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细胞因子与猪瘟病毒E_2基因真核双表达载体的构建及其免疫增强作用 被引量：8
1
作者 陈创夫 余兴龙 +4 位作者 马正海 李作生 李红卫 涂长春 殷震 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期1406-1410,共5页
构建了猪瘟病毒E2 基因与IL 2、IL 3基因的双表达真核表达载体 ,观察其表达水平 ,并对其免疫增强效果进行了观察。结果表明 ,构建了 2种猪瘟病毒E2 基因与白细胞介素 2、3的真核表达质粒pIRSTIL 2 ,pIRSTIL 3。将 2种质粒转染BHK 2 1细... 构建了猪瘟病毒E2 基因与IL 2、IL 3基因的双表达真核表达载体 ,观察其表达水平 ,并对其免疫增强效果进行了观察。结果表明 ,构建了 2种猪瘟病毒E2 基因与白细胞介素 2、3的真核表达质粒pIRSTIL 2 ,pIRSTIL 3。将 2种质粒转染BHK 2 1细胞 ,均可在体外表达E2 抗原和有生物活性的IL 2、IL 3两种质粒能诱导产生CSFV的特异性免疫反应。pIRSTIL 2 ,pIRSTIL 3所诱导的免疫应答反应比使用单表达质粒 pIRST强。试验表明 ,细胞因子与目的基因构建的双表达基因疫苗能有效提高基因疫苗的免疫效果。 展开更多
关键词 细胞因子 猪瘟病毒 E2基因 免疫增强作用 双表达载体 猪瘟 基因疫苗 真核表达
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猪圆环病毒2型ORF2/猪白介素2嵌合表达质粒在猪体内诱导的保护性免疫反应 被引量：9
2
作者 闫若潜 王东方 +6 位作者 吴志明 李桂喜 刘淑敏 刘梅芬 赵明军 王淑娟 赵雪丽 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期199-206,共8页
为探讨猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2/猪白介素-2(PoIL-2)嵌合重组表达质粒(rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2)在猪体内的免疫效果和免疫保护效果进而研制高效PCV2核酸疫苗,将35只10日龄健康仔猪平均分成7组分别以rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2... 为探讨猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2/猪白介素-2(PoIL-2)嵌合重组表达质粒(rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2)在猪体内的免疫效果和免疫保护效果进而研制高效PCV2核酸疫苗,将35只10日龄健康仔猪平均分成7组分别以rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2重组表达质粒或PCV2ORF2基因原核表达的rCap蛋白进行免疫及免疫保护试验。共进行4次肌肉注射免疫,每次间隔2周;于第4次免疫后3周通过口腔和鼻腔途径感染PCV2细胞强毒。分别于第4次免疫后和攻毒后不同时间通过检测免疫猪血清抗体水平和外周血T淋巴细胞增殖活性、辅助性T细胞(Th)和细胞毒性T细胞(Tc)亚群的百分含量、排毒率和病毒血症阳性维持时间等指标以评价其免疫和免疫保护效果。结果表明,各免疫组猪均产生了抗PCV2特异性ELISA免疫抗体,但rCap蛋白免疫组猪抗体水平较低;rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2质粒对猪体的免疫和免疫保护效果显著优于rpcDNA3.1/ORF2质粒;在rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2质粒或rpcDNA3.1/ORF2质粒中添加rCap蛋白对重组质粒免疫及免疫保护效果无明显影响。因此,选取rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2质粒为下一步研制PCV2核酸疫苗的主要成分。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 猪白细胞介素2 rpcDNA3 1 PCV2-linker—PoIL-2重组表达质粒 免疫保护
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恶性疟原虫FCC-1/HN株裂殖子表面抗原2(MSA-2)基因在卡介苗BCG中的表达 被引量：7
3
作者 郑春福 吴少庭 +2 位作者 陈雅棠 高世同 林敏 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2002年第4期193-197,共5页
目的 :裂殖子表面抗原 2基因 (Merozoitesurfaceantigen 2 ,MSA2 )是恶性疟原虫的一种保护性抗原 ,为研究其重组BCG疫苗的保护作用 ,首先探讨携带有恶性疟原虫FCC 1 HN株MSA2基因的重组分枝杆菌-大肠杆菌穿梭质粒pBCG MSA2在卡介苗 (Bac... 目的 :裂殖子表面抗原 2基因 (Merozoitesurfaceantigen 2 ,MSA2 )是恶性疟原虫的一种保护性抗原 ,为研究其重组BCG疫苗的保护作用 ,首先探讨携带有恶性疟原虫FCC 1 HN株MSA2基因的重组分枝杆菌-大肠杆菌穿梭质粒pBCG MSA2在卡介苗 (BacillusCalmetteGuerin ,BCG)中的表达情况。方法 :采用电穿孔转化法将重组质粒pBCG MSA2导入BCG中 ,通过卡那霉素抗性筛选并经PCR鉴定的重组BCG培养于Middlebrook 7H9Broth (M7H9)培养基 ,并添加 10 %M7H9EnrichmentADC和 0 0 5 %Tween80 ,4周后于 4 5℃进行诱导表达 ,表达产物进行十二烷基磺酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳 (Sodiumdodecylsulfatepolyacrylamidegelelectrophoresis,SDS PAGE)及免疫印迹 (Western blot)分析。结果 :SDS PAGE及Western blot分析结果均显示在约 31kDa的位置上可见明显的蛋白条带 ,并与MSA2基因编码序列推断的分子量相符。结论 :恶性疟原虫裂殖子表面抗原 2可在BCG中表达 。 展开更多
关键词 恶性疟原虫 FCC-1/HN株 裂殖子 表面抗原2 MSA-2 基因 卡介苗BCG 表达 穿梭质粒
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pDsRed1-C3/LOC51255真核表达质粒的构建及在HePG_(2)细胞的表达定位 被引量：3
4
作者 黄湘 谭家余 +3 位作者 邱玉林 梁文军 周铭 李明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期402-405,共4页
目的:构建pDsRed1-C3/LOC51255真核表达质粒并检测其在人肝癌细胞株HePG2中的表达和亚细胞定位。方法:采用PCR法从pET28b/LOC51255重组质粒中克隆得到LOC51255cDNA全长序列,并将该片段亚克隆到真核表达载体pDsRed1-C3中。构建好的pDsRed... 目的:构建pDsRed1-C3/LOC51255真核表达质粒并检测其在人肝癌细胞株HePG2中的表达和亚细胞定位。方法:采用PCR法从pET28b/LOC51255重组质粒中克隆得到LOC51255cDNA全长序列,并将该片段亚克隆到真核表达载体pDsRed1-C3中。构建好的pDsRed1-C3/LOC51255真核表达质粒经双酶切和测序鉴定后,采用脂质体法将该重组质粒转染人肝癌细胞株HePG2,再用荧光显微镜直接观察LOC51255在其中的表达及定位情况。结果:经双酶切及DNA测序结果证实成功构建重组质粒pDsRed1-C3/LOC51255;荧光显微镜观察证实该重组质粒能在HePG2细胞中表达,且LOC51255蛋白主要定位于HePG2细胞的细胞质。结论:成功构建pDsRed1-C3/LOC51255真核表达质粒,并在HePG2细胞中得到表达,同时证实LOC51255定位于HePG2细胞的胞质,为进一步研究人类LOC51255基因的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 真核表达质粒 HePG_(2) LOC51255 构建 表达 亚细胞定位
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SAG1和IL-2基因佐剂混合免疫诱导鼠抗弓形虫感染的研究 被引量：12
5
作者 陈观今 陈海峰 +2 位作者 郭虹 郑焕钦 汪琦 《热带医学杂志》 CAS 2002年第1期1-4,共4页
目的　了解编码SAG1的重组质粒和IL 2基因佐剂在小鼠体内的免疫反应 ,评价该疫苗对弓形虫的保护作用。方法　编码SAG1的质粒和鼠源性IL 2表达载体以 10 0 μg的剂量免疫小鼠 ,3w后两次以相同的剂量加强免疫 ,分别以PBS和空质粒 pcDNA3 ... 目的　了解编码SAG1的重组质粒和IL 2基因佐剂在小鼠体内的免疫反应 ,评价该疫苗对弓形虫的保护作用。方法　编码SAG1的质粒和鼠源性IL 2表达载体以 10 0 μg的剂量免疫小鼠 ,3w后两次以相同的剂量加强免疫 ,分别以PBS和空质粒 pcDNA3 感染。采用ELISA法测定抗体水平、亚型、IFN γ和IL 4的含量 ,PCR及原位杂交检测感染鼠中DNA的整合及降解。所有鼠均由强毒力RH株弓形虫感染。结果　SAG1表达质粒 3次免疫后鼠体内特异IgG水平明显增高 ,IL 2表达质粒的联合使用导致IgG2a水平升高和IFN γ的产生。混合质粒注射的小鼠抗弓形虫感染的存活时间延长。结论　由SAG1DNA诱导的免疫应答因IL - 2表达质粒的共同注射而增强 。 展开更多
关键词 DNA免疫 弓形虫 表面抗原1 基因佐剂 IL-2
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癌胚抗原与IL-2真核双表达质粒的构建及体外表达 被引量：4
6
作者 王中川 傅传刚 +2 位作者 王庆敏 车文良 戴建新 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2002年第3期193-196,共4页
目的 :构建癌胚抗原 (CEA)与白细胞介素 2 (IL 2 )的真核双表达质粒 ,并检测其在体外的表达。方法 :利用分子生物学技术 ,将CEA基因片段和IL 2基因片段连接于真核双表达质粒 pIRES中 ,测定序列后 ,用脂质体包裹转染细胞 ,采用ELISA双抗... 目的 :构建癌胚抗原 (CEA)与白细胞介素 2 (IL 2 )的真核双表达质粒 ,并检测其在体外的表达。方法 :利用分子生物学技术 ,将CEA基因片段和IL 2基因片段连接于真核双表达质粒 pIRES中 ,测定序列后 ,用脂质体包裹转染细胞 ,采用ELISA双抗体夹心法检测CEA和IL 2的表达。结果 :核酸序列测定证实本实验所构建的质粒正确 ,质粒上所接入的CEA和IL 2的碱基序列与标准序列的同源性分别为 99.8%和 99.9%。该双表达质粒在体外转染细胞内后可表达CEA和IL 2分子。结论 :实验所构建的 pIRES CEA IL 2双表达质粒能在体外同时表达CEA和IL 2分子 ,说明本质粒具有在细胞水平同时表达两种生物大分子的活性 。 展开更多
关键词 DNA疫苗 癌胚抗原 共表达质粒 白细胞介素2 CEA IL-2
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用DNA免疫研制鸡白细胞介素2单克隆抗体 被引量：4
7
作者 提金凤 张艳梅 +3 位作者 李志杰 宋宗好 郝贵杰 刘秀梵 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期537-540,共4页
构建鸡白细胞介素2(鸡IL-2)的真核重组质粒pcDNA-IL-2和原核重组质粒pET-IL-2,以重组质粒pcDNA-IL-2免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,以重组质粒pET-IL-2在大肠杆菌BL21(DE_3)中诱导表达的蛋白作为筛选抗原... 构建鸡白细胞介素2(鸡IL-2)的真核重组质粒pcDNA-IL-2和原核重组质粒pET-IL-2,以重组质粒pcDNA-IL-2免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,以重组质粒pET-IL-2在大肠杆菌BL21(DE_3)中诱导表达的蛋白作为筛选抗原,通过间接ELISA法对杂交瘤进行筛选,经亚克隆后共获得3株针对鸡IL-2的特异性单克隆抗体,并对这3株单克隆抗体的特性进行了鉴定。 展开更多
关键词 DNA免疫 鸡白细胞介素2 重组表达质粒
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短发夹RNA抑制肝癌细胞HepG_2 COX-2基因表达的探讨 被引量：3
8
作者 杨义明 刘预 +2 位作者 涂植光 陈亚芹 刘靳波 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期566-569,共4页
目的:研究shRNA对肝癌细胞株HepG2中COX-2基因表达的抑制作用,同时检测对细胞周期和细胞生长的影响。方法:设计、合成一对环氧化酶-2(COX-2)基因编码的反向重复序列,中间间隔9个核苷酸序列,定向克隆至质粒载体pGenesil-1,构建抑制COX-2... 目的:研究shRNA对肝癌细胞株HepG2中COX-2基因表达的抑制作用,同时检测对细胞周期和细胞生长的影响。方法:设计、合成一对环氧化酶-2(COX-2)基因编码的反向重复序列,中间间隔9个核苷酸序列,定向克隆至质粒载体pGenesil-1,构建抑制COX-2基因的短发夹RNA(short hairpin RNA shRNA)的重组表达质粒pshRNA-COX-2,用脂质体LipofectamineTM2000转染肝癌细胞HepG2,经RT-PCR和Westernblot分别检测pshRNA-COX-2重组表达质粒对COX-2mRNA和蛋白抑制效应,流式细胞仪检测细胞周期、细胞计数检测细胞生长变化。结果:pshRNA-COX-2重组表达质粒能够抑制COX-2基因表达。与未转染肝癌细胞HepG2相比,pshRNA-COX-2重组表达质粒转染肝癌细胞后,COX-2mRNA和蛋白表达明显降低,抑制率分别为69.9%和50.3%;G0-G1期细胞由55.4%上升为77.9%,S期细胞由31.1%下降为16.2%;细胞生长明显减慢。结论:构建的pshRNA-COX-2重组表达载体能够显著抑制COX-2基因表达;引起G0-G1期细胞增多,S期细胞减少,从而阻止肝癌细胞生长。 展开更多
关键词 短发夹RNA 环氧化酶-2 重组表达质粒 细胞周期
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猪IL-2真核表达质粒对猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因疫苗诱导小鼠细胞免疫增强作用的研究 被引量：7
9
作者 陈希文 程安春 +6 位作者 汪铭书 希尼尼根 豆文波 张平英 李雪梅 王刚 刘伍梅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期60-63,共4页
目的 :研究猪白细胞介素 2真核表达质粒 (pcDNA IL 2 )对猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因疫苗 (pcDNA PRRSV ORF5 )诱导BALB/c小鼠产生细胞免疫应答的影响。方法 :用pcDNA IL 2与PRRSVORF5基因疫苗 (pcDNA PRRSV ORF5 )共同免疫BALB/c小... 目的 :研究猪白细胞介素 2真核表达质粒 (pcDNA IL 2 )对猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因疫苗 (pcDNA PRRSV ORF5 )诱导BALB/c小鼠产生细胞免疫应答的影响。方法 :用pcDNA IL 2与PRRSVORF5基因疫苗 (pcDNA PRRSV ORF5 )共同免疫BALB/c小鼠 ,以空载质粒pcDNA为阴性对照 ,PBS为空白对照 ;采用流式细胞仪 (FACS)、淋巴细胞增殖试验(MTT法 )分别对小鼠外周血中CD4 + 、CD8+ T淋巴细胞数和淋巴细胞的转化功能进行了检测。结果 :pcDNA IL 2与pcDNA PRRSV ORF5共同免疫小鼠后外周血对ConA有明显的反应性 ,CD4 + 、CD8+ T淋巴细胞数在免疫后 7天显著超过对照组 ,共同组与单独pcDNA PRRSV ORF5组有显著差异 (P <0 0 1)。结论 :pcDNA PRRSV ORF5免疫小鼠能够诱导其机体产生良好的细胞免疫应答 ,猪pcDNA IL 2能够显著增强pcDNA PRRSV ORF5诱导小鼠细胞免疫的能力。 展开更多
关键词 猪白细胞介素2真核表达质粒 猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因疫苗 细胞免疫 小鼠
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猪圆环病毒2型ORF2截短基因片段真核表达载体的构建及其DNA疫苗的免疫效果 被引量：2
10
作者 张宁 李茂宁 +7 位作者 侯韶毅 兰家暖 谢丽华 黄伟坚 冯励 韦英益 刘芳 李军 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期327-332,共6页
为研究猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2截短基因片段核酸疫苗的免疫效果,以PCV-2 GXWZ-1株为模板,用PCR方法扩增出ORF2基因及其截短基因共8个片段[A(ORF2)、B(51～100 aa)、C(101～150 aa)、D(181～235 aa)、E(151～200 aa)、F(51～150 aa)、G... 为研究猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2截短基因片段核酸疫苗的免疫效果,以PCV-2 GXWZ-1株为模板,用PCR方法扩增出ORF2基因及其截短基因共8个片段[A(ORF2)、B(51～100 aa)、C(101～150 aa)、D(181～235 aa)、E(151～200 aa)、F(51～150 aa)、G(101～235 aa)、H(51～235 aa)],将其插入pcD-NA3.0载体中,成功构建了pcDNA-A、pcDNA-B、pcDNA-C、pcDNA-D、pcDNA-E、pcDNA-F、pcDNA-G、pcDNA-H。将纯化后的真核表达质粒转染PK-15细胞后,用间接免疫荧光试验检测各个质粒在细胞中的瞬时表达情况。分别用单独免疫和组合免疫的方法免疫小鼠,每只0.15 mg,用ELISA试剂盒检测小鼠血清中的抗体效价,并分析这两种方法的免疫效果。结果显示,6个片段较短的重组质粒(pcDNA-B、pcDNA-C、pcDNA-D、pcDNA-E、pcDNA-F、pcDNA-G)转染的细胞中均有明显且较亮的荧光出现,而2个片段较长的重组质粒(pcDNA-A、pcDNA-H)及空载体pcDNA3.0转染的细胞中没有荧光出现。在单独免疫组中,这8个片段的真核表达质粒都能刺激机体产生特异性抗体,其中片段较短的pcDNA-C、pcDNA-D、pcDNA-E的免疫效果比较理想;在组合免疫中,除pcDNA-C-F外,各个真核表达质粒都能产生较高水平且稳定的抗体,其中pcDNA-D-H、pcDNA-B-F的免疫效果最好。表明组合免疫要比单独免疫的效果好。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 ORF2截短基因 真核表达 重组质粒 免疫效果
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小鼠Dishevelled 2表达质粒的构建及其在RAW264.7细胞中的表达 被引量：1
11
作者 黄旭 赵鹃 +1 位作者 毛英杰 谷志远 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期306-309,313,共5页
目的构建小鼠Dishevelled 2(Dvl2)表达质粒,并检测其转染小鼠破骨前体细胞RAW264.7后的表达,为进一步研究Dvl2在破骨细胞分化和骨重建中的作用、筛选调节骨重建潜在靶点奠定基础。方法根据GenBank小鼠Dvl2 cDNA序列设计两条特异性引物,... 目的构建小鼠Dishevelled 2(Dvl2)表达质粒,并检测其转染小鼠破骨前体细胞RAW264.7后的表达,为进一步研究Dvl2在破骨细胞分化和骨重建中的作用、筛选调节骨重建潜在靶点奠定基础。方法根据GenBank小鼠Dvl2 cDNA序列设计两条特异性引物,提取RAW264.7细胞总RNA,以RT-PCR获得Dvl2的开放阅读框(ORF),并将其克隆到真核表达质粒pEZ-M29上,酶切电泳,测序鉴定构建的pEZ-M29/Dvl2质粒。用脂质体介导瞬时转染RAW264.7细胞,通过荧光显微镜观察转染效果,实时定量RT-PCR检测Dvl2基因表达情况。结果成功构建pEZ-M29/Dvl2表达载体,酶切电泳和测序结果与目的基因相符;转染RAW264.7细胞后48 h,荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白表达;实时定量RT-PCR可见实验组Dvl2基因较对照组强烈过表达。结论成功构建小鼠Dvl2真核表达质粒pEZ-M29/Dvl2,瞬时转染小鼠破骨前体细胞RAW264.7可显著提高Dvl2的mRNA水平。 展开更多
关键词 DISHEVELLED 2 表达质粒 RAW264.7细胞 破骨细胞
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IL-2/IFN-γ融合蛋白基因质粒联合HBV DNA疫苗治疗HBV转基因小鼠效果评价 被引量：3
12
作者 杨富强 陈光明 +5 位作者 饶桂荣 徐宇虹 赵勇刚 何晓嫱 孙希海 侯金林 《热带医学杂志》 CAS 2008年第5期408-411,435,F0004,共6页
目的评价融合蛋白基因质粒(pFP)联合在体电脉冲(EP)介导的HBVDNA疫苗(pS2.S)免疫HBV转基因(Tg)小鼠的治疗效果。方法HBVTg小鼠随机分成3组,每组5只,分别为pS2.S+pFP、pS2.S+pcDNA3.1免疫治疗和pcDNA3.1对照组,联合免疫质粒总剂量40μg/... 目的评价融合蛋白基因质粒(pFP)联合在体电脉冲(EP)介导的HBVDNA疫苗(pS2.S)免疫HBV转基因(Tg)小鼠的治疗效果。方法HBVTg小鼠随机分成3组,每组5只,分别为pS2.S+pFP、pS2.S+pcDNA3.1免疫治疗和pcDNA3.1对照组,联合免疫质粒总剂量40μg/只,按1∶1比例混合接种。初次免疫后第4、8周分别进行第一、二次增强免疫,免疫前后分别检测血清学、组织学及HBV特异性免疫应答。结果HBVDNA血清定量检测结果,pS2.S+pFP组免疫第8周(13317±2539)拷贝/ml、第12周(6462±3359)拷贝/ml时分别较免疫前(36159±7769)拷贝/ml明显减低,差异具有统计学意义(P<0.01);pS2.S+pcDNA3.1组第4周(20618±9523)拷贝/ml及第8周(23818±5319)拷贝/ml时均较其免疫前水平(36090±4421)拷贝/ml明显降低(P<0.01),但不能持续到12周(27691±13071)拷贝/ml,并明显高于此时pS2.S+pFP组水平,差异有统计学意义(P<0.01);观察终点(12周)pS2.S+pFP组Tg小鼠个体血清HBVDNA及肝组织HBsAg表达水平降低的同时,伴随其血清ALT水平及HBsAg特异性IFN-γ分泌细胞数目的升高。结论Th1类细胞因子IL-2/IFN-γ融合蛋白基因表达质粒能够增强HBVDNA疫苗抑制Tg鼠HBVDNA复制和表达的治疗作用。 展开更多
关键词 DNA疫苗 乙型肝炎病毒 白细胞介素-2/γ-干扰素融合蛋白基因表达质粒
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表达谷胱甘肽S转移酶-蜂毒素-^(88)精氨酸变体白细胞介素2工程菌的发酵条件研究 被引量：1
13
作者 刘明军 王斌 +3 位作者 钱冬萌 丁守怡 闫志勇 宋旭霞 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 2007年第2期84-87,共4页
目的研究重组蜂毒素-88精氨酸变体白细胞介素2(Melittin-88ArgIL-2)工程菌的发酵条件。方法采用摇瓶发酵,对含pGEX-4T-2-Melittin-88ArgIL-2重组质粒的工程菌进行诱导表达,研究诱导温度、诱导时间、诱导剂浓度、培养基的pH值等对谷胱甘... 目的研究重组蜂毒素-88精氨酸变体白细胞介素2(Melittin-88ArgIL-2)工程菌的发酵条件。方法采用摇瓶发酵,对含pGEX-4T-2-Melittin-88ArgIL-2重组质粒的工程菌进行诱导表达,研究诱导温度、诱导时间、诱导剂浓度、培养基的pH值等对谷胱甘肽S转移酶-Melittin-88ArgIL-2表达量的影响。同时研究培养温度对产物表达形式的影响。结果根据优化的条件,蛋白质的表达量占菌体总蛋白质的36%左右。结论确立了该重组melittin-88ArgIL-2工程菌的发酵条件。 展开更多
关键词 谷胱甘肽S转移酶-蜂毒素-^88精氨酸变体白细胞介素2(GST-Melittin-^88ArgIL-2) 重组质粒 表达 发酵 工程菌
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IL-2与猪瘟病毒E_2基因真核双表达载体的构建及其免疫增强作用的研究 被引量：1
14
作者 陈创夫 余兴龙 +4 位作者 乔军 马正海 李作生 涂长春 殷震 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2001年第2期90-94,共5页
应用DNA重组技术构建了猪瘟病毒E2 基因与IL 2基因的双表达真核表达载体 ,观察其表达水平 ,并对其免疫增强效果进行了观察。结果是构建了猪瘟病毒E2 基因与白细胞介素 2的真核表达质粒pIRSTIL 2。将质粒转染BHK 2 1细胞 ,可在体外表达E2... 应用DNA重组技术构建了猪瘟病毒E2 基因与IL 2基因的双表达真核表达载体 ,观察其表达水平 ,并对其免疫增强效果进行了观察。结果是构建了猪瘟病毒E2 基因与白细胞介素 2的真核表达质粒pIRSTIL 2。将质粒转染BHK 2 1细胞 ,可在体外表达E2 和有生物活性IL 2。pIRSTIL 2质粒能诱导产生CSFV的特异性免疫反应。pIRSTIL 2所诱导的免疫应答反应比使用单表达质粒pIRST强。实验表明 :IL 2与猪瘟病毒E2 展开更多
关键词 双表达质粒 IL-2 猪瘟 基因疫苗 DNA重组技术 免疫增强作用 真核表达载体
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HSV-2多功能蛋白ICP27真核表达载体构建及其在Vero细胞中的表达 被引量：2
15
作者 龙朝钦 杨慧兰 +1 位作者 张发洲 薛礼长 《中国感染控制杂志》 CAS 2011年第2期81-85,共5页
目的构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)多功能蛋白感染细胞多肽27(ICP27)真核表达载体pCDNA3.0-ICP27,并检测其在非洲绿猴肾细胞(Vero)中的表达。方法提取病毒株HSV-2333 DNA,用高保真DNA聚合酶对多功能蛋白ICP27基因进行高保真扩增,用双酶切... 目的构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)多功能蛋白感染细胞多肽27(ICP27)真核表达载体pCDNA3.0-ICP27,并检测其在非洲绿猴肾细胞(Vero)中的表达。方法提取病毒株HSV-2333 DNA,用高保真DNA聚合酶对多功能蛋白ICP27基因进行高保真扩增,用双酶切连接至真核表达载体pCDNA3.0中。pCDNA3.0-ICP27经双酶切、测序验证,并通过脂质体介导质粒瞬时转染Vero细胞,经RT-PCR和Western blot检测ICP27蛋白的表达。结果 pCDNA3.0-ICP27经双酶切可切出目的片段,测序结果经比对,与基因库中的序列完全一致。转染后经RT-PCR和Western blot检测,证实转染重组质粒组有ICP27蛋白表达,而转染空质粒组及未转染组没有检测到ICP27的表达。结论成功构建了HSV-2多功能蛋白ICP27真核表达载体pCDNA3.0-ICP27,并能在Vero细胞中表达。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒2型 疱疹 单纯 感染细胞多肽27 真核表达载体 质粒 疱疹 生殖器
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IL-2/IFN-γ融合蛋白质粒增强HBV DNA疫苗免疫原性的实验研究(英文) 被引量：2
16
作者 杨富强 陈光明 +5 位作者 饶桂荣 徐宇虹 赵勇刚 何晓嫱 孙希海 侯金林 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期838-842,846,共6页
目的评价IL-2/IFN-γ融合蛋白基因质粒(pFP)增强HBV DNA疫苗(pS2.S)免疫原性的佐剂作用。方法构建IL-2/IFN-γ融合蛋白和HBV包膜中蛋白(PreS2+S)编码基因的重组真核表达质粒,根据pFP编码的目的基因序列分子模拟IL-2/IFN-γ融合蛋白的空... 目的评价IL-2/IFN-γ融合蛋白基因质粒(pFP)增强HBV DNA疫苗(pS2.S)免疫原性的佐剂作用。方法构建IL-2/IFN-γ融合蛋白和HBV包膜中蛋白(PreS2+S)编码基因的重组真核表达质粒,根据pFP编码的目的基因序列分子模拟IL-2/IFN-γ融合蛋白的空间结构,检测质粒体外转染细胞表达目的基因产物及其生物活性;体内实验采用提高质粒转染效率的在体电脉冲(EP)技术免疫健康BALB/c小鼠,分别以ELISA及免疫酶联斑点(ELISPOT)方法检测小鼠血清抗HBs及脾脏HBsAg特异性分泌IFN-γ的淋巴细胞应答水平。结果pFP能够以融合蛋白的形式正确表达IL-2和IFN-γ,其活性域保持相对独立,其分子模拟的结果得到了质粒体外细胞转染检定实验的证实。EP介导的HBV DNA免疫反应中,pS2.S+pFP组血清抗-HBs[(51.2±50.5)mIU/mL,89%]及HBsAg特异性分泌IFN-γ的淋巴细胞应答[(207±103)IFN-rT细胞SFCs/3×105脾细胞,78%]水平和阳性率均显著高于pS2.S+pcDNA3.1组[抗-HBs:(14.8±7.6)mIU/mL,64%;IFN-γT细胞:(84±70)SFCs/3×105脾细胞,28%](P<0.05)。结论实验结果提示Th1型细胞因子IL-2和IFN-γ的融合蛋白基因表达质粒可提高HBV DNA疫苗的免疫效果,并促进初始T细胞向Th1方向分化。 展开更多
关键词 DNA疫苗 乙型肝炎病毒(HBV) 白细胞介素-2(IL-2)/γ-干扰素(IFN-γ)融合蛋白表达质粒(pFP) 在体电转染(EP)
暂未订购
山地乌骨鸡IL-2、IL-15、IL-18及IFN-γ真核表达载体构建及其对IBV DNA疫苗免疫增强作用研究 被引量：1
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作者 胡慧琼 王红宁 +4 位作者 周生 李晓英 黄勇 柳萍 徐永莉 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1056-1062,共7页
利用RT-PCR法从刺激的山地乌骨鸡的外周淋巴细胞及脾脏组织总RNA中扩增出与鸡IL-2、IL-15、IL-18及IFN-γ基因预期大小的DNA片段,并与pcDNA3.1连接构建了真核表达质粒pDNAIL2、pDNAIL15、pDNAIL18及pDNAIFN-γ.研制了4种分子免疫佐剂,... 利用RT-PCR法从刺激的山地乌骨鸡的外周淋巴细胞及脾脏组织总RNA中扩增出与鸡IL-2、IL-15、IL-18及IFN-γ基因预期大小的DNA片段,并与pcDNA3.1连接构建了真核表达质粒pDNAIL2、pDNAIL15、pDNAIL18及pDNAIFN-γ.研制了4种分子免疫佐剂,对通过检测血清总IgG值、CD4＋、CD8＋百分含量,研究了４种分子免疫佐剂对禽传染性支气管炎DNA疫苗的免疫增强作用.并对pDNAIL2在鸡胚成纤维细胞中的表达进行了研究.研究发现,所有分子佐剂和DNA疫苗联合接种试验组鸡血清总IgG值、CD4＋T及CD8＋T淋巴细胞含量从5天后就一直高于DNA疫苗单独注射组,并在15天和21天时出现差异显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）.结果表明,IL-2、IL-15、IL-18及IFN-γ对IBV DNA疫苗有免疫增强作用,且pDNAIL2在体外得到了表达. 展开更多
关键词 山地乌骨鸡 白细胞介素2 白细胞介素15 白细胞介素18 γ-干扰素 真核表达载体 DNA疫苗
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bcl-2/EGFP融合基因真核表达质粒的构建 被引量：1
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作者 彭树英 安志兴 张涌 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2004年第12期65-68,共4页
　为深入研究bcl 2对细胞凋亡的调控机制和肿瘤发生发展的影响,应用基因重组手段,根据表达载体pEGFP C1上的多克隆位点和bcl 2基因序列设计了1对引物,对含有bcl 2基因的质粒pWB bcl进行了PCR扩增,得到了708bp的目的片断。将其克隆到pMD1... 　为深入研究bcl 2对细胞凋亡的调控机制和肿瘤发生发展的影响,应用基因重组手段,根据表达载体pEGFP C1上的多克隆位点和bcl 2基因序列设计了1对引物,对含有bcl 2基因的质粒pWB bcl进行了PCR扩增,得到了708bp的目的片断。将其克隆到pMD18 Tvector,筛选阳性克隆并测序,序列分析表明,其与原初序列同源性达99%。将bcl 2插入到载体启动子下游,与报告基因绿色荧光蛋白(EnhancerGreenFluorescentProtein,EGFP)融合,经限制性内切酶酶切和PCR鉴定,证明Bcl 2/EGFP真核表达质粒构建成功。 展开更多
关键词 BCL-2 绿色荧光蛋白 真核表达质粒
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bcl-2基因克隆、转染及其在PC12细胞中的表达 被引量：1
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作者 吴永青 刘彦文 +1 位作者 邱鹏新 葛坚 《中山医科大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第2期99-102,共4页
【目的】研究bcl 2基因 (bcl 2 )在PC12细胞中的表达。【方法】构建真核表达载体pcDNA3 bcl 2 ,采用脂质体介导将重组质粒导入PC12细胞 ,Westernblot和原位免疫组化检测外源基因表达。【结果】本实验成功构建了真核表达载体pcDNA3 bcl ... 【目的】研究bcl 2基因 (bcl 2 )在PC12细胞中的表达。【方法】构建真核表达载体pcDNA3 bcl 2 ,采用脂质体介导将重组质粒导入PC12细胞 ,Westernblot和原位免疫组化检测外源基因表达。【结果】本实验成功构建了真核表达载体pcDNA3 bcl 2 ,并用脂质体介导的方法获得了稳定表达bcl 2的细胞克隆 ;Westernblot显示有 2 6ku的蛋白质表达 ,bcl 2单克隆抗体免疫组化染色呈阳性反应。【结论】重组质粒 pcDNA3 bcl 2经转染能够在PC12细胞中有效表达 ,为进一步研究 bcl 2对PC12细胞的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 重组DNA 质粒pcDNA3-bcl-2 PC12细胞 基因表达 神经退行性疾病 基因治疗 BCL-2基因 基因克隆 基因转染
暂未订购
α2巨球蛋白cDNA片段-增强型绿色荧光蛋白质粒的构建 被引量：1
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作者 刘之荣 范文辉 李露斯 《西北国防医学杂志》 CAS 2006年第6期408-410,共3页
目的:构建α2巨球蛋白cDNA片段(FP6)-增强型绿色荧光蛋白(pEBFP)质粒(pEBFP/FP6双表达质粒)。方法:利用PCR技术克隆出FP6,将其克隆至pMD18-T载体中,再通过分子克隆技术将FP6插入pEBFP表达基因中,构建pEBFP/FP6质粒,双酶切和测序鉴定。结... 目的:构建α2巨球蛋白cDNA片段(FP6)-增强型绿色荧光蛋白(pEBFP)质粒(pEBFP/FP6双表达质粒)。方法:利用PCR技术克隆出FP6,将其克隆至pMD18-T载体中,再通过分子克隆技术将FP6插入pEBFP表达基因中,构建pEBFP/FP6质粒,双酶切和测序鉴定。结果:PCR方法能克隆FP6,并成功构建pEBFP/FP6质粒,双酶切和测序结果表明构建的pEBFP/FP6质粒完全符合设计要求。结论:利用PCR、酶切、连接反应等基因克隆手段,可以构建pEBFP/FP6双表达质粒。 展开更多
关键词 质粒 Α2巨球蛋白 增强型绿色荧光蛋白 基因克隆
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