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溶藻弧菌dldh基因突变株的构建及其生物学功能研究 被引量:3
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作者 庞欢瑛 陈立明 +3 位作者 黄郁葱 简纪常 鲁义善 吴灶和 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期161-167,共7页
为揭示二氢硫辛酰胺脱氢酶(Dihydrolipoamide dehydrogenase,DLDH)在溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)致病中的作用,以pRE112自杀质粒为载体,应用插入失活突变法构建dldh基因插入突变株,比较分析了野生株ZJ03与缺失株ZJ03Δdldh在生长、... 为揭示二氢硫辛酰胺脱氢酶(Dihydrolipoamide dehydrogenase,DLDH)在溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)致病中的作用,以pRE112自杀质粒为载体,应用插入失活突变法构建dldh基因插入突变株,比较分析了野生株ZJ03与缺失株ZJ03Δdldh在生长、泳动能力、酶活性、生物膜形成、致病性的表现。结果表明,dldh基因的突变,使溶藻弧菌生长的迟缓期延长、泳动能力显著减弱(P<0.05),酶活性显著降低(P<0.05),生物膜生成显著减少(P<0.05),对石斑鱼(Epinephelus coioides)的致病性也明显减弱(P<0.05)。本研究为从细菌能量代谢角度研究弧菌的致病机制提供理论依据。 展开更多
关键词 溶藻弧菌 dldh缺失株 生物特性
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版纳微型猪近交系DLDH基因编码区序列扩增及生物信息学分析 被引量:3
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作者 成文敏 潘伟荣 +4 位作者 尹俊芳 黄言 查星琴 肖晶 曾养志 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1706-1712,共7页
本试验旨在扩增版纳微型猪近交系DLDH基因编码区序列,为进一步研究DLDH基因的表达信号通路及与精子获能和顶体反应发生相关基因的表达调控提供必要的基础。通过提取版纳微型猪近交系睾丸组织RNA,经反转录后获得cDNA,设计特异性引物以扩... 本试验旨在扩增版纳微型猪近交系DLDH基因编码区序列,为进一步研究DLDH基因的表达信号通路及与精子获能和顶体反应发生相关基因的表达调控提供必要的基础。通过提取版纳微型猪近交系睾丸组织RNA,经反转录后获得cDNA,设计特异性引物以扩增DLDH基因的编码区序列,经测序后采用生物信息学软件对编码区序列及氨基酸序列进行生物信息学分析和结构预测。结果表明,版纳微型猪近交系DLDH基因编码区序列全长1 530bp,编码509个氨基酸。生物信息学分析表明,不同物种DLDH基因编码区核苷酸序列和氨基酸序列具有较强的保守性,DLDH蛋白中存在丰富的磷酸化位点,空间结构以α-螺旋和无规则卷曲为主。 展开更多
关键词 版纳微型猪近交系 dldh基因 编码区 蛋白质结构预测
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Construction and Biological Function Analysis of a dldh Deletion Mutant Strain of Vibrio alginolyticus
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作者 Huanying PANG Liming CHEN +4 位作者 Yanfei ZHANG Jing LI Mingsheng QIU Jichang JIAN Zaohe WU 《Agricultural Biotechnology》 CAS 2015年第4期47-51,共5页
[ Objeetlve] This study aimed to investigate the role of dihydrolipoamide dehydrogenase (DLDH) in the pathopoiesis of Vibrio alginolyticua. [ Method] Using suicide plasmid pRE112 as the vector, d/dh deletion mutant ... [ Objeetlve] This study aimed to investigate the role of dihydrolipoamide dehydrogenase (DLDH) in the pathopoiesis of Vibrio alginolyticua. [ Method] Using suicide plasmid pRE112 as the vector, d/dh deletion mutant strain ZJO3Adldh was constructed with insertion inactivation mutation method by Overlap PCR and homologous recombination technology to compare and analyze the differences in the growth, swimming ability, enzyme activity, biofilm formation and pathogenicity between wild-type strain ZJ03 and deletion mutant strain ZJO3△dldh. [ Result] dldh deletion mutant strain ZJ03 △d/dh exhibited prolonged lag phase, significantly reduced swimming ability (P 〈 0.05 ), significantly reduced enzyme activity (P 〈 0.05 ), significantly reduced biofilm formation ability (P 〈 0.05 ) and remarkably reduced pathogenicity to Epinephelus coioides (P 〈0.05) compared to wild-type strain ZJ03. [ Conclusion] This study provided theoretical basis for revealing the pathogenic mechanisms of Vibrio from the perspective of bacterial energy metabolism. 展开更多
关键词 Vibrio alginolyticus dldh Deletion strain Biological characteristics
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双孢蘑菇丛生变异的RAPD分析及差异片段的克隆 被引量:7
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作者 陈美元 王泽生 +1 位作者 廖剑华 宋思扬 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期657-660,共4页
通过双孢蘑菇正常菌株及其丛生变异菌株基因组DNA的RAPD研究,找到一个与双孢蘑菇丛生变异可能相关的DNA片段,将其克隆并测序.GenBank查询结果表明该片段可能的部分开放读框(ORF)与多种生物的二氢硫辛酰胺脱氢酶(DLDH)的部分氨基酸序列... 通过双孢蘑菇正常菌株及其丛生变异菌株基因组DNA的RAPD研究,找到一个与双孢蘑菇丛生变异可能相关的DNA片段,将其克隆并测序.GenBank查询结果表明该片段可能的部分开放读框(ORF)与多种生物的二氢硫辛酰胺脱氢酶(DLDH)的部分氨基酸序列有较高的同源性,由此提出了一个双孢蘑菇丛生变异的分子机理假设. 展开更多
关键词 食用菌 双孢蘑菇 丛生变异 RAPD分析 DNA差异片段 基因变异 基因克隆 分子机理
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双孢蘑菇部分cDNA文库的构建及筛选 被引量:4
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作者 王泽生 陈美元 +4 位作者 廖剑华 卢政辉 郭仲杰 李洪荣 M.P.Wach 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期63-65,共3页
构建了双孢蘑菇Agaricus bisporus菌株AA和A41的部分cDNA文库,其滴度分别为1.0?05 pfu/ml和6.0×104pfu/ml。用地高辛标记的丛生差异片段探针对文库进行筛选,分别获得5个和3个阳性克隆。
关键词 双孢蘑菇 丛生变异 阳性克隆 二氢硫辛酰胺脱氢酶 CDNA文库
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酿酒酵母产D-乳酸重组菌的构建与发酵 被引量:3
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作者 汪兆峰 石贵阳 张梁 《生物加工过程》 CAS 2015年第6期6-12,共7页
采用基因工程方法对酿酒酵母进行代谢改造,使酵母产生乳酸代谢途径。将来源于L.mesenteroides和E.coli的D-乳酸脱氢酶基因,分别插入带有G418抗性的酵母穿梭质粒p YX212-kan MX上,电转化酵母,得到2株生产D-乳酸的酿酒酵母重组菌S.cerevis... 采用基因工程方法对酿酒酵母进行代谢改造,使酵母产生乳酸代谢途径。将来源于L.mesenteroides和E.coli的D-乳酸脱氢酶基因,分别插入带有G418抗性的酵母穿梭质粒p YX212-kan MX上,电转化酵母,得到2株生产D-乳酸的酿酒酵母重组菌S.cerevisiae WE1510和S.cerevisiae WB1186。进一步摇瓶发酵试验表明:重组菌S.cerevisiae WB1186在YEPD培养基、20 g/L糖、p H 5的条件下生长条件最好,并具有更好的产乳酸能力。经3 L发酵罐条件下验证,S.cerevisiae WB1186分批发酵96 h,最终乳酸积累量达到18.0 g/L;发酵条件为培养基YEPD,接种量10%,溶解氧(DO)30%,转速150 r/min,初始葡萄糖质量浓度10 g/L,控制pH 5.0,通气量3 L/min,OD600最大值转为厌氧发酵。 展开更多
关键词 D-乳酸 D-乳酸脱氢酶 LEUCONOSTOC mesenteroides 酿酒酵母 代谢改造
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