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青鳉eef1a1l3基因的表达特征及抗体制备
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作者 黄岩 林淑婷 +2 位作者 邓菊 梁晶婕 陈天圣 《淡水渔业》 北大核心 2025年第1期60-68,共9页
青鳉(Oryzias latipes)是研究性别分化和生殖调控的重要模式鱼类,前期通过青鳉性腺转录组发现eef1a1l3 mRNA在卵巢中高表达,而在精巢几乎不表达,推测其参与性别分化和卵巢发育的调控。生物信息学分析显示,Eef1a1l3蛋白在硬骨鱼类中非常... 青鳉(Oryzias latipes)是研究性别分化和生殖调控的重要模式鱼类,前期通过青鳉性腺转录组发现eef1a1l3 mRNA在卵巢中高表达,而在精巢几乎不表达,推测其参与性别分化和卵巢发育的调控。生物信息学分析显示,Eef1a1l3蛋白在硬骨鱼类中非常保守。为探究eef1a1l3基因的功能,通过半定量PCR(SqRT-PCR)绘制了eef1a1l3基因在不同组织和早期不同发育时期的表达谱。通过抗原选取、原核表达、蛋白纯化以及动物免疫实验获取Eef1a1l3多克隆抗体,并对该抗体进行了特异性的检测以及效价的鉴定。结果显示,eef1a1l3 mRNA在成体组织中仅在卵巢特异表达,在早期胚胎发育阶段呈现母源性表达。制备的Eef1a1l3多克隆抗体与抗原结合的最大稀释倍数为1∶64000,显示出良好的免疫原性,并且Eef1a1l3蛋白在青鳉性腺中的卵巢而非精巢中有表达,这与mRNA表达模式一致。综上,eef1a1l3基因可能是早期胚胎发育和卵巢发育的重要调控因子,并且制备的Eef1a1l3多克隆抗体可以应用于青鳉及其他硬骨鱼类eef1a1l3基因功能的相关研究。 展开更多
关键词 青鳉(Oryzias latipes) eef1a1l3基因 多克隆抗体 表达模式 性别分化
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eEF1A1通过正向调控NOB1的表达促进肝癌细胞的侵袭和转移 被引量:11
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作者 张文明 项明峰 +4 位作者 郑楚骞 陈磊峰 戈进 晏琛 刘秀霞 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1195-1202,共8页
目的探讨真核翻译延长因子1A1(eEF1A1)对肝癌侵袭转移的影响机制。方法采用荧光定量PCR和Western blot法检测多种肝癌细胞系和正常肝脏细胞中eEF1A1和NI1/RPN12结合蛋白1同源物(NOB1)的mRNA和蛋白表达。肝癌细胞中干扰和过表达eEF1A1后... 目的探讨真核翻译延长因子1A1(eEF1A1)对肝癌侵袭转移的影响机制。方法采用荧光定量PCR和Western blot法检测多种肝癌细胞系和正常肝脏细胞中eEF1A1和NI1/RPN12结合蛋白1同源物(NOB1)的mRNA和蛋白表达。肝癌细胞中干扰和过表达eEF1A1后,通过Transwell侵袭实验和RTCA实验观察肝癌细胞侵袭迁移能力的变化,并观察肝癌细胞中NOB1mRNA及蛋白表达变化。在稳定干扰eEF1A1表达的HCCLM3细胞中过表达NOB1,或在过表达eEF1A1的MHCC97h细胞中干扰NOB1的表达,分析eEF1A1和NOB1蛋白表达水平和细胞侵袭迁移能力。结果肝癌细胞中eEF1A1和NOB1表达明显高于正常肝细胞,并呈正相关。肝癌细胞中干扰eEF1A1表达可明显降低肝癌细胞的侵袭迁移能力,同时NOB1的mRNA和蛋白表达也显著被降低(P均<0.01);过表达eEF1A1后明显增加肝癌细胞的侵袭迁移能力,同时也增加NOB1的mRNA和蛋白表达(P均<0.01)。在稳定干扰eEF1A1表达的HCCLM3细胞中过表达NOB1导致NOB1表达和肝癌细胞侵袭迁移能力的恢复(P均<0.01);然而在稳定过表达eEF1A1的肝癌细胞系中降低NOB1导致NOB1表达的下调和肝癌细胞侵袭迁移能力的抑制(P均<0.01)。结论肝癌细胞中eEF1A1正向调控NOB1表达,进而影响肝癌细胞的侵袭和迁移。 展开更多
关键词 肝细胞性肝癌 eef1a1 NOB1 侵袭和迁移
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eEF1A1基因克隆、原核分泌表达及融合蛋白纯化 被引量:2
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作者 郭艳荣 常晓月 +2 位作者 崔晓君 魏勋斌 朱乃硕 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期127-133,共7页
eEF1A1作为蛋白合成中的重要翻译延伸因子,可与多种功能性蛋白如F-actin、BPOZ-2结合,并在细胞凋亡、蛋白降解方面起重要作用。以往原核基因工程蛋白表达系统大多为包涵体表达的变性分子,需要复性。为了获得eEF1A1原核分泌性可溶性蛋白... eEF1A1作为蛋白合成中的重要翻译延伸因子,可与多种功能性蛋白如F-actin、BPOZ-2结合,并在细胞凋亡、蛋白降解方面起重要作用。以往原核基因工程蛋白表达系统大多为包涵体表达的变性分子,需要复性。为了获得eEF1A1原核分泌性可溶性蛋白分子,克隆了人eEF1A1蛋白编码序列(约1 300 bp),并成功构建pET22b-A原核分泌表达重组质粒,转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株,0.4 mmol/L终浓度IPTG诱导,经不同温度下包涵体与胞浆蛋白组分分析,快速明确蛋白表达情况,即诱导4 h后,37℃表达于包涵体组分,在30℃分泌表达至胞浆组分。通过His-Trap亲和层析纯化柱进行线性洗脱,Bradford法测定蛋白浓度高达620 mg/mL,SDS-PAGE分析纯度约为95%,蛋白大小符合50 kD,Western blotting显示目的蛋白能被eEF1A1抗体识别;质谱分析证实重组蛋白为人eEF1A1蛋白分子。为进一步研究其与重要功能性蛋白的相互作用及在细胞凋亡和蛋白降解中的作用奠定基础。 展开更多
关键词 eef1a1 基因克隆 分泌表达 融合蛋白 蛋白纯化
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Verification of the Interaction between SET and eEF1A1 in Human Liver Cells by Co-immunoprecipitation 被引量:2
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作者 杨亮 杨细飞 +2 位作者 张毅 刘建军 李杰 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2010年第8期87-90,共4页
[Objective] The aim was to investigate the possible interaction between SET and eEF1A1 in human liver cells. [Method] Firstly the total proteins of human L-02 liver cells were extracted under non-denaturing conditions... [Objective] The aim was to investigate the possible interaction between SET and eEF1A1 in human liver cells. [Method] Firstly the total proteins of human L-02 liver cells were extracted under non-denaturing conditions; then,mouse anti-human SET and rabbit anti-human eEF1A1 antibodies were used to perform the co-immunoprecipitation respectively; subsequently,the immunoprecipitations was correspondingly detected with rabbit anti-human eEF1A1 and mouse anti-human SET antibodies by Western Blot. [Result] EEF1A1 was detected in protein complex from the immunoprecipitations by using anti-SET antibody,and SET also was detected in immunoprecipitations by using anti-eEF1A1 antibody. [Conclusion] The interaction between SET and eEF1A1 in human liver cells was confirmed. 展开更多
关键词 SET eef1a1 IMMUNOPRECIPITATION INTERACTION
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利用免疫共沉淀技术验证SET与eEF1A1在人肝细胞内的相互作用 被引量:2
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作者 杨亮 杨细飞 +2 位作者 张毅 刘建军 李杰 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第35期19946-19948,共3页
[目的]探讨SET与eEF1A1在人肝细胞内是否存在相互作用。[方法]以人L-02肝细胞为材料,在非变性条件下提取总蛋白,将鼠抗人SET、兔抗人eEF1A1抗体分别加到总蛋白提取物中,用偶联了琼脂糖珠的Protein A/G分离抗原抗体复合物,最后分别用兔抗... [目的]探讨SET与eEF1A1在人肝细胞内是否存在相互作用。[方法]以人L-02肝细胞为材料,在非变性条件下提取总蛋白,将鼠抗人SET、兔抗人eEF1A1抗体分别加到总蛋白提取物中,用偶联了琼脂糖珠的Protein A/G分离抗原抗体复合物,最后分别用兔抗人eEF1A1、鼠抗人SET抗体进行Western blotting检测。[结果]在用SET抗体免疫共沉淀下来的蛋白复合物中检测到eEF1A1,同时在用eEF1A1抗体免疫共沉淀下来的蛋白复合物中也检测到SET。[结论]SET与eEF1A1在人肝细胞内存在相互作用。 展开更多
关键词 SET eef1a1 免疫共沉淀 相互作用
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肺癌病灶中eEF1A1表达量对癌细胞负荷程度及增殖活性的影响 被引量:3
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作者 陈双喜 《海南医学院学报》 CAS 2017年第23期3286-3289,共4页
目的:探讨肺癌病灶中eEF1A1表达量对癌细胞负荷程度及增殖活性的影响。方法:200例在本院接受肺癌根治术的非小细胞肺癌患者纳入为肺癌组,同期在本院接受急诊手术治疗的肺大泡患者78例被纳入为肺大泡组。对比两组病灶组织中eEF1A1及增殖... 目的:探讨肺癌病灶中eEF1A1表达量对癌细胞负荷程度及增殖活性的影响。方法:200例在本院接受肺癌根治术的非小细胞肺癌患者纳入为肺癌组,同期在本院接受急诊手术治疗的肺大泡患者78例被纳入为肺大泡组。对比两组病灶组织中eEF1A1及增殖基因表达量的差异,检测血清肿瘤标志物、血管新生指标的含量。采用Pearson检验评估非小细胞肺癌患者病灶组织中eEF1A1表达量与肿瘤标志物、血管新生指标、增殖基因的相关关系。结果:肺癌组病灶组织中eEF1A1的表达量高于肺大泡组;肺癌组患者血清中CYFRA21-1、ProGRP、CEA、SCC Ag、HIF-1α、VEGF的含量高于肺大泡组且与eEF1A1的表达量呈正相关;肺癌组患者病灶组织中LRRC3B、TUSC3、VPS33B mRNA的表达量低于肺大泡组且与eEF1A1的表达量呈负相关,MACC1、RACK1 mRNA的表达量高于肺大泡组且与eEF1A1的表达量呈正相关。结论:非小细胞肺癌组织中存在eEF1A1异常高表达,具体表达量可客观反映肿瘤负荷及肿瘤细胞增殖活性。 展开更多
关键词 肺癌 eef1a1 肿瘤标志物 血管新生指标 增殖基因
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eEF1A1低表达对肝癌细胞凋亡、增殖与迁移的影响及eEF1A1/A2与ANXA7间的相互作用 被引量:6
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作者 周淑亭 王丽 +8 位作者 黄玉红 张军 魏元怡 王静文 王洪海 邢博漪 宣威 黄贺 唐建武 《肿瘤学杂志》 CAS 2018年第8期755-763,共9页
[目的]研究shRNA抑制eEF1A1表达对肝癌Hca-P细胞凋亡、增殖、迁移的影响,并通过分别下调eEF1A1和ANXA7的表达,探讨肝癌Hca-P细胞中eEF1A1、eEF1A2与ANXA7表达的相关性及潜在的相互作用。[方法]构建靶向eEF1A1基因的shRNA质粒表达载体,... [目的]研究shRNA抑制eEF1A1表达对肝癌Hca-P细胞凋亡、增殖、迁移的影响,并通过分别下调eEF1A1和ANXA7的表达,探讨肝癌Hca-P细胞中eEF1A1、eEF1A2与ANXA7表达的相关性及潜在的相互作用。[方法]构建靶向eEF1A1基因的shRNA质粒表达载体,瞬时转染至小鼠肝癌Hca-P细胞中,设无处理组(CON)、eEF1A1-shRNA组(eEF1A1-shRNA)、转染pGPU/GFP/Neo-NC的阴性对照组(NC)三组细胞进行实验。采用实时荧光定量PCR和Westernblot技术检测eEF1A1的抑制效果,并分别检测各组eEF1A2、ANXA7在mRNA和蛋白水平的表达。CCK-8法、流式细胞仪、Transwell小室分别检测对细胞增殖、凋亡、迁移的影响。此外,复苏已稳定低表达ANXA7的Hca-P细胞,通过实时荧光定量PCR和Westernblot技术检测无处理组(CON)、ANXA7-shRNA转染组(ANXA7-shRNA)、阴性对照组(NC)三组Hca-P细胞中eEF1A1、eEF1A2在mRNA和蛋白水平的表达。[结果]eEF1A1靶向shRNA成功下调小鼠肝癌Hca-P细胞中eEF1A1基因的表达。流式细胞仪检测显示,CON组、eEF1A1-shRNA组、NC组细胞凋亡率分别为2.85%±0.37%、4.71%±0.21%和3.01%±0.33%,eEF1A1-shRNA组的细胞凋亡较CON组和NC组明显增加(P〈0.05);CCK-8实验发现,eEF1A1-shRNA转染细胞后细胞增殖能力较CON组和NC组明显下降;Transwell实验显示,CON组、eEF1A1-shRNA组、NC组迁移细胞数目为123.75±9.26、66.84±17.47、115.31±12.59,eEF1A1-shRNA组细胞迁移能力较CON组和NC组显著减弱(P〈0.05)。qRT-PCR和Westernblot检测显示,eEF1A1-shRNA组eEF1A2、ANXA7在mRNA和蛋白水平的表达量较CON组和NC组明显降低(P〈0.05),相较其无处理组的蛋白表达水平,eEF1A2和ANXA7分别下降了57%和21%;ANXA7-shRNA组中eEF1A1、eEF1A2在mRNA和蛋白水平的表达量较CON组和NC组亦明显降低(P〈0.05)。[结论]通过靶向eEF1A1的shRNA使eEF1A1低表达,可诱导细胞凋亡,抑制细胞的增殖能力及迁移能力。eEF1A1、eEF1A2与ANXA7的表达密切相关,且eEF1A1与ANXA7存在相互作用,可能共同参与调控肿瘤的发生与发展。 展开更多
关键词 eef1a1 eEF1A2 ANXA7 肝肿瘤
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Effects of eEF1A1 expression on cancer cell load and proliferation activity in lung cancer lesions
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作者 Shuang-Xi Chen 《Journal of Hainan Medical University》 2017年第23期104-107,共4页
Objective: To investigate the effects of eEF1A1 expression on cancer cell load and proliferation activity in lung cancer lesions. Methods: A total of 200 patients with non-small cell lung cancer who received radical o... Objective: To investigate the effects of eEF1A1 expression on cancer cell load and proliferation activity in lung cancer lesions. Methods: A total of 200 patients with non-small cell lung cancer who received radical operation for lung cancer in our hospital were enrolled in lung cancer group, and 78 patients with pulmonary bullae who accepted emergency surgical treatment in our hospital during the same period were enrolled in pulmonary bullae group. Differences in eEF1A1 and proliferation gene expression in lesion tissue were compared between the two groups, and the contents of serum tumor markers and angiogenesis indexes were detected. Pearson test was used to evaluate the correlation of eEF1A1 expression with tumor markers, angiogenesis indexes and proliferation genes in the lesions of patients with non-small cell lung cancer. Results: eEF1A1 expression in lesion tissue of lung cancer group was higher than that of pulmonary bullae group;serum CYFRA21-1, ProGRP, CEA, SCC Ag, HIF-1 and VEGF levels of lung cancer group were higher than those of pulmonary bullae group and positively correlated with the eEF1A1 expression;LRRC3B, TUSC3 and VPS33B mRNA expression in lesion tissue of lung cancer group were lower than those of pulmonary bullae group and negatively correlated with the eEF1A1 expression whereas MACC1 and RACK1 mRNA expression were higher than those of pulmonary bullae group and positively correlated with the eEF1A1 expression. Conclusion: eEF1A1 is highly expressed in non-small cell lung cancer tissues, and the specific expression can objectively reflect the tumor load and the proliferation activity of tumor cells. 展开更多
关键词 Lung cancer eef1a1 Tumor MARKERS ANGIOGENESIS indexes PROLIFERATION genes
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真核翻译延伸因子1A1在肿瘤发生和发展中作用的研究进展 被引量:3
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作者 晏琛 邵江华 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期378-382,共5页
真核翻译延伸因子1A1(eukaryotic translation elongation factor 1A1,eEF1A1)是一个在蛋白质合成过程中发挥肽链延伸作用的重要因子,在细胞生长过程中起着重要作用。研究表明,eEF1A1的作用不只局限于肽链的延伸过程,还可参与蛋白质翻... 真核翻译延伸因子1A1(eukaryotic translation elongation factor 1A1,eEF1A1)是一个在蛋白质合成过程中发挥肽链延伸作用的重要因子,在细胞生长过程中起着重要作用。研究表明,eEF1A1的作用不只局限于肽链的延伸过程,还可参与蛋白质翻译后修饰、蛋白质降解以及细胞骨架的调节等生理活动,这些非经典功能使其在细胞增殖、凋亡以及肿瘤细胞侵袭和转移等方面均发挥了重要作用,干扰eEF1A1的表达可以影响肿瘤化疗的敏感性,eEF1A1可能成为一个潜在的肿瘤防治靶点。本文对近年来关于eEF1A1在肿瘤发生和发展中作用的研究进展进行简要综述。 展开更多
关键词 肿瘤 细胞增殖 细胞凋亡 肿瘤转移 eef1a1
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