitatory and inhibitory fibers.While the reticulospinal tract has been shown to be particularly prone to axonal growth and plasticity following injuries of the spinal cord,the differential capacities of excitatory and inhibitory fibers for plasticity remain unclear.As adaptive axonal plasticity involves a sophisticated interplay between excitatory and inhibitory input,we investigated in this study the plastic potential of glutamatergic(vGlut2)and GABAergic(vGat)fibers originating from the gigantocellular nucleus and the lateral paragigantocellular nucleus,two nuclei important for locomotor function.Using a combination of viral tracing,chemogenetic silencing,and AI-based kinematic analysis,we investigated plasticity and its impact on functional recovery within the first 3 weeks following injury,a period prone to neuronal remodeling.We demonstrate that,in this time frame,while vGlut2-positive fibers within the gigantocellular and lateral paragigantocellular nuclei rewire significantly following cervical spinal cord injury,vGat-positive fibers are rather unresponsive to injury.We also show that the acute silencing of excitatory axonal fibers which rewire in response to lesions of the spinal cord triggers a worsening of the functional recovery.Using kinematic analysis,we also pinpoint the locomotion features associated with the gigantocellular nucleus or lateral paragigantocellular nucleus during functional recovery.Overall,our study increases the understanding of the role of the gigantocellular and lateral paragigantocellular nuclei during functional recovery following spinal cord injury. 展开更多
关键词 GABAergic(vGat)fibers gait features glutamatergic(vGlut2)fibers PLASTICITY recovery of function reticulospinal tract spinal cord injury
暂未订购
基于血清4型禽腺病毒Fiber-2间接ELISA方法的建立 被引量:8
6
作者 梅楠 孙海伟 +3 位作者 李允章 汪凯 王桂军 陈鸿军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期807-811,共5页
为建立一种快速监测鸡群中血清4型禽腺病毒(FAdV-4)的方法,本研究通过PCR扩增FAd V-4 AQ强毒株的fiber-2基因截短体(112 bp^1 440 bp),克隆至p ET-32a(+)载体中进行原核表达,以重组表达的Fiber-2蛋白作为包被抗原,经优化反应条件,建立... 为建立一种快速监测鸡群中血清4型禽腺病毒(FAdV-4)的方法,本研究通过PCR扩增FAd V-4 AQ强毒株的fiber-2基因截短体(112 bp^1 440 bp),克隆至p ET-32a(+)载体中进行原核表达,以重组表达的Fiber-2蛋白作为包被抗原,经优化反应条件,建立了快速检测FAd V-4的间接ELISA方法,该方法特异性试验结果显示,除FAd V-4外,与其它病原无交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法检测血清最低稀释度为1∶12 800,具有较高的敏感性;重复性试验结果显示,该方法批内、批间变异系数均小于10%。该方法对FAd V-4临床感染的阳性血清检出率为100%,与琼脂扩散试验结果完全吻合。本研究建立的以Fiber-2重组蛋白为包被抗原的间接ELISA方法能够用于FAd V-4灭活疫苗免疫后的血清学调查。 展开更多
关键词 血清4型禽腺病毒 FAdV-4 fiber-2 原核表达 间接ELISA
在线阅读 下载PDF
血清4型禽腺病毒fiber-2基因在昆虫细胞中的表达及其免疫原性分析 被引量:7
7
作者 梅梅 陆吉虎 +3 位作者 张雪花 唐应华 卢宇 侯继波 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期1251-1255,共5页
为研究I群血清4型禽腺病毒(FAdV-4)fiber-2蛋白的免疫原性,本研究利用杆状病毒表达系统构建了含fiber-2基因的重组杆状病毒穿梭载体,将其转染Sf9细胞后获得重组杆状病毒rBA-fiber-2,并采用悬浮放大工艺表达重组fiber-2蛋白。通过间接免... 为研究I群血清4型禽腺病毒(FAdV-4)fiber-2蛋白的免疫原性,本研究利用杆状病毒表达系统构建了含fiber-2基因的重组杆状病毒穿梭载体,将其转染Sf9细胞后获得重组杆状病毒rBA-fiber-2,并采用悬浮放大工艺表达重组fiber-2蛋白。通过间接免疫荧光试验(IFA)和western blot鉴定重组蛋白fiber-2的表达,并采用免疫琼扩试验(AGP)检测fiber-2蛋白效价。以fiber-2蛋白作为免疫原制备油乳剂疫苗免疫SPF鸡进行免疫效力试验,分别设fiber-2疫苗组、fiber-2疫苗配伍免疫增强剂CVCVA5组及生理盐水对照组。免疫后14 d、21 d和28 d采集SPF鸡外周血分离血清,利用AGP法检测其血清抗体水平。IFA结果显示fiber-2蛋白在昆虫细胞中获得表达;western blot结果显示该蛋白能够与FAdV-4阳性血清发生特异性免疫反应,蛋白分子量约62 ku;AGP结果显示fiber-2蛋白AGP效价达1:16。免疫后14 d两组实验组鸡均可检测到特异性琼扩抗体,免疫后28 d fiber-2疫苗组SPF鸡抗体AGP效价平均值可达1:24,配伍CVCVA5疫苗组SPF鸡抗体AGP效价平均值可达1:104。以上结果表明fiber-2蛋白具有一定的免疫原性,免疫后可诱导机体产生特异性抗体,本研究为进一步研制FAdV-4亚单位疫苗提供实验依据。 展开更多
关键词 血清4型禽腺病毒 纤突蛋白 表达 免疫原性
在线阅读 下载PDF
Thermally Conductive Ti_(3)C_(2)T_(x)Fibers with Superior Electrical Conductivity
8
作者 Yuxiao Zhou Yali Zhang +5 位作者 Yuheng Pang Hua Guo Yongqiang Guo Mukun Li Xuetao Shi Junwei Gu 《Nano-Micro Letters》 2025年第10期197-210,共14页
High-performance Ti_(3)C_(2)T_(x)fibers have garnered significant potential for smart fibers enabled fabrics.Nonetheless,a major challenge hindering their widespread use is the lack of strong interlayer interactions b... High-performance Ti_(3)C_(2)T_(x)fibers have garnered significant potential for smart fibers enabled fabrics.Nonetheless,a major challenge hindering their widespread use is the lack of strong interlayer interactions between Ti_(3)C_(2)T_(x)nanosheets within fibers,which restricts their properties.Herein,a versatile strategy is proposed to construct wet-spun Ti_(3)C_(2)T_(x)fibers,in which trace amounts of borate form strong interlayer crosslinking between Ti_(3)C_(2)T_(x)nanosheets to significantly enhance interactions as supported by density functional theory calculations,thereby reducing interlayer spacing,diminishing microscopic voids and promoting orientation of the nanosheets.The resultant Ti_(3)C_(2)T_(x)fibers exhibit exceptional electrical conductivity of 7781 S cm^(-1)and mechanical properties,including tensile strength of 188.72 MPa and Young's modulus of 52.42 GPa.Notably,employing equilibrium molecular dynamics simulations,finite element analysis,and cross-wire geometry method,it is revealed that such crosslinking also effectively lowers interfacial thermal resistance and ultimately elevates thermal conductivity of Ti_(3)C_(2)T_(x)fibers to 13 W m^(-1)K^(-1),marking the first systematic study on thermal conductivity of Ti_(3)C_(2)T_(x)fibers.The simple and efficient interlayer crosslinking enhancement strategy not only enables the construction of thermal conductivity Ti_(3)C_(2)T_(x)fibers with high electrical conductivity for smart textiles,but also offers a scalable approach for assembling other nanomaterials into multifunctional fibers. 展开更多
关键词 Thermally conductive Ti_(3)C_(2)T_(x)fibers Interlayer crosslinking High electrical conductivity Density functional theory simulation Equilibrium molecular dynamics simulation
在线阅读 下载PDF
表达禽腺病毒血清4型Fiber2蛋白的重组耐热新城疫病毒的构建及免疫效果评估 被引量:2
9
作者 商雨 李林涛 +9 位作者 李丽 徐英英 冯贺龙 汪宏才 张蓉蓉 曾哲 王红琳 罗青平 邵华斌 温国元 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第2期650-659,共10页
【目的】研究针对新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)和禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)的耐热基因工程疫苗。【方法】利用反向遗传学操作技术将NDV耐热株的HN基因替换到LaSota疫苗株上,再将禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus sero... 【目的】研究针对新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)和禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)的耐热基因工程疫苗。【方法】利用反向遗传学操作技术将NDV耐热株的HN基因替换到LaSota疫苗株上,再将禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)的Fiber2基因插入到其基因组上,构建表达Fiber2蛋白的重组耐热NDV质粒pTS-HN-Fiber2。通过病毒拯救技术拯救重组NDV rTS-HN-Fiber2,并测定其生物学特性和作为疫苗候选株的免疫原性和攻毒保护性。【结果】rTS-HN-Fiber2的鸡胚平均致死时间>168 h,且脑内接种致病指数为0,属于弱毒的范畴;在细胞上的生长曲线结果表明,rTS-HN-Fiber2与亲本LaSota株有相似的生长曲线,但最终的生长滴度略低于LaSota株;rTS-HN-Fiber2在56℃处理15 min后,病毒滴度下降约10^(3) TCID_(50)/mL,而LaSota株56℃处理5 min几乎无感染性;间接免疫荧光试验结果表明,rTS-HN-Fiber2能表达Fiber2蛋白。免疫和攻毒试验结果显示,rTS-HN-Fiber2能产生NDV抗体,且能显著提高雏鸡在FAdV-4强毒下的存活率,减轻FAdV-4强毒引起的组织病变,降低组织中的病毒载量。【结论】本研究成功构建了表达FAdV-4 Fiber2蛋白的重组耐热NDV,该病毒保持了亲本LaSota株的弱毒生物学特性,但热稳定性有显著提升;重组NDV免疫雏鸡可产生针对NDV和FAdV-4强毒的保护,该重组NDV可作为开发针对FAdV-4和NDV二联基因工程疫苗的候选病毒株。 展开更多
关键词 禽腺病毒血清4型(FAdV-4) 新城疫病毒(NDV) fiber2蛋白 重组病毒 耐热
在线阅读 下载PDF
Influence of pyrolytic carbon coatings on complex permittivity and microwave absorbing properties of Al_2O_3 fiber woven fabrics 被引量:5
10
作者 丁冬海 周万城 +1 位作者 罗发 朱冬梅 《Transactions of Nonferrous Metals Society of China》 SCIE EI CAS CSCD 2012年第2期354-359,共6页
The pyrolytic carbon (PyC) coatings were fabricated on A1203 fiber fabrics by the method of chemical vapor deposition (CVD). The microstructures of A1203 fibers with and without PyC coatings were characterized by ... The pyrolytic carbon (PyC) coatings were fabricated on A1203 fiber fabrics by the method of chemical vapor deposition (CVD). The microstructures of A1203 fibers with and without PyC coatings were characterized by SEM and Raman spectroscopy. The influence of deposition time of PyC on the DC conductivity (ad) of A1203 filaments and complex permittivity of fabrics at X band (8.2-12.4 GHz) were investigated. The values of Crd and complex permittivity increase with increasing deposition time of PyC. The electron relaxation polarization and conductance loss were supposed to be contributed to the increase of ε' and ε", respectively. In addition, the reflection loss (RL) of fabrics was calculated. The results show that the microwave absorbing properties of Al2O3 fiber fabrics can be improved by PyC coatings. The best RL results are for 60 min-deposition sample, of which the minimum value is about -40.4 dB at about 9.5 GHz and the absorbing frequency band (AFB) is about 4 GHz. 展开更多
关键词 complex permittivity pyrolytic coating Al2O3 fiber fabric
在线阅读 下载PDF
基于FAdV-4中国流行株Fiber2蛋白的间接ELISA抗体检测方法的建立 被引量:6
11
作者 万文妍 刘延珂 +10 位作者 王贝贝 吴艳阳 杨东东 高冬生 李永涛 王新卫 杨霞 常洪涛 陈陆 王川庆 赵军 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期883-888,共6页
利用在大肠杆菌中表达的FAdV-4中国流行株Fiber2蛋白作为包被抗原,建立了检测抗禽腺病毒血清4型(FAdV-4)中国流行株抗体的间接ELISA方法。所建立方法的最佳条件为:抗原最适包被量为0.25μg/μL,包被时间为37℃1h,然后4℃过夜;... 利用在大肠杆菌中表达的FAdV-4中国流行株Fiber2蛋白作为包被抗原,建立了检测抗禽腺病毒血清4型(FAdV-4)中国流行株抗体的间接ELISA方法。所建立方法的最佳条件为:抗原最适包被量为0.25μg/μL,包被时间为37℃1h,然后4℃过夜;被检血清的最佳稀释度为1:800,作用时间为2h;二抗选用HRP标记的兔抗鸡IgY,稀释度为1:4000,作用时间为1.5h;显色液TMB作用条件为室温5min。所建立ELISA的判定标准为:样品的S/P值大于或等于0.0553判为阳性,小于0.0418判为阴性。用建立的ELISA方法对抗鸡新城疫病毒、禽流感病毒、传染性法氏囊病病毒、传染性支气管炎病毒、减蛋综合征病毒阳性血清进行了检测,均无交叉反应,表明该方法有较好的特异性,组内和组间重复的最大变异系数为5.6%和5.7%,所建立的ELISA方法重复性良好。用所建立的ELISA方法对50份来自于疑似患肝炎-心包积液综合征病鸡的血清样品进行检测,阳性捡出率为98%,与FAdV-4病原学检测结果符合率为100%。结果表明:本试验所建立的ELISA方法可用于抗FAdV-4中国流行株抗体的检测,为肝炎-心包积液综合征病监测和流行病学调查提供了方法。 展开更多
关键词 禽腺病毒血清4型 fiber2蛋白 间接ELISA
原文传递
血清4型禽腺病毒Fiber-2蛋白截短表达及单克隆抗体制备 被引量:8
12
作者 韦悠 谢芝勋 +6 位作者 邓显文 李小凤 谢志勤 范晴 张艳芳 黄娇玲 王盛 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期2341-2349,共9页
【目的】获得截短表达的血清4型禽腺病毒(FAdV-4)Fiber-2重组蛋白及其单克隆抗体,为建立快速灵敏的病毒检测方法提供基础材料。【方法】对Fiber-2基因序列进行密码子优化,截取Fiber-2蛋白抗原性集中片段,PCR扩增其基因序列,连接至pET-32... 【目的】获得截短表达的血清4型禽腺病毒(FAdV-4)Fiber-2重组蛋白及其单克隆抗体,为建立快速灵敏的病毒检测方法提供基础材料。【方法】对Fiber-2基因序列进行密码子优化,截取Fiber-2蛋白抗原性集中片段,PCR扩增其基因序列,连接至pET-32a(+)构建原核表达载体。将表达的重组蛋白进行纯化,并通过Western blotting验证其在大肠杆菌中的表达情况。将重组蛋白免疫BALB/c小鼠后取脾细胞与SP2/0细胞融合,利用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法筛选阳性细胞株,再利用秋水仙素裂解法、间接ELISA法和间接免疫荧光法(IFA)对其进行鉴定。【结果】成功构建Fiber-2基因截短片段的原核表达系统,获得大小约为67 kD的Fiber-2截短蛋白,以包涵体的形式出现,经纯化后可获得单一的特异性条带,经Western blotting鉴定证明其可与FAdV-4阳性血清结合从而产生一条特异性条带。经过4次亚克隆后筛选到5株能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株(2C2、4F6、5A5、6G10和10B5),其抗体分泌稳定性、特异性好,诱生的细胞上清液抗体效价为1:1600~1:6400,腹水抗体效价为1:320000~1:1280000,秋水仙素裂解检测染色体数目为94~110条。2C2、4F6和10B5杂交瘤细胞分泌的抗体重链为IgG2b亚型,轻链为Kappa链;5A5和6G10杂交瘤细胞分泌的抗体重链为IgG1亚型,轻链为Kappa链。5株杂交瘤细胞株与感染FAdV-4的鸡肝癌上皮细胞系(LMH)进行IFA检测,结果均为阳性。【结论】制备的Fiber-2截短重组蛋白及单克隆抗体具有良好的反应原性和特异性,可用于FAdV-4病毒检测试剂盒研发。 展开更多
关键词 血清4型禽腺病毒(FAdV-4) fiber-2 基因克隆 重组蛋白 单克隆抗体 Western blotting
在线阅读 下载PDF
禽腺病毒血清4型Fiber2蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定 被引量:8
13
作者 郭瑞珍 苏冰倩 +6 位作者 王棋 王一 于朋伟 孟洁洁 齐艳丽 杨国宇 褚贝贝 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期2000-2012,共13页
旨在制备禽腺病毒血清4型(FAdV-4)纤突蛋白(Fiber2)的特异性单克隆抗体(MAb),本研究将原核表达的可溶性重组蛋白NusA-Fiber2作为免疫原免疫BALB/c雌鼠,筛选获得3株能稳定分泌抗FAdV-4 Fiber2蛋白MAb的杂交瘤细胞株2G5、2G8、4C2,取细胞... 旨在制备禽腺病毒血清4型(FAdV-4)纤突蛋白(Fiber2)的特异性单克隆抗体(MAb),本研究将原核表达的可溶性重组蛋白NusA-Fiber2作为免疫原免疫BALB/c雌鼠,筛选获得3株能稳定分泌抗FAdV-4 Fiber2蛋白MAb的杂交瘤细胞株2G5、2G8、4C2,取细胞株2G5制备腹水并纯化,利用间接免疫荧光试验(immunofluorescence assay,IFA)和Western blot鉴定该单抗的特异性。用制备的单抗包被酶标板,通过一系列的优化,建立了FAdV-4 Fiber2双抗夹心ELISA检测方法。通过逐步截短分析鉴定出单克隆抗体识别的抗原表位区域。结果表明:成功获取3株单克隆细胞株2G5、2G8、4C2。MAb 2G5可与原核表达纯化的Fiber2蛋白及FAdV-4特异性反应。建立的双抗夹心ELISA检测方法具有很好的特异性、灵敏性和重复性。该MAb识别的表位序列是N端aa1—33。本研究成功制备了具有良好Western blot和IFA反应原性的单克隆抗体,为Fiber2蛋白功能研究和FAdV-4新型表位疫苗商品化研发奠定了基础。 展开更多
关键词 禽腺病毒血清4型 fiber2蛋白 单克隆抗体 双抗夹心ELISA 表位鉴定
在线阅读 下载PDF
Ⅳ型禽腺病毒Fiber-2(knob)蛋白的表达及免疫效力评价 被引量:2
14
作者 程慧敏 刘小晓 +9 位作者 林健 刘立新 赵际成 段会娟 王小蕾 范维 刘月焕 钱泓 张强 杨志远 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期218-222,共5页
表达Ⅰ群Ⅳ型禽腺病毒(FAdV-4)Fiber-2(knob)蛋白,以制备Fiber-2(knob)蛋白亚单位疫苗并对其免疫效力进行评价。将FAdV-4 Fiber-2的knob基因克隆至原核表达载体pET28a,构建重组质粒pET28a-Fiber-2(knob)。将重组质粒转化至大肠杆菌BL-21... 表达Ⅰ群Ⅳ型禽腺病毒(FAdV-4)Fiber-2(knob)蛋白,以制备Fiber-2(knob)蛋白亚单位疫苗并对其免疫效力进行评价。将FAdV-4 Fiber-2的knob基因克隆至原核表达载体pET28a,构建重组质粒pET28a-Fiber-2(knob)。将重组质粒转化至大肠杆菌BL-21(DE3),以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达,采用镍离子亲和层析柱纯化,SDS-PAGE检测纯化后的目的蛋白。将蛋白抗原与佐剂1∶3乳化,分组免疫100,50,25,0 mg/0.5 L FAdV Fiber-2(knob)蛋白亚单位疫苗,攻毒剂量为10^(4.5) ELD_(50)/只,免疫后24 d攻毒,比较不同免疫剂量攻毒保护效果。又制备4批蛋白含量为24 mg/0.5 L FAdV Fiber-2(knob)蛋白亚单位疫苗,比较不同批次间免疫效力差异。结果显示,成功构建pET28a-Fiber-2(knob)重组质粒,纯化后的蛋白纯度达到90%,质量浓度为3269 mg/L。当攻毒剂量为10^(4.5) ELD_(50)时,FAdV Fiber-2(knob)蛋白亚单位疫苗攻毒保护率可达到100%(免疫蛋白抗原量为25~100μg/只),当攻毒剂量为5×10^(3.9) ELD_(50)时,最小免疫蛋白抗原含量为14.4μg/只时也可产生100%保护。不同批次间FAdV Fiber-2(knob)蛋白亚单位疫苗均能刺激机体产生抗体,有效保护SPF鸡抵御FAdV强毒攻击,具有良好的免疫保护效力。 展开更多
关键词 Ⅳ型禽腺病毒 fiber-2蛋白 亚单位疫苗 免疫效力
原文传递
1群4型禽腺病毒的分离鉴定及Fiber-2蛋白的免疫效果分析 被引量:7
15
作者 程增青 范根成 +4 位作者 窦小龙 刘红祥 申茂欣 徐全刚 杨汉春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期2463-2471,共9页
旨在鉴定河南某蛋鸡场以心包积液、肝肿大出血为特征的病原,并对病原的免疫原性蛋白进行表达和效果分析。本研究采用病毒分离、血清学试验、PCR检测及测序分析、动物回归试验、大肠杆菌表达、蛋白纯化、攻毒保护等方法进行研究。结果显... 旨在鉴定河南某蛋鸡场以心包积液、肝肿大出血为特征的病原,并对病原的免疫原性蛋白进行表达和效果分析。本研究采用病毒分离、血清学试验、PCR检测及测序分析、动物回归试验、大肠杆菌表达、蛋白纯化、攻毒保护等方法进行研究。结果显示,所采集样品经卵黄囊途径接种7日龄SPF鸡胚,盲传2代后获得病毒;PCR可扩增出约900 bp的Hexon基因片段,经测序,其Hexon基因与血清C4型毒株的相似性为100%;血清中和试验结果表明分离的禽腺病毒为1群血清4型禽腺病毒,命名为HN-ZK株。该毒株可在鸡胚原代肝细胞上产生CPE,病毒含量可达10^(7.5)TCID50·0.1 mL^-1。动物回归试验表明,该分离毒株可使35日龄SPF鸡100%(10/10)表现出发病症状。以分离株的DNA为模板,利用大肠杆菌原核表达系统,获得相对分子质量约为33 ku的Fiber-2蛋白,离心浓缩、纯化后蛋白含量为300 mg·mL^-1。将表达的Fiber-2蛋白用不同的剂量免疫SPF鸡,结果表明20μg·只^-1的剂量能使鸡完全抵抗强毒株的攻击,说明Fiber-2蛋白具有较好的免疫原性。本研究可为禽心包积水-肝炎综合征的诊断和基因工程亚单位疫苗的研制提供数据参考。 展开更多
关键词 I群禽腺病毒 鉴定 fiber-2蛋白 亚单位疫苗
在线阅读 下载PDF
表达禽腺病毒4型中国流行株Fiber2蛋白重组新城疫病毒的构建与鉴定 被引量:3
16
作者 田开月 张玉菡 +6 位作者 杨盼盼 郭慧芳 李宁 杨霞 边传周 王增 赵军 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1697-1702,共6页
利用NDV LaSota弱毒疫苗株反向遗传操作系统,将禽腺病毒4型(FAdV-4)中国流行株的全长Fiber2基因插入到NDV基因组的P和M基因之间,构建并拯救出重组病毒rLaSota-Fiber2。利用RT-PCR和序列测定,以及Western blot对重组病毒进行了鉴定。结... 利用NDV LaSota弱毒疫苗株反向遗传操作系统,将禽腺病毒4型(FAdV-4)中国流行株的全长Fiber2基因插入到NDV基因组的P和M基因之间,构建并拯救出重组病毒rLaSota-Fiber2。利用RT-PCR和序列测定,以及Western blot对重组病毒进行了鉴定。结果显示,Fiber2基因插入位置和方向正确,Fiber2蛋白得到正确表达,表达形式为可溶的游离形式而非嵌入到NDV颗粒中。第10代重组病毒的鸡胚致病性试验和在鸡胚中的生长特性研究结果显示,重组病毒的半数鸡胚感染量(EID50)最高可达108.5/100μL,鸡胚平均致死时间(MDT)为120 h, 1日龄雏鸡脑内接种指数(ICPI)和6周龄鸡静脉接种致病指数(IVPI)均为0,重组病毒保持了LaSota弱毒疫苗亲本毒株的低致病特性和对鸡胚良好的高滴度生长适应性。重组病毒与亲本LaSota株生长滴度在相近时间达到峰值,生长动力学特性与亲本株无明显差异。本试验构建的表达FAdV-4中国流行株Fiber2基因的重组病毒rLaSota-Fiber2有望为同时防控NDV和FAdV-4的感染提供安全、廉价和高效的辅助工具。 展开更多
关键词 禽腺病毒4型 fiber2蛋白 重组新城疫病毒 疫苗
原文传递
基于抗原蛋白Fiber-2及细胞因子佐剂的Ⅰ群4型禽腺病毒亚单位疫苗的开发 被引量:6
17
作者 匡露寒 季国荣 +2 位作者 杨灿灿 张元兴 刘琴 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期452-458,共7页
为了开发一种抗I群4型禽腺病毒(FAd V-4)的亚单位疫苗,选择I群禽腺病毒血清4型流行毒株衣壳蛋白Fiber-2作为保护性抗原蛋白。利用昆虫细胞-杆状病毒系统生产Fiber-2蛋白,通过Westernblot检测重组蛋白的表达情况,利用双向琼脂扩散法检测... 为了开发一种抗I群4型禽腺病毒(FAd V-4)的亚单位疫苗,选择I群禽腺病毒血清4型流行毒株衣壳蛋白Fiber-2作为保护性抗原蛋白。利用昆虫细胞-杆状病毒系统生产Fiber-2蛋白,通过Westernblot检测重组蛋白的表达情况,利用双向琼脂扩散法检测重组Fiber-2的免疫原性。为了增强亚单位疫苗的免疫保护效果,添加鸡源白细胞介素2(chIL-2)和鸡源γ-干扰素(ch IFN-γ)作为免疫佐剂,与重组Fiber-2单独或混合使用,制备多种形式的亚单位疫苗,并进行动物攻毒保护试验。重组蛋白的Western-blot鉴定结果显示,63 ku处出现Fiber-2蛋白目的条带;双向琼脂扩散试验结果显示,重组蛋白效价达到1∶128,表现出良好的反应原性。动物攻毒保护试验结果显示,单独使用Fiber-2免疫SPF鸡,在50 μg/只的剂量下,可为SPF鸡提供100%的保护效果,以chIL-2和chIFN-γ为免疫佐剂,与重组Fiber-2联合免疫SPF鸡,可显著增强Fiber-2在低剂量(10 μg/只)下的免疫保护效果,上述结果表明重组Fiber-2联合chIL-2和chIFN-γ细胞因子佐剂所制备的亚单位疫苗在抗I群4型禽腺病毒感染领域具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 I群4型禽腺病毒 fiber-2 chIL-2 chIFN-γ 亚单位疫苗
原文传递
鸭腺病毒3型Fiber-2蛋白单克隆抗体的制备及初步应用 被引量:5
18
作者 魏常青 史馨瑾 +4 位作者 吕璐 刘英楠 谢振华 陈宗艳 陈鸿军 《中国家禽》 北大核心 2023年第2期46-51,共6页
为进一步研究鸭腺病毒3型(DAdV-3)Fiber-2蛋白,研究通过PCR扩增fiber-2基因,构建p ET32a-DAdV3-fiber2原核质粒,表达并纯化蛋白,以纯化的蛋白为免疫原,免疫6周龄雌性BALB/c小鼠制备抗Fiber-2单克隆抗体杂交瘤细胞,采用间接免疫荧光试验... 为进一步研究鸭腺病毒3型(DAdV-3)Fiber-2蛋白,研究通过PCR扩增fiber-2基因,构建p ET32a-DAdV3-fiber2原核质粒,表达并纯化蛋白,以纯化的蛋白为免疫原,免疫6周龄雌性BALB/c小鼠制备抗Fiber-2单克隆抗体杂交瘤细胞,采用间接免疫荧光试验和免疫印迹试验进行鉴定,并用于DAdV-3 Fiber-2杆状病毒表达产物的鉴定。结果显示:原核表达获得1.77 mg/mL Fiber-2蛋白,筛选获得2株阳性单克隆细胞株2E10E4和4F7F10,两株单克隆抗体均为IgG 1型,轻链类型为κ;DAdV-3感染的LMH细胞中存在特异性荧光,免疫印迹试验确认在约59 ku处出现特异性条带;采用制备的单克隆抗体确认了表达Fiber-2蛋白的重组杆状病毒。研究获得了针对DAdV-3 Fiber-2蛋白的单克隆抗体,为深入探究Fiber-2在DAdV-3感染机制中的作用以及为建立DAdV-3抗原免疫测定技术奠定了基础。 展开更多
关键词 DAdV-3 fiber-2 单克隆抗体
原文传递
禽腺病毒血清4型fiber-2和penton蛋白亚单位疫苗初步研究及免疫效果评价 被引量:4
19
作者 刘世佳 尚宵敏 +5 位作者 王浩 周睿 李博硕 孙晰瑶 韩静静 杜恩岐 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1162-1166,1186,共6页
选取禽腺病毒血清4型(fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)JLJ13株的fiber-2和penton蛋白作为保护性抗原,利用SWISS-MODEL网站对fiber-2蛋白空间结构进行模拟,截取其主要功能区fiber-2-Shaft 2替代fiber-2,进行密码子优化后,将fiber-2-S... 选取禽腺病毒血清4型(fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)JLJ13株的fiber-2和penton蛋白作为保护性抗原,利用SWISS-MODEL网站对fiber-2蛋白空间结构进行模拟,截取其主要功能区fiber-2-Shaft 2替代fiber-2,进行密码子优化后,将fiber-2-Shaft 2和penton蛋白基因序列克隆到pET28a(+)载体上并送至北京天一辉远生物科技有限公司进行基因合成,将合成的质粒分别命名为pET-28a-msyb-fiber-2-Shaft 2和pET-28a-msyb-penton。通过原核表达系统进行蛋白表达并使用镍柱纯化。经BCA定量后,用PBS分别将fiber-2-Shaft 2和penton蛋白质量浓度稀释至1000,500,250 mg/L,再将相同质量浓度的fiber-2-Shaft 2和penton蛋白按1∶1体积比混合后作为抗原,配伍ISCOMs佐剂,0.2 mL/只免疫30日龄SPF鸡,即高剂量组免疫fiber-2-Shaft 2和penton蛋白各100μg、中剂量组各50μg、低剂量组各25μg。一免后14 d进行二次免疫,采集二免后7,14,21 d血清检测特异性抗体和中和抗体,并在二免后21 d攻毒。结果显示,成功表达出fiber-2-Shaft 2和penton蛋白,大小分别为69,93 kDa,镍柱纯化后可获得高纯度的蛋白;二免后14 d高中低量组的中和效价依次为1280,640,640,攻毒后阴性对照组表现出明显的临床症状,2~3 d后死亡,疫苗组均未出现任何临床症状。结果表明,利用禽腺病毒血清4型JLJ13株fiber-2-Shaft 2和penton蛋白混合配伍ISCOMs佐剂制备的亚单位疫苗免疫保护效果明显。 展开更多
关键词 禽腺病毒血清4型 fiber-2 PENTON 亚单位疫苗 免疫效果评价
原文传递
一株禽腺病毒4型Fiber2蛋白单克隆抗体的制备 被引量:3
20
作者 谢明 李国攀 +6 位作者 胡基雄 张志翔 艾笑扬 陈帝斯 李杨 尹俊翔 荣俊 《湖北农业科学》 2022年第10期121-126,131,共7页
制备禽腺病毒4型(FAdV-4)Fiber2蛋白的特异性单克隆抗体,将重组蛋白FAdV-4 Fiber2纯化后作为免疫原免疫BALB/c小鼠,分离脾脏中的淋巴细胞,与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,筛选得到10株能稳定分泌抗FAdV-4 Fiber2蛋白单克隆抗体的阳性杂... 制备禽腺病毒4型(FAdV-4)Fiber2蛋白的特异性单克隆抗体,将重组蛋白FAdV-4 Fiber2纯化后作为免疫原免疫BALB/c小鼠,分离脾脏中的淋巴细胞,与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,筛选得到10株能稳定分泌抗FAdV-4 Fiber2蛋白单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株1B5F1、1B5G11、1B5C1、1B5D2、1B5E3、1B5F3、1B5E4、1B5G4、1B5A8、1B5G8,取分泌抗体水平最高的1B5F1细胞株制备腹水,利用斑点杂交(Dot blot)和间接免疫荧光试验(IFA)进行特异性检测。结果表明,成功制备10株杂交瘤细胞株;制备的腹水能与FAdV-4 Fiber2蛋白及FAdV-4攻毒后的鸡肝组织产生特异性反应,证明成功制备了FAdV-4 Fiber2蛋白特异性单克隆抗体。 展开更多
关键词 禽腺病毒4型 fiber2蛋白 单克隆抗体
在线阅读 下载PDF
上一页 1 2 36 下一页 到第
使用帮助 返回顶部