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辣椒抗疮痂病基因Bs2和Bs3双重PCR体系的建立及应用
被引量：
1
1
作者
高升华
李宁
+3 位作者
王飞
JUNTAWONG Niran
焦春海
姚明华
《北方园艺》
CAS
北大核心
2020年第13期9-15,共7页
以栽培辣椒和野生型辣椒为试验材料,采用双重PCR体系构建的方法,建立了辣椒抗疮痂病基因Bs2和Bs3的双重PCR反应体系,以期利用该反应体系提高辣椒抗疮痂病种质资源鉴定和育种分离世代材料分子标记辅助筛选的效率。结果表明:抗疮痂病基因...
以栽培辣椒和野生型辣椒为试验材料,采用双重PCR体系构建的方法,建立了辣椒抗疮痂病基因Bs2和Bs3的双重PCR反应体系,以期利用该反应体系提高辣椒抗疮痂病种质资源鉴定和育种分离世代材料分子标记辅助筛选的效率。结果表明:抗疮痂病基因Bs2和Bs3的双重PCR反应体系,以Bs2-For/Bs2-Rev和Bs3-For/Bs3-Rev为特异引物,在退火温度为52℃时,具有很好的多态性和稳定性。此外,用该体系对不同辣椒种材料进行抗病性鉴定,与接种鉴定的结果一致,进一步验证了该体系的可靠性。该双重PCR反应体系可用于辣椒抗疮痂病品种选育。
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关键词
辣椒
抗辣椒疮痂病基因Bs2和Bs3
双重
pcr
标记
原文传递
基于种特异性COI标记的西花蓟马温室品系和羽扇豆品系一步双重快速鉴定技术
被引量：
2
2
作者
张蓉
王玉生
+2 位作者
杨丽梅
万方浩
张桂芬
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第16期2809-2823,共15页
【背景】西花蓟马(Frankliniella occidentalis)是世界性农业和园艺作物害虫,也是我国重要的对外对内检疫对象。西花蓟马具有两个品系,即温室品系(greenhouse race,GR)和羽扇豆品系(lupin race,LR),二者在寄主范围、抗药性、生存环境等...
【背景】西花蓟马(Frankliniella occidentalis)是世界性农业和园艺作物害虫,也是我国重要的对外对内检疫对象。西花蓟马具有两个品系,即温室品系(greenhouse race,GR)和羽扇豆品系(lupin race,LR),二者在寄主范围、抗药性、生存环境等方面均具有明显差异,但外部形态相似,无法准确鉴别。【目的】以西花蓟马温室品系和羽扇豆品系为靶标,以田间常见的其他14种蓟马为参照,采用基于线粒体DNA细胞色素C氧化酶亚基I(mitochondrial DNA cytochrome c oxidase subunit I,mtDNA COI)基因的种特异性(species-specific COI,SS-COI)PCR法,研究一步双重品系快速检测技术。【方法】采用mtDNA COI基因通用引物获得西花蓟马温室品系和羽扇豆品系以及其他常见蓟马的COI序列,根据测序结果以及数据库已公开数据,设计筛选获得可同时扩增两个品系的特异性组合引物(TF6/GR32/LR12),其中TF6为品系通用上游引物,GR32为温室品系特异性下游引物,LR12为羽扇豆品系特异性下游引物,其扩增片段大小分别为温室品系362 bp、羽扇豆品系541 bp;对组合引物比例和退火温度进行优化;同时,对组合引物的种/品系特异性和灵敏性/检测阈值进行检验。【结果】当组合引物TF6/GR32/LR12比例为1.0/0.2/0.8、退火温度为44℃时,扩增效果最好。种/品系特异性检测结果证实,该检测技术仅对西花蓟马温室品系和羽扇豆品系具有扩增能力,对田间常见的其他14种蓟马包括花蓟马(Frankliniella intonsa)、禾花蓟马(Frankliniella tenuicornis)、黄胸蓟马(Thrips hawaiiensis)、大蓟马(Thrips major)、棕榈蓟马(Thrips palmi)、烟蓟马(Thrips tabaci)、普通大蓟马(Megalurothrips usitatus)、豆喙蓟马(Mycterothrips glycines)、草木樨近绢蓟马(Sussericothrips melilotus)、蔗腹齿蓟马(Fulmekiola serrata)、稻简管蓟马(Haplothrips aculeatus)、榕端宽管蓟马(Mesothrips jordani)、榕母管蓟马(Gynaikothrips ficorum)和横纹蓟马(Aeolothrips fasciatus)等不具有扩增能力。灵敏性检测结果显示,该组合引物不仅对单一品系或混合品系的成虫具有良好的扩增效果,对单粒卵、1龄和2龄幼虫以及预蛹和蛹均具有同样的扩增效能;对温室品系的最低检测阈值为35.90 pg·μL^-1,相当于1/10 240头雌成虫,对羽扇豆品系的最低检测阈值为146.95 pg·μL^-1,相当于1/2 560头雌成虫;同时,对来自不同地域的同一品系不同单倍型的成虫亦具有良好的扩增效能。【结论】建立的技术体系完全可以用于西花蓟马品系的快速鉴定及检疫监管,对有效阻截其进一步传播扩散及靶向防控措施制定意义重大。
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关键词
西花蓟马温室品系
西花蓟马羽扇豆品系
一步双重
pcr
SS-COI标记
品系特异性组合引物
快速鉴定
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职称材料
题名
辣椒抗疮痂病基因Bs2和Bs3双重PCR体系的建立及应用
被引量：
1
1
作者
高升华
李宁
王飞
JUNTAWONG Niran
焦春海
姚明华
机构
湖北省农业科学院经济作物研究所/蔬菜种质创新与遗传改良湖北省重点实验室
泰国农业大学
湖北省农业科学院
出处
《北方园艺》
CAS
北大核心
2020年第13期9-15,共7页
基金
国家重点研发计划资助项目(2017YFD0101903,2016YFE0205500)
博士后科学基金资助项目(2017M620305)
+1 种基金
湖北省技术创新专项资助项目(2017ABA147)
现代农业产业技术体系建设专项资金资助项目(CARS-23-G28)。
文摘
以栽培辣椒和野生型辣椒为试验材料,采用双重PCR体系构建的方法,建立了辣椒抗疮痂病基因Bs2和Bs3的双重PCR反应体系,以期利用该反应体系提高辣椒抗疮痂病种质资源鉴定和育种分离世代材料分子标记辅助筛选的效率。结果表明:抗疮痂病基因Bs2和Bs3的双重PCR反应体系,以Bs2-For/Bs2-Rev和Bs3-For/Bs3-Rev为特异引物,在退火温度为52℃时,具有很好的多态性和稳定性。此外,用该体系对不同辣椒种材料进行抗病性鉴定,与接种鉴定的结果一致,进一步验证了该体系的可靠性。该双重PCR反应体系可用于辣椒抗疮痂病品种选育。
关键词
辣椒
抗辣椒疮痂病基因Bs2和Bs3
双重
pcr
标记
Keywords
pepper
Bs2 and Bs3
duplex pcr marker
分类号
S436 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
原文传递
题名
基于种特异性COI标记的西花蓟马温室品系和羽扇豆品系一步双重快速鉴定技术
被引量：
2
2
作者
张蓉
王玉生
杨丽梅
万方浩
张桂芬
机构
中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室/农业农村部作物有害生物综合治理重点实验室
农业农村部外来入侵生物预防与控制研究中心
北京市大兴区榆垡镇农业技术推广站
出处
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第16期2809-2823,共15页
基金
国家自然科学基金(31572067)
国家重点研发计划(2017YFC1200600)
文摘
【背景】西花蓟马(Frankliniella occidentalis)是世界性农业和园艺作物害虫,也是我国重要的对外对内检疫对象。西花蓟马具有两个品系,即温室品系(greenhouse race,GR)和羽扇豆品系(lupin race,LR),二者在寄主范围、抗药性、生存环境等方面均具有明显差异,但外部形态相似,无法准确鉴别。【目的】以西花蓟马温室品系和羽扇豆品系为靶标,以田间常见的其他14种蓟马为参照,采用基于线粒体DNA细胞色素C氧化酶亚基I(mitochondrial DNA cytochrome c oxidase subunit I,mtDNA COI)基因的种特异性(species-specific COI,SS-COI)PCR法,研究一步双重品系快速检测技术。【方法】采用mtDNA COI基因通用引物获得西花蓟马温室品系和羽扇豆品系以及其他常见蓟马的COI序列,根据测序结果以及数据库已公开数据,设计筛选获得可同时扩增两个品系的特异性组合引物(TF6/GR32/LR12),其中TF6为品系通用上游引物,GR32为温室品系特异性下游引物,LR12为羽扇豆品系特异性下游引物,其扩增片段大小分别为温室品系362 bp、羽扇豆品系541 bp;对组合引物比例和退火温度进行优化;同时,对组合引物的种/品系特异性和灵敏性/检测阈值进行检验。【结果】当组合引物TF6/GR32/LR12比例为1.0/0.2/0.8、退火温度为44℃时,扩增效果最好。种/品系特异性检测结果证实,该检测技术仅对西花蓟马温室品系和羽扇豆品系具有扩增能力,对田间常见的其他14种蓟马包括花蓟马(Frankliniella intonsa)、禾花蓟马(Frankliniella tenuicornis)、黄胸蓟马(Thrips hawaiiensis)、大蓟马(Thrips major)、棕榈蓟马(Thrips palmi)、烟蓟马(Thrips tabaci)、普通大蓟马(Megalurothrips usitatus)、豆喙蓟马(Mycterothrips glycines)、草木樨近绢蓟马(Sussericothrips melilotus)、蔗腹齿蓟马(Fulmekiola serrata)、稻简管蓟马(Haplothrips aculeatus)、榕端宽管蓟马(Mesothrips jordani)、榕母管蓟马(Gynaikothrips ficorum)和横纹蓟马(Aeolothrips fasciatus)等不具有扩增能力。灵敏性检测结果显示,该组合引物不仅对单一品系或混合品系的成虫具有良好的扩增效果,对单粒卵、1龄和2龄幼虫以及预蛹和蛹均具有同样的扩增效能;对温室品系的最低检测阈值为35.90 pg·μL^-1,相当于1/10 240头雌成虫,对羽扇豆品系的最低检测阈值为146.95 pg·μL^-1,相当于1/2 560头雌成虫;同时,对来自不同地域的同一品系不同单倍型的成虫亦具有良好的扩增效能。【结论】建立的技术体系完全可以用于西花蓟马品系的快速鉴定及检疫监管,对有效阻截其进一步传播扩散及靶向防控措施制定意义重大。
关键词
西花蓟马温室品系
西花蓟马羽扇豆品系
一步双重
pcr
SS-COI标记
品系特异性组合引物
快速鉴定
Keywords
Frankliniella occidentalis greenhouse race
F. occidentalis lupin race
one-step
duplex
pcr
SS-COI
marker
race-specific combined primer set
rapid identification
分类号
S433.89 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
辣椒抗疮痂病基因Bs2和Bs3双重PCR体系的建立及应用
高升华
李宁
王飞
JUNTAWONG Niran
焦春海
姚明华
《北方园艺》
CAS
北大核心
2020
1
原文传递
2
基于种特异性COI标记的西花蓟马温室品系和羽扇豆品系一步双重快速鉴定技术
张蓉
王玉生
杨丽梅
万方浩
张桂芬
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
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