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LTB-2xSTN12S融合蛋白联合cGAMP和dmLT双佐剂对小鼠的免疫保护效果 被引量：1
1
作者 陈敬 张燕斌 +4 位作者 刘钰 王雪薇 钟佑秀 王平 刘梅影 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2020年第12期1345-1351,共7页
目的在原核系统中表达肠产毒性大肠埃希菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)不耐热肠毒素B亚基(heat labile enterotoxin B subunit,LTB)和耐热肠毒素(heat stable enterotoxin)突变体(STN12S)的融合蛋白,联合环鸟-腺二核苷酸(cy... 目的在原核系统中表达肠产毒性大肠埃希菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)不耐热肠毒素B亚基(heat labile enterotoxin B subunit,LTB)和耐热肠毒素(heat stable enterotoxin)突变体(STN12S)的融合蛋白,联合环鸟-腺二核苷酸(cyclic guanosine monophosphate-adenosine monophosphate,cGAMP)和dmLT(double mutant heat-labile enterotoxin)佐剂初步评价其保护效果并进行免疫反应分析。方法构建表达质粒pET28α-LTB-2xSTN12S,转化至E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,镍柱纯化,将纯化的重组LTB-2xSTN12S蛋白联合dmLT和cGAMP佐剂(为抗原+dmLT+cGAMP组;同时设空白对照组、感染对照组、抗原组),均经皮下途径免疫BALB/c小鼠,免疫2针,间隔2周,末次免疫2周后滴鼻攻击ETEC-HN临床分离株(LT+/ST+),2周后称重,取眼眶静脉血及脾淋巴细胞进行体液和细胞免疫分析。结果重组质粒pET28-LTB-2xSTN12S基因测序正确,纯化的重组LTB-2xSTN12S蛋白相对分子质量约20000,纯度为93%,与霍乱毒素(cholera toxin,CT)和ST多抗均能发生特异反应。抗原+dmLT+cGAMP组小鼠诱导的免疫保护均高于感染对照组和抗原组(P均<0.05),诱导的针对LTB-2xSTN12S血清IgG抗体水平及针对LTB和ST抗原特异性IgG抗体水平均高于其他组(P均<0.05);脾淋巴细胞培养上清中抗LTB-2xSTN12SIgG抗体水平及针对LTB-2xSTN12SLTB抗原特异性IgG抗体水平均显著高于其他组(P均<0.01),诱导的脾淋巴细胞抗原特异性IL-4、IL-6、IL-17和IFNγ细胞因子分泌细胞数量均高于其他组(P均<0.05)。结论经原核表达系统成功表达并纯化了LTB-2xSTN12S融合蛋白,LTB和ST抗原性良好,联合cGAMP和dmLT佐剂对同时表达LT和ST临床分离株的攻击具有保护效果,并检测到显著的特异性体液和细胞免疫反应。 展开更多
关键词 LTB-2xSTN12S融合蛋白 cGAMP dmlt 双佐剂 肠产毒性大肠埃希菌 不耐热肠毒素 耐热肠毒素 免疫保护效果
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霍乱毒素及相关无毒助剂mmCT和dmLT,通过环腺苷酸蛋白激酶A和炎性体依赖白介素-1信号促进Th-17细胞应答
2
作者 党东峰 Larena M 《微生物学免疫学进展》 2016年第2期39-39,共1页
本文研究了霍乱毒素（CT）和两个新的无毒分子,多点突变的霍乱毒素（mm CT）和双突变体不耐热毒素（dm LT）对人T细胞应答的佐剂效应的分子途径。通过CT、mm CT或dm LT体外刺激人外周单核细胞或者分离出的单核细胞,加上一种多克隆刺激... 本文研究了霍乱毒素（CT）和两个新的无毒分子,多点突变的霍乱毒素（mm CT）和双突变体不耐热毒素（dm LT）对人T细胞应答的佐剂效应的分子途径。通过CT、mm CT或dm LT体外刺激人外周单核细胞或者分离出的单核细胞,加上一种多克隆刺激（葡萄球菌肠毒素B）或者是特定细菌抗原,并测定细胞因子和信号分子的表达效果。 展开更多
关键词 霍乱毒素 Th-17 dmlt mmCT 细胞应答 细菌抗原 环腺苷酸 体外刺激 细胞因子 人外
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BALB/c小鼠口服幽门螺杆菌裂解物配伍dmLT佐剂诱导黏膜局部及系统性免疫应答 被引量：2
3
作者 钟佑秀 陈敬 +3 位作者 刘钰 汤重发 魏博 刘梅影 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期298-304,共7页
目的观察口服免疫幽门螺杆菌(Hp)裂解物配伍黏膜佐剂双突变大肠埃希菌热不稳定毒素(double mutant heat-labile toxin,dmLT)在BALB/c小鼠中诱导抗Hp免疫保护效果,分析相关免疫应答特点。方法将SS1(Sydney strain 1)株Hp裂解物配伍佐剂d... 目的观察口服免疫幽门螺杆菌(Hp)裂解物配伍黏膜佐剂双突变大肠埃希菌热不稳定毒素(double mutant heat-labile toxin,dmLT)在BALB/c小鼠中诱导抗Hp免疫保护效果,分析相关免疫应答特点。方法将SS1(Sydney strain 1)株Hp裂解物配伍佐剂dmLT经口服免疫BALB/c小鼠后,进行幽门螺杆菌胃部活菌接种。对照组小鼠给予口服生理盐水,每只200μl。感染后6周检测幽门螺杆菌胃部定植量,采集血清、脾脏、肠系膜淋巴结、小肠、盲肠、粪便等样本进行相关免疫应答分析。结果抗原配伍佐剂免疫组小鼠与对照组相比较胃部幽门螺杆菌定植量降低;血清中检测到比对照组更强的特异性IgG抗体反应,IgG亚型主要以IgG1为主,且IgG1/IgG2a比值显著高于对照组;小肠、盲肠、粪便中均检测到较高的sIgA,小肠中最为显著,而对照组中均未有明显sIgA反应;脾和肠系膜淋巴结中IL-17+CD4+T比例与对照组相比较显著升高。结论口服免疫Hp裂解物配伍佐剂dmLT诱导黏膜局部及系统性免疫应答,增强BALB/c小鼠抗幽门螺杆菌感染,与显著增强的Th17免疫应答,以及Th细胞中Th2的极化相关,该结果为进一步评价dmLT作为黏膜佐剂用于幽门螺杆菌重组蛋白疫苗提供了实验资料。 展开更多
关键词 SS1裂解物 双突变大肠埃希菌热不稳定毒素(dmlt) BALB/c小鼠 免疫应答 幽门螺杆菌蛋白疫苗
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