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海洋芽孢杆菌Bacillus methylotrophicus B-9987中difficidins生物合成基因簇的分析鉴定 被引量：2
1
作者 高宇佳 张君 +1 位作者 李花月 李文利 《中国海洋药物》 CAS CSCD 2019年第5期1-8,共8页
目的对海洋芽孢杆菌B-9987中difficidins生物合成基因簇及其关键基因进行分析、鉴定及功能研究。方法通过生物信息学手段对difficidins基因簇的基因组成和功能结构域进行了分析;结合其结构特征及聚酮化合物的生物合成原理,初步推导其生... 目的对海洋芽孢杆菌B-9987中difficidins生物合成基因簇及其关键基因进行分析、鉴定及功能研究。方法通过生物信息学手段对difficidins基因簇的基因组成和功能结构域进行了分析;结合其结构特征及聚酮化合物的生物合成原理,初步推导其生物合成途径;构建了烯酰辅酶A水合酶基因difO双交换阻断突变株,对其功能进行初步验证并对基因簇进行确认。结果从B-9987发酵液中分离纯化得到化合物oxydifficidin,鉴定了B-9987中该化合物的生物合成基因簇,其是由位于同一个操纵子的15个基因difA-O所编码的反式酰基转移酶聚酮合酶体系组装而成;difO基因阻断后,oxydifficidin不再产生。结论 difficidins生物合成基因簇的鉴定为后续研究其生物合成途径及相关基因的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 海洋芽孢杆菌 BACILLUS methylotrophicus B-9987 difficidins 生物合成基因簇
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Difficidins生物合成基因簇中蛋白激酶基因difB功能研究
2
作者 武强强 高宇佳 +1 位作者 肖菲 李文利 《中国海洋药物》 CAS CSCD 2023年第4期19-26,共8页
目的对海洋芽孢杆菌Bacillus methylotrophicus B-9987 difficidins化合物生物合成基因簇中difB基因功能进行探究。方法通过生物信息学手段对difB的功能进行预测;构建difB双交换阻断突变株及高表达株;通过高效液相色谱法(HPLC)分析野生... 目的对海洋芽孢杆菌Bacillus methylotrophicus B-9987 difficidins化合物生物合成基因簇中difB基因功能进行探究。方法通过生物信息学手段对difB的功能进行预测;构建difB双交换阻断突变株及高表达株;通过高效液相色谱法(HPLC)分析野生株和突变株发酵产物的差异;在大肠杆菌中表达DifB蛋白,以脱磷酸difficidin(3)作为底物,探究DifB的体外功能。结果得到了ΔdifB双交换阻断突变株及difB高表达株;HPLC分析结果表明,相比较野生株,ΔdifB突变株中difficidins化合物峰不再产生,difB高表达株中difficidins的产量与野生株无显著差别;DifB蛋白不能催化脱磷酸化difficidin(3)发生磷酸化反应。结论difB是difficidins生物合成所必需的,可能与磷酸基团的组装相关,但磷酸化机制有待进一步研究。 展开更多
关键词 海洋芽孢杆菌 difficidins 生物合成 磷酸化修饰
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