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题名肿瘤细胞胞外囊泡DNA特征分析
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作者
陈思宇
章运生
裴超柱
谭拥军
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机构
中南林业科技大学生命科学与技术学院
湖南大学生物学院
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出处
《激光生物学报》
CAS
2024年第2期151-159,共9页
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基金
国家自然科学基金项目(81773169)。
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文摘
从肺腺癌A549细胞培养上清液中分离胞外囊泡(EVs),通过动态光散射(DLS)和透射电镜(TEM)分析得到EVs的大小约为100 nm,并在样品中检测到EVs的特异性标记TSG101。通过琼脂糖凝胶电泳检测发现,胞外囊泡DNA(evDNA)分子片段的大小在12 kb左右。根据evDNA测序数据选择特定evDNA开展PCR试验,实现其有效检测。对EVs进行脱氧核糖核酸酶Ⅰ(DNase I)或ATP依赖的DNA酶(PS酶)处理,证实evDNA以线性方式存在于囊泡外侧。通过末端转移酶(TdT)向evDNA末端添加poly-dA,使用oligo-dT珠对其进行捕获,进一步证明其线性表面分布。此外,建立TetO-DNA/TetR-GFP可视化系统,在荧光显微镜下观察到TetR-GFP蛋白与EVs上TetO-DNA的结合。流式细胞术和PCR试验证实,可用TetR-GFP蛋白实现对携带TetO-DNA EVs的富集。本研究证实了evDNA以线性的形式分布在EVs表面,为进一步研究其生物学功能提供了重要基础。
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关键词
肺腺癌细胞
胞外囊泡
evdna
Tet操纵基因-DNA
Tet阻遏蛋白-绿色荧光蛋白
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Keywords
lung adenocarcinoma cells
extracellular vesicles
evdna
TetO-DNA
TetR-GFP
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分类号
Q71
[生物学—分子生物学]
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