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携带人MST4或人dnMST4转基因的肺癌细胞株构建
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作者 韩留鑫 夏加伟 +6 位作者 李云珍 朱江春 沈含章 周玮莎 赵文淘 李静 肖东 《临床医学进展》 2023年第1期191-200,共10页
目的:利用慢病毒感染分别建立稳定过表达MST4和dnMST4的人肺癌细胞株。方法:分别以pcDNA3.1-MST4、pcDNA3.1-MST4 T178A质粒为模板,PCR分别扩增MST4、MST4 T178A序列(均为1.251 kb),片段两侧分别添加EcoR I/BamH I和Xba I/BamH I酶切位... 目的:利用慢病毒感染分别建立稳定过表达MST4和dnMST4的人肺癌细胞株。方法:分别以pcDNA3.1-MST4、pcDNA3.1-MST4 T178A质粒为模板,PCR分别扩增MST4、MST4 T178A序列(均为1.251 kb),片段两侧分别添加EcoR I/BamH I和Xba I/BamH I酶切位点,分别In-Fusion克隆至pCDH-RFP和pHEZG中,次日挑选单克隆菌落,提取质粒并进行测序和酶切鉴定;所构建的载体分别命名为pCDH-MST4-RFP和pHEZG-dnMST4。按标准程序进行慢病毒包装,并确认是否成功生产慢病毒;用携带MST4和RFP基因的慢病毒分别感染人肺癌细胞A549和HCC827,用携带dnMST4和GFP基因的慢病毒分别感染人肺癌细胞A549和HCC827,以建立稳定过表达MST4和dnMST4的人肺癌细胞系。应用qRT-PCR和Westernblot检测所建立肺癌细胞系中MST4和dnMST4在RNA层面和蛋白层面的表达水平。结果:测序和酶切鉴定的结果均证实成功构建了pCDH-MST4-RFP和pHEZG-dnMST4,按标准程序生产的携带MST4和RFP基因以及携带dnMST4和GFP基因的慢病毒均能成功感染人肺癌细胞。结论:成功构建稳定过表达MST4或dnMST4的人肺癌细胞株,为进一步研究MST4在肺癌恶性进程中的生物学功能及机制打下了良好基础。 展开更多
关键词 MST4 dnmst4 慢病毒载体 肺癌
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