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原核表达dsRNA发酵条件、提取方法优化及应用
1
作者 杨壹 周茂超 +3 位作者 杨纪潇 唐滔 赵弘巍 牛冬冬 《中国农业大学学报》 北大核心 2025年第11期14-26,共13页
为优化原核表达系统中双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)的发酵条件和提取方法,并探讨其在水稻纹枯病防治中的应用潜力,通过构建靶向水稻纹枯病RsDCL1/2基因的重组发夹结构表达载体,并导入大肠杆菌HT115(DE3)菌株中,通过对pH、IPTG诱... 为优化原核表达系统中双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)的发酵条件和提取方法,并探讨其在水稻纹枯病防治中的应用潜力,通过构建靶向水稻纹枯病RsDCL1/2基因的重组发夹结构表达载体,并导入大肠杆菌HT115(DE3)菌株中,通过对pH、IPTG诱导浓度、诱导温度转速、诱导时间、NaCl浓度进行调整优化,筛选出最佳发酵条件以提高dsRNA产量;并评估Trizol法、RNAswift法、75%乙醇固定法及PB缓冲裂解法4种提取方法对dsRNA的提取效率,采用最适提取方法对提取的dsRNA开展水稻纹枯病的温室防治效果验证。结果表明:1)经优化后的发酵条件为pH 7,0.4 mmol/L IPTG,33℃,160 r/min,7.5 g/L NaCl,发酵时间12 h,该发酵条件下获得的dsRNA产量比优化前增加1.32倍;2)在提取方法比较中,PB缓冲裂解法在产量和纯度方面表现最佳,产量是75%乙醇固定法的3.89倍;3)温室盆栽防效试验表明,PB缓冲裂解法提取的dsRNA喷施水稻后,显著降低病斑的面积,进一步验证了dsRNA作为生物农药在水稻纹枯病防治中的潜力。综上,基于优化发酵条件和PB缓冲裂解法2种方式构建的dsRNA生产体系,可有效提高dsRNA的产量;同时,该体系产出的dsRNA在水稻纹枯病的防治中表现出良好的应用效果。 展开更多
关键词 dsrna 发酵条件 dsrna提取方法 水稻纹枯病
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葡萄病毒病的双链RNA(dsRNA)检测技术研究 被引量：22
2
作者 牛建新 李东栋 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期149-152,共4页
将病毒dsRNA分析检测技术应用到果树病毒的诊断检测上熏并对生产中广泛发生的葡萄卷叶病病毒穴GLRV雪、葡萄扇叶病毒穴GFV雪进行了检测并确立检测标准,为今后葡萄病毒病的诊断检测奠定了良好的基础。同时,还对在葡萄上发生的一种黄边花... 将病毒dsRNA分析检测技术应用到果树病毒的诊断检测上熏并对生产中广泛发生的葡萄卷叶病病毒穴GLRV雪、葡萄扇叶病毒穴GFV雪进行了检测并确立检测标准,为今后葡萄病毒病的诊断检测奠定了良好的基础。同时,还对在葡萄上发生的一种黄边花叶病进行了研究,并获得了这种病毒的dsRNA,证实其为病毒侵染所致。 展开更多
关键词 葡萄 病毒诊断 dsrna提取 病毒病 双链RNA检测技术 木本指示植物
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鸡传染性法氏囊病病毒dsRNA的提纯与应用 被引量：8
3
作者 孙建和 陆苹 +1 位作者 赵渝 李晖 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期311-314,共4页
用传染性法氏囊病病毒 (IBDV)攻击 4周龄的非免疫鸡 ,以超速离心法从感染鸡法氏囊组织中分离、纯化IBDV ,应用蛋白酶K消化和Trizol(异硫氰酸胍 -酚 -氯仿法 )处理 2种方法从纯化的IBDV中抽提dsRNA。通过低熔点琼脂糖割胶 -酚 -氯仿抽提... 用传染性法氏囊病病毒 (IBDV)攻击 4周龄的非免疫鸡 ,以超速离心法从感染鸡法氏囊组织中分离、纯化IBDV ,应用蛋白酶K消化和Trizol(异硫氰酸胍 -酚 -氯仿法 )处理 2种方法从纯化的IBDV中抽提dsRNA。通过低熔点琼脂糖割胶 -酚 -氯仿抽提可获得纯化的dsRNA ,研究发现应用蛋白酶K消化获得的纯化RNA产量高 ,用其作模板进行RT -PCR可扩增IBDV基因组全长cDNAA片段和B片段、VP2基因和VP2 - 4 - 3基因。 展开更多
关键词 鸡传染性法氏囊病病毒 dsrna 提纯 应用
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双链RNA快速小量提取法在水稻dsRNA病毒病诊断中的应用 被引量：5
4
作者 郭灵芳 刘小娟 +1 位作者 吴祖建 章松柏 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2014年第1期26-28,共3页
水稻病毒病是水稻生产中重要的病害，目前国内流行的水稻病毒病病原多为 dsRNA病毒，每一种dsRNA病毒都有特异性基因图谱，为此，探讨了双链RNA快速小量提取法在水稻dsRNA病毒病诊断中的应用。结果表明：1）双链RNA快速小量提取法可以从... 水稻病毒病是水稻生产中重要的病害，目前国内流行的水稻病毒病病原多为 dsRNA病毒，每一种dsRNA病毒都有特异性基因图谱，为此，探讨了双链RNA快速小量提取法在水稻dsRNA病毒病诊断中的应用。结果表明：1）双链RNA快速小量提取法可以从0．5～0．8 g的水稻组织中快速提取 dsRNA，在3 h内完成对样品的鉴定，提取产物可以直接应用于dsRNA的检测、分类以及相关基因的克隆；2）提取效率较传统方法高，以 SRBSDV为例，传统 dsRNA提取方法中 dsRNA的产率为0．15～0．3μg/g，该方法中dsRNA的产率茎组织达到3μg/g以上，叶组织0．1～0．5μg/g；3）该方法也可以应用于介体体内的dsRNA病毒基因组核酸的提取。 展开更多
关键词 dsrna病毒 快速小量提取法 水稻
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