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CLONING AND EXPRESSION OF SPODOPTERA LITURA UBIQUITIN GENE 被引量:2
1
作者 李朝飞 龚映雪 +2 位作者 师永霞 潘丽晶 庞义 《Entomologia Sinica》 CSCD 2003年第1期27-34,共8页
Ubiquitin (UBI) plays a very important role in regulated non-lysosoma l ATP dependent protein degradation. In the present work, the coding sequence of Spodoptera litura UBI gene was isolated (GenBank Accession No. AF4... Ubiquitin (UBI) plays a very important role in regulated non-lysosoma l ATP dependent protein degradation. In the present work, the coding sequence of Spodoptera litura UBI gene was isolated (GenBank Accession No. AF436066). Th e le ngth of this ORF is 228bp, encoding a protein with Mr of 8.56 kD and isoelectri c point of 6.56. Multiple sequence alignment indicated that S.litura UBI is very similar to the homologous proteins of other eukaryotic species and it has 84% id entity with S.litura nucleopolyhedrovirus (SpltMNPV) UBI at amino acid level . RT -PCR analysis showed that S.litura UBI gene is ubiquitously expressed in la rva t issues which are susceptible to SpltMNPV infection. By constructing E.coli e xpre ssion vector, S.litura UBI was highly expressed and the recombinant protein was purified using Ni-NTA resin column, and currently further study on the function of S.litura UBI in SpltMNPV infection is underway. 展开更多
关键词 Spodoptera litura UBIQUITIN gene cloning gene expressi on
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禽网状内皮组织增生症病毒囊膜糖蛋白gp90的原核表达 被引量:16
2
作者 吉荣 崔治中 +3 位作者 丁家波 秦爱建 刘岳龙 金文杰 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期28-30,共3页
根据禽网状内皮组织增生症病毒 (REV) SNV株的前病毒基因组 c DNA序列 ,设计并合成 1对引物 ,以 SNV株前病毒 c DNA全基因组克隆为模板 ,通过 PCR技术 ,扩增出该病毒囊膜糖蛋白 (env) gp90基因部分片段。将 PCR产物按正确的阅读框架定... 根据禽网状内皮组织增生症病毒 (REV) SNV株的前病毒基因组 c DNA序列 ,设计并合成 1对引物 ,以 SNV株前病毒 c DNA全基因组克隆为模板 ,通过 PCR技术 ,扩增出该病毒囊膜糖蛋白 (env) gp90基因部分片段。将 PCR产物按正确的阅读框架定向克隆进 p GEX- 5 X- 3载体中谷胱甘肽 - S-转移酶 (GST)的下游 ,将重组质粒转化进宿主菌BL2 1 中 ,在 1.0 mm ol/ L IPTG(37℃ )诱导下 ,gp90基因部分片段以融合蛋白的形式获得了良好的表达。表达产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定 ,确定其表达的融合蛋白相对分子质量为 6 40 0 0。将表达产物从凝胶中回收后免疫小鼠 ,所得的抗血清可与 REV野毒株感染的鸡胚成纤维细胞 (CEF)在免疫荧光试验中起反应。由此表明 ,体外表达的 SNV株gp90 - GST融合蛋白保留了天然蛋白所具有的抗原性。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 囊膜糖蛋白gp90 原核表达
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茵陈五苓散抗大鼠动脉粥样硬化作用机理探讨 被引量:17
3
作者 王东生 唐发清 +4 位作者 肖长江 陈方平 袁肇凯 黄献平 郭志华 《中医杂志》 CSCD 北大核心 2008年第1期67-69,共3页
目的探讨茵陈五苓散对动脉粥样硬化大鼠的作用机理。方法70只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、茵陈五苓散组、绞股蓝组。采用高脂饲料喂饲法复制大鼠动脉粥样硬化模型,治疗1个月后分别检测血脂、血液流变学、主动脉组织学及超微... 目的探讨茵陈五苓散对动脉粥样硬化大鼠的作用机理。方法70只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、茵陈五苓散组、绞股蓝组。采用高脂饲料喂饲法复制大鼠动脉粥样硬化模型,治疗1个月后分别检测血脂、血液流变学、主动脉组织学及超微结构变化、血管平滑肌细胞(VSMC)bcl-2 mRNA的表达。结果茵陈五苓散降低总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇,升高高密度脂蛋白胆固醇,降低血液黏度、红细胞压积、血小板黏附率,维持主动脉组织结构,下调基因bcl-2 mRNA的表达均优于绞股蓝。结论茵陈五苓散具有良好的抗动脉粥样硬化作用,其下调相关基因bcl-2 mRNA的表达可能是其作用机理。 展开更多
关键词 茵陈五苓散 动脉粥样硬化 血管平滑肌细胞 基因表达 血脂 血液黏度
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二硫代氨基吡咯烷和维生素C对急性胰腺炎模型大鼠胰肝细胞粘附分子及超氧化物歧化酶表达的影响 被引量:6
4
作者 李学礼 李永渝 +3 位作者 杨翠香 张红 姚红 朱玲 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第10期1331-1336,共6页
目的 :探讨二硫代氨基吡咯烷 (PDTC)和维生素C(VitC)对急性胰腺炎 (AP)模型大鼠胰腺及肝脏中超氧化物歧化酶 (SOD :Mn -SOD ,Cu ,Zn -SOD)和细胞粘附分子 (ICAM - 1)表达的影响。方法 :经十二指肠壁进入胰管开口处 ,逆行加压注入 3%牛... 目的 :探讨二硫代氨基吡咯烷 (PDTC)和维生素C(VitC)对急性胰腺炎 (AP)模型大鼠胰腺及肝脏中超氧化物歧化酶 (SOD :Mn -SOD ,Cu ,Zn -SOD)和细胞粘附分子 (ICAM - 1)表达的影响。方法 :经十二指肠壁进入胰管开口处 ,逆行加压注入 3%牛磺脱氧胆酸钠复制大鼠AP模型。模型随机分为 3组 :AP +生理盐水 (NS)组、AP +PDTC组和AP +VitC组 ,并在复制模型手术后 10min和 5h按分组给药。另设假手术组。各实验组于术后 1、5、10h取胰腺和肝脏 ,采用RT -PCR方法测定其ICAM - 1及Mn -SOD、Cu ,Zn -SOD的表达。结果 :AP +NS组胰腺和肝脏ICAM - 1表达高于假手术组 (P <0 0 5 ) ,胰腺Cu ,Zn -SOD表达低于假手术组 (P <0 0 5 )。AP +PDTC组和AP +VitC组胰腺Mn -SOD、Cu ,Zn -SOD表达高于AP +NS组 (P <0 0 5 ,P <0 0 1)。AP +PDTC组胰肝ICAM - 1表达低于AP+NS组 (P <0 0 5 )。结论 :结果提示 ,PDTC和VitC缓解AP的作用机制在于不仅它们自身是抗氧化剂 ,而且它们促进SOD的表达 ,同时PDTC还具有抑制ICAM - 1表达的作用。 展开更多
关键词 胞内粘附分子1 超氧化物歧化酶 逆转录聚合酶链反应 基因表达 急性坏死性胰腺炎 大鼠
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大肠杆菌苯丙氨酸生物合成关键酶的串联表达 被引量:1
5
作者 刘云 梁学颖 +2 位作者 刘志红 徐琪寿 马立人 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2000年第4期7-10,共4页
aroG基因编码的 3-脱氧-2-阿拉伯庚酮糖-7-磷酸合成酶(DAHP Synthetase DS)和 pheA基因编码的分支酸变位酶/预苯酸脱水酶(Chorimate mutase/ Prephenate dehyd... aroG基因编码的 3-脱氧-2-阿拉伯庚酮糖-7-磷酸合成酶(DAHP Synthetase DS)和 pheA基因编码的分支酸变位酶/预苯酸脱水酶(Chorimate mutase/ Prephenate dehydratase,CW/PD)都是本丙氨酸合成途径中的关键酶,为了通过基因工程手段来增加本丙氨酸生物的产量,在利用高效的原核表达载体pBV22 0对pheA基因编码的CM/ PD 酶进行了表达的基础上,采用PCR方法扩增了抗反馈抑制的arcG基因,进行克隆表达,并与pheA基因串联,以PRPL-aroG-PL-pheA的形式,实现了2种酶基因在大肠杆菌中的表达, SDSPAGE 图谱显示了新增的43ku及35ku蛋白带,经酶活性测定DS、CM/PD酶的比活分别提高了 4.67倍、805/10.71倍。 展开更多
关键词 苯丙氨酸 关键酶 串联表达 生物合成 大肠杆菌
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新城疫病毒HN蛋白基因真核表达载体的构建及其表达 被引量:1
6
作者 丁壮 金宁一 +6 位作者 王兴龙 金扩世 王宏伟 吕杰 李太元 米志强 殷震 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第S1期15-17,共3页
将质粒pKSHNS、pKSHNC、pKSHNQ、pKSHNL和 pKSHNB利用 BamHI和 XbaI双酶切后回收。将转座载体 pFast BacI同样方法酶切、回收。分别将回收的 HNS、HNC、HNQ、HNL、HNB... 将质粒pKSHNS、pKSHNC、pKSHNQ、pKSHNL和 pKSHNB利用 BamHI和 XbaI双酶切后回收。将转座载体 pFast BacI同样方法酶切、回收。分别将回收的 HNS、HNC、HNQ、HNL、HNB与 pFast BacI连接,使目的基因亚克隆到 pFast BacI上的 ocu基因启动子下游的 MCS上,然后转化 E. coli DH5a,以 LB/AMP+ GM平板筛选阳性重组子,经酶切鉴定,再转化至 E. coli DH10Bac感受态细胞中,经抗性培养和蓝白斑筛选,挑取白色菌落为阳性重组表达载体,经酶切鉴定后,分别命名为BacmidHNS、BacmidHNC、BacmidHNL和BacmidHNB.经小量提取后,转染sf-9细胞,27℃培养72小时,应用 SDS-PAGE和 Western-blot检测和鉴定表达的 HN蛋白。结果表明,本研究成功地构建了 Bacmid HN重组表达载体,并在 sf-9昆虫细胞中表达了 NDVHN基因,SDS-PAGE出现一条特异性泳带,约74ku,Westemblot结果出现一条杂交带,分子量与之相同,进一步证明构建的重组表达载体表达了NDVHN基因。 展开更多
关键词 新城疫病毒 HN基因 真核表达载体 构建 表达
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外源野生型p53基因表达对人肺癌细胞药物敏感性影响 被引量:3
7
作者 张洪涛 汪蕙赖 +2 位作者 百塘 张春燕 扬学惠 《中国肺癌杂志》 CAS 2000年第3期166-169,共4页
目的 了解外源野生型p5 3(wild typep5 3 ,wtp5 3)基因表达对人大细胞肺癌 80 1 D细胞对化疗药物敏感性的影响。方法 选用p5 3基因突变的人大细胞肺癌 80 1 D系。用脂质体介导构建的含wtp5 3基因载体转染 80 1 D细胞 ,PCR检测外源wtp... 目的 了解外源野生型p5 3(wild typep5 3 ,wtp5 3)基因表达对人大细胞肺癌 80 1 D细胞对化疗药物敏感性的影响。方法 选用p5 3基因突变的人大细胞肺癌 80 1 D系。用脂质体介导构建的含wtp5 3基因载体转染 80 1 D细胞 ,PCR检测外源wtp5 3在宿主细胞存在情况 ,3H TdR掺入法测定 80 1 D细胞转染wtp5 3后药物敏感性变化 ,流式细胞仪 (FACS)分析细胞死亡情况。结果 转染wtp5 3在 80 1 D细胞有效表达 ,FACS分析转染细胞死亡率为 2 0 .1%。对多种抗癌药物筛选 ,转染wtp5 3细胞对顺铂和5 氟脲嘧啶敏感性分别提高 9.7和 11.4倍 ,对非DNA损伤制剂和其它DNA损伤制剂的敏感性无变化 ;DNA断裂电泳分析和形态学观察显示细胞呈坏死特征。结论 wtp5 3可选择性增加 80 1 D细胞对某些DNA损伤制剂的敏感性 ,其调节机制可能以非凋亡途径为主 。 展开更多
关键词 肺肿瘤 野生型P53基因 有达 药敏试验
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幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位融合蛋白表达的研究 被引量:1
8
作者 冉向阳 邹全明 +1 位作者 毛旭虎 王缚鲲 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期41-45,共5页
目的 获得大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位 (LTB)与幽门螺杆菌保护性抗原热休克蛋白A亚单位 (HspA)的融合蛋白。方法 PCR扩增ltB和hspA基因 ,依次构建至表达载体pIM 1,转化大肠杆菌 ,SDS PAGE、免疫印迹分析目的蛋白表达情况。采用GM1 EL... 目的 获得大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位 (LTB)与幽门螺杆菌保护性抗原热休克蛋白A亚单位 (HspA)的融合蛋白。方法 PCR扩增ltB和hspA基因 ,依次构建至表达载体pIM 1,转化大肠杆菌 ,SDS PAGE、免疫印迹分析目的蛋白表达情况。采用GM1 ELISA和D(+) 半乳糖亲和层析方法检测重组LTB HspA融合蛋白LTB组分与GM1 神经节苷脂结合活性。结果 重组LTB HspA融合蛋白表达量最高可达细菌总蛋白的 2 5 %。免疫印迹检测结果证实为重组LTB HspA融合蛋白。GM1ELISA和D(+) 半乳糖亲和层析方法检测结果证实重组LTB HspA融合蛋白具有与GM1 神经节苷脂结合的活性。结论 LTB HspA融合蛋白的表达研究 。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 热休克蛋白A亚单位 大肠杆菌不耐热毒素B亚单位 融合蛋白 重组表达
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高密度cDNA微阵列技术检测乳腺癌差异表达基因 被引量:1
9
作者 张林杰 王曦 罗畅民 《安徽医科大学学报》 CAS 2003年第1期9-11,共3页
目的 描绘乳腺癌的基因差异表达谱 ,以寻找乳腺癌新的肿瘤相关候选基因和分子标志。方法 用含 1 4 0 0 0个cDNA克隆的表达微阵列检测乳腺癌组织、乳腺癌旁组织及乳腺非癌组织的mRNA表达 ,并分析其表达的差异。结果 乳腺癌组织与乳腺... 目的 描绘乳腺癌的基因差异表达谱 ,以寻找乳腺癌新的肿瘤相关候选基因和分子标志。方法 用含 1 4 0 0 0个cDNA克隆的表达微阵列检测乳腺癌组织、乳腺癌旁组织及乳腺非癌组织的mRNA表达 ,并分析其表达的差异。结果 乳腺癌组织与乳腺非癌组织比较有 80个差异表达基因 ,乳腺癌组织与乳腺癌旁组织比较有 57个差异表达基因 ,乳腺癌旁组织与乳腺非癌组织比较有 2 9个差异表达基因 ,在乳腺癌组织与乳腺非癌组织和乳腺癌旁组织比较中有 1 4个差异表达基因是一致的。结论 用微阵列技术对乳腺癌的肿瘤相关基因和分子标志作初步探索 ,为了解中国女性乳腺癌发生发展的分子机制。 展开更多
关键词 高密度cDNA微阵列技术 检测 乳腺癌 差异表达基因 基因表达 诊断 治疗
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空间尺度的创新表达 被引量:6
10
作者 彭曲云 范伟 《家具与室内装饰》 2010年第3期62-63,共2页
人从主客观的空间需求入手,不断地对空间尺度进行着创新性理解,使功能性的客观尺度、人享尺度能更好地结合,以做出个性表达的创新尺度设计,并随时代进步,规划出管理社会的有效尺度。
关键词 功能性的客观尺度 人享尺度 创新表达
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Fas/APO-1基因真核表达质粒的构建 被引量:1
11
作者 张德海 肖冰 《西北国防医学杂志》 CAS 2001年第2期163-164,共2页
目的 :构建凋亡信号受体Fas/APO - 1基因真核表达质粒 ,为进一步研究Fas/APO - 1在肿瘤细胞凋亡中的作用提供物质基础。方法 :将质粒pBluscript-FascDNA酶切后 ,回收DNA片段并提纯 ;用连接酶连接到真核表达载体pBK CMV内 ,克隆出重组基... 目的 :构建凋亡信号受体Fas/APO - 1基因真核表达质粒 ,为进一步研究Fas/APO - 1在肿瘤细胞凋亡中的作用提供物质基础。方法 :将质粒pBluscript-FascDNA酶切后 ,回收DNA片段并提纯 ;用连接酶连接到真核表达载体pBK CMV内 ,克隆出重组基因载体pBK FascDNA。结果 :原始质粒pBluscript-FascDNA及重组质粒pBK -FascDNA酶切后 ,凝胶电泳鉴定均含有大小正确的Fas/APO - 1碱基片段。结论 :本实验成功地构建了Fas/APO - 1基因的真核表达质粒。 展开更多
关键词 基因 FAS/APO-1 真核表达载体 质粒
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血管生成抑素的原核表达及纯化
12
作者 傅赞 吴月 +3 位作者 李艳丽 朱自路 赵翰林 陈丙莺 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期403-405,共3页
目的 :构建血管生成抑素 ( angiostatin)的原核表达载体 ,并转入大肠杆菌 BL 2 1中诱导表达并纯化。方法 :设计引物扩增 angiostatin的 c DNA,然后亚克隆入原核表达载体 p ET3 2 a,并转化入大肠杆菌 BL2 1中诱导表达。结果 :通过重组质... 目的 :构建血管生成抑素 ( angiostatin)的原核表达载体 ,并转入大肠杆菌 BL 2 1中诱导表达并纯化。方法 :设计引物扩增 angiostatin的 c DNA,然后亚克隆入原核表达载体 p ET3 2 a,并转化入大肠杆菌 BL2 1中诱导表达。结果 :通过重组质粒酶切和测序分析等方法 ,筛选出重组阳性克隆 ,转化入大肠杆菌 BL 2 1中诱导表达 ,并纯化成功。结论 :通过构建的原核表达 ,获得了纯化的 展开更多
关键词 生长因子 血管生成抑素 原核表达 纯化 肿瘤
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人骨形态发生蛋白-2重组腺病毒的构建与制备
13
作者 刘继中 纪宗玲 +3 位作者 朱帮福 陶惠人 胡蕴玉 陈苏民 《生物技术通讯》 CAS 2003年第1期16-19,共4页
将人BMP-2的编码区cDNA克隆至穿梭载体pShuttle,以PI-SceI和I-CeuI切下含BMP-2编码区cDNA的片断,在体外与PI-SceI/I-CeuI切开的腺病毒DNA连接,构建重组有BMP-2全长编码区基因的腺病毒DNA,PCR鉴定正确后,经PacI酶切线性化,在脂质体介导... 将人BMP-2的编码区cDNA克隆至穿梭载体pShuttle,以PI-SceI和I-CeuI切下含BMP-2编码区cDNA的片断,在体外与PI-SceI/I-CeuI切开的腺病毒DNA连接,构建重组有BMP-2全长编码区基因的腺病毒DNA,PCR鉴定正确后,经PacI酶切线性化,在脂质体介导下转染HEK293细胞,反复冻融制备重组腺病毒,空斑形成试验测定病毒滴度约为7.5×106~1.5×107pfu/ml。以BMP-2重组腺病毒感染体外培养的小鼠成肌细胞C2C12,Westernblot检测证实有BMP-2表达。 展开更多
关键词 人骨形态发生蛋白-2 重组腺病毒 构建 制备 基因表达
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豆粕对松浦镜鲤肠黏膜能量代谢、肠道健康相关基因表达的影响及α-酮戊二酸缓解作用 被引量:3
14
作者 赵静怡 金检生 +3 位作者 杨丽丽 陈丽萍 叶金云 徐奇友 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期146-158,共13页
为探究豆粕对松浦镜鲤肠道健康及能量水平的影响及AKG缓解肠道损伤的作用机制。选取初始体重为(9.51±0.06)g松浦镜鲤幼鱼609尾,随机分为7组,每组3个重复,每缸29尾鱼。对照组(FM)饲喂30.8%鱼粉为蛋白源饲料,实验组以40%豆粕为基础饲... 为探究豆粕对松浦镜鲤肠道健康及能量水平的影响及AKG缓解肠道损伤的作用机制。选取初始体重为(9.51±0.06)g松浦镜鲤幼鱼609尾,随机分为7组,每组3个重复,每缸29尾鱼。对照组(FM)饲喂30.8%鱼粉为蛋白源饲料,实验组以40%豆粕为基础饲料(SM),AKG组、Met组和Com组分别在SM基础上添加1%AKG、300 mg/kg Metformin和0.2 mg/kg Compound-c,Met+AKG组和Com+AKG组为在AKG组上分别添加Metformin和Compound-c。实验共59 d。结果显示,与FM组比,SM组后肠黏膜ATP和ADP含量显著升高;前肠ACC、TNF-α、IL-1β、TGFβ2、caspase9、Claudin7、Claudin11、Claudin3c、Occludin,中肠AMPK-α、TOR、ACC、IL-1β、TGFβ1、Caspase8、Claudin7、Occludin及后肠TGFβ1、Caspase8、Caspase9基因表达显著降低;后肠TNF-α、Claudin11、Claudin3c和Occludin显著升高。与SM组比,AKG组前肠TGFβ1、Claudin7、Claudin11,前肠及中肠TOR显著升高;中肠caspase8、TNF-α、Claudin11,后肠Claudin11、Occludin显著降低。Met组和Com组上调后肠ADP和AMP含量。Met组上调前肠AMPK-α、TNF-α、IL-1β、Caspase9、Claudin7、Claudin11、Claudin3c,中肠TGFβ1、Claudin11,后肠IL-1β、Claudin7,中肠及后肠TOR表达量;下调后肠Occludin表达量;Com组上调前肠Occludin表达量,下调中肠及后肠Claudin11和后肠Occludin表达量。与AKG组相比,Com+AKG组后肠ATP、ADP及AMP含量和Met+AKG组后肠ADP含量均显著升高。Met+AKG、Com+AKG降低前肠Claudin7、Claudin11和中肠TOR的表达量。Met+AKG上调前肠caspase8、中肠Claudin11和后肠Claudin7表达量。Com+AKG显著提高后肠Claudin11和Occludin表达量。研究表明,豆粕降低前肠及中肠能量水平,抑制AMPK-α和TOR表达,降低前肠及中肠紧密连接蛋白的基因表达;引起后肠肠道炎症。AKG通过提高前肠TOR、紧密连接、抗炎因子的表达,减少中肠及后肠促炎因子的产生,减缓中肠及后肠的细胞凋亡,缓解豆粕对鲤肠道的损伤。 展开更多
关键词 松浦镜鲤 豆粕 Α-酮戊二酸 能荷水平 基因表达
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石榴赤霉素合成相关基因PgKO的克隆及表达分析
15
作者 黄蓉 刘娜 +2 位作者 王琦 熊枫 张水明 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期631-636,共6页
该研究以‘红玉石籽’(Punica granatum cv.Hongyushizi)石榴为试验材料,采用RT-PCR和RACE技术,从石榴花中克隆得到赤霉素合成关键酶——内根贝壳杉烯氧化酶(KO)基因,命名为PgKO(GenBank登录号为MG208017)。PgKO全长cDNA为1 729bp,包含1... 该研究以‘红玉石籽’(Punica granatum cv.Hongyushizi)石榴为试验材料,采用RT-PCR和RACE技术,从石榴花中克隆得到赤霉素合成关键酶——内根贝壳杉烯氧化酶(KO)基因,命名为PgKO(GenBank登录号为MG208017)。PgKO全长cDNA为1 729bp,包含1 542bp开放阅读框(ORF),编码513个氨基酸,相对分子量为141.16kD,理论等电点为4.9。多重序列对比显示,PgKO与苹果MdKO、白梨PcKO、葡萄VvKO的相似性分别为61.28%、64.56%和73%,并且具有CYP450结构域(脯氨酸富含域、氧还原位点和血红素结合域)。系统进化树分析表明,PgKO与其他物种的起源相同,并与桉树EgKO的亲缘关系最近。荧光定量PCR发现,在石榴蕾期和盛花期,PgKO基因的表达量均为筒状花高于钟状花,且PgKO基因在两种花型的子房、花药、花萼中均有表达,但筒状花中子房的表达量最高,花萼的表达量最低;钟状花中花药的表达量最高,子房的表达量最低。 展开更多
关键词 石榴 内根-贝壳杉烯氧化酶(KO) 基因克隆 基因表
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缺氧时内皮细胞中血管内皮生长因子受体的表达 被引量:4
16
作者 张曼 沈乐 周爱儒 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期197-199,共3页
目的 探讨脐带静脉内皮细胞在缺氧条件培养下血管内皮生长因子特异受体的表达 ,为进一步研究血管内皮生长因子及其受体在新血管生成中的作用提供理论依据。方法 体外培养脐带静脉内皮细胞 ,不同缺氧时间处理及血管活性因子刺激 ,提取... 目的 探讨脐带静脉内皮细胞在缺氧条件培养下血管内皮生长因子特异受体的表达 ,为进一步研究血管内皮生长因子及其受体在新血管生成中的作用提供理论依据。方法 体外培养脐带静脉内皮细胞 ,不同缺氧时间处理及血管活性因子刺激 ,提取组织总RNA ,应用Northern杂交和逆转录聚合酶连扩增反应 (RT PCR)等方法 ,观察基因表达的变化。结果 内皮细胞无缺氧和缺氧 3h均未见flt 1表达 ,缺氧 6h可见flt 1摸板核糖核酸 (mRNA)的表达。内皮细胞缺氧 6h ,内皮素 (ET)、一氧化氮 (NO)、LNNA对flt 1表达有影响。ET促进flt 1mRNA的表达 ,NO抑制其表达 ,而LNNA部分恢复其表达。在无缺氧和缺氧 3,6hKDR基因均有表达。内皮细胞缺氧 6h ,ET、NO、LNNA对KDR无影响。LNNA阻断了内源性NO后 ,明显促进KDRmRNA的表达 ,其他无作用。结论 在缺氧条件下血管内皮细胞生长因子的受体flt 1表达明显增加并受血管活性因子调节 。 展开更多
关键词 内皮生长因子 低氧 基因表达 血管生成 血管内皮细胞生长因子受体 VEGF RT-PCR技术
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人博卡病毒VP2蛋白的原核表达及血清学检测方法的建立 被引量:3
17
作者 蒿叶霞 高基民 +7 位作者 金玉 李晓乐 李金松 谢志萍 敖元云 陈惜倩 陈克娜 段招军 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2012年第1期18-21,共4页
目的获得高表达量的人博卡病毒(HBoV1、HBoV2)VP2蛋白,建立血清学检测方法。方法按照大肠埃希菌密码子使用偏性,对HBoV1、HBoV2VP2衣壳蛋白基因编码区序列进行优化合成。将合成的目的基因克隆至表达载体pET30a,构建重组表达质粒pET... 目的获得高表达量的人博卡病毒(HBoV1、HBoV2)VP2蛋白,建立血清学检测方法。方法按照大肠埃希菌密码子使用偏性,对HBoV1、HBoV2VP2衣壳蛋白基因编码区序列进行优化合成。将合成的目的基因克隆至表达载体pET30a,构建重组表达质粒pET30a-VP2,转化大肠埃希菌BL21(DE3),使用IPTG诱导表达并摸索最佳表达条件;粗提取蛋白进行Ni亲和层析纯化后建立间接酶联免疫吸附试验(ELISA),进行临床血清标本筛查,分析人群HBoV1、HBoV2感染情况。结果优化合成的HBoV1、HBoV2VP2基因正确连接至pET30a载体,开放阅读框正确,用1mmol/LIPTG过夜诱导表达(25℃)得到高表达量的VP2蛋白,目的蛋白主要以包涵体的形式存在。粗提取蛋白经Ni—NTA亲和层析,在pH4.5时获得较理想的纯化蛋白,以其为抗原建立ELISA检查方法,筛查临床血清标本IgG抗体水平,结果显示健康儿童HBoV1阳性率为62.2%,HBoV2阳性率为55.5%,混合感染率为37%。结论本研究成功将H-BoV1、HBoV2VP2衣壳蛋白基因编码区序列进行优化,得到了较高的蛋白表达量,所建立的ELISA法可以应用于HBoV1、HBoV2人群血清流行病学调查。 展开更多
关键词 人博卡病毒 密码子 表达的序列标记 流行病学 分子 酶联免疫吸附试验
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Auto-regulatory feedback by RNA-binding proteins 被引量:5
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作者 Michaela Muller-McNicoll Oliver Rossbach +1 位作者 Jingyi Hui Jan Medenbach 《Journal of Molecular Cell Biology》 SCIE CAS CSCD 2019年第10期930-939,共10页
RNA-binding proteins(RBPs)are key regulators in post-transcriptional control of gene expression.Mutations that alter their activity or abundance have been implicated in numerous diseases such as neurodegenerative diso... RNA-binding proteins(RBPs)are key regulators in post-transcriptional control of gene expression.Mutations that alter their activity or abundance have been implicated in numerous diseases such as neurodegenerative disorders and various types of cancer.This highlights the importance of RBP proteostasis and the necessity to tightly control the expression levels and activities of RBPs.In many cases,RBPs engage in an auto-regulatory feedback by directly binding to and influencing the fate oftheirown mRNAs,exerting control over their own expression.For this feedback control,RBPs employ a variety of mechanisms operating at all levels of posttranscriptional regulation of gene expression.Here we review RBP-mediated autogenous feedback regulation that either serves to maintain protein abundance within a physiological range(by negative feedback)or generates binary,genetic on/off switches important for e.g.cell fate decisions(by positive feedback). 展开更多
关键词 AUTOGENOUS REGULATION protein HOMEOSTASIS RNA-BINDING proteins POST-TRANSCRIPTIONAL REGULATION of gene expressi on
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