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大额牛瘤胃纤维素酶CMX-1基因的突变体构建及酶学特性研究
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作者 劳凤娟 火登亮 +4 位作者 赖洁微 久美 巴桑珠扎 旦增洛桑 杨舒黎 《饲料研究》 北大核心 2025年第24期79-84,共6页
试验旨在分析筛选自大额牛瘤胃Fosmid文库的高表达纤维素酶CMX-1的基本酶学性质。为进一步提高该酶的催化效率,采用易错聚合酶链反应(ep-PCR)对CMX-1编码基因进行突变改造。结果显示,试验成功获得突变体基因EMX-1。序列分析表明,EMX-1编... 试验旨在分析筛选自大额牛瘤胃Fosmid文库的高表达纤维素酶CMX-1的基本酶学性质。为进一步提高该酶的催化效率,采用易错聚合酶链反应(ep-PCR)对CMX-1编码基因进行突变改造。结果显示,试验成功获得突变体基因EMX-1。序列分析表明,EMX-1编码305个氨基酸(aa),理论分子量为34.29 kDa,等电点(pI)为5.70,属于糖苷水解酶家族5(GH5),与GenBank数据库中同源序列的最高相似性为80%。该突变基因可在大肠杆菌BL21中高效表达,并表现出纤维素酶活性。酶学性质分析显示,突变酶EMX-1的最适温度与原始酶CMX-1相同,均为50℃;在该温度下,EMX-1的最适pH值由CMX-1的5.0提高至5.5。在各自对应的最适pH值及50℃条件下,EMX-1的纤维素酶活性为247.76 U/mL,较CMX-1(178.92 U/mL)提高约1.4倍。在40~50℃和p H值3.0~9.0范围内,EMX-1较CMX-1表现出更强的稳定性。研究表明,研究通过ep-PCR技术成功获得了催化性能明显提升的突变酶EMX-1,为反刍动物饲料添加剂的开发提供了新的酶资源。 展开更多
关键词 大额牛 纤维素酶基因 易错聚合酶链反应 突变体 酶学特性
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副干酪乳酪杆菌ProSci-92全基因组分析及胞外多糖生物合成 被引量:1
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作者 吴娜 崔欣蕊 +3 位作者 胡海敏 彭清婷 刘金惠 丹彤 《中国食品学报》 北大核心 2025年第2期376-387,共12页
乳酸菌(LAB)生产的胞外多糖是微生物适应环境的产物,具有抑制致病菌生长、抗氧化、降血糖等多种益生功效,还具有改善发酵乳制品口感、质构、风味等作用。本研究以从香格里拉藏区酸牦牛乳中分离得到的高产胞外多糖的副干酪乳酪杆菌ProSci... 乳酸菌(LAB)生产的胞外多糖是微生物适应环境的产物,具有抑制致病菌生长、抗氧化、降血糖等多种益生功效,还具有改善发酵乳制品口感、质构、风味等作用。本研究以从香格里拉藏区酸牦牛乳中分离得到的高产胞外多糖的副干酪乳酪杆菌ProSci-92为研究对象,采用Illumina Hiseq 4000二代测序技术,完成该菌株的全基因组测序,并利用SOAPdenovo软件对其进行组装,结合RAST、COG、GO、KEGG数据库完成基因的预测及功能注释,发现副干酪乳酪杆菌ProSci-92基因组全长3012314 bp,共编码2975个基因。基因注释的结果表明副干酪乳酪杆菌ProSci-92具有完整的eps基因簇,长度为16581 bp,包括wzb、LytR、wzg、epsC、epsD、glf1、glf2、glf3、wze、glf4、WelA、WelB等19个与胞外多糖(EPS)生物合成相关基因。此外,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)试验结果证明eps基因簇中几乎所有的基因均可表达,且在6 h时表达量达到最大值。研究结果将有助于副干酪乳酪杆菌ProSci-92 EPS的结构研究,为其工业化应用奠定理论基础。 展开更多
关键词 胞外多糖 副干酪乳酪杆菌 eps基因簇 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)
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原生质体紫外诱变筛选刺芹侧耳高EPS含量菌株及其鉴定 被引量:4
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作者 李艳丽 金周雨 李玉 《中国农机化学报》 2016年第12期98-102,共5页
对刺芹侧耳原生质体进行紫外诱变,研究诱变时间对原生质体存活率的影响。对诱变后的原生质体再生菌株进行发酵培养,对胞外多糖(EPS)进行提取及含量测定,从中筛选EPS含量高的菌株。通过传代培养测定其遗传稳定性,通过RAPD-PCR技术鉴定其... 对刺芹侧耳原生质体进行紫外诱变,研究诱变时间对原生质体存活率的影响。对诱变后的原生质体再生菌株进行发酵培养,对胞外多糖(EPS)进行提取及含量测定,从中筛选EPS含量高的菌株。通过传代培养测定其遗传稳定性,通过RAPD-PCR技术鉴定其与亲本菌株之间的遗传差异。结果表明:刺芹侧耳原生质体对紫外线诱变敏感。在诱变剂量为50s时,筛选出一株能稳定遗传的、EPS含量高的菌株HU50—15,其多糖含量为360.9±8.0mg/L,比亲株HB—3的多糖含量提高了58%。RAPD—PCR结果显示,菌株HU50—15与亲株HB—3有明显的遗传差异,暗示其是一株新的刺芹侧耳变异菌株。 展开更多
关键词 原生质体 紫外诱变 刺芹侧耳 胞外多糖 随机扩增多态性—PCR
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硫酸化淫羊藿多糖对鸡外周血淋巴细胞IL-2和IFN-γ的mRNA表达的影响 被引量:14
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作者 卢宇 王凯民 +3 位作者 郭振环 张帆 王德云 胡元亮 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2009年第5期1073-1077,共5页
促进淋巴细胞分泌抗病毒干扰素和白介素等细胞因子是生物活性多糖抗病毒和增强免疫的机制之一。为探明sEPS5和sEPS2抗病毒和增强免疫作用的机理,用Primer Premier软件设计了1对白介素-2(Interleukin-2,IL-2)引物和1对干扰素-γ(Interfer... 促进淋巴细胞分泌抗病毒干扰素和白介素等细胞因子是生物活性多糖抗病毒和增强免疫的机制之一。为探明sEPS5和sEPS2抗病毒和增强免疫作用的机理,用Primer Premier软件设计了1对白介素-2(Interleukin-2,IL-2)引物和1对干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)引物,用荧光定量PCR方法测定sEPS2和sEPS5对鸡外周血T淋巴细胞IL-2、IFN-γ的mRNA表达的影响,以未修饰的EPS为对照。结果表明,在62.50μg/ml和31.25μg/ml时,sEPS5和sEPS2对2种细胞因子的诱生作用显著强于未修饰的EPS,其中sEPS5的作用最强,sEPS2次之,并与剂量呈正相关。这可能是硫酸化多糖抗病毒和增强免疫的分子机制之一。 展开更多
关键词 淫羊藿多糖 硫酸化修饰 淋巴细胞 细胞因子 荧光定量PCR
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好氧颗粒污泥对盐酸氯苯胍的响应试验研究
5
作者 苏馈足 袁瑞 +2 位作者 陈丁丁 林坦 陈文静 《中国给水排水》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期92-96,共5页
以絮体污泥作为接种污泥,在序批式反应器中分析好氧颗粒污泥对盐酸氯苯胍(RH)的去除效果,阐述污泥体积指数以及COD、氨氮、RH去除率的变化,并利用三维荧光光谱研究污泥胞外聚合物(EPS)中具有荧光特性的组分变化,解析好氧颗粒污泥微生物... 以絮体污泥作为接种污泥,在序批式反应器中分析好氧颗粒污泥对盐酸氯苯胍(RH)的去除效果,阐述污泥体积指数以及COD、氨氮、RH去除率的变化,并利用三维荧光光谱研究污泥胞外聚合物(EPS)中具有荧光特性的组分变化,解析好氧颗粒污泥微生物群落的结构特征。结果表明,颗粒污泥具有良好的沉降性能,COD去除率高达90%以上,NH_4^+-N去除率约为98%。当RH浓度为10 mg/L时,颗粒污泥对COD、NH_4^+-N的去除率分别下降至60%和70%左右,EPS组分发生明显变化,运行稳定前期,颗粒污泥对RH的去除率可达90%以上,而后期仅为70%。 展开更多
关键词 好氧颗粒污泥 胞外聚合物 盐酸氯苯胍 PCR-DGGE
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贫营养条件下EPS、SMP和微生物多样性的研究 被引量:20
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作者 黄兴 孙宝盛 +1 位作者 孙井梅 张斌 《环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2009年第5期1468-1474,共7页
为了考察活性污泥在营养缺乏的条件下,胞外聚合物(EPS)、溶解性微生物产物(SMP)和微生物种群结构自身的变化情况,为优化MBR系统运行、延缓膜污染等提供理论依据,对天津大学游泳馆MBR中的污泥混合液进行贫营养实验,测定了污泥混合液中EPS... 为了考察活性污泥在营养缺乏的条件下,胞外聚合物(EPS)、溶解性微生物产物(SMP)和微生物种群结构自身的变化情况,为优化MBR系统运行、延缓膜污染等提供理论依据,对天津大学游泳馆MBR中的污泥混合液进行贫营养实验,测定了污泥混合液中EPS和SMP的含量,通过聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术和克隆测序技术对微生物多样性进行分析,根据序列数据进行同源性分析并构建系统进化树.实验初期,EPS和SMP的浓度由15.04 mg/g和0 mg/g分别上升到17.99 mg/g和3.29 mg/g.随着实验的进行,EPS有很大的降低,最终只有2.40 mg/g;SMP则一直在3.5 mg/g左右变化.实验表明,EPS和SMP对外界环境变化具有一定的缓冲作用,并且在营养缺乏的条件下微生物能够以降解EPS和SMP来维持自身生命活动.由于对EPS和SMP的利用,污泥的Shannon多样性指数由最初的0.81上升到最高时的1.09,随后开始降低,并最终稳定在0.95.克隆测序的结果表明,污泥中微生物的种类比较丰富,并且优势菌种大部分为未经培养菌种.部分菌种能够通过产生蛋白质和多糖水解酶来实现对EPS和SMP的降解,主要属于拟杆菌(Bacteroidetes)、黄杆菌(Flavobacterium)、腐螺旋菌(Saprospiraceae)和厚壁门菌(Firmicutes)等. 展开更多
关键词 膜生物反应器 胞外聚合物 溶解性微生物产物 微生物多样性 聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳 克隆测序
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微小隐孢子虫miR-2980真核表达载体的构建及初步鉴定 被引量:1
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作者 呼高伟 程天印 +5 位作者 米荣升 秦培兰 黄燕 周鹏 曹薇 陈兆国 《安徽农业科学》 CAS 2012年第13期7739-7741,7803,共4页
[目的]构建微小隐孢子虫的miR-2980真核表达载体,并进行鉴定。[方法]从微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)基因组DNA扩增cp-miR-2980前体,克隆到pMD18-T载体上,经测序鉴定正确后亚克隆到pVAXⅠ载体上,转染HCT-8细胞,提取细胞总RNA,RT... [目的]构建微小隐孢子虫的miR-2980真核表达载体,并进行鉴定。[方法]从微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)基因组DNA扩增cp-miR-2980前体,克隆到pMD18-T载体上,经测序鉴定正确后亚克隆到pVAXⅠ载体上,转染HCT-8细胞,提取细胞总RNA,RT-PCR检测cp-miR-2980的表达。[结果]成功构建了cp-miR-2980真核表达载体pVAX-miR2980,RT-PCR检测证实其能在真核细胞HCT-8中表达。[结论]构建的真核表达载体pVAX-miR2980能在HCT-8细胞中成功表达cp-miR-2980,为后续研究cp-miR-2980的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 cp-miR-2980 前体 真核表达载体 RT-PCR
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健康人群TTV第1、4、5基因群感染检测分析
8
作者 彭进 王清 +2 位作者 胡烈谱 赵学森 彭宜红 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期564-566,共3页
目的 对九江市健康婴儿及志愿献血员血清中TT病毒(TTVirus,TTV)第1、4、5基因群感染情况进行检测,以期阐明3种不同TTV基因群在该地区人群中的感染情况。方法 分别用UTRPCR以及N2 2PCR、G4PCR、G5PCR等3种群特异性PCR ,检测九江市86例... 目的 对九江市健康婴儿及志愿献血员血清中TT病毒(TTVirus,TTV)第1、4、5基因群感染情况进行检测,以期阐明3种不同TTV基因群在该地区人群中的感染情况。方法 分别用UTRPCR以及N2 2PCR、G4PCR、G5PCR等3种群特异性PCR ,检测九江市86例健康婴儿和12 9例健康献血员血清中总TTVDNA以及3种不同基因群TTVDNA。结果 婴儿和献血员血清中TTV总检出率分别为5 3. 5 % (46 / 86 )和98. 5 % (12 7/ 12 9) ,其中第1基因群TTVDNA检出率分别为16 . 3% (14 / 86 )和35 .7% (46 / 12 9) ,第4基因群TTVDNA检出率分别为4 0 . 7%(35 / 86 )和82. 9% (10 7/ 12 9) ,第5基因群TTVDNA检出率分别为2 4. 4 % (2 1/ 86 )和4 6 .5 % (6 0 / 12 9)。结论 TTV在该地区健康婴儿和成人中有很高的感染率,但不同的基因群感染率各不相同,其中TTV第4基因群可能是该地区人群中TTV感染的优势株。此外,6个月以内的婴儿大多数尚未感染TTV ,受感染的7~12个月龄婴儿中以感染1种TTV基因群为主,但婴儿中不同基因群的混合感染随着年龄的增加而逐渐增多,但同时感染3种基因群者明显少于当地成人水平(P <0 .0 0 1)。而当地健康成人则以混合感染3种不同基因群者多见。 展开更多
关键词 TT病毒 聚合酶链反应 分子流行病学
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高效厌氧氨氧化颗粒污泥脱氮特征及EPS分层特性 被引量:4
9
作者 王衫允 贾方旭 +3 位作者 靳鹏飞 高梦佳 马斌 彭永臻 《中国给水排水》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期35-39,共5页
考察了处理低氨氮废水的厌氧氨氧化颗粒污泥的脱氮特征、分层EPS组分及三维荧光光谱特性。结果表明,厌氧氨氧化颗粒污泥表现出高效的厌氧氨氧化活性,对NH+4-N和NO-2-N的平均降解速率分别为0.14和0.15 g/(g VSS·d),去除率分别为80.1... 考察了处理低氨氮废水的厌氧氨氧化颗粒污泥的脱氮特征、分层EPS组分及三维荧光光谱特性。结果表明,厌氧氨氧化颗粒污泥表现出高效的厌氧氨氧化活性,对NH+4-N和NO-2-N的平均降解速率分别为0.14和0.15 g/(g VSS·d),去除率分别为80.1%和97.0%;对TN的去除率为65.8%;该过程伴随N_2O的产生和短时积累,峰值浓度为0.92 mg/L,仅占TN转化率的2.52%;另外,p H值能指示厌氧氨氧化反应的终点。对分层EPS组分的分析可知,蛋白质为所有EPS层的主要成分,达226.9 mg/g VSS,占EPS总量的58.9%;绝大部分EPS为TB-EPS,占EPS总量的77.1%。三维荧光光谱显示蛋白质主要为酪氨酸和色氨酸,两者在TB-EPS中的荧光强度分别为165.5和46.1 AU/(mg C·L)。该研究结果为今后厌氧氨氧化污泥颗粒化的研究提供了理论依据。 展开更多
关键词 厌氧氨氧化 颗粒污泥 PCR—clone 分层胞外聚合物 三维荧光光谱
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黄曲条跳甲E型前列腺素受体cDNA的鉴定及表达谱研究
10
作者 贺华良 宾淑英 +3 位作者 陈颖 廖泓之 吴仲真 林进添 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期6-9,共4页
前列腺素(Prostaglandin,PG)的受体(E-Prostaglandin Receptors,EP)与细胞信号传导密切相关,对于昆虫免疫、生殖等具有重要意义。为促进重要蔬菜害虫黄曲条跳甲前列腺素受体的功能研究,结合转录组测序和荧光定量PCR等方法,分析了黄曲条... 前列腺素(Prostaglandin,PG)的受体(E-Prostaglandin Receptors,EP)与细胞信号传导密切相关,对于昆虫免疫、生殖等具有重要意义。为促进重要蔬菜害虫黄曲条跳甲前列腺素受体的功能研究,结合转录组测序和荧光定量PCR等方法,分析了黄曲条跳甲PGE2受体EP(PsEP)的cDNA序列及基因表达情况。结果表明,PsEP的cDNA的开放阅读框为1 323 bp,编码323个氨基酸,含有典型的G-蛋白耦联受体家族1结构域,但其亚型分类还有待进一步验证。PsEP分子在成虫的多种组织器官中都有表达,但生殖系统和中肠相对较高。此外,雌雄之间对比发现,雄虫PsEP表达量均比雌虫对应组织器官的表达量要高。 展开更多
关键词 黄曲条跳甲 前列腺素受体 信号传导 荧光定量PCR
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MN/CA9和Ep-cam基因检测在良恶性胸腔积液鉴别中的价值
11
作者 赖志珍 陶志华 王良兴 《浙江医学》 CAS 2012年第13期1113-1116,共4页
目的探讨MN/CA9和Ep—cam基因检测对良、恶性胸腔积液鉴别诊断的价值。方法选择35例恶性胸腔积液(MPE)和30例良性胸腔积液(BPE),采用SYBRGreenIFQRT—PCR检测胸水沉淀细胞中MN/CA9mRNA、Ep—cammRNA的表达,胸水找脱落细胞,免... 目的探讨MN/CA9和Ep—cam基因检测对良、恶性胸腔积液鉴别诊断的价值。方法选择35例恶性胸腔积液(MPE)和30例良性胸腔积液(BPE),采用SYBRGreenIFQRT—PCR检测胸水沉淀细胞中MN/CA9mRNA、Ep—cammRNA的表达,胸水找脱落细胞,免疫化学发光法检测胸水CEA水平。结果MN/CA9和Ep—cam基因在良、恶性胸腔积液中的表达均有明显差异(均P〈001)。对MPE的诊断,用FQRT—PCR方法检测MN/CA9mRNA和Ep—cammRNA的敏感性(SN)均高于其它两项检查,差异均有统计学意义(均P〈005),而特异性(SP)无统计学差异(均P〉0.05)。细胞学阴性的MPE,MN/CA9诊断的SN为55.6%,SP为100%;Ep—cam诊断的SN为61.5%,SP为100%;两者联合检测的细胞学阴性MPE的SN为76.9%,SP为100%。结论SYBRGreenIFQRT—PCR检测MN/CA9和Ep—cam基因有助于鉴别良、恶性胸腔积液;联合检测MN/CA9和Ep—cam基因的表达有助于提高细胞学阴性MPE诊断的敏感性。 展开更多
关键词 MN/CA9 Ep—cam 胸腔积液 SYBR Green I FQ RT—PCR
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Study on membrane fouling of submerged membrane bioreactor in treating bathing wastewater 被引量:6
12
作者 GUO Jifeng XIA Siqing +1 位作者 WANG Rongchang ZHAO Jianfu 《Journal of Environmental Sciences》 SCIE EI CAS CSCD 2008年第10期1158-1167,共10页
A pilot-scale submerged membrane bioreactor (MBR) was used to treat the bathing wastewater for more than 90 d. Several factors a?ecting membrane fouling were studied, including the variation in transmembrane pressure ... A pilot-scale submerged membrane bioreactor (MBR) was used to treat the bathing wastewater for more than 90 d. Several factors a?ecting membrane fouling were studied, including the variation in transmembrane pressure (TMP), changes in extracellular polymeric substance (EPS), and distribution of membrane resistance (R). The relationships between R and EPS concentration were found to be R = 0.00008(EPSS)2.915 in the mixed liquor (EPSS) and R = 0.2853(EPSm) – 0.824 on the membrane surface (EPSm). The constant ... 展开更多
关键词 MBR membrane fouling extracellular polymeric substance (EPS) PCR-DGGE fluorescent in situ hybridization (FISH)
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丝瓜络更换比例对同步硝化反硝化脱氮和功能菌丰度的影响
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作者 朱晓辉 张立秋 +4 位作者 李淑更 张绍青 雷志娟 黄凤丹 邵兵 《广东化工》 CAS 2021年第2期114-116,106,共4页
本研究以丝瓜络作为生物膜反应器的碳源和生物膜载体,采用同步硝化反硝化(simultaneous nitrification and denitrification,SND)工艺对低碳城市污水进行处理。但长期运行的丝瓜络会失效,导致出水TN浓度不能满足《城镇污水处理厂污染物... 本研究以丝瓜络作为生物膜反应器的碳源和生物膜载体,采用同步硝化反硝化(simultaneous nitrification and denitrification,SND)工艺对低碳城市污水进行处理。但长期运行的丝瓜络会失效,导致出水TN浓度不能满足《城镇污水处理厂污染物排放标准》一级A出水标准。为保证系统的持续运行,本研究采用20%、40%和60%的更换比,考察系统的脱氮效果、胞外聚合物(extracellular polymeric substance,EPS)以及功能菌丰度的变化,确定40%为最佳更换比例。 展开更多
关键词 丝瓜络 同步硝化反硝化 更换比例 EPS 定量PCR
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干酪乳杆菌LC2W胞外多糖生物合成基因簇启动子的鉴定 被引量:2
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作者 杜心恬 宋馨 +3 位作者 刘欣欣 夏永军 艾连中 熊智强 《工业微生物》 CAS 2020年第4期1-5,共5页
干酪乳杆菌LC2W是一株高产胞外多糖的益生乳酸菌,其胞外多糖具有独特的物化特性和益生活性,应用潜力巨大。但LC2W胞外多糖(EPS)生物合成的基因调控研究较少,其核心元件启动子尚未明确。为鉴定干酪乳杆菌LC2W中eps基因簇的启动子,本研究... 干酪乳杆菌LC2W是一株高产胞外多糖的益生乳酸菌,其胞外多糖具有独特的物化特性和益生活性,应用潜力巨大。但LC2W胞外多糖(EPS)生物合成的基因调控研究较少,其核心元件启动子尚未明确。为鉴定干酪乳杆菌LC2W中eps基因簇的启动子,本研究采用生物信息学方法预测得到8个潜在启动子区域,通过RT-PCR方法鉴定出6个启动子元件P2169-2170、P2172-2173、P2174-2175、P2175-2176、P2185-2186、P2189-2190,为干酪乳杆菌EPS合成的转录调控研究奠定基础。 展开更多
关键词 干酪乳杆菌LC2W eps基因簇 启动子 RT-PCR
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产胞外多糖干酪乳杆菌的筛选鉴定及galU基因克隆与分析 被引量:1
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作者 周涛 李烨青 +3 位作者 周通 应碧 周洁 徐波 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第10期228-234,共7页
乳酸菌胞外多糖具有良好的功能特性。从泡菜中分离乳酸菌,初筛到11株产胞外多糖的乳酸菌。经黏度及EPS产量测定,复筛出1株高产EPS的乳酸菌,其产量为771.97μg/m L。采用CTAB法提取该菌株基因组,测定其16S r RNA序列,在NCBI上进行同源序... 乳酸菌胞外多糖具有良好的功能特性。从泡菜中分离乳酸菌,初筛到11株产胞外多糖的乳酸菌。经黏度及EPS产量测定,复筛出1株高产EPS的乳酸菌,其产量为771.97μg/m L。采用CTAB法提取该菌株基因组,测定其16S r RNA序列,在NCBI上进行同源序列比对,建立系统发育树。结果初步确定该菌株为干酪乳杆菌ZJ-4(Lactobacillus casei ZJ-4)。以该菌株基因组为模板,参照干酪乳杆菌BL23(HM162415)的gal U序列设计引物。采用Touch-down PCR扩增得到大约900 bp的gal U序列,经TA克隆、测序,与干酪乳杆菌BL23(HM162415)的gal U序列同源率为98%,表明克隆正确。 展开更多
关键词 干酪乳杆菌 胞外多糖 UDP-葡萄糖焦磷酸化酶 降落PCR
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