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Error-prone PCR获得EPSP酶突变基因提高水稻的草甘膦抗性 被引量:10
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作者 苏军 陈建民 +2 位作者 田大刚 朱祯 王锋 《分子植物育种》 CAS CSCD 2008年第5期830-836,共7页
将通过Error-prone PCR方法获得的表达水稻EPSP酶突变基因epsp102和未经修饰的水稻epsp基因分别导入籼稻恢复系明恢86,获得转化克隆84个和109个。对T1、T2代转基因水稻三叶期和分蘖期喷施草甘膦,各选出4个对草甘膦高抗性的T3代材料,进... 将通过Error-prone PCR方法获得的表达水稻EPSP酶突变基因epsp102和未经修饰的水稻epsp基因分别导入籼稻恢复系明恢86,获得转化克隆84个和109个。对T1、T2代转基因水稻三叶期和分蘖期喷施草甘膦,各选出4个对草甘膦高抗性的T3代材料,进行分子鉴定。对其中的3个株系进行农艺性状考察,并各选1个株系作为父本与其他优良恢复系进行杂交,进一步考察epsp和epsp102基因在不同遗传背景下的抗性和农艺性状表现。Southern结果显示:epsp的整合拷贝数为2~3拷贝,epsp102拷贝数为1~2拷贝。萌发种子、三叶期及分蘖期对草甘膦抗性检测显示:转基因萌发种子对草甘膦的抗性提高15倍;三叶期对草甘膦的抗性提高3~4倍。分蘖期剂量效应检测结果显示:非转基因对照在施0.1倍以上的致死剂量农达时,植株显著失水,而转基因株系水分生理正常。两地两季的农艺性状考察显示:与对照相比转基因株系的穗数明显增多,转基因株系ep-3和ep102-20结实率和单株重与对照没有显著差异;以ep-3和ep102-20作父本,与4个恢复系杂交的F2代对草甘膦的抗性没有降低,两个组合的结实率显著增加,SK/ep-3组合结实率显著下降,其余组合的结实率与对照持平。 展开更多
关键词 水稻 error-prone PCR EPSP酶突变基因 草甘膦
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Error-prone PCR致哈茨木霉几丁质酶突变的条件优化 被引量:2
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作者 王傲雪 李微 +1 位作者 陈秀玲 李景富 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期134-138,共5页
运用Error-prone PCR对哈茨木霉几丁质酶基因(Chit42)进行人工突变。在常规PCR基础上,通过提高体系中Mg2+浓度,适当加入一定浓度Mn2+,调节四种dNTP(dATP、dGTP、dCTP、dGTP)浓度,得到产生明显突变效果的试验条件。在Error-prone PCR中,... 运用Error-prone PCR对哈茨木霉几丁质酶基因(Chit42)进行人工突变。在常规PCR基础上,通过提高体系中Mg2+浓度,适当加入一定浓度Mn2+,调节四种dNTP(dATP、dGTP、dCTP、dGTP)浓度,得到产生明显突变效果的试验条件。在Error-prone PCR中,使用5.0 mmol·L-1Mg2+,0.5 mmol·L-1Mn2+,0.04 mmol·L-1dATP和dGTP,1.5 mmol·L-1dTTP和dCTP进行扩增后,随机挑选10个克隆测序,累积13 370个碱基,检测到57个突变,平均突变率为0.4%。为产生优良突变株、酶分子定向进化奠定基础。 展开更多
关键词 Error—prone PCR 哈茨木霉几丁质酶 Chit42 突变
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Saturation throughput analysis of RTS/CTS scheme in an error-prone WLAN channel 被引量:2
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作者 Xiang-yu PENG Le-tian JIANG Guo-zhi XU 《Journal of Zhejiang University-Science A(Applied Physics & Engineering)》 SCIE EI CAS CSCD 2009年第12期1714-1719,共6页
In this paper, a new three-dimensional Markov model is proposed for the estimation of saturation throughput of RTS/CTS (request to send/clear to send) scheme in an error-prone wireless local area network (WLAN) channe... In this paper, a new three-dimensional Markov model is proposed for the estimation of saturation throughput of RTS/CTS (request to send/clear to send) scheme in an error-prone wireless local area network (WLAN) channel. The model takes account of the effect of bit error on all the frames, and station short and long retry limits. Saturation throughput was re-analyzed using the new Markov model and numerical results closely matched those from simulation, confirming the accuracy of the new model. Evaluation of the influence of different parameters on throughput showed that the saturation throughput is sensitive to channel bit error rates and packet length, especially in high bit error conditions. 展开更多
关键词 Saturation throughput RTS/CTS error-prone WLAN channel Markov model _ _
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Instrumental Variable Type Estimation for Generalized Varying Coefficient Models with Error-Prone Covariates 被引量:2
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作者 ZHAO Peixin 《Wuhan University Journal of Natural Sciences》 CAS 2013年第3期241-246,共6页
In this paper,the estimation for a class of generalized varying coefficient models with error-prone covariates is considered.By combining basis function approximations with some auxiliary variables,an instrumental var... In this paper,the estimation for a class of generalized varying coefficient models with error-prone covariates is considered.By combining basis function approximations with some auxiliary variables,an instrumental variable type estimation procedure is proposed.The asymptotic results of the estimator,such as the consistency and the weak convergence rate,are obtained.The proposed procedure can attenuate the effect of measurement errors and have proved workable for finite samples. 展开更多
关键词 generalized varying coefficient models instrumental variable error-prone covariates
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Influence of Error-prone Channel on the Performance of IEEE 802.11 WLAN Utilizing RTS/CTS Handshaking 被引量:1
5
作者 Haider M. AlSabbagh 陈建平 徐友云 《Journal of Shanghai Jiaotong university(Science)》 EI 2007年第6期799-804,共6页
A comprehensive study was presented for WLAN 802.11b using error-prone channel. It was theoretically and numerically evaluated the performance of three different network sizes with the bit rates that available in 802.... A comprehensive study was presented for WLAN 802.11b using error-prone channel. It was theoretically and numerically evaluated the performance of three different network sizes with the bit rates that available in 802.11b protocol. Results show that throughput does not change with the size of the network for wide range of bit error rates (BERs) and the channel bit rates play a significant role in the main characteristics of the network. A comprehensive explanation has given for the phenomenon of the packet delay suppression at relatively high level of BERs in view of the size of the networks and the BERs. The effect length of the transmitting packets is also investigated. 展开更多
关键词 IEEE802.11B REQUEST to send/clear to send(RTS/CTS) wireless local area network(WLAN) error-prone channel
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Influence of the Limited Retransmission on the Performance of WLANs Using Error-Prone Channel 被引量:1
6
作者 Haider M. ALSABBAGH Jianping CHEN Youyun XU 《International Journal of Communications, Network and System Sciences》 2008年第1期49-54,共6页
In WLANs, stations sharing a common wireless channel are governed by IEEE 802.11 protocol. Many conscious studies have been conducted to utilize this precious medium efficiently. However, most of these studies have be... In WLANs, stations sharing a common wireless channel are governed by IEEE 802.11 protocol. Many conscious studies have been conducted to utilize this precious medium efficiently. However, most of these studies have been done either under assumption of idealistic channel condition or with unlimited retransmitting number. This paper is devoted to investigate influence of limited retransmissions and error level in the utilizing channel on the network throughput, probability of packet dropping and time to drop a packet. The results show that for networks using basic access mechanism the throughput is suppressed with increasing amount of errors in the transmitting channel over all the range of the retry limit. It is also quite sensitive to the size of the network. On the other side, the networks using four-way handshaking mechanism has a good immunity against the error over the available range of retry limits. Also the throughput is unchangeable with size of the network over the range of retransmission limits. However, the throughput does not change with retry limits when it exceeds the maximum number of the backoff stage in both DCF’s mechanisms. In both mechanisms the probability of dropping a packet is a decreasing function with number of retransmissions and the time to drop a packet in the queue of a station is a strong function to the number of retry limit, size of the network, the utilizing medium access mechanism and amount of errors in the channel. 展开更多
关键词 IEEE802.11 DCF WLAN MAC Protocol THROUGHPUT error-prone Channel.
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Small Amplicons Mutation Library for Vaccine Screening by Error-Prone Polymerase Chain Reaction
7
作者 程曼曼 张云龙 +2 位作者 陈婷 张敏敏 陆昌瑞 《Journal of Donghua University(English Edition)》 CAS 2023年第2期171-176,共6页
Library construction is a common method used to screen target genes in molecular biology.Most library constructions are not suitable for a small DNA library(<100 base pair(bp))and low RNA library output.To maximize... Library construction is a common method used to screen target genes in molecular biology.Most library constructions are not suitable for a small DNA library(<100 base pair(bp))and low RNA library output.To maximize the library’s complexity,error-prone polymerase chain reaction(PCR)was used to increase the base mutation rate.After introducing the DNA fragments into the competent cell,the library complexity could reach 109.Library mutation rate increased exponentially with the dilution and amplification of error-prone PCR.The error-prone PCR conditions were optimized including deoxyribonucleotide triphosphate(dNTP)concentration,Mn^(2+)concentration,Mg^(2+)concentration,PCR cycle number,and primer length.Then,a RNA library with high complexity can be obtained by in vitro transcription to meet most molecular biological screening requirements,and can also be used for mRNA vaccine screening. 展开更多
关键词 error-prone polymerase chain reaction in vitro transcription DNA library RNA library
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Polymerase-tautomeric Model for Untargeted Delayed Base Substitution Mutations Formation during Error-prone and SOS Replication of Double-stranded DNA Containing Thymine and Adenine in Some Rare Tautomeric Forms
8
作者 Helen A.Grebneva 《Journal of Oncology Research》 2019年第2期24-37,共14页
Polymerase-tautomeric model for untargeted delayed base substitution mutations is proposed.Structural analysis of bases insertion showed that any canonical bases may be inserted opposite rare tautomeric forms of thymi... Polymerase-tautomeric model for untargeted delayed base substitution mutations is proposed.Structural analysis of bases insertion showed that any canonical bases may be inserted opposite rare tautomeric forms of thymine T3*,adenines A2*and A4*so that between them hydrogen bonds are formed.Canonical adenine and cytosine can be incorporated opposite canonical thymine only.Canonical thymine and guanine can be incorporated opposite canonical adenine only.If in the synthesis of DNA containing rare tautomeric forms of thymine T3*,adenines A2*and A4*,involved DNA polymerases with relatively high fidelity of synthesis,mutations not appear.However,if further DNA synthesis will involve DNA polymerases having a low fidelity of synthesis,there may be base substitution mutations.It was shown that the conclusion made in the Tomasetti and Vogelstein cancer risk model that the formation of about 67%of all mutations was not caused by exposure to any mutagens is erroneous. 展开更多
关键词 Radiation-induced genomic instability Untargeted delayed base substitution MUTATIONS UV-mutagenesis Rare tautomeric forms of DNA bases Thymine adenine error-prone REPLICATION SOS REPLICATION
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ESTIMATION AND INFERENCE FOR VARYING-COEFFICIENT REGRESSION MODELS WITH ERROR-PRONE COVARIATES
9
作者 XU Yongqing LI Xiaoli CHEN Gemai 《Journal of Systems Science & Complexity》 SCIE EI CSCD 2014年第6期1263-1285,共23页
This paper studies the estimation and inference for a class of varying-coefficient regression models with error-prone covariates.The authors focus on the situation where the covariates are unobserved,there are no repe... This paper studies the estimation and inference for a class of varying-coefficient regression models with error-prone covariates.The authors focus on the situation where the covariates are unobserved,there are no repeated measurements,and the covariance matrix of the measurement errors is unknown,but some auxiliary information is available.The authors propose an instrumental variable type local polynomial estimator for the unknown varying-coefficient functions,and show that the estimator achieves the optimal nonparametric convergence rate,is asymptotically normal,and avoids using undersmoothing to allow the bandwidths to be selected using data-driven methods.A simulation is carried out to study the finite sample performance of the proposed estimator,and a real date set is analyzed to illustrate the usefulness of the developed methodology. 展开更多
关键词 error-prone covariate instrumental variable local polynomial efficient estimation varying-coefficient.
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易错PCR技术改造黑曲霉β-甘露聚糖酶的耐温性
10
作者 陈晓飞 李珊珊 +3 位作者 周伏忠 刘德海 王佰涛 刁文涛 《中国饲料》 北大核心 2025年第17期53-60,共8页
为改造黑曲霉来源的β-甘露聚糖酶基因Man26A,获得耐温性重组β-甘露聚糖酶,本试验通过易错PCR技术(在PCR体系中加入不同水平的MnCl_(2)),将目的基因Man26A克隆至载体pGAPZαA上,构建重组质粒pGAPZαA-Man26A,将重组质粒电转化至毕赤酵... 为改造黑曲霉来源的β-甘露聚糖酶基因Man26A,获得耐温性重组β-甘露聚糖酶,本试验通过易错PCR技术(在PCR体系中加入不同水平的MnCl_(2)),将目的基因Man26A克隆至载体pGAPZαA上,构建重组质粒pGAPZαA-Man26A,将重组质粒电转化至毕赤酵母GS115中,在含有100μg/mL博来霉素的YPDS平板上筛选耐温性突变体,并测定重组酶的酶学性质。本试验筛选出2株产耐温性β-甘露聚糖酶的重组突变体3-228和4-59,两重组酶的最适pH和温度分别为5.0和45℃,均与野生型酶相同,但与野生型相比,两重组酶的工作温度范围更加宽泛,且温度稳定性显著提高;金属离子Fe^(2+)、Mg^(2+)、Mn^(2+)、K+、Ca^(2+)、Co^(2+)对β-甘露聚糖酶活力有不同程度的激活作用,SDS、EDTA、Cd^(2+)、Cu^(2+)、Ni^(2+)、Ag^(2+)、Fe^(3+)、Pb^(2+)等对酶活力有不同的抑制作用。2个耐温性重组β-甘露聚糖酶均具有工作温度范围广、耐温性强等特点,提高了其在饲料工业上的应用潜力,证明了易错PCR技术是提高酶温度稳定性的有效方法。 展开更多
关键词 Β-甘露聚糖酶 易错PCR 耐温性 酶学性质
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道路机动车辆产品准入申报质量提升方法
11
作者 张幸 《中国标准化》 2025年第3期205-209,共5页
本文介绍了中华人民共和国工业和信息化部发布的车辆公告制度以及公告申报的流程。依据日常审查工作发现总结了公告申报中关于主要技术参数、佐证材料、结构图纸、检测项目统计表方面的常见易错点,通过对易错点的分析提出了建立审查反... 本文介绍了中华人民共和国工业和信息化部发布的车辆公告制度以及公告申报的流程。依据日常审查工作发现总结了公告申报中关于主要技术参数、佐证材料、结构图纸、检测项目统计表方面的常见易错点,通过对易错点的分析提出了建立审查反馈机制、定期组织培训、建立企业分类、构建智能审查系统的建议,旨在帮助车辆生产企业顺利完成公告申报,提高产品准入申报质量,为汽车行业的健康高质量发展提供有力保障。 展开更多
关键词 公告申报 审查 易错点 质量提升
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空间飞行器总装与测试易错操作风险识别与控制研究
12
作者 许帆 刘峰均 +2 位作者 闫金超 何陈烨 王叶奔儒 《质量与标准化》 2025年第7期49-53,共5页
空间飞行器总装与测试作为产品研制的最后阶段,具有质量要求严和操作风险高的特点。本文针对操作风险中容易疏漏的操作,按照操作对象进行分类,提出了设备、电缆和管路等易错操作的风险识别方法与控制措施,并以神舟载人飞船和天舟货运飞... 空间飞行器总装与测试作为产品研制的最后阶段,具有质量要求严和操作风险高的特点。本文针对操作风险中容易疏漏的操作,按照操作对象进行分类,提出了设备、电缆和管路等易错操作的风险识别方法与控制措施,并以神舟载人飞船和天舟货运飞船工程实践为例,验证了该易错操作风险识别与控制方法的可行性和有效性,为相关规范的制定提供参考。 展开更多
关键词 空间飞行器 总装 测试 易错操作 风险识别与控制
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利用SPT3的定向进化提高工业酿酒酵母乙醇耐受性 被引量:15
13
作者 赵心清 姜如娇 +2 位作者 李宁 杨晴 白凤武 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期159-164,共6页
利用对转录因子的定向进化可对多基因控制的性状进行有效的代谢工程改造。本研究对酿酒酵母负责胁迫相关基因转录的SAGA复合体成分SPT3编码基因进行易错PCR随机突变,并研究了SPT3的定向进化对酿酒酵母乙醇耐性的影响。将SPT3的易错PCR... 利用对转录因子的定向进化可对多基因控制的性状进行有效的代谢工程改造。本研究对酿酒酵母负责胁迫相关基因转录的SAGA复合体成分SPT3编码基因进行易错PCR随机突变,并研究了SPT3的定向进化对酿酒酵母乙醇耐性的影响。将SPT3的易错PCR产物连接改造的pYES2.0表达载体并转化酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae4126,构建了突变体文库。通过筛选在高浓度乙醇中耐受性提高的突变株,获得了一株在10%(V/V)乙醇中生长较好的突变株M25。该突变株利用125g/L的葡萄糖进行乙醇发酵时,终点乙醇产量比对照菌株提高了11.7%。由此表明,SPT3是对酿酒酵母乙醇耐性进行代谢工程改造的一个重要的转录因子。 展开更多
关键词 定向进化 乙醇耐性 SPT3 酿酒酵母 易错PCR
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基于易错PCR技术的短小芽孢杆菌YZ02脂肪酶基因BpL的定向进化 被引量:21
14
作者 黄瑛 蔡勇 +1 位作者 杨江科 闫云君 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期445-451,共7页
利用易错PCR技术对短小芽胞杆菌(Bacillus pumilus)YZ02脂肪酶基因BpL进行两轮定向进化研究,分别获得最佳突变株BpL1-7和BpL2-1369,其脂肪酶活力比出发酶分别提高了2倍和6倍。序列分析表明,突变体BpL2-1369有4个碱基发生了突变:T61C/C14... 利用易错PCR技术对短小芽胞杆菌(Bacillus pumilus)YZ02脂肪酶基因BpL进行两轮定向进化研究,分别获得最佳突变株BpL1-7和BpL2-1369,其脂肪酶活力比出发酶分别提高了2倍和6倍。序列分析表明,突变体BpL2-1369有4个碱基发生了突变:T61C/C147T/A334G/T371A,其中有3个碱基突变导致了氨基酸的改变。通过SWISS-MODEL数据库模拟脂肪酶的结构显示,3个突变氨基酸分别位于第1个α螺旋的第3个氨基酸、第4和第5个β折叠之间的转角以及第5个β折叠的第1个氨基酸位置。将野生型脂肪酶基因BpL和进化后的基因BpL2-1369的高效表达产物经Ni-Agarose柱和Sephadex-G75纯化后,酶学性质测定表明:突变脂肪酶的比活力比野生型脂肪酶提高了1.31倍,Km值由8.24mmol/L降低至7.17mmol/L;在pH>8.0时的稳定性较野生型脂肪酶有所提高。 展开更多
关键词 短小芽胞杆菌 脂肪酶 定向进化 易错PCR
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定向进化提高枯草芽孢杆菌脂肪酶的活力 被引量:11
15
作者 赵博 陶进 +5 位作者 马吉胜 廉虹 王岩 常琳 高仁钧 曹淑桂 《催化学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2009年第4期291-296,共6页
通过定向进化的方法,提高了一个新的源于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的脂肪酶(BSL2)的活力.经过两轮易错PCR以及高通量筛选,最终获得了比活力为野生出发酶4.5倍的突变体3-1B2.基因比对结果表明,共有两个氨基酸发生了突变.突变酶的... 通过定向进化的方法,提高了一个新的源于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的脂肪酶(BSL2)的活力.经过两轮易错PCR以及高通量筛选,最终获得了比活力为野生出发酶4.5倍的突变体3-1B2.基因比对结果表明,共有两个氨基酸发生了突变.突变酶的酶学性质研究发现,与野生酶相比,它的热稳定性及pH稳定性略有增加,最适温度和最适pH值则无太大的变化.同源模建了BSL2与3-1B2的结构,并与底物进行了分子对接.结果表明,突变体3-1B2的结合能比野生型BSL2低1.29 kcal/mol,活性中心Ser77残基与底物羰基的距离也由0.319 nm减小为0.278 nm,因而加快了酶反应速度,提高了酶活力. 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 脂肪酶 易错聚合酶链反应 定向进化 分子对接
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定向进化提高嗜热拟青霉J18耐热β-1,3-1,4-葡聚糖酶在酸性条件下的催化能力 被引量:10
16
作者 李一男 贾会勇 +2 位作者 闫巧娟 江正强 杨绍青 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1797-1804,共8页
应用定向进化技术提高了嗜热拟青霉Paecilomyces thermophila J18耐热β-1,3-1,4-葡聚糖酶(PtLic16A)在酸性条件下的催化能力。结合易错PCR和DNA改组的方法,构建了β-葡聚糖酶的突变体文库;利用刚果红染色法建立了阳性克隆的高通量筛选... 应用定向进化技术提高了嗜热拟青霉Paecilomyces thermophila J18耐热β-1,3-1,4-葡聚糖酶(PtLic16A)在酸性条件下的催化能力。结合易错PCR和DNA改组的方法,构建了β-葡聚糖酶的突变体文库;利用刚果红染色法建立了阳性克隆的高通量筛选体系。筛选得到的突变酶PtLic16AM1的反应最适pH由7.0变化至5.5,且保持了原有的耐热性和比酶活。突变酶的DNA序列中有4个点位发生突变,引发了4处氨基酸替换,分别是T58S、Y110N、G195E和D221G。结构模拟结果显示,发生突变的4个氨基酸位点中,Y110N位置靠近酶活性中心,而T58S、G195E和D221G则离酶活性中心较远,其中T58S、G195E可能对酶最适pH的变化起到了关键作用。 展开更多
关键词 嗜热拟青霉 β-1 3.1 4.葡聚糖酶 易错PCR DNA改组
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基于易错PCR的黄曲霉毒素解毒酶体外分子定向进化 被引量:11
17
作者 张赛 邢克克 +3 位作者 胡亚冬 谢春芳 刘大岭 姚冬生 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期1100-1108,共9页
运用定向进化-易错PCR方法,提高黄曲霉毒素解毒酶的活力及稳定性,并结合辣根过氧化物酶(HRP)-隐性亮绿(RBG)快速高通量筛选系统,构建了库容约为104的突变体库。经过两轮易错PCR,最终分别获得了耐高温70℃突变酶A1773、pH 4.0稳定性的突... 运用定向进化-易错PCR方法,提高黄曲霉毒素解毒酶的活力及稳定性,并结合辣根过氧化物酶(HRP)-隐性亮绿(RBG)快速高通量筛选系统,构建了库容约为104的突变体库。经过两轮易错PCR,最终分别获得了耐高温70℃突变酶A1773、pH 4.0稳定性的突变酶A1476,pH 4.0和pH 7.5均表现稳定性的突变酶A2863,其酶活力比野生酶分别提高了6.5倍、21倍和12.6倍。经序列分析表明,发现突变酶A1773发生了Glu127Lys和Gln613Arg突变;突变酶A2863发生了Gly73Ser、Ile307Leu、Val596Ala、Gln613Arg突变;突变酶A1476发生了Ser46Pro、Lys221Gln、Ile307Leu和Asn471Ile突变。结果为进一步了解黄曲霉毒素解毒酶的结构与功能之间的关系提供了参考。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素解毒酶 稳定性 定向进化 易错PCR
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D-泛解酸内酯水解酶的定向进化 被引量:8
18
作者 柳志强 孙志浩 +2 位作者 郑璞 冷泳 钱嘉南 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期773-781,共9页
易错PCR结合DNA改组方法向D泛解酸内酯水解酶基因中引入突变,并构建突变体库。利用酶的催化特点和产物特性建立了基于平板初筛和高效液相复筛的两步法D泛解酸内酯水解酶活性筛选系统。用该筛选系统以酶活力和pH稳定性为指标对突变体库... 易错PCR结合DNA改组方法向D泛解酸内酯水解酶基因中引入突变,并构建突变体库。利用酶的催化特点和产物特性建立了基于平板初筛和高效液相复筛的两步法D泛解酸内酯水解酶活性筛选系统。用该筛选系统以酶活力和pH稳定性为指标对突变体库进行筛选,最终获得一株酶活力高且在低pH条件下稳定性好的突变体MutE861。该突变体的酶活力是野生型酶的5.5倍。对突变体和野生型酶在pH6.0和pH5.0条件下的残余酶活进行对比,在这两种pH条件下,突变体酶的酶活残留分别为75%和50%,而野生型酶只能保持原来的40%和20%。通过软件对突变体MutE861酶基因和野生型酶基因进行分析对比,发现突变体MutE861酶基因发生了三处点突变,其中突变使两处氨基酸取代,另一处为沉默突变,未引起氨基酸的变化。 展开更多
关键词 串珠镰孢霉菌 D-泛解酸内酯水解酶 易错PCR DNA改组 筛选 定向进化
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大肠杆菌碱性磷酸酶的体外定向进化研究 被引量:13
19
作者 徐卉芳 张先恩 +2 位作者 张治平 张用梅 A.E.G.CASS 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第1期89-94,共6页
大肠杆菌碱性磷酸酶 (E .colialkalinephosphatase,EAP ,EC 3 1 3 1)是一个非特异性二聚体磷酸单酯酶 .采用易错聚合酶链反应 (errorpronePCR)的方法 ,在原有高活力突变株的基础上 ,对EAP远离活性中心催化三联体的区域进行定向进化 ,经... 大肠杆菌碱性磷酸酶 (E .colialkalinephosphatase,EAP ,EC 3 1 3 1)是一个非特异性二聚体磷酸单酯酶 .采用易错聚合酶链反应 (errorpronePCR)的方法 ,在原有高活力突变株的基础上 ,对EAP远离活性中心催化三联体的区域进行定向进化 ,经两轮errorpronePCR ,获得催化活力较亲本D10 1S突变株提高 3倍、较野生型酶提高 35倍的进化酶 4 186 ,并对该酶的催化动力学特征进行了分析 .进化酶基因的DNA测序表明 4 186含两个有义氨基酸置换 :K16 7R和S374C ,二者既不位于底物结合位点 ,也不位于酶的金属离子结合位点 . 展开更多
关键词 大肠杆菌 碱性磷酸酶 体外定向进化 催化活力
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易错PCR研究进展及应用 被引量:10
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作者 高义平 赵和 +2 位作者 吕孟雨 杨学举 王海波 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期607-612,共6页
易错PCR是目前最简单、有效的一种基因体外随机诱变技术,是农业、工业、生物制药等领域获得优异基因的重要手段。本文综述了易错PCR的基本原理、方法、发展历程,以及该技术的最新研究成果、成功应用领域,并提出了目前存在的问题和可能... 易错PCR是目前最简单、有效的一种基因体外随机诱变技术,是农业、工业、生物制药等领域获得优异基因的重要手段。本文综述了易错PCR的基本原理、方法、发展历程,以及该技术的最新研究成果、成功应用领域,并提出了目前存在的问题和可能解决途径。 展开更多
关键词 易错PCR 随机诱变 研究进展
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