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青鳉eef1a1l3基因的表达特征及抗体制备
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作者 黄岩 林淑婷 +2 位作者 邓菊 梁晶婕 陈天圣 《淡水渔业》 北大核心 2025年第1期60-68,共9页
青鳉(Oryzias latipes)是研究性别分化和生殖调控的重要模式鱼类,前期通过青鳉性腺转录组发现eef1a1l3 mRNA在卵巢中高表达,而在精巢几乎不表达,推测其参与性别分化和卵巢发育的调控。生物信息学分析显示,Eef1a1l3蛋白在硬骨鱼类中非常... 青鳉(Oryzias latipes)是研究性别分化和生殖调控的重要模式鱼类,前期通过青鳉性腺转录组发现eef1a1l3 mRNA在卵巢中高表达,而在精巢几乎不表达,推测其参与性别分化和卵巢发育的调控。生物信息学分析显示,Eef1a1l3蛋白在硬骨鱼类中非常保守。为探究eef1a1l3基因的功能,通过半定量PCR(SqRT-PCR)绘制了eef1a1l3基因在不同组织和早期不同发育时期的表达谱。通过抗原选取、原核表达、蛋白纯化以及动物免疫实验获取Eef1a1l3多克隆抗体,并对该抗体进行了特异性的检测以及效价的鉴定。结果显示,eef1a1l3 mRNA在成体组织中仅在卵巢特异表达,在早期胚胎发育阶段呈现母源性表达。制备的Eef1a1l3多克隆抗体与抗原结合的最大稀释倍数为1∶64000,显示出良好的免疫原性,并且Eef1a1l3蛋白在青鳉性腺中的卵巢而非精巢中有表达,这与mRNA表达模式一致。综上,eef1a1l3基因可能是早期胚胎发育和卵巢发育的重要调控因子,并且制备的Eef1a1l3多克隆抗体可以应用于青鳉及其他硬骨鱼类eef1a1l3基因功能的相关研究。 展开更多
关键词 青鳉(Oryzias latipes) eef1a1l3基因 多克隆抗体 表达模式 性别分化
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植物延伸因子eEF1A研究进展 被引量:16
2
作者 覃迎姿 黄先益 +2 位作者 叶兴枝 王爱勤 李杨瑞 《广西农业科学》 CAS CSCD 2009年第5期472-477,共6页
60年代初,首先从E.co1i细胞中分离获得延伸因子,延伸因子eEF1A广泛存在于真核细胞内,是在核糖体上催化氨基酸链的延伸而推动、控制蛋白质的合成等方面起到重要作用的蛋白质因子。在植物蛋白质合成延伸过程中,eEF1A是一个主要的翻译因子... 60年代初,首先从E.co1i细胞中分离获得延伸因子,延伸因子eEF1A广泛存在于真核细胞内,是在核糖体上催化氨基酸链的延伸而推动、控制蛋白质的合成等方面起到重要作用的蛋白质因子。在植物蛋白质合成延伸过程中,eEF1A是一个主要的翻译因子;在快速增殖的细胞中,eEF1A基因的表达调控十分保守,其表达水平同细胞生长及增殖速度有关。eEF1A除了参与同翻译控制有关的信号传导外,还参与细胞生长、应激反应及与运动性有关的信号传导,并且与细胞凋亡等有关。eEF1A在体内和体外均能同肌动蛋白纤维及微管蛋白结合,是细胞骨架运动性的调节蛋白。目前许多植物的eEF1A基因已被分离,植物种间的eEF1A氨基酸序列高度保守;植物eEF1A由多基因编码,它的表达受激素、环境胁迫和生长发育过程等因素诱导。文章通过总结植物延伸因子eEF1A的生理作用以及eEF1A基因的克隆、鉴定、诱导表达等分子生物学研究,以期为今后进一步深入研究eEF1A奠定基础。 展开更多
关键词 延伸因子 eef1A 生理作用 克隆表达 展望
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甘蔗eEF1A反义表达载体构建及其遗传转化研究 被引量:2
3
作者 覃迎姿 王爱勤 +2 位作者 黄文静 杨丽涛 李杨瑞 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2009年第3期579-583,共5页
延伸因子eEF1A(Eukaryotic elongation factor 1A)是在核糖体催化氨基酸链延伸以及推动、控制蛋白质合成过程中起重要作用的蛋白质因子。利用RT-PCR技术扩增得到甘蔗eEF1A的编码区1420 bp的cDNA序列,反向连接到受体质粒pB I121载体中,... 延伸因子eEF1A(Eukaryotic elongation factor 1A)是在核糖体催化氨基酸链延伸以及推动、控制蛋白质合成过程中起重要作用的蛋白质因子。利用RT-PCR技术扩增得到甘蔗eEF1A的编码区1420 bp的cDNA序列,反向连接到受体质粒pB I121载体中,构建含GUS基因的甘蔗eEF1A基因反义植物表达载体pB IantiEF。用冻融法将pB IantiEF导入根癌农杆菌菌株EHA105中,通过农杆菌介导法,将eEF1A反义基因转化烟草K346。将获得的43株抗卡那霉素烟草经PCR筛选,得到38株呈阳性的反义转基因植株,阳性植株再经Dot-Southern杂交检测,证明eEF1A基因已整合进其中的34株烟草基因组中,平均转化率为79%。反义转基因烟草植株移栽后表型出现不同程度的变异,叶片变厚,卷曲不能平展,叶背出现明显皱折,并外突成芽,茎、叶的伸长明显受阻,顶芽出现双芽,开花延迟。推测甘蔗延伸因子eEF1A可能与甘蔗茎、叶伸长生长和发育有关。 展开更多
关键词 甘蔗 eef1A 反义转基因 遗传转化
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中国荷斯坦奶牛EEF1D基因的SNPs检测及其与产奶性状的关联分析 被引量:4
4
作者 张娟 母童 +5 位作者 蔡正云 顾亚玲 刘丽元 杨雪瑶 温万 孙东晓 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第4期961-969,共9页
试验旨在研究中国荷斯坦奶牛真核生物翻译延伸因子1 D(eukaryotic translation elongation factor 1delta,EEF1D)基因的多态性及其与产奶性状的相关性。利用Sequenom MassARRAY SNP分型技术对宁夏地区1 252头中国荷斯坦奶牛EEF1 D基因... 试验旨在研究中国荷斯坦奶牛真核生物翻译延伸因子1 D(eukaryotic translation elongation factor 1delta,EEF1D)基因的多态性及其与产奶性状的相关性。利用Sequenom MassARRAY SNP分型技术对宁夏地区1 252头中国荷斯坦奶牛EEF1 D基因的多态性进行了检测,并对其多态位点不同基因型和组合基因型与产奶性状进行了关联分析。结果显示,EEF1 D基因的5′侧翼区存在2个SNPs位点,即EEF1D-1和EEF1D-3;经检测发现,EEF1D-1存在2种基因型,EEF1D-3存在3种基因型。χ2检验表明,中国荷斯坦奶牛在EEF1D-1位点偏离Hardy-Weinberg平衡状态(P<0.05),在EEF1D-3位点未偏离Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05);EEF1D-1和EEF1D-3位点多态信息含量(PIC)分别为0.10和0.28,分别呈现低度多态和中度多态。在试验群体中,EEF1D-1位点对乳脂率和乳蛋白率性状的效应均达到极显著水平(P<0.01),对305d产奶量性状的效应达到显著水平(P<0.05);EEF1D-3位点对305d产奶量、乳脂率和乳蛋白率性状的效应均达到极显著水平(P<0.01);EEF1 D基因的优势基因型组合GG-AG和GG-GG个体乳脂率均显著高于GG-AA组合个体(P<0.05)。说明EEF1 D基因可以作为影响中国荷斯坦奶牛产奶性状的候选基因用于标记辅助选择。 展开更多
关键词 中国荷斯坦牛 eef1D基因 产奶性状 SNP 基因型组合
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EEF1A2嵌合型重组腺病毒载体的构建及鉴定 被引量:2
5
作者 曹海霞 诸琦 +3 位作者 章永平 黄佳 张愫 姚玮艳 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2009年第2期174-176,共3页
目的:克隆人类真核翻译延长因子1A2(EEF1A2)基因全长,构建其重组腺病毒载体。方法:应用RT-PCR方法从人胰腺癌组织中扩增人EEF1A2基因全长,经T-A克隆后,亚克隆到腺病毒穿梭质粒pDC316,构建穿梭质粒pDC316-EEF1A2。利用同源重组的方法将... 目的:克隆人类真核翻译延长因子1A2(EEF1A2)基因全长,构建其重组腺病毒载体。方法:应用RT-PCR方法从人胰腺癌组织中扩增人EEF1A2基因全长,经T-A克隆后,亚克隆到腺病毒穿梭质粒pDC316,构建穿梭质粒pDC316-EEF1A2。利用同源重组的方法将腺病毒骨架质粒pBHG35和穿梭质粒pDC316-EEF1A2共转染293细胞,获得腺病毒重组质粒Ad5/F35-EEF1A2,经过在293细胞中包装和扩增之后,获得高滴度的腺病毒重组质粒Ad5/F35-EEF1A2。PCR、WesternBlot检测EEF1A2基因的表达。结果:用RT-PCR方法,从人胰腺癌组织中扩增出1400bp的cDNA片段,经测序证实为人EEF1A2基因。构建及包装出高滴度的重组腺病毒载体Ad5/F35-EEF1A2。结论:成功地克隆了人EEF1A2基因全长,并构建其表达的重组腺病毒载体,为进一步研究人EEF1A2基因在相关疾病中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 腺病毒科 eef1A2 腺病毒载体 基因克隆
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奶牛乳脂性状候选基因EEF1D突变位点功能分析 被引量:3
6
作者 蒋秋斐 蔡正云 +3 位作者 黄增文 冯小芳 张娟 顾亚玲 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2020年第7期1155-1159,共5页
提高乳脂含量、提升奶质已成为当前奶牛业研究的重点方向之一。前期经GWAS方法研究发现,EEF1D基因5′非翻译区(5′-UTR)的G/A突变与乳脂率极显著相关,为了进一步对候选基因EEF1D的突变位点进行功能分析,首先通过人工合成获得了EEF1D基... 提高乳脂含量、提升奶质已成为当前奶牛业研究的重点方向之一。前期经GWAS方法研究发现,EEF1D基因5′非翻译区(5′-UTR)的G/A突变与乳脂率极显著相关,为了进一步对候选基因EEF1D的突变位点进行功能分析,首先通过人工合成获得了EEF1D基因突变型与野生型片段,并在细胞水平上对其开展了功能验证实验。研究发现,EEF1D基因5′-UTR的G/A突变引起Sp3转录起始位点后移33 bp,并且突变型的活性大约是野生型的3倍。研究结果表明,该突变可改变转录因子的转录起始位点,从而使EEF1D的表达上调。 展开更多
关键词 乳脂含量 eef1D基因 5′非翻译区(5′-UTR) SP3 突变型
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Eef1a1及JUP蛋白在心肌梗死后左室重构大鼠心肌中的表达 被引量:3
7
作者 顾红娟 贡郡丽 《中国实验诊断学》 2012年第10期1780-1782,共3页
目的本研究对心肌梗死后左室重构大鼠心肌中Eef1a1和JUP蛋白的表达进行分析,探讨心肌梗死后心室重构的发生机制。方法将23只大鼠随机分为LVR组12只、Sham组11只。LVR组采用结扎冠状动脉前降支,并饲养4周,制成心肌梗死后左室重构模型。S... 目的本研究对心肌梗死后左室重构大鼠心肌中Eef1a1和JUP蛋白的表达进行分析,探讨心肌梗死后心室重构的发生机制。方法将23只大鼠随机分为LVR组12只、Sham组11只。LVR组采用结扎冠状动脉前降支,并饲养4周,制成心肌梗死后左室重构模型。Sham组只挂线不结扎。免疫组织化学方法检测两组心肌中Eef1a1和JUP蛋白表达变化。结果免疫组织化学法结果显示,EeF1α1的表达在LVR组较Sham组显著增加(P<0.01)。JUP的表达LVR组较Sham组也增加(P<0.05)。结论 EeF1α1和JUP蛋白的表达异常可能在心肌梗死后左室重构中发挥作用。 展开更多
关键词 左室重构 心肌梗死 eef1α1 JUP
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MAPK1和eEF1B对奶牛乳腺上皮细胞泌乳调控的作用及机理研究报告 被引量:1
8
作者 陆黎敏 黄建国 +1 位作者 李庆章 高学军 《科技创新导报》 2016年第8期170-170,共1页
该研究采用组织块儿培养法,成功构建了体外培养的奶牛乳腺上皮细胞模型,应用CASY细胞分析仪检测了不同浓度和作用时间下蛋氨酸和赖氨酸对奶牛乳腺上皮细胞活力的影响,利用高效液相色谱检测了β-casein的分泌情况,确定了蛋氨酸和赖氨酸... 该研究采用组织块儿培养法,成功构建了体外培养的奶牛乳腺上皮细胞模型,应用CASY细胞分析仪检测了不同浓度和作用时间下蛋氨酸和赖氨酸对奶牛乳腺上皮细胞活力的影响,利用高效液相色谱检测了β-casein的分泌情况,确定了蛋氨酸和赖氨酸最佳剂量分别为0.6 mmol/L和1.2 mmol/L,最佳作用时间为24 h。建立奶牛乳腺上皮细胞核磷酸化蛋白质组技术,应用双向电泳(2-DE)结合质谱技术(MALDI-TOF-MS)鉴定蛋氨酸和赖氨酸对奶牛乳腺上皮细胞核磷酸化蛋白质的差异影响,发现蛋氨酸处理组,mitogen-activated protein kinase 1(MAPK1)和e EF1B蛋白质表达上调;并应用荧光定量PCR和Western blotting技术验证差异蛋白在转录水平和蛋白水平上的表达,与2-DE结果一致。实验过程中构建了真核表达载体p GCMVIRES-EGFP-MAPK1、e EF1B,转染至奶牛乳腺上皮细胞中,通过G418筛选获得稳定转染的细胞株;然后通过基因沉寂和过表达等技术,减少或增加MAPK1、e EF1B的表达水平后,检测泌乳信号转导通路中重要调控蛋白的表达情况,发现蛋氨酸和赖氨酸营养素可以通过调节MAPK1、e EF1B介导m TOR信号转导通路,影响Stat5的表达,进而调节乳蛋白的表达。以上实验结果为奶牛营养基因组学的研究提供了理论依据和技术方法。 展开更多
关键词 蛋氨酸 赖氨酸 细胞核磷酸化蛋白质组 MAPK1 eef1B 奶牛乳腺上皮细胞
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eEF1A1通过正向调控NOB1的表达促进肝癌细胞的侵袭和转移 被引量:11
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作者 张文明 项明峰 +4 位作者 郑楚骞 陈磊峰 戈进 晏琛 刘秀霞 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1195-1202,共8页
目的探讨真核翻译延长因子1A1(eEF1A1)对肝癌侵袭转移的影响机制。方法采用荧光定量PCR和Western blot法检测多种肝癌细胞系和正常肝脏细胞中eEF1A1和NI1/RPN12结合蛋白1同源物(NOB1)的mRNA和蛋白表达。肝癌细胞中干扰和过表达eEF1A1后... 目的探讨真核翻译延长因子1A1(eEF1A1)对肝癌侵袭转移的影响机制。方法采用荧光定量PCR和Western blot法检测多种肝癌细胞系和正常肝脏细胞中eEF1A1和NI1/RPN12结合蛋白1同源物(NOB1)的mRNA和蛋白表达。肝癌细胞中干扰和过表达eEF1A1后,通过Transwell侵袭实验和RTCA实验观察肝癌细胞侵袭迁移能力的变化,并观察肝癌细胞中NOB1mRNA及蛋白表达变化。在稳定干扰eEF1A1表达的HCCLM3细胞中过表达NOB1,或在过表达eEF1A1的MHCC97h细胞中干扰NOB1的表达,分析eEF1A1和NOB1蛋白表达水平和细胞侵袭迁移能力。结果肝癌细胞中eEF1A1和NOB1表达明显高于正常肝细胞,并呈正相关。肝癌细胞中干扰eEF1A1表达可明显降低肝癌细胞的侵袭迁移能力,同时NOB1的mRNA和蛋白表达也显著被降低(P均<0.01);过表达eEF1A1后明显增加肝癌细胞的侵袭迁移能力,同时也增加NOB1的mRNA和蛋白表达(P均<0.01)。在稳定干扰eEF1A1表达的HCCLM3细胞中过表达NOB1导致NOB1表达和肝癌细胞侵袭迁移能力的恢复(P均<0.01);然而在稳定过表达eEF1A1的肝癌细胞系中降低NOB1导致NOB1表达的下调和肝癌细胞侵袭迁移能力的抑制(P均<0.01)。结论肝癌细胞中eEF1A1正向调控NOB1表达,进而影响肝癌细胞的侵袭和迁移。 展开更多
关键词 肝细胞性肝癌 eef1A1 NOB1 侵袭和迁移
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eEF1A1基因克隆、原核分泌表达及融合蛋白纯化 被引量:2
10
作者 郭艳荣 常晓月 +2 位作者 崔晓君 魏勋斌 朱乃硕 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期127-133,共7页
eEF1A1作为蛋白合成中的重要翻译延伸因子,可与多种功能性蛋白如F-actin、BPOZ-2结合,并在细胞凋亡、蛋白降解方面起重要作用。以往原核基因工程蛋白表达系统大多为包涵体表达的变性分子,需要复性。为了获得eEF1A1原核分泌性可溶性蛋白... eEF1A1作为蛋白合成中的重要翻译延伸因子,可与多种功能性蛋白如F-actin、BPOZ-2结合,并在细胞凋亡、蛋白降解方面起重要作用。以往原核基因工程蛋白表达系统大多为包涵体表达的变性分子,需要复性。为了获得eEF1A1原核分泌性可溶性蛋白分子,克隆了人eEF1A1蛋白编码序列(约1 300 bp),并成功构建pET22b-A原核分泌表达重组质粒,转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株,0.4 mmol/L终浓度IPTG诱导,经不同温度下包涵体与胞浆蛋白组分分析,快速明确蛋白表达情况,即诱导4 h后,37℃表达于包涵体组分,在30℃分泌表达至胞浆组分。通过His-Trap亲和层析纯化柱进行线性洗脱,Bradford法测定蛋白浓度高达620 mg/mL,SDS-PAGE分析纯度约为95%,蛋白大小符合50 kD,Western blotting显示目的蛋白能被eEF1A1抗体识别;质谱分析证实重组蛋白为人eEF1A1蛋白分子。为进一步研究其与重要功能性蛋白的相互作用及在细胞凋亡和蛋白降解中的作用奠定基础。 展开更多
关键词 eef1A1 基因克隆 分泌表达 融合蛋白 蛋白纯化
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Verification of the Interaction between SET and eEF1A1 in Human Liver Cells by Co-immunoprecipitation 被引量:2
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作者 杨亮 杨细飞 +2 位作者 张毅 刘建军 李杰 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2010年第8期87-90,共4页
[Objective] The aim was to investigate the possible interaction between SET and eEF1A1 in human liver cells. [Method] Firstly the total proteins of human L-02 liver cells were extracted under non-denaturing conditions... [Objective] The aim was to investigate the possible interaction between SET and eEF1A1 in human liver cells. [Method] Firstly the total proteins of human L-02 liver cells were extracted under non-denaturing conditions; then,mouse anti-human SET and rabbit anti-human eEF1A1 antibodies were used to perform the co-immunoprecipitation respectively; subsequently,the immunoprecipitations was correspondingly detected with rabbit anti-human eEF1A1 and mouse anti-human SET antibodies by Western Blot. [Result] EEF1A1 was detected in protein complex from the immunoprecipitations by using anti-SET antibody,and SET also was detected in immunoprecipitations by using anti-eEF1A1 antibody. [Conclusion] The interaction between SET and eEF1A1 in human liver cells was confirmed. 展开更多
关键词 SET eef1A1 IMMUNOPRECIPITATION INTERACTION
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真核翻译延伸因子eEF1A功能研究进展 被引量:5
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作者 高爽 查笑君 潘建伟 《浙江师范大学学报(自然科学版)》 CAS 2013年第4期444-449,共6页
总结了近年来对于真核翻译延伸因子eEFlA生物学功能和作用机制研究的一些新进展,具体包括:eEFlA参与介导受损或错误折叠的蛋白质的降解;对微丝、微管骨架系统的组织与调控;参与调控细胞凋亡;参与细胞核输出氨酰-tRNA;与病毒基因组和RNA... 总结了近年来对于真核翻译延伸因子eEFlA生物学功能和作用机制研究的一些新进展,具体包括:eEFlA参与介导受损或错误折叠的蛋白质的降解;对微丝、微管骨架系统的组织与调控;参与调控细胞凋亡;参与细胞核输出氨酰-tRNA;与病毒基因组和RNA依赖性RNA聚合酶类(RNA-dependent RNA polymerase,RdRP)互作,参与病毒繁殖.阐述了对eEFlA进行研究的意义和价值,并提供了新的见解和展望. 展开更多
关键词 真核生物 翻译延伸因子1A(eef1A) 功能 作用机制
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利用免疫共沉淀技术验证SET与eEF1A1在人肝细胞内的相互作用 被引量:2
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作者 杨亮 杨细飞 +2 位作者 张毅 刘建军 李杰 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第35期19946-19948,共3页
[目的]探讨SET与eEF1A1在人肝细胞内是否存在相互作用。[方法]以人L-02肝细胞为材料,在非变性条件下提取总蛋白,将鼠抗人SET、兔抗人eEF1A1抗体分别加到总蛋白提取物中,用偶联了琼脂糖珠的Protein A/G分离抗原抗体复合物,最后分别用兔抗... [目的]探讨SET与eEF1A1在人肝细胞内是否存在相互作用。[方法]以人L-02肝细胞为材料,在非变性条件下提取总蛋白,将鼠抗人SET、兔抗人eEF1A1抗体分别加到总蛋白提取物中,用偶联了琼脂糖珠的Protein A/G分离抗原抗体复合物,最后分别用兔抗人eEF1A1、鼠抗人SET抗体进行Western blotting检测。[结果]在用SET抗体免疫共沉淀下来的蛋白复合物中检测到eEF1A1,同时在用eEF1A1抗体免疫共沉淀下来的蛋白复合物中也检测到SET。[结论]SET与eEF1A1在人肝细胞内存在相互作用。 展开更多
关键词 SET eef1A1 免疫共沉淀 相互作用
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EEF1D基因表达对绵羊羊毛纤维直径和毛囊发育的影响 被引量:2
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作者 张敏 杨华 +2 位作者 魏巧兰 何高明 沈敏 《家畜生态学报》 北大核心 2023年第1期27-31,共5页
为了探讨真核翻译延伸因子1D基因(eukaryotic translation elongation factor 1 Delta,EEF1D)对羊毛品质和毛囊周期发育的影响,采集中国美利奴羊(新疆军垦型)(细毛羊)的10个脏器组织及3个毛囊发育期的中国美利奴羊(新疆军垦型)和多胎萨... 为了探讨真核翻译延伸因子1D基因(eukaryotic translation elongation factor 1 Delta,EEF1D)对羊毛品质和毛囊周期发育的影响,采集中国美利奴羊(新疆军垦型)(细毛羊)的10个脏器组织及3个毛囊发育期的中国美利奴羊(新疆军垦型)和多胎萨福克羊(粗毛羊)的毛样品和皮肤组织,测定和比较分析2个绵羊品种在3个毛囊发育期的羊毛纤维直径,应用qRT-PCR检测EEF1D基因在10个组织以及不同毛囊发育期皮肤组织中的表达水平。研究表明,在3个毛囊发育期,中国美利奴羊的羊毛纤维直径均极显著小于多胎萨福克羊(P<0.01)。EEF1D基因在中国美利奴(新疆军垦型)皮肤组织中的表达丰度显著高于其他9个组织(P<0.05)。在毛囊生长期和退行期,EEF1D基因在细毛羊中的表达量显著高于粗毛羊(P<0.05),EEF1D基因的高表达诱导毛囊发育进入休止期。 展开更多
关键词 eef1D基因 基因表达 毛囊发育 纤维直径 绵羊
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口蹄疫病毒IRES RNA元件与宿主蛋白eEF1a相互作用抑制病毒复制的研究 被引量:3
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作者 赵博 杨德成 +3 位作者 刘文明 曹志远 孙超 于力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期325-330,共6页
口蹄疫病毒(FMDV)内部核糖体进入位点(IRES)是该病毒复制的一种重要RNA元件,介导病毒蛋白的翻译起始,其过程需要多种宿主细胞因子的参与。为筛选与IRES相互作用的宿主蛋白,本研究以生物素标记的FMDV IRES RNA为"诱饵",通过RNA... 口蹄疫病毒(FMDV)内部核糖体进入位点(IRES)是该病毒复制的一种重要RNA元件,介导病毒蛋白的翻译起始,其过程需要多种宿主细胞因子的参与。为筛选与IRES相互作用的宿主蛋白,本研究以生物素标记的FMDV IRES RNA为"诱饵",通过RNA pulldown试验结合质谱分析筛选得到4种有可能与IRES存在相互作用的宿主蛋白,包括eEF1a、RPS3、DDX5和DDX3X。对筛选获得的宿主蛋白评分分析后,针对丰度高的宿主蛋白eEF1a进行IRES RNA pulldown分析以及western blot检测,结果显示eEF1a蛋白与FMDV IRES存在相互作用。激光共聚焦显微镜观察显示,FMDV感染宿主细胞后eEF1a蛋白从细胞核转移至细胞质中,并与FMDV基因组RNA在细胞质中共定位。此外,western blot检测显示,瞬时过表达eEF1a蛋白显著抑制FMDV在BHK-21细胞中的复制。本研究首次证实了宿主蛋白eEF1a能够与FMDV IRES RNA元件特异性结合,并抑制FMDV的复制,为深入了解IRES介导的翻译起始机制以及FMDV在宿主体内复制的分子调控机制奠定了基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 内部核糖体进入位点 eef1a RNA-蛋白相互作用
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真核延长因子eEF1A功能研究进展 被引量:8
16
作者 程君 芮耀诚 《药学实践杂志》 CAS 2012年第2期89-91,124,共4页
真核延长因子(eEFs)是一类在蛋白质合成过程中发挥肽链延伸作用的重要分子,在真核生物体内它有eEF1和eEF2两个亚型。其中在肽链延伸过程中起主要作用的eEF1A是eEF1的一个亚型,它不但能促进氨酰基-tRNA(aa-tRNA)与核糖体的A位点结合,发... 真核延长因子(eEFs)是一类在蛋白质合成过程中发挥肽链延伸作用的重要分子,在真核生物体内它有eEF1和eEF2两个亚型。其中在肽链延伸过程中起主要作用的eEF1A是eEF1的一个亚型,它不但能促进氨酰基-tRNA(aa-tRNA)与核糖体的A位点结合,发挥肽链延伸功能;而且近年来大量的研究表明它在细胞凋亡、肿瘤的发生、细胞内信号转导及心血管系统的调节方面均发挥了重要作用,而且这些作用与它在蛋白合成中的功能无关;这表明eEF1A是一个多功能蛋白,能够成为一个潜在的疾病防治的靶点。本文就国内外近几年来有关eEF1A的研究做一综述,介绍真核延长因子eEF1A功能研究的进展。 展开更多
关键词 真核延长因子eef1A 蛋白合成 细胞凋亡 肿瘤 心血管系统
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EEF1A2基因变异致发育性癫痫性脑病33型1例 被引量:1
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作者 贺海兰 林雪芹 +4 位作者 王晓乐 彭盼 肖慧 尹飞 彭镜 《中国当代儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期861-864,共4页
患儿,男,7月龄,表现为重度全面发育落后、难治性癫痫、肌张力降低、眼球震颤、眼距宽、鼻梁塌陷、上唇外翻、高腭弓和隐睾,基因检测发现EEF1A2基因存在c.364G>A(p.E122K)新生杂合错义变异,最终该患儿确诊为EEF1A2基因变异致常染色体... 患儿,男,7月龄,表现为重度全面发育落后、难治性癫痫、肌张力降低、眼球震颤、眼距宽、鼻梁塌陷、上唇外翻、高腭弓和隐睾,基因检测发现EEF1A2基因存在c.364G>A(p.E122K)新生杂合错义变异,最终该患儿确诊为EEF1A2基因变异致常染色体显性遗传发育性癫痫性脑病33型。该病例报道提示,对不明原因婴儿期起病的重度-极重度全面发育落后/智力障碍、难治性癫痫患儿,尤其是存在肌张力低下、语言缺失、颅面部畸形者,应考虑EEF1A2基因变异可能,应尽早完善遗传学检测协助诊断。 展开更多
关键词 全面发育落后 智力障碍 癫痫 eef1A2基因 婴儿
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eEF1A2基因在宫颈癌组织中的表达及意义 被引量:1
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作者 潘欢 李洪涛 +7 位作者 朱君玲 王红英 杨昕 武丹 潘贞贞 何鸿昌 任显显 潘泽民 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2016年第2期176-180,共5页
为探讨真核翻译延伸因子1A2在宫颈癌中的表达以及临床病理学意义。收集新鲜宫颈癌组织和宫颈正常组织样本各10例,运用实时荧光定量PCR方法检测了eEF1A2基因的mRNA表达水平。收集宫颈癌患者60例、宫颈上皮内瘤样病变患者45例和慢性宫颈... 为探讨真核翻译延伸因子1A2在宫颈癌中的表达以及临床病理学意义。收集新鲜宫颈癌组织和宫颈正常组织样本各10例,运用实时荧光定量PCR方法检测了eEF1A2基因的mRNA表达水平。收集宫颈癌患者60例、宫颈上皮内瘤样病变患者45例和慢性宫颈炎患者35例石蜡标本组织,采用免疫组织化学SP方法检测eEF1A2基因在宫颈组织中的蛋白表达状况。qRT-PCR结果显示,eEF1A2基因在宫颈癌组织mRNA表达水平较正常宫颈组织明显增加,差异有统计学意义(P<0.01)。免疫组织化学结果显示,eEF1A2蛋白质表达强阳性率、弱阳性率和阴性率表达在宫颈癌组织分别为46.6%,31.0%和22.4%,而在慢性宫颈炎组织中分别为21.2%,48.5%和30.3%,差异具有统计学意义(P<0.001)。由此可知,eEF1A2基因的表达增高可能在宫颈癌的发生、发展中发挥一定的作用,其机制有待进一步研究,观察eEF1A2表达情况对于宫颈癌的临床诊断、病理分级有参考价值。 展开更多
关键词 宫颈癌 eef1A2基因 基因表达 QRT-PCR 免疫组织化学
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独行菜eEF-1a基因片段分离克隆及RT-PCR分析 被引量:2
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作者 葛凤伟 田永芝 +1 位作者 曾卫军 赵惠新 《新疆师范大学学报(自然科学版)》 2014年第2期22-26,共5页
文章根据已知植物eEF-1a(编码Eukaryotic elongation factor1-alpha)基因的保守序列设计引物,采用RT-PCR的方法扩增独行菜(Lepidium apetalumWilld.)eEF-1a基因片段。结果获得一大小为570bp的基因片段,序列比对表明,该基因片段与拟南芥e... 文章根据已知植物eEF-1a(编码Eukaryotic elongation factor1-alpha)基因的保守序列设计引物,采用RT-PCR的方法扩增独行菜(Lepidium apetalumWilld.)eEF-1a基因片段。结果获得一大小为570bp的基因片段,序列比对表明,该基因片段与拟南芥eEF-1a基因核苷酸序列的同源性达到95%,推测该其应该是独行菜eEF-1a基因片段。采用RT-PCR方法,对独行菜三个生长阶段材料及对应阶段冷诱导后地材料中的eEF-1a基因表达作了分析,表明eEF-1a在独行菜组织中表达稳定,可以作为实时荧光定量PCR研究独行菜基因表达分析中的看家基因。 展开更多
关键词 eef-1a( eef1A)基因 克隆 RT-PCR分析
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敲减EEF1D的人卵巢癌细胞的构建及其药物敏感性研究 被引量:2
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作者 汪慎燚 徐恰 +4 位作者 阮昕 席浩 王鹏 陈曦 秦宜德 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2018年第6期828-834,共7页
目的探讨RNA干扰真核生物翻译延长因子1δ(EEF1D)基因表达对人卵巢癌耐药细胞DDP、PGPIPN敏感性的影响。方法针对人EEF1D基因设计并筛选出下调基因表达效果最佳的siRNA,构建shRNA序列表达载体pLJM1-shRNA。通过慢病毒表达载体构建稳定转... 目的探讨RNA干扰真核生物翻译延长因子1δ(EEF1D)基因表达对人卵巢癌耐药细胞DDP、PGPIPN敏感性的影响。方法针对人EEF1D基因设计并筛选出下调基因表达效果最佳的siRNA,构建shRNA序列表达载体pLJM1-shRNA。通过慢病毒表达载体构建稳定转染pLJM1-shRNA-EEF1D的SKOV3、SKOV3/DDP细胞株。RT-PCR和Western blot检测稳定转染细胞株EEF1D基因的表达情况,MTT法测定PGPIPN、DDP、DDP/PGPIPN对稳定转染细胞株的增殖抑制率。结果成功构建重组慢病毒载体pLJM1-shRNA-EEF1D。RT-PCR和Western blot法均证实在SKOV3、SKOV3/DDP细胞中成功敲减EEF1D的表达。此外,MTT结果显示,与对照组和非特异性转染组相比,DDP/PGPIPN细胞的增殖均明显受到抑制,差异有统计学意义(P<0.05)。结论通过敲减EEF1D基因表达可以明显增强人卵巢癌SKOV3/DDP细胞对DDP/PGPIPN的敏感性。 展开更多
关键词 RNA干扰 人卵巢癌 eef1D DDP PGPIPN
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