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表达J亚群禽白血病病毒Env蛋白的重组血清4型禽腺病毒的构建
1
作者 徐超 谢泉 +6 位作者 武佳妍 王胜男 万志敏 邵红霞 秦爱建 叶建强 李拓凡 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第3期66-73,共8页
旨在为解决国内禽白血病净化周期长以及净化鸡群J亚群禽白血病病毒(ALV-J)感染频发等问题提供新型抗ALV-J策略。本研究利用前期构建好的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与血清4型禽腺病毒(FAdV-4)纤突蛋白Fiber-2融合的重组FAdV-4为载体,并使... 旨在为解决国内禽白血病净化周期长以及净化鸡群J亚群禽白血病病毒(ALV-J)感染频发等问题提供新型抗ALV-J策略。本研究利用前期构建好的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与血清4型禽腺病毒(FAdV-4)纤突蛋白Fiber-2融合的重组FAdV-4为载体,并使用CRISPR/Cas9和Cre-LoxP技术构建表达ALV-J囊膜蛋白(Env)的重组FAdV-4,通过间接免疫荧光试验和Western blot验证重组病毒表达的Env蛋白,测定重组病毒在鸡肝癌细胞系(LMH)细胞中的增殖特性。结果:成功拯救了能表达ALV-J Env蛋白的重组病毒FAdV-4-ALV-J-env,该重组病毒在LMH细胞中的复制效率远低于野生型FAdV-4。本研究构建的重组病毒FAdV-4-ALV-J-env为ALV-J和FAdV-4感染的联防联控提供了二联候选疫苗株。 展开更多
关键词 J亚群禽白血病病毒 env蛋白 血清4型禽腺病毒 重组病毒
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腺相关病毒载体递送Env特异性抗体可阻止停用抗逆转录病毒疗法后的SIV病毒反弹
2
作者 赵林(编译) 《广东药科大学学报》 2025年第2期75-75,共1页
为了实现对HIV-1的持久控制,需要开发终身抗逆转录病毒疗法(ART)的替代疗法。本研究表明,通过腺相关病毒(AAV)递送2种具有强效中和能力及抗体依赖性细胞毒作用的猕猴抗体(靶向猴免疫缺陷病毒SIV的包膜糖蛋白Env),可在感染条形码标记病毒... 为了实现对HIV-1的持久控制,需要开发终身抗逆转录病毒疗法(ART)的替代疗法。本研究表明,通过腺相关病毒(AAV)递送2种具有强效中和能力及抗体依赖性细胞毒作用的猕猴抗体(靶向猴免疫缺陷病毒SIV的包膜糖蛋白Env),可在感染条形码标记病毒SIVmac239M的猕猴停止抑制性ART后,阻止病毒的反弹。在AAV给药后,除1只动物外,其余均实现了抗体的持续表达,且抗药物抗体反应极低。 展开更多
关键词 腺相关病毒载体 env特异性抗体 SIV病毒反弹
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河南省有偿供血者HIV-1外膜蛋白env基因序列分析及表型预测 被引量：5
3
作者 冯霞 杨海儒 +4 位作者 余双庆 周玲 李红霞 李泽琳 曾毅 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期88-94,共7页
应用套式聚合酶链反应(nested-PCR)从60例河南省HIV-1抗体阳性有偿献血者的外周血单核细胞的DNA样品中扩增全长env基因并对扩增产物测序,共扩增到21个全长env基因,序列分析发现其中15个env基因有完整的可读框(ORF),14个为B'亚型,与... 应用套式聚合酶链反应(nested-PCR)从60例河南省HIV-1抗体阳性有偿献血者的外周血单核细胞的DNA样品中扩增全长env基因并对扩增产物测序,共扩增到21个全长env基因,序列分析发现其中15个env基因有完整的可读框(ORF),14个为B'亚型,与国际参考株RL42的基因离散率为4.87%±0.31%,1个为B亚型,与国际参考株HXB2的基因离散率为5.43%。根据核苷酸序列推导出相应的氨基酸序列,并且分析及比较了重要的功能结构域。发现这15个序列的N糖基化位点和数目没有显著变化;CD4受体结合位点高度保守;根据V3环氨基酸序列及净电荷数目,预测大多数分离株使用CCR5辅助受体;V3环四肽序列以典型欧美B亚型GPGR最多,占40%;gp120/gp41剪切位点高度保守,预测所有gp160前体都能有效剪切;四种广谱中和抗体2G12I、gG1b12、4E10及2F5的识别位点高度保守,表明大多数分离株对这四种中和抗体敏感。有必要进一步阐明env基因型与相关功能的关系,这将为疫苗研究和药物开发提供依据。 展开更多
关键词 供血者 HIV-1 序列测定 基因 env
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HIV-1 env基因在重组鸡痘病毒中的表达 被引量：4
4
作者 金宁一 方厚华 +5 位作者 郭志儒 罗坤 古长庆 殷震 邵一鸣 王虹 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 1999年第4期193-196,共4页
在以鸡痘病毒复制非必需区TK基因为侧翼构建的载体 (插入有 16个串联的突变型痘苗病毒P7 5启动子和牛痘病毒A型包涵体晚期启动子及LacZ报告基因 )中的复合启动子下游 ,分别插入编码人免疫缺陷病毒(HIV)Ⅰ型外膜蛋白的env基因和中国株HI... 在以鸡痘病毒复制非必需区TK基因为侧翼构建的载体 (插入有 16个串联的突变型痘苗病毒P7 5启动子和牛痘病毒A型包涵体晚期启动子及LacZ报告基因 )中的复合启动子下游 ,分别插入编码人免疫缺陷病毒(HIV)Ⅰ型外膜蛋白的env基因和中国株HIV 1gp12 0基因 ,通过与野生型鸡痘病毒的同源重组 ,X gal显色挑斑 ,获得 2株重组病毒vUTA - 2f- 16LE和vUTA - 2f- 16LG。经Dot-ELISA、免疫荧光试验、SDS -PAGE和Westernblot检测表明 ,2株重组病毒均能表达gp16 0和gp12 0 ,相对分子质量分别为 16 0 0 0 0和 12 0 0 0 0。经小鼠免疫试验其血清中抗gp12 0抗体A值和脾脏CD4+ /CD8+ T淋巴细胞比值均高于对照组 (P <0 .0 1) ,说明由重组病毒表达的Env蛋白和Gp12 0蛋白具有良好的反应原性和免疫原性。 展开更多
关键词 HIV-1 env基因 gp120基因 基因表达 FPV AIDS疫
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HIV-1包膜蛋白ENV慢病毒载体的构建及表达 被引量：4
5
作者 孙丹丹 李昌 +7 位作者 李太元 朱娜 杜寿文 任大勇 刘存霞 秦艳青 李沂 金宁一 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期440-443,共4页
目的:构建表达HIV-1包膜蛋白ENV的慢病毒载体,感染人胚肾细胞HEK293T,观察env基因在HEK293T中的表达。方法:通过点突变获得HIV-1 env完整基因,将env基因亚克隆至慢病毒穿梭载体pLVX-IRES-ZsGreen1的EcoRⅠ、XhoⅠ位点,构建重组质粒pLV-e... 目的:构建表达HIV-1包膜蛋白ENV的慢病毒载体,感染人胚肾细胞HEK293T,观察env基因在HEK293T中的表达。方法:通过点突变获得HIV-1 env完整基因,将env基因亚克隆至慢病毒穿梭载体pLVX-IRES-ZsGreen1的EcoRⅠ、XhoⅠ位点,构建重组质粒pLV-env,采用脂质体转染法转染HEK293T,经RT-PCR、Western blot检测目的基因表达,同时利用激光共聚焦技术对env基因的表达进行了定位。结果:成功获得了HIV-1 env基因,构建了重组慢病毒质粒pLV-env,RT-PCR、Western blot检测均表明外源基因能够表达,并具有抗原性,同时env基因表达后可以分泌到细胞膜表面膜上。结论:成功构建了含有HIV-1包膜蛋白env基因的重组慢病毒质粒,并验证了其表达,为下一步慢病毒的包装以及细胞模型和动物模型的构建奠定了基础。 展开更多
关键词 env HIV-1 慢病毒载体 真核表达
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禽网状内皮组织增生症病毒env蛋白的表达及其在ELISA方法中的应用 被引量：6
6
作者 张文娟 裴宗飞 牛钟相 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1521-1525,共5页
以pb101质粒为模板,PCR扩增禽网状内皮组织增生症病毒(REV)囊膜糖蛋白env基因片段。构建原核表达质粒pGEX-4T-3-env后,转化入宿主菌BL21,IPTG诱导表达env蛋白,对表达的蛋白进行SDS-PAGE及Western blot分析。结果表明,表达的重组蛋白具... 以pb101质粒为模板,PCR扩增禽网状内皮组织增生症病毒(REV)囊膜糖蛋白env基因片段。构建原核表达质粒pGEX-4T-3-env后,转化入宿主菌BL21,IPTG诱导表达env蛋白,对表达的蛋白进行SDS-PAGE及Western blot分析。结果表明,表达的重组蛋白具有良好的反应原性,相对分子质量约66.4 ku。将表达产物纯化后作为包被抗原,建立了检测REV抗体的间接ELISA方法(Ienv-ELISA)。经应用表明该方法具有良好的特异性、可重复性和敏感性,与IFA及iREV-ELISA结果相比其准确率均超过90%。该方法为检测REV抗体提供了一种快速、准确、简便的技术手段。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 REV env蛋白 原核表达 间接ELISA
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禽白血病病毒J亚群囊膜蛋白env基因的克隆和表达 被引量：9
7
作者 秦爱建 崔冶中 +1 位作者 Lucy Lee Aly Fadly 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期54-59,共6页
禽白血病病毒J亚群 (ALV J)是 90年代鉴定出的ALV的新亚群 ,其囊膜蛋白env基因序别与ALVA E亚群有相当大的差别。为研究ALV Jenv基因及其表达产物的特点 ,用PCR方法扩增出ADOL 4817毒株的env基因 ,并克隆进TA载体 ,经电泳鉴定大小为 1 ... 禽白血病病毒J亚群 (ALV J)是 90年代鉴定出的ALV的新亚群 ,其囊膜蛋白env基因序别与ALVA E亚群有相当大的差别。为研究ALV Jenv基因及其表达产物的特点 ,用PCR方法扩增出ADOL 4817毒株的env基因 ,并克隆进TA载体 ,经电泳鉴定大小为 1 7kb。将克隆出的env基因与杆状病毒pBlue Bac4表达质粒DNA连接 ,构建成转移性载体 pBac4817env ,通过与Bac N Blue杆状病毒DNA共转染 ,获得了重组病毒rBac4817env 2。该重组杆状病毒感染Sf9细胞 ,能高效表达env基因产物。免疫荧光分析结果证明 ,单克隆抗体G2或多价兔抗envgp37血清能识别Sf9细胞中重组env基因表达的特异性抗原 ;Westernblotting分析结果表明 ,表达的重组基因产物的分子量大小约为 90kD～ 94kD。用这些重组基因产物免疫鸡可以诱导鸡产生出高滴度的抗ALV J特异性抗体。这一结果提示 ,这种杆状病毒表达的重组基因产物有助于ALV 展开更多
关键词 禽白血病病毒 J亚群 env基因 克隆 表达
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鸡痘DNA疫苗pVAX-env的构建及其体内外表达 被引量：6
8
作者 洪琴 任晓峰 李广兴 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期105-108,I0002,共5页
利用PCR技术将鸡痘病毒env基因亚克隆到pVAX1真核载体上,构建了含有该基因的真核表达质粒pVAX-env。将质粒pVAX-env体外瞬时转染BHK21细胞通过间接免疫荧光检测蛋白表达。将pVAX-env质粒肌肉注射免疫14日龄雏鸡,通过RT-PCR和组织免疫荧... 利用PCR技术将鸡痘病毒env基因亚克隆到pVAX1真核载体上,构建了含有该基因的真核表达质粒pVAX-env。将质粒pVAX-env体外瞬时转染BHK21细胞通过间接免疫荧光检测蛋白表达。将pVAX-env质粒肌肉注射免疫14日龄雏鸡,通过RT-PCR和组织免疫荧光检测体内质粒表达。结果表明,成功构建了真核表达质粒pVAX-env,并证明pVAX-env在体内体外都能有效表达。研究为鸡痘病毒基因工程疫苗进一步研制及应用奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡痘病毒 env 真核表达
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基于Dim env-YOLO算法的昏暗场景车辆多目标检测 被引量：17
9
作者 郭克友 王苏东 +1 位作者 李雪 张沫 《计算机工程》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期312-320,共9页
低照度的夜间路况复杂,现有夜间车辆识别相关研究较少,且存在识别方法实时性不高、过多占用硬件资源等不足。针对夜间场景车辆识别干扰因素较多、检测效果不佳的问题,提出一种基于YOLOv4的Dim env-YOLO车辆目标检测算法。利用MobileNetV... 低照度的夜间路况复杂,现有夜间车辆识别相关研究较少,且存在识别方法实时性不高、过多占用硬件资源等不足。针对夜间场景车辆识别干扰因素较多、检测效果不佳的问题,提出一种基于YOLOv4的Dim env-YOLO车辆目标检测算法。利用MobileNetV3网络替换原始YOLOv4中的主干网络,以减少模型参数量。在改进的YOLOv4模型上使用图像暗光增强方法,提高车辆目标在昏暗环境中的可识别性。在此基础上,引入注意力机制加强特征信息选择,同时利用深度可分离卷积降低网络计算量。选取北京部分道路的夜间场景图片自制数据集并进行实验验证,结果表明,在存在高斯噪声、模糊扰动、雨雾夜晚等情况下,Dim env-YOLO算法的测试结果较稳定,对于照度低于30 lx的昏暗条件下的车流,其检测mAP值达到90.49%,对于最常见的轿车类别,mAP值达到96%以上,优于Faster-RCNN、YOLOv3、YOLOv4等网络模型在昏暗光照条件下的检测效果。 展开更多
关键词 昏暗场景 车辆检测 深度可分离卷积 Dim env-YOLO算法 MobileNetV3网络
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广西凭祥斗鸡禽白血病病毒检测及分离株env基因分析 被引量：3
10
作者 何成伟 王培坤 +5 位作者 秦丽莉 毕玉彧 邹广珍 杨永立 彭昊 韦平 《动物医学进展》 北大核心 2016年第2期23-26,共4页
为了解广西凭祥市特有家禽品种斗鸡禽白血病病毒（ALV）的感染情况,采集了该市3个鸡场斗鸡的肛拭子、血清、血浆样品共344份,用禽白血病ELISA检测试剂盒进行检测。结果显示,斗鸡ALV感染情况严重,其中肛拭样品ALV-p27抗原阳性率高达39.1... 为了解广西凭祥市特有家禽品种斗鸡禽白血病病毒（ALV）的感染情况,采集了该市3个鸡场斗鸡的肛拭子、血清、血浆样品共344份,用禽白血病ELISA检测试剂盒进行检测。结果显示,斗鸡ALV感染情况严重,其中肛拭样品ALV-p27抗原阳性率高达39.13%,血清样品病毒分离阳性率为12.97%,ALV-J和ALV-A/B抗体阳性率分别为22.39%和7.46%;对从2只斗鸡获得的病毒分离株DJ-3-18和DJ-45进行病毒囊膜蛋白基因env的扩增、序列测定及比较分析,结果显示2株病毒的gp85基因与ALV-A亚群参考株之间氨基酸的同源性为88.2%～96.5%,gp37基因与ALV-A亚群参考株之间氨基酸的同源性为91.4%～98.0%,其中与台湾A亚群蛋鸡源分离株TW-3577的亲缘关系最近,而与ALV其他亚群毒株的同源性则较低。结果表明,首次获得的2株斗鸡源ALV分离株属A亚群。 展开更多
关键词 斗鸡 禽白血病 流行病学调查 env基因 ALV-A亚群
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重组杆状病毒表达的EIAVEnv蛋白与含有env基因重组痘苗病毒的联合免疫 被引量：2
11
作者 代春铭 张晓燕 +2 位作者 张然然 邵一鸣 沈荣显 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期410-414,共5页
目的 :构建新型的马传染性贫血病毒 (EIAV)的候选疫苗。方法 :利用BAC To BAC杆状病毒表达系统 ,将中国马传贫驴白细胞弱毒疫苗 (EIAVDLV)及其亲本株 (EIAVLN)env基因导入到杆状病毒基因组中。转染昆虫细胞后 ,得到的重组病毒用SDS PAGE... 目的 :构建新型的马传染性贫血病毒 (EIAV)的候选疫苗。方法 :利用BAC To BAC杆状病毒表达系统 ,将中国马传贫驴白细胞弱毒疫苗 (EIAVDLV)及其亲本株 (EIAVLN)env基因导入到杆状病毒基因组中。转染昆虫细胞后 ,得到的重组病毒用SDS PAGE和Westernblot检测表达产物。以本实验室构建的含有EIAVenv基因的重组痘苗病毒 ,单独或与重组杆状病毒表达的EIAVEnv蛋白联合免疫小鼠。结果 :构建的重组杆状病毒能正确表达全长Env蛋白。与单独免疫组相比 ,联合免疫组免疫应答显著增强 ,其中中和抗体的滴度提高5～ 9倍。结论 :含有EIAVenv基因的重组痘苗病毒与Env蛋白抗原联合免疫 ,能够诱导高滴度的中和抗体。 展开更多
关键词 EIAV env蛋白 重组杆状病毒 重组痘苗病毒 免疫应答
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禽白血病病毒J亚群env基因产物的抗原性分析 被引量：4
12
作者 秦爱建 刘岳龙 +2 位作者 金文杰 Lucy Lee Aly Fadly 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期99-104,共6页
用PCR扩增方法将ALV Jenv基因不同片段进行了克隆 ,并构建了env基因片段GST融合蛋白载体。用Westernblot实验证明 ,大肠杆菌表达的不同env基因片段的GST融合蛋白能与相应的单克隆抗体产生特异性反应性 ,单克隆抗体JE9和G2识别的抗原位... 用PCR扩增方法将ALV Jenv基因不同片段进行了克隆 ,并构建了env基因片段GST融合蛋白载体。用Westernblot实验证明 ,大肠杆菌表达的不同env基因片段的GST融合蛋白能与相应的单克隆抗体产生特异性反应性 ,单克隆抗体JE9和G2识别的抗原位点位于gp85的氨基酸 6 5～ 1 5 5区域 ,而I45识别的抗原表位位于env基因的另一区域 (1 5 6～ 2 3 3位氨基酸 )。ALV J氨基酸多肽而非糖基化位点决定ALV 展开更多
关键词 禽白血病病毒 J亚群 env基因 表达 抗原分析
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外源性绵羊肺腺瘤病毒新疆株env囊膜蛋白生物信息学分析 被引量：2
13
作者 赵庆亮 卢梅 +3 位作者 王永树 谭艳 冉光鑫 盛金良 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2021年第7期792-796,共5页
目的采用生物信息学方法分析外源性绵羊肺腺瘤病毒新疆株env囊膜蛋白的结构和功能。方法利用NCBI数据库查询外源性对绵羊肺腺瘤病毒新疆株env囊膜蛋白基因序列,采用在线软件ProtParam、Prot Scale、DNASTAR、SOPMA、SWISS MODEL、SOSUI... 目的采用生物信息学方法分析外源性绵羊肺腺瘤病毒新疆株env囊膜蛋白的结构和功能。方法利用NCBI数据库查询外源性对绵羊肺腺瘤病毒新疆株env囊膜蛋白基因序列,采用在线软件ProtParam、Prot Scale、DNASTAR、SOPMA、SWISS MODEL、SOSUI、TMHMM2.0、Signal 4.1、Bepipred Linear Epitope Prediction、PROSITE SCAN、PSOTR分析预测env蛋白的理化性质、亲疏水性、二级结构、三级结构、跨膜区、信号肽、B细胞表位、结构域、亚细胞定位。结果 env蛋白由615个氨基酸组成,分子式为C_(3144)H_(4924)N_(840)O_(879)S_(29),相对分子质量为69.5×10^(3),理论等电点为8.48,不稳定系数为37.04(为稳定蛋白),脂肪系数平均为99.56,总平均亲水性为-0.048。二级结构以α-螺旋为主,占42.76%,无规卷曲占38.7%,延伸链占16.59%,β-转角占1.59%。三级结构env蛋白序列与同源模板的序列在408~540区域存在21%的同源性,只能进行部分同源建模。env蛋白存在2个跨膜区,无信号肽。env蛋白包含有20个线性表位,其中356-442、490-555、104-131、206-230、448-469区段是env蛋白的优势抗原表位区段。env蛋白包含9个N-糖基化位点,4个蛋白激酶C磷酸化作用位点,4个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化作用位点,4个N-豆蔻酰基化位点,1个酰胺化位点,1个细胞附着序列位点。亚细胞定位分析预测env蛋白为细胞膜蛋白,env蛋白绵羊肺腺瘤病毒的囊膜蛋白。结论外源性绵羊肺腺瘤病毒新疆株env囊膜蛋白存在多个B细胞抗原表位及1个细胞附着序列位点,可作为潜在抗原用于env蛋白绵羊肺腺瘤病毒感染疫苗的研制。 展开更多
关键词 绵羊肺腺瘤 env蛋白 生物信息学 B细胞表位 免疫原性
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绵羊肺腺瘤内、外源性env基因比较分析 被引量：2
14
作者 孔汉金 张克山 +3 位作者 刘永杰 尚佑军 吴斌 刘湘涛 《中国动物传染病学报》 CAS 2013年第3期18-26,共9页
绵羊肺腺瘤(Ovine pulmonary adenocarcinoma,OPA)是由绵羊肺腺瘤反转录病毒(Jaagsiekte retrovirus,JSRV)感染引起的成年绵羊的一种慢性、进行性、接触传染性肺脏疾病。env是JSRV的主要毒力基因之一,而在正常羊的基因组中也存在着JSRV... 绵羊肺腺瘤(Ovine pulmonary adenocarcinoma,OPA)是由绵羊肺腺瘤反转录病毒(Jaagsiekte retrovirus,JSRV)感染引起的成年绵羊的一种慢性、进行性、接触传染性肺脏疾病。env是JSRV的主要毒力基因之一,而在正常羊的基因组中也存在着JSRV的内源性基因片段。为比较分析JSRV内、外源性env的特征,本文扩增并测定了正常绵羊肺组织的内源性env基因(Enenv),运用生物信息学技术,比较分析了其与外源性绵羊肺腺瘤病毒JSRV21(AF105220)env基因(Exenv)的遗传进化关系,二、三级蛋白结构和抗原表位。结果表明Enenv和Exenv核苷酸同源性为88.1%,推导的氨基酸同源性为92.0%,两者的主要差异位于TM区和YXXM基序。本结果为进一步研究JSRVenv基因功能提供了新线索。 展开更多
关键词 绵羊肺腺瘤 env基因 序列分析 结构预测
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HIV-1 env基因序列分析及其与长期感染不进展现象相关性研究 被引量：2
15
作者 许晶 王媛 +1 位作者 黎志东 徐志凯 《中国皮肤性病学杂志》 CAS 北大核心 2008年第3期155-156,共2页
目的研究HIV-1长期感染不进展现象与HIV-1 env基因变异的关系。方法用巢式聚合酶链反应(nested-PCR)对21例感染HIV-1毒株7年以上者外周血单一核细胞(PBMCs)的核酸样本进行扩增,获得HIV-1膜蛋白(env)基因的核酸片段,对其C2-V3及邻区350-... 目的研究HIV-1长期感染不进展现象与HIV-1 env基因变异的关系。方法用巢式聚合酶链反应(nested-PCR)对21例感染HIV-1毒株7年以上者外周血单一核细胞(PBMCs)的核酸样本进行扩增,获得HIV-1膜蛋白(env)基因的核酸片段,对其C2-V3及邻区350-450个核苷酸序列进行测定和分析,所得结果与HIV-1该亚型国际标准株进行比较,分析共享序列及突变序列,制作系统树,计算离散率。结果离散率和系统树分析21个毒株均为HIV-1 B亚型,毒株间基因离散率在2%左右,高于前期研究结果;未见V3环顶端四肽特征性GPGR和GRGQ,也未见前期研究曾经发现的脯氨酸向异亮氨酸的变异现象。结论HIV-1长期感染者体内毒株env基因无规律性突变。 展开更多
关键词 HIV-1 长期感染不进展者 膜蛋白(env)基因
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云南瑞丽县IDUs人群HIV-1感染者毒株env基因C2-V3区序列的测定 被引量：4
16
作者 方荣 王斌 +2 位作者 路永波 宋旭霞 邵济钧 《青岛大学医学院学报》 CAS 2000年第1期20-22,共3页
1目的　了解云南瑞丽县 1994年以后静脉药瘾 (IDU s)人群 HIV- 1感染者分离株的分子流行病学特征。 2方法　运用套式聚合酶链反应扩增 HIV- 1env基因 C2 - V3区 ,将扩增片段纯化后与 p EGM5 zf(+)载体连接 ,再克隆入大肠杆菌 ,提取重组... 1目的　了解云南瑞丽县 1994年以后静脉药瘾 (IDU s)人群 HIV- 1感染者分离株的分子流行病学特征。 2方法　运用套式聚合酶链反应扩增 HIV- 1env基因 C2 - V3区 ,将扩增片段纯化后与 p EGM5 zf(+)载体连接 ,再克隆入大肠杆菌 ,提取重组质粒 ,使用 DNA自动测序仪进行序列测定。 3结果　与此地区 1989年分子流行病学资料比较 ,V3区变异不显著 ,未发现新的亚型与毒株。 4结论　 5株 HIV- 1毒株进化关系非常密切 ,这一地区IDUs人群中 HIV- 1的流行毒株仍以美欧 HIV- 1SF2株为主。 展开更多
关键词 HIV-1 序列分析 DNA 艾滋病 env基因 IDUS
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禽网状内皮组织增生症病毒env基因的原核表达及其多克隆抗体制备 被引量：1
17
作者 李凯 高宏雷 +4 位作者 祁小乐 高玉龙 高立 邓小芸 王笑梅 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期812-814,共3页
为原核表达禽网状内皮组织增生症病毒(REV)env蛋白及制备抗env蛋白的高效价多克隆抗体,本研究以pMD18T-env(HLJR0901株)为模板,扩增得到REV的env全长基因,将其克隆于pET-32a(+)中。将阳性重组质粒pET-env转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞... 为原核表达禽网状内皮组织增生症病毒(REV)env蛋白及制备抗env蛋白的高效价多克隆抗体,本研究以pMD18T-env(HLJR0901株)为模板,扩增得到REV的env全长基因,将其克隆于pET-32a(+)中。将阳性重组质粒pET-env转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达。利用亲和层析纯化重组蛋白,复性后免疫BALB/c小鼠,制备抗env多克隆血清。SDS-PAGE及western blot结果表明,env基因以融合蛋白形式获得正确表达,相对分子质量约为84ku,表达产物具有良好免疫原性;IFA结果显示,制备的抗env多克隆血清能与REV野毒株特异性反应;ELISA效价达到1∶105以上。该研究为REV的检测及env蛋白的深入研究奠定了基础。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 env基因 原核表达 纯化 多克隆抗体
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HIV-2 env基因在大肠杆菌和重组痘苗病毒中的表达 被引量：1
18
作者 王秀清 金宁一 +5 位作者 田梅 郭志儒 方厚华 顾万钧 李萍 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期216-220,共5页
将编码人Ⅱ型免疫缺陷病毒（ＨＩＶ－２）ｅｎｖｇｐ１２０（Ｅ１）和ｇｐ３６（Ｅ２）分别克隆到原核高效表达载体ｐＥＴ１７ｂ、ｐＢＶ２２０和真核表达载体ｐ１０、ｐ１６中，构建成８个重组质粒。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒ... 将编码人Ⅱ型免疫缺陷病毒（ＨＩＶ－２）ｅｎｖｇｐ１２０（Ｅ１）和ｇｐ３６（Ｅ２）分别克隆到原核高效表达载体ｐＥＴ１７ｂ、ｐＢＶ２２０和真核表达载体ｐ１０、ｐ１６中，构建成８个重组质粒。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析证明，在原核表达系统成功地表达了ＨＩＶ－２ｅｎｖ融合蛋白，表达的蛋白分子量分别为３５０００、７００００和５００００，而原核表达质粒ｐＥＴＥ１在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶的３５０００处可见明显的额外蛋白带。经薄层扫描测定，原核系统表达的Ｅｎｖ蛋白（ｇｐ１２０）相对含量为５．８％。在真核细胞中表达的Ｅｎｖ蛋白经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测分析，分子量分别为６００００、５７０００和４２０００。上述表达的Ｅｎｖ蛋白均能与ＨＩＶ－２阳性血清发生特异性反应。 展开更多
关键词 HIV-2 env蛋白 表达 大肠杆菌 痘苗病毒
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五华鸡J亚群白血病病毒env部分基因的克隆和序列分析 被引量：2
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作者 戴银 张丹俊 +1 位作者 胡晓苗 赵瑞宏 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第12期122-125,共4页
本试验通过PCR技术获得了安徽省地方品种五华鸡禽白血病病毒J亚群(avian leukosis virus subgroup J,ALV-J)env部分基因序列ALV-J-env1,并将该序列与GenBank数据库中登录的8条env基因相应序列进行了比对分析。结果表明,五华鸡已经感染了... 本试验通过PCR技术获得了安徽省地方品种五华鸡禽白血病病毒J亚群(avian leukosis virus subgroup J,ALV-J)env部分基因序列ALV-J-env1,并将该序列与GenBank数据库中登录的8条env基因相应序列进行了比对分析。结果表明,五华鸡已经感染了J亚群禽白血病,且部分鸡个体已经发病。通过分析可见,ALV-J-env1与所比较的基因序列同源性介于94.2%～96.6%之间,说明不同毒株之间的env基因有一定变异。但与ALV-J-env1同源性最高的是来自于中国ALV-J毒株的HQ425636和HM235665基因序列,且在进化树中聚集为一组,暗示它们之间亲缘关系较近,由共同的毒株进化而来。与ALV-J-env1同源性最低的是来源于马来西亚毒株的AY312965基因序列,遗传进化分析也进一步证实,两者之间亲缘关系较远。 展开更多
关键词 禽白血病病毒J亚群 env部分基因 序列分析
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HIV-1SF2株env基因(120)在大肠杆菌中的表达 被引量：6
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作者 王斌 邵一鸣 曾毅 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第1期18-22,共5页
运用基因重组技术，将ＨＩＶ－１ＳＦ２株编码外膜蛋白ｇｐ１２０的ｅｎｖ基因片段与原核载体ｐＢＶ２２０进行重组，构建成质粒ｐＢＶＳＦ２ｅｎｖ，并在肠杆菌（ＥＣｏｉｌＤＨ１０ｂ）中获得表达，经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ反应证实... 运用基因重组技术，将ＨＩＶ－１ＳＦ２株编码外膜蛋白ｇｐ１２０的ｅｎｖ基因片段与原核载体ｐＢＶ２２０进行重组，构建成质粒ｐＢＶＳＦ２ｅｎｖ，并在肠杆菌（ＥＣｏｉｌＤＨ１０ｂ）中获得表达，经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ反应证实，该重组蛋白可与来自ＨＩＶ－１感染者的血清（含多克隆抗体）发生特异性反应。 展开更多
关键词 艾滋病毒 艾滋病毒1 毒株 env基因 基因表达
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