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诱导型eIF3g人工microRNA表达载体的构建及应用 被引量：4
1
作者 褚丽莎 韩娜 +1 位作者 宋向阳 曹江 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期135-138,共4页
目的:构建可用四环素调控的针对人eIF3g的人工microRNA表达载体,用于抑制肿瘤细胞中eIF3g的表达。方法:利用网络资源设计针对人eIF3g的人工microRNA,以PCR方法克隆,经DNA测序验证后亚克隆至四环素调控表达系统的pRevTRE2载体上,得到pRev... 目的:构建可用四环素调控的针对人eIF3g的人工microRNA表达载体,用于抑制肿瘤细胞中eIF3g的表达。方法:利用网络资源设计针对人eIF3g的人工microRNA,以PCR方法克隆,经DNA测序验证后亚克隆至四环素调控表达系统的pRevTRE2载体上,得到pRevTRE2-eIF3g-microRNA。将四环素调控表达系统的Tet-off质粒转染K562细胞获得稳定转染克隆后,再利用带有报告基因GFP的pRevTRE2-GFP转染选择调控能力较好的K562/Tet-off细胞株,将pRevTRE2-eIF3g-microRNA转染K562/Tet-off细胞,Westernblot检测eIF3g的表达,以研究eIF3g人工microRNA的作用效果。结果:DNA测序结果显示,针对人eIF3g的人工microRNA的克隆正确。pRevTRE2-GFP转染结果表明所选择的K562/Tet-off细胞株有较好的诱导功能。Westernblot结果显示,转染pRevTRE2-eIF3g-microRNA的K562/Tet-off细胞可用四环素调控eIF3g人工microRNA的表达从而抑制K562细胞中eIF3g的表达。结论:成功构建了可用四环素调控的eIF3g人工mi-croRNA表达载体,能有效调控K562细胞中eIF3g的表达。 展开更多
关键词 eif3g MICRORNA 四环素诱导表达系统
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eIF3g差异表达的乳癌细胞模型的建立 被引量：2
2
作者 李春春 陈丽红 +2 位作者 叶景佳 张行 曹江 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1226-1231,共6页
真核翻译起始因子3的亚单位eIF3g在一些多药耐药肿瘤细胞中表达上调。背景相近而eIF3g表达有明显差异的肿瘤细胞模型的建立对阐明其作用及机制有重要意义。该研究利用四环素调控的Tet-On Advanced诱导表达系统,分别构建了可诱导过表达... 真核翻译起始因子3的亚单位eIF3g在一些多药耐药肿瘤细胞中表达上调。背景相近而eIF3g表达有明显差异的肿瘤细胞模型的建立对阐明其作用及机制有重要意义。该研究利用四环素调控的Tet-On Advanced诱导表达系统,分别构建了可诱导过表达外源性eIF3g和表达eIF3g人工microRNA的载体,并包装为相应的慢病毒,将慢病毒分别感染乳腺癌细胞Bcap37,经400μg/mLG418和0.4μg/mL Puromycin筛选后,分别获得稳定转染的乳癌细胞克隆Bcap37/Tet-On-eIF3g和Bcap37/Tet-On-eIF3gmiR。将这些细胞克隆分别在1μg/mL DOX的作用下诱导培养72 h,用West-ern blot检测eIF3g的表达。结果显示,Bcap37/Tet-On-eIF3g中eIF3g表达明显增加,Bcap37/Tet-On-eIF3gmiR中eIF3g表达抑制明显。该工作成功建立了可诱导外源性eIF3g过表达和抑制内源性eIF3g表达的乳腺癌细胞模型,为进一步的研究打下了基础。 展开更多
关键词 eif3g 差异表达 乳腺癌 细胞模型
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斑节对虾真核生物翻译起始因子3亚基4(btseIF3g)序列分析及组织表达特性 被引量：1
3
作者 陈亮 张殿昌 +3 位作者 杨丽诗 黄建华 杨其彬 江世贵 《南方水产》 CAS 2009年第3期1-9,共9页
通过mRNA差异显示(differential display,DD)技术筛选的差异片段,与斑节对虾(Penaeus monodon)混合组织cDNA文库中的EST进行拼接,获得斑节对虾真核生物翻译起始因子3亚基4(btseIF3g)的全序列(GenBank登录号:FJ829364)。btseIF3g全长1041... 通过mRNA差异显示(differential display,DD)技术筛选的差异片段,与斑节对虾(Penaeus monodon)混合组织cDNA文库中的EST进行拼接,获得斑节对虾真核生物翻译起始因子3亚基4(btseIF3g)的全序列(GenBank登录号:FJ829364)。btseIF3g全长1041bp,由72bp5′非编码区、90bp3′非编码区以及879bp的开放阅读框组成,推测编码一个长度为292个氨基酸的蛋白。经BLAST分析,btseIF3g C端含有一个RNA识别基序(RNA recognition motif,RRM)的保守结构域(E值为2.72e-25)。利用氨基酸序列进行系统发育分析表明,btseIF3g与eIF3g属于同一分支。采用荧光定量PCR(Real-time PCR)方法对250日龄的雌、雄斑节对虾不同组织表达特性研究发现,btseIF3g在眼柄神经节、脑神经、肝胰腺、性腺和肌肉组织中均有表达,在卵巢中的相对表达量极显著(P<0.01)高于其他组织,这一结果提示eIF3g可能与斑节对虾卵巢发育相关。 展开更多
关键词 斑节对虾 eif3g 克隆 组织表达
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水稻eIF3g亚基编码基因的克隆及植物表达载体构建
4
作者 倪继翔 崔鹏 +2 位作者 费冰雁 何纪友 刘宏波 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1846-1849,共4页
真核生物起始因子(e IF)种类多且复杂,广泛参与真核生物翻译起始进程,并在植物生长发育调控过程中发挥重要的功能。本研究前期通过酵母双杂交从水稻cDNA文库筛选到一个可能调控根系生长发育的起始因子,CDS全长为828 bp,该基因编码水稻eI... 真核生物起始因子(e IF)种类多且复杂,广泛参与真核生物翻译起始进程,并在植物生长发育调控过程中发挥重要的功能。本研究前期通过酵母双杂交从水稻cDNA文库筛选到一个可能调控根系生长发育的起始因子,CDS全长为828 bp,该基因编码水稻eIF3g亚基,命名为OseIF3g1。利用RT-PCR技术进行克隆,将该基因全长CDS通过BamHⅠ和SmaⅠ酶切位点连接至植物表达载体pBI121,经双酶切验证后确认已成功构建转基因过表达载体,为该基因后续的遗传转化及相关功能研究提供基础。 展开更多
关键词 水稻 eif3g亚基 基因克隆 载体构建
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成年牦牛和雄性不育犏牛睾丸eIF4G3 mRNA水平的比较 被引量：1
5
作者 雷杰雯 黄林 +2 位作者 杨乐 金素钰 郑玉才 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第8期208-211,298,共5页
为了比较牦牛和犏牛睾丸组织中真核起始因子e IF4G3基因的相对表达量,探讨e IF4G3基因表达与犏牛雄性不育的关系,试验从牦牛、犏牛睾丸组织中提取总RNA,采用实时荧光定量PCR技术检测牦牛和犏牛睾丸组织中e IF4G3基因mRNA水平。结果表明... 为了比较牦牛和犏牛睾丸组织中真核起始因子e IF4G3基因的相对表达量,探讨e IF4G3基因表达与犏牛雄性不育的关系,试验从牦牛、犏牛睾丸组织中提取总RNA,采用实时荧光定量PCR技术检测牦牛和犏牛睾丸组织中e IF4G3基因mRNA水平。结果表明:牦牛睾丸中e IF4G3基因的表达量极显著高于犏牛(P<0.01)。说明了e IF4G3作为一个重要的翻译调控因子,可能与犏牛睾丸组织中蛋白质表达的改变有一定关联。 展开更多
关键词 牦牛 犏牛 eIF4G3基因 定量PCR 睾丸
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