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生防荧光假单胞菌2P24中EnvZ/OmpR双因子系统克隆与OmpR原核表达 被引量：1
1
作者 孙冰冰 张伟 +3 位作者 段红英 李伟 田涛 张力群 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2014年第3期41-45,共5页
用Mini-Tn5转座子随机突变荧光假单胞菌野生型菌株2P24,得到抗生素2,4二乙酰基间苯三酚(2,4-diacetylphloroglucinol,2,4-DAPG)产量提高的突变体Sesu-25。对转座子侧翼序列分析表明,转座子插入到EnvZ/OmpR双因子系统的反应调节因子ompR... 用Mini-Tn5转座子随机突变荧光假单胞菌野生型菌株2P24,得到抗生素2,4二乙酰基间苯三酚(2,4-diacetylphloroglucinol,2,4-DAPG)产量提高的突变体Sesu-25。对转座子侧翼序列分析表明,转座子插入到EnvZ/OmpR双因子系统的反应调节因子ompR基因。克隆得到包含完整EnvZ/OmpR系统,全长约为5.9 kb的DNA片段。该双因子系统中的envZ基因和ompR基因与P.fluorescens F113的envZ基因和ompR基因同源性分别为93%和96%。将ompR基因克隆到表达载体pET-22b(+)中,得到重组表达载体pET-ompR。将pET-ompR转入Escherichia coli BL21中得到重组菌株BL21-ompR,用IPTG诱导表达和亲和柱层析法纯化的OmpR蛋白,经SDS-PAGE电泳分析表明ompR基因得到成功表达和纯化。 展开更多
关键词 荧光假单胞菌 随机突变 envz/OmpR 双因子系统
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组氨酸激酶基因envZ调控禽致病性大肠埃希菌生物被膜的机制研究 被引量：1
2
作者 冯寒霜 薛媚 +5 位作者 卢会奇 谷一 邵颖 宋祥军 涂健 祁克宗 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期26-33,共8页
【目的】研究双组分系统ompR/envZ中的组氨酸激酶基因envZ对禽致病性大肠埃希菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)生物被膜形成能力的影响,了解该双组分系统在APEC中对生物被膜的调控机制,为探索生物被膜影响禽致病性大埃希菌... 【目的】研究双组分系统ompR/envZ中的组氨酸激酶基因envZ对禽致病性大肠埃希菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)生物被膜形成能力的影响,了解该双组分系统在APEC中对生物被膜的调控机制,为探索生物被膜影响禽致病性大埃希菌耐药性的途径提供参考。【方法】采用Red同源重组的方法构建envZ基因缺失株,比较野生株和envZ基因缺失株生长特性、生物被膜形成能力的差异。利用转录组学方法分析envZ在转录调控网络中对其生物被膜形成相关基因的调控机制。【结果】成功构建envZ基因缺失株AE17ΔenvZ;envZ基因缺失对APEC的生长速度无明显影响,但使APEC生物被膜的成膜能力减弱。与野生株AE17相比,envZ基因缺失株有711个基因发生差异表达,与生物被膜形成相关的基因显著下调。【结论】envZ基因除了响应环境渗透压,还参与调控APEC生物被膜的形成。 展开更多
关键词 禽致病性大肠埃希菌 envz基因 生物被膜 转录组分析
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嗜水气单胞菌双组分系统EnvZ/OmpR功能探究 被引量：2
3
作者 马世林 李继红 +4 位作者 马倩倩 吴志豪 陈愿 张永安 周洋 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期161-167,共7页
为探究嗜水气单胞菌双组分系统的调控功能,通过同源重组法敲除嗜水气单胞菌双组分基因envZ/ompR,检测各菌株在不同盐浓度胁迫条件下的生长情况,采用结晶紫染色法比较各菌株的生物被膜形成能力,通过全血共培养试验评估各菌株抵御鱼血杀... 为探究嗜水气单胞菌双组分系统的调控功能,通过同源重组法敲除嗜水气单胞菌双组分基因envZ/ompR,检测各菌株在不同盐浓度胁迫条件下的生长情况,采用结晶紫染色法比较各菌株的生物被膜形成能力,通过全血共培养试验评估各菌株抵御鱼血杀伤的能力;比较不同菌株感染斑马鱼的半数致死量(LD50),通过草鱼组织载菌量评判各菌株的侵袭能力,采用荧光定量PCR检测各脏器的促炎因子的转录水平。结果显示,在不同盐度条件下嗜水气单胞菌双基因缺失株ΔenvZ/ompR的生长没有显著差异,而其下游基因ompF和ompC的转录水平显著受到影响;ΔenvZ/ompR株的生物被膜形成能力以及抗鱼全血杀伤能力相较野生型都显著下降。ΔenvZ/ompR的斑马鱼刮伤感染LD50较野生型增长了4.8倍,致病力减弱,在草鱼腹腔感染中其全身扩散能力也较野生株显著减弱,并且ΔenvZ/ompR感染组草鱼脾脏、肝脏和肾脏中促炎因子TNF-α和IL-6的转录水平相对于野生株感染组均显著降低。上述结果表明嗜水气单胞菌双组分系统EnvZ/OmpR参与响应渗透胁迫,参与调控生物被膜形成,且在致病过程尤其是在宿主体内系统扩散过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 嗜水气单胞菌 双组分系统envz/OmpR 盐胁迫 生物被膜 致病力 斑马鱼 草鱼
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基因envZ、iscS、asnC调控根瘤菌胞外多糖产量和环境适应性
4
作者 杨冰洁 袁晓霞 +3 位作者 高梦哲 申奥龙 李华 冀照君 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期277-284,共8页
【目的】Rhizobium yanglingense CCBAU 01603可与豆科锦鸡儿属植物形成高效固氮根瘤,前期研究在含碱培养基中连续进化500代得到进化菌株,发现与其他进化菌株相比,Alk_40中基因envZ、iscS、asnC发生特异SNPs变化导致胞外多糖产量大幅降... 【目的】Rhizobium yanglingense CCBAU 01603可与豆科锦鸡儿属植物形成高效固氮根瘤,前期研究在含碱培养基中连续进化500代得到进化菌株,发现与其他进化菌株相比,Alk_40中基因envZ、iscS、asnC发生特异SNPs变化导致胞外多糖产量大幅降低,进而探究关键基因调控根瘤菌胞外多糖产量和环境适应性。【方法】采用同源重组法构建根瘤菌envZ、iscS、asnC单基因缺失突变株,测定突变株的胞外多糖产量和不同环境条件下的生长情况。【结果】根瘤菌envZ、iscS、asnC基因缺失突变株在YMA培养基中胞外多糖产量显著下降,酸性环境适应性降低,65℃热处理的耐受能力减弱,且胞外多糖产量与根瘤菌耐酸性和耐热性具有一定相关性;根瘤菌envZ和asnC基因缺失突变株对NaCl十分敏感,在含NaCl培养基中的生长繁殖严重受限,在弱碱性环境中适应能力显著降低。【结论】根瘤菌胞外多糖产量受基因iscS、envZ、asnC的调控。 展开更多
关键词 根瘤菌 envz ISCS asnC 胞外多糖 环境适应性
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组氨酸激酶EnvZ调节副溶血弧菌群集性爬动和生物被膜形成的作用机制
5
作者 袁艺萱 吴文婷 +4 位作者 陆倩 姚宁 周秀娟 钟孝俊 杨梦华 《微生物学报》 北大核心 2025年第5期2049-2060,共12页
【目的】探究组氨酸激酶EnvZ调控副溶血弧菌群集性爬动和生物被膜形成的作用机制。【方法】利用含有诱导型启动子的pBAD24与pMal质粒,构建相应基因的过表达质粒,并将其导入野生株和envZ基因缺失株中,通过运动性培养基比较各菌株的群集... 【目的】探究组氨酸激酶EnvZ调控副溶血弧菌群集性爬动和生物被膜形成的作用机制。【方法】利用含有诱导型启动子的pBAD24与pMal质粒,构建相应基因的过表达质粒,并将其导入野生株和envZ基因缺失株中,通过运动性培养基比较各菌株的群集性爬动能力,采用结晶紫染色法检测各菌株的生物被膜形成能力,并结合RT-qPCR与荧光报告系统检测下游基因的表达水平,以探究EnvZ调节副溶血弧菌群集性爬动和生物被膜形成的分子机制。【结果】ΔenvZ菌株的群集性爬动能力显著低于野生株,而导入pBAD24-envZ回补质粒的ΔenvZ菌株能够恢复其群集性爬动能力。这些菌株的群集性爬动能力与侧生鞭毛相关基因的表达水平呈正相关。在envZ基因缺失的菌株中,Scr系统启动子的转录活性显著低于野生株和ΔompR菌株。在envZ基因缺失的菌株中过表达Scr系统,可以显著恢复其群集性爬动;然而,在scrABC基因缺失的菌株中过表达EnvZ,并不能改变其群集性爬动能力。ΔenvZ菌株的生物被膜形成能力显著低于野生株,而pMal-envZ质粒能够使ΔenvZ菌株的生物被膜厚度恢复至野生株水平,但pMal-scrABC重组质粒则无此功能。在ΔenvZ菌株中,胞外多糖操纵子(epsA−J)的启动子活性与关键基因的转录水平均显著低于野生株。【结论】组氨酸激酶EnvZ可通过调控Scr系统的表达来增强副溶血弧菌的群集性爬动能力,同时也可通过调控胞外多糖的表达来促进该菌的生物被膜形成。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 组氨酸激酶 envz/OmpR 群集性爬动 生物被膜
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双组分系统EnvZ/OmpR促进副溶血弧菌抵抗碱胁迫的作用机制 被引量：4
6
作者 姚宁 鲁重 +2 位作者 王菲 钟孝俊 杨梦华 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期5043-5055,共13页
【目的】探究双组分系统(two-component system,TCS)EnvZ/OmpR对副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)抵抗碱胁迫的作用机制。【方法】用SMART在线工具(https://smart.embl.de/)鉴定出副溶血弧菌基因组中的双组分系统EnvZ/OmpR,再利... 【目的】探究双组分系统(two-component system,TCS)EnvZ/OmpR对副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)抵抗碱胁迫的作用机制。【方法】用SMART在线工具(https://smart.embl.de/)鉴定出副溶血弧菌基因组中的双组分系统EnvZ/OmpR,再利用同源重组技术将envZ和ompR基因分别进行缺失,构建相应回补株,比较各菌株的生长曲线来检测相应基因对细菌适应高渗透胁迫和碱胁迫的作用,并结合qRT-PCR及荧光检测系统,筛选参与EnvZ/OmpR抵抗碱胁迫的下游靶基因,鉴定该双组分系统对下游基因的调控机制。【结果】在副溶血弧菌基因组中鉴定出vp0155/vp0154编码EnvZ/OmpR双组分系统同源蛋白。ΔompR菌株在高渗透胁迫和碱胁迫中的生长能力明显弱于野生株,而回补株CΔompR、ΔenvZ和CΔenvZ菌株生长能力与野生株类似。在ΔompR菌株中,孔道蛋白基因vp1218、vp0493、vpa1745、vpa0085与vpa1308的转录水平均明显低于野生株,并且发现这些孔道蛋白基因缺失株(Δvpa1308除外)在碱性环境中生长能力均明显弱于野生株。OmpR蛋白可直接抑制调控因子AphB基因转录,而ΔaphB菌株在碱胁迫中的生长能力明显强于野生株。此外,AphB蛋白可直接抑制孔道蛋白基因vp0493和vpa0085转录。【结论】双组分系统EnvZ/OmpR促进副溶血弧菌抵抗碱胁迫,其中OmpR蛋白可通过抑制调控因子AphB的表达,以促进部分孔道蛋白的表达,从而增强副溶血弧菌抵抗碱胁迫的能力。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 双组分系统 envz/OmpR 碱胁迫
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