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蔬菜病毒不同检测技术灵敏度的比较研究
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作者 陈伟 姚洁 +4 位作者 冯明峰 李帅 蒋西子 蒋磊 江彤 《浙江农业学报》 北大核心 2025年第5期1072-1081,共10页
为了明确蔬菜病毒种类,探索快速、灵敏、低成本、高通量的病毒检测方法。将10种蔬菜病毒,烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,... 为了明确蔬菜病毒种类,探索快速、灵敏、低成本、高通量的病毒检测方法。将10种蔬菜病毒,烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)、番茄花叶病毒(Tomato mosaic virus,ToMV)、蚕豆萎蔫病毒(Broad bean wilt virus,BBWV)、芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)、小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)、番茄褪绿病毒(Tomato chlorosis virus,ToCV)、马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)和番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot virus,TZSV)的cp基因质粒DNA顺次固定在同一张硝酸纤维素膜(NC膜)上,根据10种蔬菜病毒的cp基因序列制备地高辛(DIG)标记的特异性探针,利用dot-Southern blot方法一次性检测10种病毒。再采用dot-Southern blot、dot-Northern blot、PCR和ELISA方法检测TMV,比较不同检测方法的灵敏度。结果发现,dot-Southern blot方法可在同一张NC膜上一次性检出10种病毒的cp基因质粒DNA。dot-Southern blot检测TMV cp基因质粒DNA和cp基因cDNA的最低浓度分别为5×10^(-2)ng·μL^(-1)和5×10^(-1)ng·μL^(-1),dot-Northern blot检测感染TMV蔬菜样本总RNA的最低浓度为5×10^(-2)ng·μL^(-1),PCR检测TMV cp基因质粒DNA的最低浓度为5×10-3ng·μL^(-1),RT-PCR检测TMV cDNA的最低浓度为5×10^(-2)ng·μL^(-1),dot-ELISA和TAS-ELISA检测感染TMV蔬菜病汁液的最低浓度为9.8 ng·μL^(-1)和78 ng·μL^(-1)。说明dot-Southern blot能够一次性检出多种病毒,可用于蔬菜病毒复合侵染检测。dot-Southern blot、dot-Northern blot、RT-PCR和PCR等核酸检测方法的灵敏度相对较高,而ELISA检测方法的灵敏度相对较低。 展开更多
关键词 蔬菜病毒 检测方法 灵敏度 dot-southern blot
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用AFLP片段构建甘蔗祖亲种特异DNA探针 被引量:6
2
作者 庄南生 郑成木 +2 位作者 王英 黄东益 高和琼 《热带作物学报》 CSCD 2004年第3期18-23,共6页
应用AFLP标记技术获得了甘蔗祖亲种的AFLP特异片段487条,对部分AFLP特异片段进行斑点杂交与Southern杂交分析,结果有5个可作为甘蔗属特异探针(a44,a59,b60,e42,d19),2个可作为斑茅特异探针(f08,f16)。利用这些特异探针对参试的30份甘蔗... 应用AFLP标记技术获得了甘蔗祖亲种的AFLP特异片段487条,对部分AFLP特异片段进行斑点杂交与Southern杂交分析,结果有5个可作为甘蔗属特异探针(a44,a59,b60,e42,d19),2个可作为斑茅特异探针(f08,f16)。利用这些特异探针对参试的30份甘蔗种质进行了血缘测验,能较好地检测出这些种质的基因组构成。其中:崖城73/512、崖城57/25和崖城62/703份种质的血缘与系谱记录不符,均只含甘蔗属血缘而不含斑茅血缘;崖城96/46既含甘蔗属血缘,又含斑茅血缘,因而是甘蔗属与斑茅种杂交的真杂种。 展开更多
关键词 AFLP片段 构建技术 甘蔗 亲种 特异DNA探针
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食管癌及癌旁组织中人乳头状瘤病毒DNA的存在状态 被引量:8
3
作者 李茵 黄光琦 +3 位作者 肖恒怡 黄一峰 毛婷 邓文杰 《华西医科大学学报》 CAS CSCD 1991年第2期157-160,共4页
作者以人乳头状瘤病毒(HPV)16DNA为探针,采用斑点杂交及Southern分子杂交技术检测24例食管癌及其相应癌旁组织中的HPV16DNA。结果:在食管癌组织中,HPV 16DNA斑点及Southern杂交的阳性率为50%(12/24),癌旁组织为37%(9/24);经Bam H I酶... 作者以人乳头状瘤病毒(HPV)16DNA为探针,采用斑点杂交及Southern分子杂交技术检测24例食管癌及其相应癌旁组织中的HPV16DNA。结果:在食管癌组织中,HPV 16DNA斑点及Southern杂交的阳性率为50%(12/24),癌旁组织为37%(9/24);经Bam H I酶切的食管癌及癌旁组织中,杂交后出现7.2kb的HPV16DNA特异性阳性区带;经Pst I酶切杂交后出现2.7kb、2.3kb、1.75kb、1.18kb四条HPV16DNA阳性区带;未经酶切者来发现阳性杂交带出现。提示人乳头状瘤病毒基因组确实存在于食管癌及癌旁组织DNA中,且多以整合状态存在。 展开更多
关键词 食管肿瘤 乳头状瘤病毒 斑点杂交
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玉米基因枪转化Bt基因的研究 被引量:4
4
作者 孙红炜 朱常香 +4 位作者 杨崇良 尚佑芬 赵玖华 路兴波 王升吉 《山东农业科学》 2004年第3期20-22,共3页
以玉米自交系A188为试材,将含有Bar基因和Bt基因的质粒pBW3导入玉米幼胚内,获得了转基因抗性苗。抗性植株点杂交及Southern杂交结果显示,该基因已整合到抗性玉米植株体内,外源基因在玉米基因组内有4个拷贝。
关键词 玉米 BT基因 基因枪 点杂交 Southem杂交
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核质互作型水稻线粒体不育基因的RAPD分析 被引量:12
5
作者 裴得胜 向跃武 +5 位作者 李名扬 蔡平钟 张志雄 阎文昭 侯磊 裴炎 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第4期357-363,共7页
采用RAPD对水稻Ⅱ 32A、Ⅱ 32B、Ⅱ优 94 9的mtDNA进行分析 ,得到两个特异的扩增片段OPJ18 10 0 0、OPJ18 14 0 0。序列测定两个特异片段全长分别为 10 6 8bp和 14 81bp。Southern杂交结果证明了差异片段的真实性。用OPJ18 10 0 0作... 采用RAPD对水稻Ⅱ 32A、Ⅱ 32B、Ⅱ优 94 9的mtDNA进行分析 ,得到两个特异的扩增片段OPJ18 10 0 0、OPJ18 14 0 0。序列测定两个特异片段全长分别为 10 6 8bp和 14 81bp。Southern杂交结果证明了差异片段的真实性。用OPJ18 10 0 0作探针与Ⅱ 32A、Ⅱ 32B、Ⅱ 优 94 9的mtRNA斑点杂交结果表明 ,除Ⅱ 32B外 ,都在转录水平上对水稻雄性不育有一定影响。虽然OPJ18 14 0 0对应的RNA斑点杂交呈阴性 ,但其DNA序列中存在一个七碱基 5′ TTC CCTC 3′的保守系列。据报道它是atp6基因中同源重组热点区 ,可促使线粒体基因重组形成嵌合基因 ,从而对水稻雄性不育的形成起着重要作用。经同源性比较和DNA、RNA杂交证实获得的两个片段是新的与水稻细胞质雄性不育相关的mtDNA序列。 展开更多
关键词 水稻雄性不育 mtDNA RAPD分析 SOUTHERN杂交 RNA斑点杂交
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采用量子点标记的寡核苷酸探针检测ApoEε4等位基因 被引量:2
6
作者 杨华静 徐鹏 +2 位作者 王坚苗 夏星 张苏明 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期493-495,共3页
目的探讨新型纳米荧光材料量子点标记的寡核苷酸探针在确定基因型中的应用价值。方法采用以CdSe为核心的量子点与ApoEε4基因的等位基因特异性寡核苷酸反应合成探针,对ApoEε4-PT7-PL质粒和正常人标本进行Southern blot检测,并与地高辛... 目的探讨新型纳米荧光材料量子点标记的寡核苷酸探针在确定基因型中的应用价值。方法采用以CdSe为核心的量子点与ApoEε4基因的等位基因特异性寡核苷酸反应合成探针,对ApoEε4-PT7-PL质粒和正常人标本进行Southern blot检测,并与地高辛标记方法作相应比较。结果量子点与地高辛标记显影结果完全一致。结论量子点在Southern blot检测成像中表现出优良特性,可望替代传统标记物。 展开更多
关键词 量子点 ApoEε4等位基因 寡核苷酸探针 Southern印迹法
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CWE纯系小鼠脑组织发育过程中细胞癌基因及其表达研究 被引量:4
7
作者 孙宁 孙芝琳 《生物化学杂志》 CAS CSCD 1990年第3期238-242,共5页
本文以Ha-ras.c-fos、c-myc、v-erbB、mos五种癌基因片段为分子探针,应用斑点杂交技术,对CWE纯系小鼠脑组织发育的四个时期(胚胎期、新生期、性成熟期、体成熟期)的RNA进行分子杂交分析。发现:在实验各期中这几种癌基因的表达有较明显... 本文以Ha-ras.c-fos、c-myc、v-erbB、mos五种癌基因片段为分子探针,应用斑点杂交技术,对CWE纯系小鼠脑组织发育的四个时期(胚胎期、新生期、性成熟期、体成熟期)的RNA进行分子杂交分析。发现:在实验各期中这几种癌基因的表达有较明显的变化。Ha-ras、c-fos、c-myc基因的表达在胚胎期和新生期脑组织中较高;v-erbB基因的表达在性成熟期脑组织中较高;mos基因在实验各期均无表达。DNA斑点杂交结果:小鼠脑组织发育各期均未观察到癌基因扩增现象。Southern杂交结果:CWE小鼠发育的各期均显示:5.4kb、3.4kb、1.8kb、1.0kb四条c-fos基因区带;7.4kb、4.5kb、3.4kb三条c-myc基因区带。结果表明:不同细胞癌基因在小鼠胚胎发育和胚后发育中有不同的表达。 展开更多
关键词 细胞癌基因 小鼠 脑组织 基因表达
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黄鳝单条染色体的显微分离及特异性检测 被引量:6
8
作者 戢福云 余其兴 +3 位作者 郭一清 海燕 周荣家 刘利 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第1期114-120,共7页
建立了显微分离黄鳝单条染色体及检测其特异性的方法。在Olympus倒置显微镜下用毛细玻璃微针手工分离黄鳝减数分裂Ⅰ终变期 3号染色体 ,将其DNA作模板进行DOP PCR扩增后 ,分别以α-3 2 P dCTP和Biotin 11 dUTP标记的单条染色体DNAPCR扩... 建立了显微分离黄鳝单条染色体及检测其特异性的方法。在Olympus倒置显微镜下用毛细玻璃微针手工分离黄鳝减数分裂Ⅰ终变期 3号染色体 ,将其DNA作模板进行DOP PCR扩增后 ,分别以α-3 2 P dCTP和Biotin 11 dUTP标记的单条染色体DNAPCR扩增产物及Biotin 11 dUTP标记的大豆 18SrRNA基因作探针进行Southern杂交、FISH和Dot杂交来检测其特异性。结果表明 :(1)减数分裂Ⅰ终变期染色体标本是进行染色体显微操作的理想材料 ;(2 )DOP PCR扩增产物片段在 2 0 0~ 10 0 0bp之间 ,平均 6 0 0bp左右 ;(3)杂交结果显示 ,本研究所获得的单条染色体是黄鳝 3号染色体 ;(4 )与显微操作仪和微激光分离相比较 ,该方法不需要昂贵仪器 ,在常规实验室即可操作 。 展开更多
关键词 黄鳝 单条染色体 显微分离 DOP-PCR SOUTHERN杂交 FISH Dot杂交 特异性检测
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人胃癌细胞株Rb抗癌基因缺失的研究 被引量:1
9
作者 许中伟 林三仁 +3 位作者 曾菲菲 王新娟 彭晓冬 童坦君 《北京医科大学学报》 CSCD 1994年第2期125-127,共3页
以Rb基因cDNA3.8Kb片段做探针,经非放射性地高辛—dUTP及放射性同位素α-32P-dcTP两种标记方法标记,对6株人胃癌细胞株的DNA进行点杂交和Southern印迹杂交,显示5株细胞Rb基因完全缺失,1株... 以Rb基因cDNA3.8Kb片段做探针,经非放射性地高辛—dUTP及放射性同位素α-32P-dcTP两种标记方法标记,对6株人胃癌细胞株的DNA进行点杂交和Southern印迹杂交,显示5株细胞Rb基因完全缺失,1株不全缺失伴突变。 展开更多
关键词 胃癌细胞株 RB 抗癌基因 点杂交
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W316bp探针鉴定高、低产王浆西蜂DNA分子特异标记的研究 被引量:10
10
作者 张雅娟 蒋滢 +3 位作者 王尉平 汪成富 葛凤晨 张大隆 《中国养蜂》 2001年第2期6-8,共3页
W31 6bp(bp ,basepair)是不同三品系高产王浆西蜂 (浙农大、平湖及萧山等意蜂 )以随机引物W ( 5’ CGGCCCCGGT 3’)通过RAPD(RandomAmplifiedPolymorphicDNA) PCR扩增获得的一个共同的特异DNA片段 ,然后将此片段用地高辛配基标记成探... W31 6bp(bp ,basepair)是不同三品系高产王浆西蜂 (浙农大、平湖及萧山等意蜂 )以随机引物W ( 5’ CGGCCCCGGT 3’)通过RAPD(RandomAmplifiedPolymorphicDNA) PCR扩增获得的一个共同的特异DNA片段 ,然后将此片段用地高辛配基标记成探针 ,再与高、低产浆西蜂的基因组DNA及PCR扩增产物分别进行斑点杂交及Southern杂交。结果W 31 6bp探针只与高产王浆西蜂的PCR扩增产物及其基因组DNA杂交 。 展开更多
关键词 西蜂 蜂王浆 品种 SOUTHERN杂交 斑点杂交 W316bp探针 DNA分子标记
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人宫颈癌DNA与HPV16型核酸分子杂交的研究
11
作者 黄光琦 李茵 +3 位作者 黄一峰 毛婷 邓文杰 宁其志 《华西医学》 CAS 北大核心 1992年第1期112-116,共5页
本文以人乳头状瘤病毒(HPV)16型-PBR_(322)重组质粒,对大肠杆菌HB101进行转化实验。经筛选、扩增、酶切、电泳鉴定。获得满意的电泳图谱及kb值,HPV-16Bam HI DNA为7.2kb,其260/280O.D比值为1.9-2。纯度合乎要求,可用以制备探针。以HPV-1... 本文以人乳头状瘤病毒(HPV)16型-PBR_(322)重组质粒,对大肠杆菌HB101进行转化实验。经筛选、扩增、酶切、电泳鉴定。获得满意的电泳图谱及kb值,HPV-16Bam HI DNA为7.2kb,其260/280O.D比值为1.9-2。纯度合乎要求,可用以制备探针。以HPV-16DNA7.2kb片段为探针,应用^(32)P(α)-dATP标记进行了点杂交及Southern印迹杂交实验。结果表明38例宫颈癌组织DNA,其点杂交阳性率为76.3%,Southern杂交阳性率为65.7%。点杂交与Southern杂交结果基本符合。上述结果说明了在人宫颈癌组织中,存在着HPV-16相关的基因组,Southern杂交表明其以整合形式存在。说明宫颈癌的发病可能与HPV-16型的感染有密切关系。从分子水平进一步探讨了宫颈癌的病毒病因。 展开更多
关键词 乳头状瘤病毒 点杂交 宫颈癌
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宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒16型DNA序列的检测
12
作者 孟祥金 王鲁泉 《山东医科大学学报》 1991年第2期127-129,共3页
应用DNA斑点分子杂交技术检测了54例宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒16型DNA序列,并应用DNA Southern印迹杂交技术分析了部分斑点杂交阳性的标本。结果表明,50%的宫颈癌标本中HPV16DNA阳性,而在18例正常宫颈组织中未测到HPV16DNA序列;South... 应用DNA斑点分子杂交技术检测了54例宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒16型DNA序列,并应用DNA Southern印迹杂交技术分析了部分斑点杂交阳性的标本。结果表明,50%的宫颈癌标本中HPV16DNA阳性,而在18例正常宫颈组织中未测到HPV16DNA序列;Southern印迹杂交发现HPV16DNA以整合状态存在。提示HPV16与宫颈癌的发生密切相关。 展开更多
关键词 宫颈癌 乳头状瘤病毒 DNA序列
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基于单克隆抗体的南方菜豆花叶病毒血清学检测技术 被引量:5
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作者 王亚琴 田沂民 +2 位作者 于翠 周雪平 吴建祥 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期347-354,共8页
为建立南方菜豆花叶病毒(southern bean mosaic virus,SBMV)的快速、简便、高通量检测技术,加强该病毒的口岸检验检疫,以提纯的SBMV粒子为免疫原免疫BALB/C小鼠,利用杂交瘤技术获得3株杂交瘤细胞株19C3、19H9和20G4,其分泌的SBMV腹水单... 为建立南方菜豆花叶病毒(southern bean mosaic virus,SBMV)的快速、简便、高通量检测技术,加强该病毒的口岸检验检疫,以提纯的SBMV粒子为免疫原免疫BALB/C小鼠,利用杂交瘤技术获得3株杂交瘤细胞株19C3、19H9和20G4,其分泌的SBMV腹水单抗效价均达到10-7,且3个单抗与感染SBMV大豆叶片组织粗提液有强烈的特异性免疫反应,而不与感染南方豇豆花叶病毒(southern cowpea mosaic virus,SCPMV)的豇豆、健康的大豆、毛豆、豌豆、蚕豆和菜豆叶片组织粗提液发生免疫反应。以制备的单抗为核心,建立了检测植物中SBMV的ACP-ELISA和dotELISA两种血清学方法。3个单抗中19H9单抗的检测灵敏度最高,以其建立的ACP-ELISA和dot-ELISA方法检测大豆病叶粗提液的灵敏度分别达到1∶163840和1∶10240稀释浓度。利用建立的dot-ELISA方法可从上海口岸截获的大豆种子中检测出SBMV,且该检测结果得到RT-PCR方法验证。表明制备的SBMV单抗及建立的SBMV血清学检测技术可有效用于我国SBMV的口岸检验检疫。 展开更多
关键词 南方菜豆花叶病毒(SBMV) 单克隆抗体 ACP-ELISA DOT-ELISA
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南方水稻黑条矮缩病毒dot-ELISA检测试剂盒的应用性能验证 被引量:1
14
作者 王亚琴 姜军 +3 位作者 黄德青 周雪平 洪健 吴建祥 《中国植保导刊》 北大核心 2018年第7期34-39,共6页
以制备的抗南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)单抗2C2为核心,建立了检测水稻叶片和白背飞虱虫中SRBSDV的dot-ELISA试剂盒。试剂盒的灵敏度分析表明,当SRBSDV感染病叶稀释到1∶10 240倍(w/v,g/m L... 以制备的抗南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)单抗2C2为核心,建立了检测水稻叶片和白背飞虱虫中SRBSDV的dot-ELISA试剂盒。试剂盒的灵敏度分析表明,当SRBSDV感染病叶稀释到1∶10 240倍(w/v,g/m L)、单头携毒白背飞虱稀释到1∶51 200倍(头/μL)时仍能检测到SRBSDV。建立的试剂盒检测感染SRBSDV的水稻和携毒白背飞虱呈阳性反应,而检测感染水稻黑条矮缩病毒、水稻矮缩病毒、水稻条纹病毒、水稻瘤矮病毒、水稻条纹花叶病毒、水稻锯齿矮缩病毒的病叶和健康水稻及非携毒白背飞虱呈阴性反应。试剂盒的田间样品检测结果与RT-PCR方法的检测结果的符合率达到100%,核酸测序和序列比对结果发现RT-PCR检测阳性的样品确实感染SRBSDV。试验结果表明,建立的检测试剂盒能准确、有效地检测田间白背飞虱及水稻样品中的SRBSDV,可为我国南方水稻黑条矮缩病的检测和诊断、预测预警及科学防控提供技术服务。 展开更多
关键词 南方水稻黑条矮缩病毒 单克隆抗体 DOT-ELISA 白背飞虱
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南方水稻黑条矮缩病毒的快速检测 被引量:2
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作者 王锡锋 李政 +4 位作者 胡荣 罗汉钢 张求东 章松柏 郭灵芳 《中国植保导刊》 北大核心 2015年第5期10-12,9,共4页
南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)病原鉴定和介体带毒率检测是病害防治的前提条件。本研究分别建立了病株dsRNA基因组鉴定法和介体带毒率测定的斑点杂交法。结果显示:dsRNA基因组鉴定法可以从0.... 南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)病原鉴定和介体带毒率检测是病害防治的前提条件。本研究分别建立了病株dsRNA基因组鉴定法和介体带毒率测定的斑点杂交法。结果显示:dsRNA基因组鉴定法可以从0.5 g水稻病株组织中快速检测到SRBSDV,不需要经过RT-PCR过程,具有快速简便等特点;斑点杂交法检测介体昆虫白背飞虱带毒率的灵敏度较高,单头带毒介体的总RNA稀释1 000倍后依然可以检测到病毒,并且可以大批量处理样品,用于病害流行研究和测报。 展开更多
关键词 南方水稻黑条矮缩病毒 dsRNA基因组检测法 斑点杂交法 白背飞虱
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